木耳菌种制备方法
怎样制备黑木耳菌种
怎样制备黑木耳菌种
黑木耳菌种制作包括母种、原种、栽培种的制作三个程序。
一、母种的分离和培养
1.母种培养基。
配方为马铃薯葡萄糖琼脂。
配制成试管斜面，经常规灭菌，即可使用。
2.母种分离和培养。
分离方法有孢子分离法、耳木分离法和组织分离法，无论哪种方法，都可获得菌种。
①孢子分离法：这种方法获
得的菌种变异较大，适合于育种采用。
②耳木分离法：成功率高，种性较稳定，生产中多用此法。
③组织分离法：选片大、肉厚、成
丛生长的鲜耳或当年生长经晒干的干耳再经清水泡胀，洗净，进行无菌操作分离。
以上方法均在28℃下培养。
分离得到的母种必须经过转管纯化，质量评定，出耳试验，才能作进一步扩大生产。
二、原种制作
培养基配方：木屑78%，米糠20%，蔗糖1%，石膏粉1%，水65%，pH为6。
把各种培养料拌匀，调至适当水分，装瓶，灭菌。
灭菌后
待瓶温降至30℃送入接种室，无菌操作，接入母种块。
在28℃下培养。
三、栽培种制备
栽培种是直接在生产中使用的菌种，由原种进一步扩大生产而得到。
黑木耳的栽培种有几种类型。
木耳菌种培育技术
木耳菌种培育技术木耳是一种非常受欢迎的食用菌，它不仅味道鲜美，而且营养丰富。
在中国，木耳的种植历史已有数千年，而现在，木耳的种植技术已经得到了很大的发展。
本文将介绍木耳菌种培育技术，帮助读者更好地了解木耳的生长过程和种植技巧。
一、木耳菌种的选取在木耳菌种的选取方面，我们应该选择生长稳定、营养丰富、菌丝生长迅速的菌株。
同时，我们还应该注意避免选择虚弱、病害较多的菌株，以免影响后续的种植效果。
二、木耳菌种的制备木耳菌种的制备是木耳种植的重要环节之一。
通常，我们可以采用两种方法来制备木耳菌种：一是利用菌丝体进行制种，二是利用孢子进行制种。
1. 利用菌丝体进行制种利用菌丝体进行制种是一种比较简单的方法。
具体操作步骤如下：（1）将新鲜的木耳菌丝体分离出来。
（2）将分离出来的菌丝体接种到含有木耳菌丝体生长所需的营养物质的培养基上。
（3）将培养基培养于适宜的温度和湿度下，待菌丝体生长到一定大小后，即可用于制种。
2. 利用孢子进行制种利用孢子进行制种是一种比较复杂的方法。
具体操作步骤如下：（1）将新鲜的木耳菌盖采摘下来，放置于培养皿中。
（2）将木耳菌盖放置于含有适宜营养物质的培养基上，待孢子成熟后，即可用于制种。
三、木耳菌种的培养木耳菌种的培养是木耳种植的关键环节之一。
在培养过程中，我们应该注意以下几点：1. 温度控制木耳生长的适宜温度为20℃-25℃，因此，在培养过程中，我们应该控制好温度，以确保木耳的正常生长。
2. 湿度控制木耳生长需要一定的湿度环境，因此，在培养过程中，我们应该注意保持适宜的湿度，以促进木耳的正常生长。
3. 通风控制通风对于木耳的生长也非常重要，因此，在培养过程中，我们应该注意通风，以保持适宜的氧气浓度和二氧化碳浓度。
四、木耳菌种的保存为了保证木耳菌种的质量和数量，我们应该采取适当的措施进行保存。
通常，我们可以采用以下两种方法来保存木耳菌种：1. 冷冻保存将木耳菌种放置于低温环境中，以达到冷冻保存的目的。
木耳液体菌种制作规程讲解
液体菌种制作规程工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种一、摇瓶种的制作1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。
25度培养7天备用。
2、初级摇瓶制作①配方土豆200克葡萄糖20克酵母膏2克蛋白胨3克磷酸二氢钾2克硫酸镁1克V B110毫克水1000毫升。
（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。
②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。
初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm 直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。
③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。
断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。
④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。
把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。
操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。
黑木耳菌种制作方法
入２ ５～ ２ ８ ℃培养箱 （ 室 ）内培养 。培养
过程 中 ，要 每天 检查 菌丝 生长 发 育情
况 。 如 发 现 菌种 瓶 内有 杂 菌 污 染 ，应 及
时清除处理。黑 木耳 菌丝纯 白色 ，先端
菌 丝 整 齐 一 致 向 下生 长 。 如菌 丝 颜 色 不
纯 ，或虽 为 白色但 却杂乱无 章地生 长 ，
１ ． 培养基的配制。（ １ ）培 养基配方 。木屑培养基 ：锯木
屑７ ８ ％ ，麸 皮 （ 或米糠 ）２ ０ ％， 蔗糖 １ ％ ，石 膏 粉 １ ％ ，水 适
量 ，ｐ Ｈ值 ６ ． ５ 。棉 籽 壳 培 养 基 ：棉籽壳 ９ ８ ％，蔗糖 ０ ． ８ ％， 石膏粉 １ ％，过磷酸钙 ０ ． ２ ％， 水适量 ，ｐ Ｈ值 ６ ． ５ 。（ ２ ）配制 方法 。选用 上述任 一种 培养 基 ，按配料 比例 ，将各种 原 料称 好 ，拌 匀 。将 蔗糖放 入 容 器 内 ，加 少量 清 水 溶解 ， 倒入 原料 中充分 翻拌 。再 徐 徐加 水 ，边 加边 翻拌 ，直至 用 手紧握原料 ，指缝有水渗 出而不滴下 为 止 。最 后 用 ｐ Ｈ试 纸 调 试 酸 碱 度 至
三 、注 意 事 项 １ ． 培 养 基 木 屑一 定 要 选 用 杂 木 屑 ，
１ ８ ／ＮＯ ＮＧ Ｃ Ｌ 』 Ｎ Ｘ Ｉ Ｎ ｛ Ｉ Ｓ Ｉ 扼 Ｊ／袭村新 技术
培养基 、棉籽壳培养基 、枝条及木块培 养基等制作 。木屑及棉籽壳培养基的配
方及制作方法 同原种一样 ，下面介绍枝 条种 的制作方法。 枝条培养基配方 ：枝条 ５ Ｏ 千克 ，木
屑９ 千克 ，麸皮 （ 或米糠 ）５ ． ４ 千克 ，蔗
食药用菌
木耳菌种制备方法
（一）母种的制备用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种（保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。
1.培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0. 5克维生素B110毫克琼脂20克水1000亳升PH值自然配方二合成培养基马铃薯20克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋口腺10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0. 8克水1000毫升PH值自然2.培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克加水1000毫升，煮沸15-20分钟, 用4层纱布过滤,取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克,再加热，琼脂溶化后,再加入其它配方中的药品。
培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40°C凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4o装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。
3.灭菌将分装后的试管扎捆好,放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下（锅入温度达121°C）灭菌20分钟，使微生物包括芽子色全部杀死。
待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4.接种、培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28°C、3天后将温度降至24°C 继续培养,12-15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成（生产）母种。
（二）原种、制备母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种,原种一般采用广口瓶或袋装。
1.培养基配方配方一木屑隸皮培养基阔树木78%鉄皮20%糖1%石膏粉1%水65% PH值自然配方一•棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳90%糖1%隸皮5%过磷酸钙3%石膏粉1% PH值自然2.拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，汁算配料总量，将荻皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1:1、3拌匀,培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。
木耳的栽培实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在通过实践操作，了解木耳的栽培技术，掌握木耳的生长周期和条件要求，同时验证不同栽培条件下木耳的生长状况和产量，为木耳的规模化生产提供科学依据。
二、实验材料1. 菌种：紫木耳菌种（编号：ZM-2018）2. 栽培基质：稻草、河沙3. 设备：电子秤、温度计、湿度计、喷雾器、灭菌锅、无菌操作台、接种针、菌袋、沙床等4. 工具：剪刀、铁锹、筛子、塑料薄膜、绳子等三、实验方法1. 菌种制备：将菌种在无菌操作台中按照比例接种到预先制备好的菌袋中。
2. 菌袋培养：将接种后的菌袋放入恒温培养箱中，控制温度在25-28℃，湿度在60-70%，培养至菌丝满袋。
3. 沙床准备：选择干净无菌的河沙，晒干后铺设在栽培场地，厚度约为10厘米，距离墙两侧80厘米用砖铺设两排人行采耳走道。
4. 菌袋转接：将培养好的菌袋脱去袋筒，按照一定的间距栽植在沙床上。
5. 水分管理：采用喷雾器定期喷水，保持沙床湿润，使空气相对湿度达到85-95%。
6. 温度控制：通过开闭门窗和覆盖薄膜等方式，控制室内温度在20-25℃之间。
7. 光照管理：白天盖膜、夜间揭膜，模拟自然光照条件。
8. 病虫害防治：定期检查，发现病虫害及时采取措施进行防治。
四、实验步骤1. 菌种制备：按照菌种制备步骤，将菌种接种到菌袋中。
2. 菌袋培养：将接种后的菌袋放入恒温培养箱中，培养至菌丝满袋。
3. 沙床准备：按照沙床准备步骤，准备沙床。
4. 菌袋转接：将菌袋脱去袋筒，按照一定的间距栽植在沙床上。
5. 水分管理：定期喷水，保持沙床湿润。
6. 温度控制：通过开闭门窗和覆盖薄膜等方式，控制室内温度。
7. 光照管理：白天盖膜、夜间揭膜。
8. 病虫害防治：定期检查，发现病虫害及时采取措施进行防治。
五、实验结果与分析1. 菌丝生长情况：经过一个月的培养，菌丝生长旺盛，菌袋内菌丝呈白色，质地均匀。
2. 木耳生长情况：在适宜的条件下，木耳生长迅速，耳片肥厚，产量较高。
木耳液体菌种制作规程
液体菌种制作规程工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种一、摇瓶种的制作1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。
25度培养7天备用。
2、初级摇瓶制作①配方土豆200克葡萄糖20克酵母膏2克蛋白胨3克磷酸二氢钾2克硫酸镁1克V B110毫克水1000毫升。
（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。
②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。
初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm 直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。
③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。
断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。
④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。
把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。
操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。
黑木耳母种培养基配制后的接种与培养
黑木耳母种培养基配制后的接种与培养1.固体菌种生产固体菌种是菌丝体生长在固体培养基中而形成的固体形态菌种。
试管母种（1级种）菌种通常被分为3级。
1级种也叫母种或试管种，可用组织分离法或孢子分离法获得母种。
2级种也叫原种，是利用母种的菌丝体接入木屑培养基中所产生的菌种。
3级种也叫栽培种，是利用原种再扩繁一次所产生的菌种，它直接用于生产，因此也叫生产种。
经过母种—原种—栽培种的不断扩大繁殖后，菌丝体的数量越来越多，越来越强壮，利用这样的菌丝体投入生产就可以生长出优良的子实体。
母种培养基的配制：（1）常用配方：马铃薯200克、白糖20克、琼脂20克、水1000毫升。
为了强化营养，有条件的生产者可在上述培养基中添加蛋白胨3.0克、磷酸二氢钾3.0克、硫酸镁1.5克。
（2）配制方法：首先把马铃薯削皮、切片、水煮，八分熟后取其汁液，再将汁液小火加热，放入琼脂、白糖。
溶化后把培养基装入规格为18毫米×180毫米的试管中，装入高度为管长的1/4或1/5为适宜。
分装后试管塞紧棉塞，每7支捆成1捆，用牛皮纸包扎，准备灭菌。
（3）培养基灭菌：用手提式高压蒸汽灭菌锅或家用高压锅灭菌，在0.12兆帕压力下（锅内温度121℃）灭菌40分钟。
待温度降至60℃时取出摆斜面，斜面长度最好占管长的2/3左右比较合适。
2.菌种分离与扩大培养菌种分离方法有孢子分离法、组织分离法、耳木分离法。
孢子分离法是选用当年生无杂菌污染的鲜耳片，以黑、厚、大为佳，经无菌水冲洗几次，用丝线将耳片腹面向下吊挂，另一端吊挂在装有培养基的三角瓶口部，加棉塞封口，在25～28℃温箱中接收孢子并培养成菌丝体。
组织分离法是选用优质耳片，表面用75%酒精棉球擦拭2～3遍，用酒精棉包住耳片约2分钟，剪取远离耳基没有筋的部位约0.2平方厘米。
在无菌条件下，接入试管斜面培养基上，经28℃左右的温度培养长出菌丝体。
耳木分离法是从黑木耳的段木中分离菌丝体获得菌种的方法。
袋栽黑木耳菌种制作技术
３３接 茵 ．
培养基进行试管分装后及时 灭菌 。每 １ ０支试管捆绑在一 起， 并用牛皮纸或报纸包裹 ， 立放 入高压锅 内 ， 直 盖好锅 盖 ， 打 开排 气阀开始加 热 ， 当排气 阀急速排 出热气 时 ， 闭排气阀 ， 关
气 压 升 至 ０１ ａ 维 持 ３ ． Ｍｐ 时 ０分 钟 后 停 止 加 热 ，气 压 降 至 Ｏ０Ｍｐ 时打开排 气阀 ，气 压归零时拧开螺栓将锅盖错开缝 ， ． ５ ａ 以烘干棉塞 ， 几分钟之后打开锅盖 。
２母 种 制 作 ．
３１１ ． 锯木屑培养基 原料按 比例 称取 ， ． 先将 锯木屑 、 麦麸 、
石膏 混合 ， 将蔗糖 溶入 适量水 中后拌入 混合料中 ， 使含水量达 到 ６ ％～６％，即 以手握紧培 养料后指 缝间见 水但不 下滴为 ０ ５ 宜。装瓶 （ ７ ０ 原 种瓶 或 ５０ 点滴瓶 ）用棉 塞封 口。 用 ５ｍｌ ０ ｍｌ ， ３１ ．． 米粒培 养基 将玉米 粒浸泡 １ ２玉 ２小时 以上 ，然后在 沸水 中煮半小时 ， 以玉 米粒变软膨大且不开 裂为度 ， 拌入玉米 粒干物质重的 １ ％的石膏 ， 装瓶 。
袋 栽 黑 木耳 菌种 制作 技术
文， 吕树 尧 黄 金 亮 刘 丹
（ 敦化市马铃薯开发繁育中心 １３ ０ ） ３７ ０
１选 择 适 宜 的 品 种 ． 长 满 斜面 。
３ 原 种 制 作 ． ３１原种 培 养 基 配 方及 制 作 ．
选择在本地经过栽培 试验且表现 良好的菌株 ，要求具备 高产稳产 ， 逆性强 ， 抗 产品质量好等特 点。在敦化市 表现 较好 的品种有长 自山 ７ 、 ２ 、 号 黑 ９丰收 ２ 号等 。
出的菌丝洁 白 、 健壮有 力 ； 勤通风 ， 以提高培 养室空气 中 ０： 含
黑木耳液体菌种的制备工艺及质量标准
黑木耳液体菌种的制备工艺及质量标准050000摘要：黑木耳作为食药两用真菌，在我国的国民经济、人类健康中展现出巨大的开发前景。
从药用角度来讲，主要是黑木耳天然药物活性成分的提取、分离纯化以及相关药品、保健品的开发等；然而，目前市场上的相关药品甚少，部分产品只是局限于动物试验测试。
从食用角度来讲，我国是世界黑木耳产量最多、食用最多的国家。
近年来，黑木耳已成为我国栽培量第二大的食用菌品种，但各个产地生产的黑木耳品质参差不齐，具有优良性状的黑木耳新品种更是少见。
关键词：黑木耳；液体菌种；工艺；质量引言多糖是木耳属真菌中一类重要的化合物，广泛存在于木耳子实体、菌丝体等组织中，近代研究表明，包括木耳在内的多种食用菌多糖是一类具有开发价值和利用潜力的天然化合物，对调节机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤等方面表现出了良好的活性。
例如，黑木耳中的水溶性多糖通过调节小鼠肠道微生物群落来降低由葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎。
角质木耳、毛木耳、黑木耳胞内多糖能够显著促进细胞增殖，对抗炎和抑菌表现出了较好的活性，同时，黑木耳子实体中的吡喃糖多糖还具有调节血脂保护肝脏的作用。
以心脑血管病人为研究对象，进行不同阶段的黑木耳多糖摄入治疗，通过病人的康复自愈能力分析结果发现黑木耳多糖能够促进心脑血管人体的康复。
对黑木耳多糖进行了提取及结构解析并发现黑木耳多糖可以通过促进巨噬细胞的增殖和吞噬能力，该作用在人体免疫调节方面具有广阔的应用前景。
1.培养基固体培养基（ＣＰＤＡ）：液体母种培养基，为不添加琼脂的ＣＰＤＡ培养基；基础发酵培养基：马铃薯（去皮）２００．０ｇ／Ｌ、蛋白胨３．０ｇ／Ｌ、麦麸１０．０ｇ／Ｌ、葡萄糖２０．０ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４２．０ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ１．０ｇ／Ｌ，初始ｐＨ值自然。
2.母种培养基ADA培养基:马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂粉20g，加水至1000ml。
1.1.3.2母种替换培养基在ADA培养基的基础上，分别用不同量的麦麸、稻杆和木屑替换ADA培养基中的马铃薯。
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(一)母种的制备
用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。
1．培养基配方
配方一综合马铃薯培养基
马铃薯200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克
维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升PH值自然
配方二合成培养基
马铃薯20克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克
酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升PH值自然
2．培养基制作方法
先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。
培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。
装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。
3．灭菌
将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。
待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4．接种、培养
通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。
(二)原种、制备
母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。
1．培养基配方
配方一木屑麸皮培养基
阔树木78% 麸皮20% 糖1% 石膏粉1% 水65% PH值自然
配方二棉籽壳木屑混合培养基
棉籽壳90% 糖1% 麸皮5% 过磷酸钙3% 石膏粉1% PH值自然
2．拌料与装袋
选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。
堆闷30分钟后，装瓶(袋)。
用机械或人工装袋稍加压实。
(塑料袋规格通常为9*21*0、04即，而袋宽9厘米，长21厘米，单层厚4厘米)实，在袋口外套入塑料环，形成象瓶子一样，然后在袋口内塞松紧适宜棉塞、或用牛皮纸包扎好。
3．灭菌
原种灭菌方法有两种，高压灭菌和常压灭菌。
高压灭菌又称加压蒸气灭菌，灭菌
原理：在高温(120℃)、高压(1公斤/厘米2)条件下灭菌2~3小时，将芽孢在内的微生物全部杀死。
常压灭菌称流通蒸气灭菌，由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度变动在90~103℃之间，其热力、穿透力不强，在一定温度下维持足够时间达到灭菌目的，通常在100℃下维持8~10小时。
4．接种与培养
不论用接种箱或接种室接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0、2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的料瓶(袋)放入接种箱内或接种室内，用紫外线灯照射30分钟后，在无菌条件下进行接种，或在接种前用烟雾剂密闭薰蒸消毒。
即烟雾剂点燃消毒时应关闭门窗。
接种室消毒，一间房需点燃3盒50克规格烟雾剂；接种箱消毒每次仅用重量为40克，但又细分为20包的其中2包点燃即可(每包2克)。
一般18×180厘米，母种试管每支可接4—6瓶(袋)原种。
将接种后的菌种瓶(袋)放入发菌室培养。
以培养室温度22~26℃，相对湿度为80%以下，光线为弱散射光，发菌期间应保持良好的通风条件。
原种从接种到菌丝长满瓶(袋)需30—40天。
(三)栽培种制备
原种进一步扩繁，即为栽培种。
栽培种一般采用塑料袋制备，规格为15×33×0、05，用无棉盖体封口。
一瓶原种可接50瓶(袋)栽培种。
栽培种培养基配方及拌料、装袋、灭菌、接种、发菌管理与原种用塑料袋制备时一致。
(四)、菌种质量鉴定
菌种质量不仅与能否成功发菌有关，也关系到产量和效益，从事木耳栽培必须严把质量关。
菌种的质量鉴定有两个方面的含义：一是分离培养的菌种是否是栽培所需种类。
二是菌种是否为优良菌株。
黑木耳菌种正常菌丝应洁白，生活力旺盛，发菌培养45天后，瓶(袋)间自上而下会出现菊花状或梅花型胶质原基，颜色明褐至黑褐色。
如果瓶(袋)底积淡黄色液体，或上半部出现黄色粘液，培养基收缩，为过期老化菌种，应予淘汰。
如果菌种菌丝仅发至瓶(袋)1/3~1/2处时出现淡黑色的胶状耳基，说明菌种早熟，或扩大次数太多，或由于培养室光线过强。
若菌丝只长一个角落而不蔓延，可能是培养基太干、过湿或干湿不均引起。
若菌丝蔓延停止不前，并有一明显抑制线，多为杂菌所致。
在发菌过程中，发现杂菌应及时检出不用。