【最新2018】细胞培养实验心得-word范文模板 (11页)
细胞技术实践报告范文(2篇)

第1篇一、实验背景细胞技术是现代生物技术的重要组成部分,涉及细胞培养、细胞分裂、细胞融合、细胞遗传学等多个领域。
通过细胞技术,我们可以研究细胞的生命活动、细胞代谢、细胞分化等生物学现象,为疾病诊断、治疗和生物制品的研发提供重要手段。
本实验旨在通过细胞培养、细胞传代等基本操作,掌握细胞技术的基本技能。
二、实验目的1. 熟悉细胞培养的基本操作,包括细胞接种、细胞传代等。
2. 掌握细胞计数、细胞活力检测等细胞生物学基本技能。
3. 了解细胞生长曲线的绘制方法。
三、实验原理细胞培养是细胞技术的基础,通过在体外模拟细胞生长环境,使细胞在人工条件下生长繁殖。
细胞培养过程中,需注意无菌操作、营养供给、pH调节、气体交换等因素。
细胞传代是指将培养至一定时期的细胞取出,分装到新的培养容器中继续培养,以保证细胞的遗传稳定性。
四、实验材料与仪器1. 实验材料:细胞悬液、培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、胰蛋白酶、细胞计数板、盖玻片、移液器、培养皿、超净工作台等。
2. 实验仪器:显微镜、离心机、CO2培养箱、恒温水浴锅、高压蒸汽灭菌器等。
五、实验步骤1. 细胞接种(1)将细胞悬液用移液器吸取,加入培养皿中,使其均匀分布。
(2)将培养皿放入CO2培养箱中,37℃、5%CO2条件下培养。
2. 细胞传代(1)将培养至一定时期的细胞取出,用胰蛋白酶消化细胞。
(2)将消化后的细胞用移液器移至新的培养皿中,加入适量培养基。
(3)将培养皿放入CO2培养箱中,37℃、5%CO2条件下培养。
3. 细胞计数(1)将细胞悬液用移液器吸取,加入细胞计数板中。
(2)在显微镜下观察,计数细胞数目。
4. 细胞活力检测(1)将细胞悬液用移液器吸取,加入96孔板中。
(2)在酶标仪下检测细胞活力。
5. 绘制细胞生长曲线(1)根据实验数据,绘制细胞生长曲线。
(2)分析细胞生长规律。
六、实验结果与分析1. 细胞接种后,细胞在培养皿中均匀分布,生长良好。
2. 细胞传代过程中,细胞生长状况良好,遗传稳定性较好。
生物细胞培养实习报告

一、实习背景随着生物科学技术的不断发展,细胞培养技术在医学、生物学、药理学等领域中发挥着越来越重要的作用。
为了加深对细胞培养技术的理解,提高自身的实践操作能力,我参加了为期两周的生物细胞培养实习。
本次实习旨在通过实际操作,掌握细胞培养的基本原理、操作步骤和注意事项。
二、实习目的1. 了解细胞培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握细胞传代、冻存、复苏等基本技术。
3. 培养严谨的实验态度和良好的实验习惯。
4. 提高团队合作能力和解决问题的能力。
三、实习内容1. 细胞培养基础知识实习开始前,我们首先学习了细胞培养的基本知识,包括细胞生物学、分子生物学、微生物学等相关知识。
通过学习,我们了解到细胞培养是利用体外培养技术,在适宜的条件下使细胞生长、繁殖的过程。
2. 细胞培养操作步骤(1)细胞复苏:将冷冻保存的细胞取出后,用预温的培养基溶解冻存管中的保护剂,将细胞重悬于培养基中,然后接种于培养皿或培养瓶中。
(2)细胞传代:将培养皿或培养瓶中的细胞用胰酶消化,然后接种于新的培养皿或培养瓶中,进行下一次培养。
(3)细胞冻存:将培养皿或培养瓶中的细胞用预冷的含10%二甲基亚砜(DMSO)的培养基重悬,分装于冻存管中,置于-80℃冰箱中保存。
(4)细胞复苏:将冻存管取出后,置于37℃水浴中解冻,然后接种于新的培养皿或培养瓶中。
3. 实验操作在导师的指导下,我们进行了以下实验操作:(1)观察细胞形态:通过显微镜观察细胞在不同培养阶段的形态变化,了解细胞生长状态。
(2)细胞计数:使用细胞计数板和血球计数器,对细胞进行计数,了解细胞密度。
(3)细胞传代:将培养皿中的细胞用胰酶消化,然后接种于新的培养皿中,进行传代培养。
(4)细胞冻存:将培养皿中的细胞用预冷的含10%二甲基亚砜(DMSO)的培养基重悬,分装于冻存管中,置于-80℃冰箱中保存。
4. 实验结果与分析(1)细胞形态:观察细胞在不同培养阶段的形态变化,发现细胞生长状态良好,呈典型的贴壁生长状态。
细胞工程实验小结

细胞工程实验小结本页仅作为文档页封面,使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March细胞工程实验小结专业:生物技术班级:0801 姓名:励丹学号:在本次暑期短学期的细胞工程实验课上,我们做了细胞工程中基础的几个实验——饲养层细胞的制备、动物细胞的原代培养(组织块法培养小鼠肝脏细胞,消化法培养小鼠肾脏细胞)、免疫脾细胞的制备、免疫脾细胞与骨髓瘤细胞的融合、细胞的超低温冻存与复苏及活性测定(MTT法检测)、抗体IgG的检测(ELISA法),让我受益菲浅。
其中很多知识在平时的学习中都是无法学习到的,其中很多实验都开阔了我们的视野,让我们获得了许多平时课堂上得不到的知识。
在细胞工程实验课即将结束的时候,我对这个短学期的学习进行总结,总结细胞工程课程试验来的收获与不足。
这次的实验分成了8个小组,因为细胞工程的实验都须在无菌室内进行,而无菌室较小,所以各小组轮流进无菌室进行实验操作,故没轮到进无菌室的小组在外面的实验室进行简单的操练,所以较为轻松。
我们中的大多数人都是第一次进无菌室,对无菌室充满了好奇。
而进无菌室也需要一重重地灭菌,以确保无菌室内的安全。
首先需要用新吉尔灭溶液对需要带进无菌室的物品及我们的手进行消毒灭菌,然后进入缓冲间穿戴无菌服、帽、手套及口罩。
在进入无菌室后还需要用酒精棉擦拭手、超净台以及一些物品。
在无菌室内的操作都需在超净台上进行,而且需要在酒精灯边上进行,不可以远离超净台,否则可能使培养的细胞或培养液等受到污染,从而造成实验失败。
我们小组在细胞培养的实验中较为成功,细胞生长状态良好,没有出现染菌现象。
在进行细胞超低温冻存于复苏实验时,我们组将两只小鼠的细胞混在一起,是的细胞数增加,相对的在冻存中损伤的细胞数也增多,这个实验应该算不成功的。
通过9天的细胞工程实验,我发现实验是细胞工程学学的实践,我们学到的许多理论都会最终作用于实验,也学到了许多其他专业课上没有教到的理论。
细胞培养入职培训心得体会

细胞培养入职培训心得体会细胞培养是生物医学实验中非常重要的一个环节,它对实验结果的准确性和可重复性有着至关重要的影响。
在我入职的第一个月,我接受了公司的细胞培养入职培训,通过授课和实际操作,我对细胞培养有了更加深入的认识和了解。
在培训的过程中,我不仅学到了细胞培养的基本理论和技术,还体会到了团队合作和沟通的重要性。
在这篇文章中,我将分享我在细胞培养入职培训中的心得体会。
在第一次接触细胞培养的时候,我对这个过程感到非常陌生。
虽然在学校里学过相关理论知识,但在实际操作中还是感到非常吃力。
因此,我对细胞培养的重要性产生了更加深刻的认识。
这也激发了我对细胞培养的学习热情,我希望通过这次培训,能够掌握细胞培养的基本技术,为日后实验工作的顺利开展打下坚实的基础。
培训的第一天,我们就开始了理论知识的学习。
导师详细讲解了细胞培养的流程、原理和注意事项,并且配以图文并茂的PPT,使我们更加直观的了解了这方面的内容。
在理论课上,我学到了许多新知识,例如:细胞的培养条件、培养环境的要求、细胞培养的基本流程等。
这些知识的学习使我对细胞培养有了一个全面的认识,也为后续的实际操作打下了良好的基础。
除了理论课,我们还进行了细胞培养实操课。
导师为我们带来了不同种类的细胞,通过操作视频和实际操作,在导师的指导下,我们逐步学会了细胞培养的基本技术。
例如:细胞的传代、培养基的配制、细胞的分离和传代等。
通过实操,我进一步加深了对细胞培养技术的理解,并且掌握了细胞培养的基本操作流程。
在实操课中,我最大的收获就是学会了严格控制细胞培养的条件。
比如,细胞培养必须在无菌操作条件下进行,培养皿和器具都必须经过高温高压消毒,培养基和培养液的配制也需要按照一定的比例和方法进行。
这些细节性的操作确保了细胞培养的可靠性和准确性。
此外,在细胞培养中,对于细胞的分代和传代也有着严格的要求。
要注意细胞的数量和活力,不可使细胞过度密集或过度释放,要及时传代,保证细胞在健康状态下进行培养。
细胞培养技术个人总结

总结---细胞培养一.基本理论概论原代培养: 也叫初代培养,指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。
传代培养:将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。
细胞系:原代培养物成功传代后,则称之为细胞系。
(如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系;已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系,称连续细胞系或无限细胞系。
)细胞株:通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。
培养类型:细胞培养,组织培养,器官培养。
细胞生长的方式:贴附生长,悬浮生长培养细胞的形态(形态不一定,环境改变形态可能改变):成纤维性型细胞,上皮型细胞(单层膜样生长),游走性细胞(游散生长,常有伪足跟突起)二.培养过程及要点(切记无菌操作)(一)工作环境的处理1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
吸管口切勿碰到容器瓶口4. 工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
细胞培养实验员工作总结

细胞培养实验员工作总结作为一名细胞培养实验员,我深知这项工作的重要性和复杂性。
在过去的一段时间里,我积累了丰富的经验,也遇到了不少挑战。
在这篇文章中,我将分享我的工作总结,希望能够对同行们有所帮助。
首先,作为细胞培养实验员,我们的工作主要是负责细胞培养和细胞实验。
这包括细胞的分离、培养、传代、冻存等工作。
在这个过程中,我们需要严格控制实验条件,确保细胞的生长环境和培养条件符合要求。
同时,我们还需要进行细胞实验,包括细胞凋亡、增殖、迁移等实验,以评估细胞的生理功能和药物反应等。
在工作中,我发现最重要的是细心和耐心。
细胞培养是一个细致而繁琐的过程,需要耐心和细心的操作。
任何一个细节的疏忽都可能导致实验失败。
因此,我在工作中始终保持高度的注意力和细致的操作,以确保实验的准确性和可靠性。
另外,团队合作也是非常重要的。
在实验室工作中,我们需要和同事们密切合作,共同完成实验任务。
在这个过程中,我学会了与他人良好沟通,团结协作,共同解决实验中的问题。
团队合作不仅提高了工作效率,也促进了团队的凝聚力和成员之间的友好关系。
此外,不断学习和提高自身的专业能力也是非常重要的。
细胞培养是一个不断发展和变化的领域,新的技术和方法层出不穷。
作为一名细胞培养实验员,我始终保持学习的态度,不断学习新的知识和技术,提高自己的专业能力。
总的来说,作为一名细胞培养实验员,我深知这项工作的重要性和挑战性。
在工作中,我始终保持细心和耐心,与同事们团结合作,不断学习和提高自身的专业能力。
我相信,在未来的工作中,我将继续努力,不断提高自己的细胞培养技术,为科学研究和医学发展贡献自己的力量。
细胞工程实训总结

细胞工程实训总结细胞工程实训是生物科学和生物工程领域的一项重要实践活动,通常包括细胞培养、分离和纯化、DNA克隆、蛋白表达等实验。
下面是一份细胞工程实训总结的示例:实训主题:细胞工程实训总结实训时间:[具体时间]实训地点:[实验室名称]实训目标:理解和掌握细胞培养的基本原理和技术。
学习细胞的分离、纯化和鉴定方法。
掌握DNA克隆和蛋白表达的基本步骤和技术。
培养实验设计和数据分析的能力。
实训内容:1、细胞培养:学习培养基的制备和细胞传代的技术。
了解细胞培养的无菌操作和细胞培养器的使用。
2、细胞分离与纯化:掌握细胞的分离和富集技术,如离心、过滤等。
学习细胞鉴定方法,包括形态学观察和分子生物学技术。
3、DNA克隆:学习DNA提取和PCR扩增技术。
掌握DNA连接和质粒构建技术。
4、蛋白表达:学习蛋白表达的基本原理和技术。
掌握细胞转染、蛋白纯化和Western印迹等技术。
5、实验设计与数据分析:学习实验设计的基本原则,包括实验组的选择和控制。
掌握数据记录和分析,以绘制图表和解释结果。
实训总结:这次细胞工程实训为我提供了宝贵的实践经验和知识。
通过参与不同领域的实验,我深入了解了细胞培养、DNA克隆和蛋白表达的基本原理和技术。
我学会了无菌操作、实验设计和数据分析的重要性。
在细胞培养方面,我成功传代了多个细胞系,掌握了培养基的制备和无菌技术。
我也了解了细胞分离和纯化的方法,包括离心和过滤,以及细胞鉴定的重要性。
在DNA克隆方面,我学会了DNA提取、PCR扩增和质粒构建。
这对于研究基因功能和蛋白表达起着关键作用。
最后,在蛋白表达方面,我熟练掌握了细胞转染、蛋白纯化和Western印迹等技术,这些技能对于研究蛋白质功能至关重要。
这次实训不仅提高了我的实验技能,还增强了我的实验设计和数据分析能力。
我相信这些知识和经验将对我的未来学术和职业发展产生积极影响。
感谢导师和实验室团队的指导和支持,使这次实训成为我学术生涯中的重要一步。
细胞培养实验报告

细胞培养实验报告引言:细胞培养是一项关键的实验技术,被广泛运用于生物医学研究以及产业生产领域。
本实验旨在通过培养小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)并观察其生长、形态特征以及细胞增殖情况,探究细胞培养技术的应用和原理。
实验方法:本实验通过收集小鼠胚胎,将其胚体分离为单个细胞,并在含有完善的培养基的培养皿中进行培养。
细胞培养过程需要细致地调节温度、湿度和培养基组分的浓度,以提供细胞正常生长所需的环境条件。
结果与讨论:1. 细胞形态观察:在培养7天后,我们观察到细胞呈现典型的长条状形态,细胞质呈深染的圆形,细胞核体积大且显著染色。
这些形态特征与前人研究得出的成纤维细胞特征相符,表明成功培养的细胞为成纤维细胞。
2. 细胞增殖情况:为了观察细胞增殖情况,我们定期记录细胞的数量。
结果显示,在培养的前3天内,细胞数量迅速增加,呈指数增长趋势。
然而,在培养达到第4天后,细胞数量的增长速度下降,呈现对数增长趋势。
这与前人研究中发现的细胞生长曲线相吻合,即细胞在培养初期呈现快速增殖,随后进入平台期。
3. 细胞死亡情况:我们也检测了细胞的死亡情况。
结果显示,在培养的前3天内,细胞死亡率较低,细胞具有良好的存活率。
然而,随着培养时间的延长,细胞死亡率逐渐升高。
这可能是由于细胞寿命受到限制,受到培养基中营养物质的消耗和毒性物质的积累的影响。
4. 细胞传代:为了延续细胞的生长,我们进行了细胞传代的实验。
在细胞密度达到一定水平后,我们对细胞进行了传代,并观察到新传代的细胞能够生长并形成典型的细胞群。
这证实了我们成功地培养出了具有传代潜能的细胞。
结论:通过本次实验,我们成功地培养出了小鼠成纤维细胞,并观察到其特征、增殖和传代情况。
这次实验验证了细胞培养技术的可行性,并为细胞生物学和生物医学研究提供了有力的工具。
细胞培养技术的应用将进一步推动生物医学领域的发展,有望为疾病治疗和组织工程等领域带来更多突破。
展望:尽管本次实验获得了较为理想的结果,但仍存在一些值得深入研究的问题。
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本文部分内容来自网络整理,本司不为其真实性负责,如有异议或侵权请及时联系,本司将立即删除!== 本文为word格式,下载后可方便编辑和修改! ==细胞培养实验心得篇一:细胞培养技术总结细胞培养技术总结(,,,)1·培养环境的要求(切记无菌操作)工作环境的处理1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
吸管口切勿碰到容器瓶口 4. 工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒。
感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中,应避免引起aerosol 之产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头之伤害等。
2·仪器设备的要求定期检测下列项目:CO2 钢瓶之CO2 压力。
CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。
无菌操作台内之airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300 小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。
水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水。
3·无菌处理1)器具的无菌操作试验用玻璃塑料用品清洗及其消毒灭菌清洗:a玻璃器皿的清洗(酸液由重铬酸钾,浓硫酸,蒸馏水配置)浸泡—刷洗—浸酸—冲洗b胶塞的清洗刚买回的常含滑石粉等杂质,先用自来水冲洗后再按常规方法处理。
2%NaoH或洗衣粉煮沸10-20分钟---1%稀Hcl浸泡30分钟或蒸馏水冲洗后再煮沸10-20分钟—晾干备用c塑料制品的清洗 2%NaoH浸泡过夜—自来水冲洗--5%稀Hcl浸泡30分钟—自来水和蒸馏水冲干备用。
2)消毒灭菌:a物理消毒法(紫外线,湿热,烘干,过滤)含碳酸氢钠溶液要过滤,高压会分解,培养液、平衡盐溶液及其它需要灭菌的液体:121℃, 15 磅, 20 分钟;布类、玻璃制品、金属器械等物品:先121℃, 15 磅, 20 分钟,然后在烘箱中烘干;玻璃瓶:干热灭菌170℃,4小时 b化学消毒法(70%酒精,千分之一的新洁尔灭)c抗生素:培养用液灭菌或预防培养物污染3)无菌的操作技术培养物的污染及控制污染种类:(1)细菌污染:培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。
污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡。
(2)真菌污染:培养细胞受真菌污染后,可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点,有的散在生长,培养液一般不发生混浊;倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中,有的呈链状排列。
(3)支原体污染:培养细胞受支原体污染后,部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢,部分细胞变圆,从瓶壁脱落。
但多数细胞污染后无明显变化,或略有变化,若不及时处理,还会产生交叉污染。
(4)病毒污染:尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的。
因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。
(5)非同种细胞污染:污染来源:(1)不洁的动物组织标本:正常情况下组织来源是不带菌的,但由于取材不小心也会染菌,也有可能动物体本身带菌,不用浓的抗生素清洗,会导致培养污染。
(2)空气:如果无菌操作区与外界隔离不严,空气中会带菌。
其次,超净台使用过久,滤板堵塞也会污染。
工作时不带口罩外界气流过强会污染。
再者,南方空气潮湿,空气中容易带菌,操作不注意会染菌。
(3)清洗消毒:培养用液除菌不彻底,培养器具清洗消毒不彻底。
(4)操作不过关4试剂及器材的准备1)培养基1. 液体培养基贮存于4 oC 冰箱,避免光照,实验进行前放在37oC 水槽中温热。
2. 液体培养基(加血清) 存放期为六个月,期间glutamine (谷氨酰胺)可能会分解,若细胞生长不佳,可以再添加适量glutamine。
3. 粉末培养基配制(以1 升为例):3.1. 细胞培养基通常须添加10 % 血清,因此粉末培养基之配制体积为900 ml,pH 为7.2 - 7.4。
NaHCO3 为另外添加,若将NaHCO3 粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差,或局部过碱。
因此粉末培养基及NaHCO3 粉末应分别溶解后才混合,然后用CO2气体调整pH,而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH),因为氯离子对细胞生长可能有影响,且贮存时培养基的pH 易发生改变。
2)PBS:0.01M,PH=7.4的PBS配方,500ml.Na2HPO4 0.575g;NaH2PO4 0.148g;Nacl 4.25g.3)胰酶:对一般细胞 0.25% 胰酶4)水:新鲜配制的三蒸水或去离子水5)细胞冻存液:培养基(无血清):血清:DMSO 比例7:2:1DMSO常温避光保存,不能高温高压灭菌。
DMEM也不能高温高压,可以过虑除菌。
6)其他:HEPES液生物缓冲液,化学性质稳定,在PH7.2~7.6范围内,比NaHCO3缓冲液的缓冲能力更强。
7)培养器材:超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。
a玻璃器材:无菌室培养皿、滴流瓶、刻读吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶b塑料器材:多孔培养板、培养皿、培养瓶c橡皮器材:橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。
d金属器材:剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头e其他物品:纱布、注射器和针头5.实验操作方法1)细胞复苏:冻存复苏后的状态主要与冻存保护种类、浓度、以及细胞复苏方法和复苏后培养液中小血清浓度等有关。
二甲基亚砜是一种分子量小、非常强的溶解能力和非凡渗透能力的化学物质用最广泛的体外培养细胞冻存保护剂[7] , 其常用浓度为10%~20%,不同种属细胞的最适浓度也存在一定差别,例如,10%二甲基亚砜浓度对长期冻存K562细胞较为适宜。
2)细胞传代:细胞在原代培养1~4周后,需要进行分离培养,否则细胞会因生存空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭,影响细胞的生长繁殖。
贴壁型细胞的传代:传代时需要用胰酶将细胞消化,使其从支持物上脱落,或用EDTA溶液与胰酶按1:1或1:2比例混合后联合使用。
过滤除菌后,小量分装,保存与-20 ℃。
消化时吸去培养瓶内的培养液,加入适量的EDTA溶液与胰酶的混合液,以能覆盖细胞层为度,将培养瓶平放,37 ℃作用3~5 min,加入Hanks 液,1 000 r/min离心5 min即可除去消化液,洗1~2次后加入完全培养液,计数,置培养皿或培养瓶中培养悬浮型细胞的传代:传代时用吸管将细胞吹打均匀,特别是一些成团生长的细胞,应将细胞团块打散。
根据细胞生长状况的不同,用吸管将细胞悬液吸去适当的量,然后再加入完全培养液至原体积。
3)细胞冻存:传代培养的细胞, 如果暂时不用,, 可以冷冻保存,需要时再复苏。
冷冻前一日更换半量或全量培养液,观察细胞生长状态。
冷冻细胞时,所用的冷冻保存液需新鲜配制,在新鲜培养液中加入 DMSO 至终浓度 5%-10%,加入血清至终浓度 20%,混合均匀即成冷冻保存液,室温待用。
将待保存的细胞离心(3000 转以下3~5min ) ,去除上清,加入适量冷冻保存液,混匀,分装于冷冻保存管中。
冷冻的方法有两种,一种是传统方法,按以下程序进行:4℃10min~-20℃30min~-80℃16~18 小时或隔夜,放入液氮长期保存。
另一种是程序降温法:用等速降温机以~1-3℃/min 的速度由室温降至-120℃,放于液氮罐长期保存。
注意事项1、实验前未检查器械和液体是否污染2、操作者未带口罩帽子,呼出空气中含细菌和支原体3、培养瓶未用75%酒精擦拭和灼烧4、操作不当吸管或培养用品接触到污染物,如皮肤,瓶壁5、操作者说话大声,来回走动,扬起灰尘。
实验结果篇二:细胞培养实验报告动物细胞培养一、试验目的。
1、掌握无菌操作技术。
2、掌握原代和传代细胞培养。
3、掌握细胞冷冻和复苏技术。
4、了解培养成纤维细胞的形态。
二、试验原理。
将动物机体的组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
对具有移动特性的稳定细胞系或细胞株进行长期保存,一方面可以作为细胞研究的试验材料,另一方面可以做细胞制品的生产材料。
目前广泛应用的细胞保存方法是低温冷冻保存法,。
细胞的冷冻保存的原则是慢冻快融,这样做是为了防止细胞由于冷冻过程中产生了冰晶而发生细胞破裂。
三、实验器材及药品。
器材:怀孕的小白鼠、培养箱、培养瓶、培养皿、移液器、眼科剪、镊子、酒精灯、离心机、水浴锅、倒置显微镜、CO2培养箱、超净工作台、离心管、高压灭菌锅、试管架等。
药品:小牛血清、DMEM合成培养基、抗生素、DMSO冷冻剂、胰酶、PBS缓冲液等。
四、实验操作。
1、消毒灭菌。
将实验所需用到的工具(如枪头、培养皿、眼科剪、镊子以及每个人的实验服等)集中灭菌、烘干。
配制75%的酒精以备实验时所需。
2、培养基的配制。
分别取10ml的小牛血清、90ml的DMEM合成培养基,将两种培养基混合在一起,再向其中加入1ml的抗生素,吹打混匀就得到了细胞培养的培养液。
3、原代培养。
(1)、准备。
将实验过程中会用到的工具以及药品全部放在超净工作台上进行紫外消毒灭菌。
实验开始前带好乳胶手套,用酒精对手进行消毒。
将怀孕的小白鼠放在酒精中杀死,取出子宫内的胚胎组织。