汉防己甲素对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺内表皮生长因子及其受体的影响和意义

【关键词】 肺发育 先天性膈疝 表皮生长因子 汉防己甲素 动物模型 中图分类号: R 285. 5 R 655. 3 文献标识码: A
EFFECT AND S IGN IF ICANCE O F TETRAND R INE O N EP ID ERM AL GROW TH FACTO R AND ITS RECEPTO R IN THE L UNG O F CO NGEN ITAL D IAPHRAGM AT IC HERN IA RAT MOD EL W A N G Y ong g ang , L IU W eny ing , L IN H an, et a l. D ep a rtm en t of P ed ia tric S u rg ery , W est C h ina H osp ita l, S ichuan U n iv ersity , C heng d u S ichuan, 610041, P.
sign ificance on ep iderm a l g row th facto r (EGF ) and its recep to r ( EGFR ) in the lung of n itrofen2induced congen ita l d iap h ragm a tic hern ia (CDH ) ra t m odel. M ethods Tw en ty fem a le ra ts w ere g iven m a terna l adm in istra tion of a sing le o ra l do se (115 m g ra t) of n itrofen to induce CDH a t 9. 5 days after p regnancy and w ere d ivided in to no rm a l so lu tion g roup (N S, n= 5) , dexam etha sone g roup (D ex, n= 5) , tetrand rine g roup (T ET , n= 5) and D ex+ T ET g roup (n= 5) a t 18. 5 days; 4 ra ts w ere g iven ed ib le o il a s con tro ls. A ll fetu ses w ere delivered by cesa rean section a t 21. 5 days. L ung h isto log ic eva lua tion s and EGF, EGFR imm unoh istochem ica l sta in ing and im age ana lysis w ere p erfo rm ed. Results CDH w a s ob served in 64 of the 137 ra t fetu ses (46. 7% ) in the exp erim en ta l g roup s; no CHD w a s ob served in 36 ra t fetu ses of con tro l g roup. T he lung s of CDH fetu ses show ed m a rked hypop la sia in N S g roup , in con tra st to im p roved m esenchym a l d ifferen tia tion in tha t of D ex, T ET , D ex+ T ET g roup s. T he exp ression of EGF w a s w eaker and w eaker and tha t of EGFR w a s stronger and stronger a s fo llow ing o rder: N S, T ET , D EX, T + D and con tro l g roup s; show ing sign ifican t d ifferences betw een them (P < 0. 05). Conclusion P rena ta l T ET adm in istra tion show s m a rked im p rovem en t in p u lm ona ry hypop la sia th rough p re2regu la ting crest2tim e of EGF exp ression and up 2regu la ting EGFR exp ression in the lung s of n itrofen2induced CDH ra t m odel. A com b ina tion of T ET and D ex w ou ld genera te eviden t synerg istic effect.
【Key words】 L ung developm en t Congen ita l d iap h ragm a tic hern ia Ep iderm a l g row th facto r T etrand rine A n im a l m odel
先 天 性 膈 疝 ( congen ita l d iap h ragm a t ic hern ia, CDH ) 发病率约为 1∶2 500ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ1], 病死率很高, 主要死因 是 新生儿心肺发育不良, 单纯手术治疗对重症CDH
作者单位: 四川大学华西医院小儿外科 (成都, 610041) # 现在山西省人民医院
通讯作者: 刘文英, 教授, 博士导师, 研究方向: 小儿胸腹部先天性 畸形、血管瘤, E2m ail: w enyingl@ 126. com
伴发心肺发育不良疗效甚微。 我们的实验拟通过除草 醚诱导的CDH 大鼠模型, 以中药防己的提取物——汉 防己甲素 ( tetrand rine, T ET ) 为干预措施, 观察 CDH 胎 仔 肺 内 表 皮 生 长 因 子 ( ep iderm a l g row th facto r, EGF ) 及 其 受 体 ( ep iderm a l g row th facto r recep to r, EGFR ) 的变化, 从而进一步探讨 T ET 对CDH 胎肺发 育的影响情况。
R. C h ina C orresp ond ing au thor: L IU W eny ing , E 2m a il: w eny ing l@ 126. com 【Abstract】 O bjective To investiga te the effect of the trad itiona l Ch inese m ed icine“T etrand rine”(T ET ) and its
将去除肺组织的胎鼠放在放大镜 (4 倍) 下, 从头 侧观察有无膈肌缺损, 逐一记录胎鼠有无膈疝、膈疝位 置、疝孔大小 (膈肌缺损> 50% 为巨大膈疝)、疝内容物 及疝内容物是否嵌顿。
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Ch inese J R eparative and R econ structive Su rgery, 2006, V o l 20 (11)
1 材料与方法 1. 1 主要材料
健康成年SD 大鼠36 只, 雌鼠24 只, 雄鼠12 只, 体 重 240～ 270 g, 平均 25210±1114 g, 均为健康青壮年 鼠, 此前未曾交配, 由四川大学华西动物实验中心提 供。除草醚 (浙江化工二厂) , an ti2EGF、an ti2EGFR (武 汉博士德生物工程公司) , T ET (陕西惠科植物开发有 限 公 司) , O lym p u s 光 学 显 微 镜 (O lym p u s 公 司, 日 本) , N ikon 图像分析仪 (N ikon 公司, 日本)。 1. 2 实验方法 1. 2. 1 实验动物模型的建立和分组 雌、雄鼠 2∶1 交配, 12 h 后取雌鼠阴道分泌物涂片, 于显微镜下观 察, 以查见精子确定为怀孕015 d。第9. 5 天随机分为对 照 组 和 实 验 组, 实 验 组 20 只 灌 胃 给 除 草 醚 (115 m g 只, 溶于食用花生油中) ; 正常对照组 4 只灌 胃给等量食用花生油。实验组第1815 天再根据给药不 同 随机分为 4 个亚 组, 每 组 5 只, 其 中 生 理 盐 水 组 (no rm a l so lu tion g roup , N S 组) , 腹腔内给生理盐水 (0125 m g kg, 1 次 d) ; 地塞米松组 (dexam etha sone, D ex 组) , 腹腔内给地塞米松 (0125 m g kg, 1 次 d ) ; T ET 组灌胃给 T ET (30 m g kg, 1 次 d) ; 地塞米松和 T ET 组 (D + T 组) , 腹腔内给地塞米松 (0125 m g kg, 1 次 d) , 同时灌胃给 T ET (30 m g kg, 1 次 d)。 1. 2. 2 肺组织标本的采集及膈疝确定 配种成功后 第 2115 天 (预产期前 24 h) , 在戊巴比妥钠麻醉下对所 有孕鼠行剖宫产, 取出胎鼠称重后立即断头处死, 经胸 骨正中切口剖开胸腔, 剪除两侧肋软骨至脊柱, 完整取 出两侧肺组织, 注意尽量避免损伤其他组织器官, 将取 出的肺组织从支气管分叉处分开左右两肺, 即刻置于 10% 中性甲醛中固定备用。
中国修复重建外科杂志 2006 年第 20 卷第 11 期
汉防己甲素对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺内 表皮生长因子及其受体的影响和意义
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王永刚# 刘文英 林涵 熊中讯 彭强 王勇
【摘 要】 目的 探讨中药成分汉防己甲素 ( tetrandrine, T ET ) 对大鼠先天性膈疝 (congen ital diap h ragm atic hern ia, CDH ) 模型胎仔肺内表皮生长因子 (ep iderm a l g row th facto r, EGF ) 及其受体 (ep iderm a l g row th facto r recep to r, EGFR ) 的影响和意义。 方法 实验组20 只雌性SD 大鼠于孕915 d 灌胃给予除草醚115 m g 只; 对照组4 只灌胃给等量 食 用 油。 孕 1815 d, 实 验 组 根 据 给 药 不 同 随 机 分 为 生 理 盐 水 组 (no rm al so lu tion group , N S 组)、地 塞 米 松 组 (dexam ethasone group , D ex 组)、汉防己甲素组 ( tetrandringe group , T ET 组)、地塞米松+ 汉防己甲素组 (D + T 组) , 每 组5 只。孕2115 d 对所有孕鼠行剖宫产, 取出胎鼠两侧肺组织行大体观察、H E 染色、EGF、EGFR 免疫组织化学染色和图 像分析。 结果 正常对照组共产胎仔 36 只, 无隔疝形成。实验组共产胎仔 137 只, CDH 形成 64 只, 致畸率 46. 7%。在 D ex 组、T ET 组和T + D 组, 肺组织处于原始肺泡期或进一步成熟。EGF 在N S 组、D ex 组、T ET 组、D + T 组及对照组的 表达量依次递减 (P < 0. 05) , 而 EGFR 在N S 组、D ex 组、T ET 组、D + T 组和对照组的表达量依次递增 (P < 0. 05)。 结 论 T ET 可使CDH 胎鼠肺内 EGF 表达高峰提前, 使 EGFR 表达上调, T ET 和D ex 联合作用对促进 EGF 表达高峰提前 及EGFR 表达上调具有明显的协同效应。T ET 可以通过调节EGF 及EGFR 在肺内的表达而实现其促进肺组织细胞发育 分化和改善肺血管构型的效应。