体外诊断试剂样本抗凝剂研究资料-以血清或对照比对分析

体外诊断试剂样本抗凝剂研究资料-以血清或对照比对分析
1.概述
抗凝剂常用于临床检验中对人全血样本或血浆样本的处理。

不同种类抗凝剂的结构、性质差异较大，且作用机制不同，其选择则需根据临床检验中的具体项目和相应使用的检测试剂来定。

不同的抗凝剂会影响血液不同的成分，或干扰检测试剂的主要成分，从而影响最终的检测结果。

因此，一方面为提高体外诊断试剂在临床检测项目中结果的可靠性，另一方面在体外诊断试剂注册审评过程抗凝剂的干扰研究作为较为关键的环节，体外诊断试剂申请人应结合整个检测系统来严格评估抗凝剂的适用性。

应当在体外诊断试剂研发及临床试验过程，根据产品的实际使用情况对抗凝剂进行干扰研究。

根据二类体外诊断试剂注册审评要求，体外诊断试剂申请人可通过两种途径进行抗凝剂的干扰评估：一是在产品分析性能评估过程中参照相关干扰研究标准和指南文件，选择人源性样本进行干扰试验研究。

研究方案、研究数据及研究评估报告等将作为国家总局发布的《关于公布体外体外诊断注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（2014年第44号）中第六项分析性能评估资料的要求来进行提交；二是在临床试验过程一并进行研究，确定抗凝剂是否适用于相应的样本类型和申报产品的检测系统中。

此外，抗凝剂干扰研究结果应在产品说明书中明确，提醒用户检测的样本应添加何种抗凝剂或不宜添加何种抗凝剂。

比如可在产品说明书中样本的要求内容中明确该产品仅适用于添加EDTA、肝素、枸橼酸钠的血浆样本。

2.研究方法
结合实际情况，本产品选择在分析性能评估中对抗凝剂的干扰研究及结果分析。

研究过程首先评估试剂的检测样本可用于何种样本，若检测项目可同时用于血清及血浆、全血样本的，可通过申报试剂对至少40例同源的人血清样本及加入要评估的抗凝剂血浆或全血样本进行对比研究，来验证两样本测定结果的一致性；若检测项目只能用于全血单一样本的（如糖化血红蛋白），可参考EP9-A2
指南文件，选用质量较好的已上市试剂为参考系统，用申报试剂的检测结果为待评价系统，分别对40例添加相同抗凝剂的样本进行检测。

通过方法比对，来证明两者的差异不具有统计学意义。

另外需要注意的是样本选择的浓度范围尽可能涵盖医学决定水平，并均匀分布。

而抗凝剂添加的干扰浓度应依据临床经验的用量、参考相关临床文献和依据全国临床检验操作规程提供的浓度等。

3.结果处理及数据分析
基于上述方法的检测结果，首先需要对数据进行分析，数据的剔除和纳入统计原则可参考EP9-A2指南文件中的相关要求。

结果的统计一般以申报产品对血清样本的检测结果(上市试剂对添加待评估抗凝剂的检测结果）为x 轴，添加抗凝剂血浆或全血样本的检测结果（申报试剂添加加待评估抗凝剂的检测结果）为y 轴，绘制散点图并进行直线回归分析，得出拟合方程y=a+bx ，计算a 、b 的95%置信区间（或99%置信区间），确定斜率b 和截距a 是否具有统计学意义，同时对相关系数r 进行假设性检验，确定概率P 值，确定两者直线相关是否成立。

除了上述结果的相关性分析外，还应进行定量的一致性分析。

参考EP9-A2指南，首先找到相应检测项目的医学决定水平，根据得出的回归方程y=a+bx ，计算在给定的医学决定水平Xc 处的预期偏倚（Bc ）的估计值，即:
B c =|Y c -X c |=|a+(b–1)X c |。

另外根据公式:
∑∑--+
±=•2
2,,)()(21
2],[x x x X N S B B B ij c x
y c high c low c
2
)(2
--=
∑•n y y S i x y
求出预期偏倚的95%置信区间。

如果预期偏倚的可信区间包含了规定的可接受偏倚（通常以CLIA’88对室间评估的允许误差的1/2为规定的可接受偏倚），或如果可接受偏倚大于预期偏倚可信区间的上限，则认为两者的测定结果具有可比性。

4测试数据
5计算结果
5.1血清与全血（EDTA-Na）回归、Bland-Altman散点图分析以及医学决定水平处的偏倚：
线性回归相关参数统计分析结果：
斜率95%的置信区间包括1，截距95%的置信包括0。

血清与全血（EDTA-Na）检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种标本检测浓度差值为0.4894±5.5547g/L（均值±标准差），两种标本检测浓度差值的均值±1.96SD 范围在-10.3978g/L到11.3767g/L之间。

超出置信区间的百分比为：3.77%<5%。

血清与全血（EDTA-Na）检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种标本检测浓度比值为1.0009±0.0268（均值±标准差），两种标本检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9483到1.0534之间。

超出置信区间的百分比为：0.00%<5%。

医学决定水平处的偏倚的计算结果如下：
医学决定水平处的偏倚在可接受的范围内。

5.2血清与全血（EDTA-K）回归、Bland-Altman散点图分析以及医学决定水平处的偏倚：
线性回归相关参数统计分析结果：
斜率95%的置信区间包括1，截距95%的置信包括0。

考血清与全血（EDTA-K）检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种样本检测浓度差值为-0.6842±5.6819g/L（均值±标准差），两种样本检测浓度差值的均值±1.96SD 范围在-11.8206g/L到10.4523g/L之间。

超出置信区间的百分比为：3.77%<5%。

考血清与全血（EDTA-K）检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种样本检
测浓度比值为0.9992±0.0302（均值±标准差），两种样本检测浓度比值的均值±1.96SD 范围在0.9400到1.0584之间。

超出置信区间的百分比为：0.00%<5%。

医学决定水平处的偏倚的计算结果如下：
医学决定水平处的偏倚在可接受的范围内。

5.3血清与血浆（EDTA-Na）回归、Bland-Altman散点图分析以及医学决定水平处的偏倚：
线性回归相关参数统计分析结果：
斜率95%的置信区间包括1，截距95%的置信包括0。

血清与血浆（EDTA-Na）检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种标本检测浓度差值为-0.6898±4.8635g/L（均值±标准差），两种标本检测浓度差值的均值±1.96SD 范围在-10.2222g/L到8.8426g/L之间。

超出置信区间的百分比为：3.77%<5%。

血清与血浆（EDTA-Na）检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种标本检测浓度比值为1.0005±0.0262（均值±标准差），两种标本检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9492到1.0518之间。

超出置信区间的百分比为：0.00%<5%。

医学决定水平处的偏倚的计算结果如下：
医学决定水平处的偏倚在可接受的范围内。

5.4血清与血浆（EDTA-K）回归、Bland-Altman散点图分析以及医学决定水平处的偏倚：
线性回归相关参数统计分析结果：
斜率95%的置信区间包括1，截距95%的置信包括0。

血清与血浆（EDTA-K）检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种标本检测浓度差值为0.6164±4.5223g/L（均值±标准差），两种标本检测浓度差值的均值±1.96SD范围在-8.2473g/L到9.4801g/L之间。

超出置信区间的百分比为：3.77%<5%。

血清与血浆（EDTA-K）检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种标本检测浓度比值为1.0009±0.0284（均值±标准差），两种标本检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9452到1.0566之间。

超出置信区间的百分比为：0.00%<5%。

医学决定水平处的偏倚的计算结果如下：
医学决定水平处的偏倚在可接受的范围内。

6结论
综上结论，EDTA-Na和EDTA-K用于样本抗凝时，对本试剂盒检测结果不存在干扰，可用于检测前的样本处理。