水解动物蛋白-诺维信
Protomax 复合蛋白酶
储存
建议将 酶 储存 于 0-25°C （ 32-77°F ）的 密闭 容 器 中， 保持干燥 ， 避免阳光直 晒。本产品配至最佳的稳定性。然而随时间的推移，酶会逐渐失去活力。延期 储存或不宜条件，如较高的温度或湿度，会导致较高的添加量。
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应用
与其它多种内切蛋白酶不同，Protamex 即使在低水解度的情况下也不会产生 苦味的蛋白质水解物。 添加量 最佳添加量应由试验确定。
反应参数
应用实验确定，最佳工作条件为 pH 5.5-7.5，温度 35-60°C（9
60
40
25ºC
20
6
7
8 pH
图 1.不同温度下 pH 对 Protamex 活力的影响 底物：变性血红蛋白 方法：A F4
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2002-14778-01 19 07 2002 © Novozymes A/S
丝氨酸蛋白酶水解机制
快速反应相过程中酶和底物结合释放出对硝基苯酚离 子,同时形成乙酰基-酶中间体；而恒态反应相过程则 是乙酰基-酶中间体缓慢水解,放出酶,使之与底物相结 合继续释放出对硝基苯酚离子.由于乙酰基-酶的水解 很慢,使体系中酶浓度下降,进而导致对硝基苯酚释放 速率变慢.
3丝氨酸蛋白水解酶的空间结构：
X射线衍射法：通常,都是将表达蛋白的基因PCR之后克隆到一种表
达载体中,然后在大肠杆菌中诱导表达,提纯之后摸索结晶条件.结晶后, 将晶体进行x射线衍射,收集衍射图谱,通过一系列的计算,很快就能得 到蛋白质的原子结构.
牛的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶以及住的弹性蛋白酶在结构上很相似, 这三种酶大约由240个氨基酸残基组成,三者的一级结构大约有 40%是 相同的,且活性中心的必需氨基酸也大致相同Ser、His、Asp
Step 3：酰基-酶中间物的解离,这时His-57作为广义酸起催化作用.
乙酰胆碱是一种生物体内常见的神经传导物质,自身具有 很高的毒性,而负责水解完成传递信息任务后的乙酰胆碱 的乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶可将乙酰胆碱分解成无毒性 的乙酸和胆碱失活之后就会导致乙酰胆碱在生物体内不断 地积累,最终导致生物中毒死亡.
2活性His组氨酸基团：
N-对甲苯磺酰苯丙氨酸氯甲基酮TPCK其中氯甲基酮基是一个 很强的烷基化剂,它能够与反应中心His-57的咪唑基发生烷基 化反应,并最终引起酶的失活.
4.4.5 丝氨酸蛋白酶水解机制
什么是丝氨酸蛋白酶
丝氨酸蛋白酶是一个蛋白 酶家族,其激活是通过活性 中心一组氨基酸残基变化 实现的,它们之中一定有一 个是丝氨酸Ser,serine.在 哺乳类动物里面,丝氨酸蛋 白酶扮演着很重要的角色, 特别是在消化,凝血和补体 系统方面.
水产动物营养与饲料学PPT课件
概略养分与饲料组成之间的关系
水分 饲料
干物质
无机物(粗灰分或矿物质) 含氮化合物
有机物 无氮化合物
乙 醚
碳 水
粗纤维
浸化
出合
物 物 无氮浸出物(糖类)
(
粗 脂 .肪
)
纯养分
❖ 不能再进一步剖分的养分：Aa、矿物质、脂肪酸、 维生素、单糖、双糖等
▪ 优点：科学、准确、客观要求高 ▪ 缺点：方法复杂，设备要求高
.
二、饲料中糖类的种类和分布
❖ 糖类种类
▪ 单糖：多羟基醛酮，不能进一步分解－G、F、核糖 ▪ 低聚糖：2－6个单糖失水－双糖、三糖、四糖 ▪ 多糖：单糖聚合高分子化合物，多不溶于水，酶或酸解
❖ 同型聚糖：戊聚糖、己聚糖 ❖ 异型聚糖：果胶、树胶、半纤维素、粘多糖
.
三、鱼虾类对蛋白质需求
❖ 2.主要淡水养殖鱼类对蛋白需要量
▪ 青鱼： ▪ 草鱼： ▪ 团头鲂： ▪ 鲤鱼： ▪ 罗非鱼： ▪ 虹鳟： ▪ 斑点叉尾鮰： ▪ 鳗鲡： ▪ 鲮鱼：
.
三、鱼虾类对蛋白质需求
❖ 3.主要海水养殖鱼类对蛋白需要量
▪ 鰤鱼： ▪ 真鲷：55％ ▪ 黑鲷： ▪ 金鲷：40％ ▪ 鲽鱼：50％
❖ B＝0，动态平衡 ❖ B>0，摄入饲料蛋白补偿消耗外，还构成新组织，表现为体
重增加，体蛋白增加 ❖ B<0，粪尿排氮量>摄入氮，表现为鱼体消瘦，体重下降
.
三、鱼虾类对蛋白质需求
❖ 意义：
▪ 维持体蛋白动态平衡必需pr。量 ▪ 鱼虾最大生长
.
三、鱼虾类对蛋白质需求
❖ 1.确定鱼虾类饲料蛋白最适需要量方法
▪ 意义：提高pr.利用率
.
诺维信 Alcalase3.0T说明书
DFP＆PMSFD
+
EDTA＆磷酸盐
0
大豆胰蛋白酶抑制因子
0
B 链胰岛素氧化的作用链
4-5 9-10 11-12 15-16 26-27
分子量
约 27300
（表 1Alcalase 的生化特性）
规格
Alcalase 用每克酶中 Anson 单位（AU/克）标注
产品种类
Alcalase3.0T
标示活力
出物应用水冲洗，防止喷溅残余物会蒸干产生粉尘。
储存
酶制剂在不同的储存温度下，其活力会随时间不同程度地失去活力，
建议存储在阴凉干燥的环境中。
在冷藏条件下（5℃）本产品将保持标注活力至少一年，25℃储存本
产品将保持标注活力至少 3 个月。储存过久或储存条件不利；如温度
过高，则需要在使用时适量增加添加量。
包装：
Alcalase3.0T 桶装；每桶 40 公斤。
功能食品工业 2001-06774-01
产品说明书
Alcalase3.0T
碱性内切蛋白酶
应用
Alcalase 是特为水解各种蛋白质而研制的高效细菌蛋白酶。
特性
Alcalase 是由选育出的地衣芽孢杆菌生产而得，该酶的主要有效成
分枯草杆菌蛋白酶 A（枯草杆菌蛋白酶 carlsberg）,是一种内切蛋白
3.0AU/克
蛋白水解活力依据 DMC 方法测得，Alcalase3.0T 为褐色固体颗粒。
活力
使用修正的 Anson/血红蛋白方法进行测定，出 PH 値 6.5-8.5 之间
Alcalase3.0T 有最佳活力，同样得出最适合温度为约 60℃.
灭酶
当 PH 値为 4 时，50℃以上 30 分钟，或当 PH 値为 8 时，85℃以上 10
被你忽略的过瘤胃蛋白
童荣信可以从以下一下几点判断：1.由研究文献和本文所提供的附表详细计算精料、粗料中粗蛋白在瘤胃中的降解率。
2.由牛奶中的成份亦可略概判断。
例如：牛奶中的乳脂率正常而乳蛋白和乳中的尿素氮(BUN)的百分比偏低时，则显示，日粮中的粗蛋白不足量或其粗蛋白在瘤胃中的降解率过少。
3.若牛群中，卵巢囊肿和其它卵巢异常的比例偏高时，有可能是由日粮粗蛋白过量或粗蛋白在瘤胃中的降解率过高所致。
遇到如此状况或牛奶蛋白过低和尿素氮过高时，则建议使用过瘤胃蛋白以取代部分日粮中(尤其是精料中)的蛋白质来源，如：取代部分黄豆粉，以期减少粗蛋白在瘤胃的降解过多的现象。
4.一般而言，牛奶的正常含量为：乳蛋白>3.0%，尿素氮为7~9.5%，无脂固形物>8.5%。
牛只血液中的尿素氮(BUN)的正常量应为< 20 mg/100ml。
5.日粮中营养不均衡，尤其是热能和蛋白质之间的不均衡，亦相当影响牛奶成份和质量。
Q牛群的受孕率偏低与营养的关系为何?童荣信受孕率偏低的原因很多，建议由兽医师诊断后再寻求解决之道。
1.假使牛只的干物质采食量(Dry Matter Intake，DMI)不足时，由于营养不足而使内分泌系统的激素合成量不足，因而排卵不顺或受孕后的受精卵无法在子宫内着床发育，则自然地受孕率偏低。
尤其台湾炎热的夏天里，此等情况普遍存在。
2.饲料若受霉菌的污染，亦常见配种困难的问题。
霉菌毒素对配种有非常不良的影响。
霉菌毒素的污染有可能来自于精料中的玉米、黄豆或其它谷物。
粗料中的青贮料质量或新鲜度不佳对牛只的繁殖性能有不良影响。
3.矿物质不平衡、热能和蛋白质不平衡，不只影响瘤胃发酵的功能，更可影响繁殖性能和配种问题。
Q如果粗蛋白在瘤胃中被分解的量不足时，会有什么影响?童荣信若日粮中提供的粗蛋白不足以满足瘤胃微生物发酵作用的基本需求以发挥应有功能，则终致微生物蛋白(MCP)产生量不足，致使产奶量下降，以及牛奶中蛋白质含量降低。
Accepted Manuscript
polyedrum (Draisci et al., 1999) and Gonyaulax spinifera (Rhodes et al., 2006). In recent
(FAO/IOC/WHO, 2004; Amzil et al., 2008). YTXs may contribute significantly to the outcome of the traditional mouse bioassay for DSP toxins when injected intraperitoneally (i.p.). However, the mechanisms of action of OA/DTXs and YTXs are different, since it has
Accepted Manuscript
Title: Combined oral toxicity of azaspiracid-1 and yessotoxin in female NMRI mice Authors: John A.B. Aasen, Arild Espenes, Christopher O. Miles, Ingunn A. Samdal, Philipp Hess, Tore Aune PII: DOI: Reference: To appear in: S0041-0101(11)00100-0 10.1016/j.toxicon.2011.03.014 TOXCON 4078 Toxicon
the oral toxicity of YTX is not enhanced in the presence of sub-lethal levels of AZA1.
AC C
EP
蛋白质水解物在动物营养中的作用
蛋白质水解物在动物营养中的作用蛋白质是一种大分子物质，通常由二十种不同的氨基酸通过肽键连接组成。
蛋白质是动物组织(如骨骼肌、乳腺、肝脏和小肠)和畜产品(如肉、牛奶、鸡蛋和羊毛)的重要组成成分。
例如，生长期肉牛和育肥猪骨骼肌中的蛋白质含量约占干物质总量的70%(Wu等，2016)。
因此，摄入充足的蛋白质对家畜、家禽和鱼类发挥最大生长、生产性能和饲料效率都是必不可少的。
Wu(2013)报道，饲料中的蛋白质(如血粉、肉、骨粉、肠黏膜粉、豆粕、花生粕、棉籽粕)在小肠中蛋白酶的作用下被水解成小肽(二肽、三肽)和游离氨基酸。
水解生成小肽的类型与动物生理状况和日粮组成密切相关。
动物和植物性蛋白质饲料在被采食前通过化学处理、酶或者微生物发酵，可改善其营养品质、降低抗营养因子的含量并产生肽类(Dieterich等，2014;Pasupuleki 等，2010)。
此外，酶解和微生物发酵可以提高动物和植物性蛋白质饲料中小肽的溶解度、黏度、乳化性和凝胶化程度。
不同来源(细菌、植物和酵母)的蛋白酶均可用来酶解动物和植物性蛋白质饲料，多种微生物通过发酵，将动物或植物性蛋白质饲料水解生成肽类。
目前，蛋白质水解物已广泛应用于医学、营养(包括动物营养)和生物技术领域(Pasupuleki等，2010)。
本文主要对通过酶解技术和微生物发酵技术生成蛋白质水解物的相关研究进行综述，并对其在动物饲养中营养及生理学功能进行探讨。
1氨基酸、肽和蛋白质的定义氨基酸是含有氨基和酸基基团的有机物。
除甘氨酸外，所有蛋白源氨基酸均有一个α-氨基，并可在动物体内和饲料中形成L-异构体。
肽被定义为由2个或2个以上氨基酸残基通过肽键连接成的有机分子(Wu，2013)，每形成一个肽键脱去一分子水。
寡肽由2～20个氨基酸残基组成。
含有小于或等于10个氨基酸残基的寡肽称作小寡肽(或简单的小肽)，而含有10～20个氨基酸残基的寡肽称为大寡肽。
Kyte(2006)认为，超过20个氨基酸残基组成的肽被称为多肽。
饲料蛋白水解氨基酸含量的测定-实验方案
表 1.PH 型色谱柱分离 17 种氨基酸出峰顺序
缩写 支链 等电点
R基
分子量
1
天冬氨酸 Asp 酸性 苏氨酸 Thr 亲水性 丝氨酸 Ser 亲水性 谷氨酸 Glu 酸性 脯氨酸 Pro 疏水性 甘氨酸 Gly 亲水性 丙氨酸 Ala 疏水性 半胱氨酸 Cys 亲水性 缬氨酸 Val 疏水性 甲硫氨酸 Met 疏水性 异亮氨酸 Ile 疏水性 亮氨酸 Leu 疏水性 酪氨酸 Tyr 疏水性 苯丙氨酸 Phe 疏水性 赖氨酸 Lys 碱性
样品、氧化水解样品等）。
7
141.78 g 401 ml 123 ml 336 ml 1000 ml
4
1
R3
2
乙醇(色谱纯) 超纯水定容
50 ml 1000 ml
备注：1. 抽滤时，使用 0.22μm 滤膜，R1-R2 有机相、R3 无机相。有机相（R1/R2）抽 滤时滤器涂抹凡士林，且要先用乙二醇甲醚透膜再过滤。 2. R1 不定容，需现用现配，避光、避免空气氧化。 3. 配制 R2 时醋酸钠不易溶解，可微热至约 60 度，促进溶解。 五、实验步骤 （一）样品前处理 1. 样品粉碎、绝干：四分法取样，选取代表性的样品 10-20 g,粉碎后 60 目过筛、混匀， 于干燥箱中 105 °C 恒重，至质量差不超过 0.0002 g，保存至干燥器内备用。 2. 称样：用酒精喷灯烧结试管 1/3 处拉细呈颈状，称样 100-200 mg,置于试管底部。 3. 水解：分批加入 15 mL 酸解剂充分浸润样品。充氮气约 1 min 除氧气，烧结密封试管。 将水解管放在(110 士 1)°C 恒温干燥箱中，水解 22-24 h。 4. 稀释、过滤：水解管冷却至室温后开管，将溶液转移至 50/100 mL 容量瓶中，超纯水 定容，混匀静置，取上清用 0.22 μm 微孔滤膜过滤至 EP 管中作为储备液。用移液枪定量 取 400 μL 至样品瓶。 5. 脱酸、稀释：样品液用液氮迅速固化后用冻干机蒸空干燥至瓶内完全无液体，加入 800 μL 0.02 N HCl 溶液，涡旋混匀，放至 4 °C 备用。 （二）上机测定 1. 色谱条件 （1）色谱柱：PH 型（钠型）：内径 4.6 mm* 长 60 mm，填料为阳离子交换树脂（强酸型 磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物）担体粒径 3 µm。 （2）进样量 20 μL。 （3）检测波长：570 nm 和 440 nm。 （4）梯度洗脱程序
兽药恩诺沙星(enrofloxacin)的水解特性
兽药恩诺沙星(enrofloxacin)的水解特性吴银宝;廖新俤;汪植三;陈杖榴;周阳【期刊名称】《应用生态学报》【年(卷),期】2006(17)6【摘要】研究了恩诺沙星在不同pH、不同光照及不同微生物条件下的水解,为其生态风险评价提供依据.结果表明,恩诺沙星的水解产物中没有环丙沙星;50 ℃时,避光5 d后恩诺沙星在pH 1～10缓冲液中的水解都小于10%,表明恩诺沙星在恒温避光下的水解半衰期将超过1年,同时溶液pH值的变化对恩诺沙星的水解速率无显著影响;恩诺沙星在天然水中的降解与光照有关,在室外自然光照条件下恩诺沙星降解很快,3 d后水中已经检测不出恩诺沙星.在室内自然光下,恩诺沙星降解较慢,在初始浓度分别为0.05、0.2、1.0 mg·L^-1条件下,31 d试验期内分别降解了48%、72%和65%;在避光条件下,恩诺沙星非常稳定,不易降解.在不同初始浓度下,微生物对恩诺沙星的水解无显著影响.由于恩诺沙星在室外自然光照条件下会迅速降解,因此不会对水环境构成直接的危害,但不能忽视其潜在的生态风险.【总页数】5页(P1086-1090)【关键词】恩诺沙星;水解【作者】吴银宝;廖新俤;汪植三;陈杖榴;周阳【作者单位】华南农业大学动物科学学院;广东省兽药研制与安全评价重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S859.83【相关文献】1.紫外可见分光度法测定恩诺沙星原料中恩诺沙星的含量 [J], 谭胜国;吴镇金;印怀文;刘水喜2.紫外可见分光度法测定恩诺沙星原料中恩诺沙星的含量 [J], 谭胜国;吴镇金;印怀文;刘水喜3.恩诺沙星、恩诺沙星钠和盐酸恩诺沙星在鸡体内的比较药动学 [J], 丁焕中;杨大伟;孙永学;沈样广;古小燕4.以恩诺沙星为检测对象探究恩诺沙星与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 傅丽;胡晓红;鞠岩;高帆;远新新;张玉婵5.钇-恩诺沙星增敏体系荧光光谱法测定饲料中恩诺沙星的含量 [J], 李军德;马池方;张婷婷;宋吉英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
动物营养学资料
第一章动物与饲料的化学组成1、饲料、养分、ADF、NDF、CF、概略养分分析法的概念。
饲料：在正常情况下，凡能被动物采食、消化吸收、无毒无害、且能提供营养物质的所有物质均叫饲料。
养分：凡能被动物用以维持生命、生产产品的物质叫养分。
ADF：酸性洗涤纤维（纤维素+酸性洗涤木质素和灰分）NDF：中性洗涤纤维（酸性洗涤纤维+中性洗涤可溶物）CF：粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分，包括纤维素、半纤维素、木质素及角质等成分。
概略养分分析法：（常规饲料分析方）即水分（或干物质）、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、无氮浸出物、矿物质；其测定的是饲料中的概略养分（或称为粗略养分），每种成分均包括多种物质，而且不完整，没有维生素。
2、饲料概略养分分析包括几大成分？分别怎样测定和计算？包括六大成分为水分、粗蛋白质、粗纤维、粗脂肪、无N浸出物和粗灰分。
（1）水分各种饲料均含有水分，其含量差异很大，最高可达95%以上，最低可低于5%。
初水含量＝饲料鲜重（g）－风干饲料重（g）/鲜饲料重（g）×100％吸附水含量＝风干饲料重（g）－烘干后饲料重（g）/风干饲料重（g）×100％（2）粗灰分：是饲料、动物组织和动物排泄物样品在550-600℃高温炉中将所有有机物质全部氧化后剩余的残渣。
粗灰分含量＝灰含量（g）/饲料样品重（g）×100％（3）粗蛋白质：饲料中含氮化合物的总称。
粗蛋白：包括（真蛋白+非蛋白氮）粗蛋白质=饲料样品含氮（g）×6.25/饲料样品重（g）×100％（4）粗脂肪是饲料、动物组织、动物排泄物中脂溶性物质的总称。
常规饲料分析是用乙醚浸提样品所得产品，故称为乙醚浸出物。
EE包括真脂肪和其他脂溶性物质（如色素、维生素等）。
（5）粗纤维：粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分，包括纤维素、半纤维素、木质素及角质等成分。
常规分析法是酸碱测定法测定。
结果：一部分纤维素、半纤维素和木质素溶解，使CF测值偏低，NFE偏高半纤维素=NDF-ADF 纤维素=ADF-酸性洗涤（六）无氮浸出物（NFE）：为可溶性碳水化合物，包括单糖、双糖和淀粉等可溶性多糖的总称。
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水解动物蛋白（HAP）
水解动物蛋白(HAP) 一般是通过酸水解、高温蒸煮骨头原料或禽类、牛或猪的畜体而制得的可以起到风味增强作用的产品。
诺维信已开发出利用酶生物技术在6至24小时内即可生产出动物水解蛋白（HAP）的生产工艺（水解度约为50－60%）。
与化学方法相比，酶法的条件温和，可将更多的动物蛋白转化为风味成份而不会产生不良副产物。
温和的条件同时又能使您减少在设备上的投资。
使用酶制剂的益处：
∙可作为进一步风味化的反应基料
∙没有反应副产物，如氯丙醇（MCP）或二氯丙醇（DCP）
∙低盐
∙投资小：无需高压蒸煮设备
所用酶制剂：
∙诺维信®碱性蛋白酶（Alcalase®）
已具有40年的悠久历史但依然功能强大，是世界上第一个为洗涤工业而大规模生产的酶制剂。
碱性蛋白酶是洗涤工业中用于去除蛋白污渍的细菌蛋白酶。
此酶的有效工作条件是中性和偏碱性
（pH 7－10），适合用于预泡剂和液体/颗粒型洗涤剂，并对羊毛没有损害。
诺维信®碱性蛋白酶
（Alcalase®）同样也可以使用于食品工业，用来提高蛋白的功能、营养以及风味特性（如乳蛋白改性）。
纺织工业中它可以用于生丝精练。
∙诺维信®风味蛋白酶（Flavourzyme®）
让生活充满更多美味
诺维信®风味蛋白酶（Flavourzyme®）是一种真菌内切和外切复合蛋白酶，广泛用于功能食品工业
中，合适水解各类蛋白质（如乳蛋白改性）。
∙诺维信®复合蛋白酶（Protamex®）
改善口感
诺维信®复合蛋白酶（Protamex®）是一种应用于功能食品工业的微生物来源的蛋白酶，它可以改善蛋白的功能、营养和风味特性。
工艺：。