人脐带源间充质干细胞分离培养方法的改进_李艳琪
中国组织工程研究 第18卷 第10期 2014–03–05出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research March 5, 2014 Vol.18, No.10
ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH
1609www.CRTER.org
李艳琪，女，1988年生，山东省淄博市人，汉族，天津大学在读硕士，主要从事脐带间充质干细胞分离培养等方面的研究。 通讯作者：靳继德，博士，副研究员，军事医学科学院放射与辐射研究所，北京市 100039 并列通讯作者：吴祖泽，研究员，中国科学院院士，天津大学化工学院制药工程系系统生物工程教育部重点实验室，天津市300072；军事医学科学院放射与辐射研究所，北京市 100039 doi:10.3969/j.issn.2095-4344. 2014.10.021 [http://www.crter.org] 中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2014)10-01609-06 稿件接受：2014-01-18 Li Yan-qi, Studying for master’s degree, Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education, and Department of Pharmaceutical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China Corresponding author: Jin Ji-de, M.D., Associate investigator, Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 10039, China Corresponding author: Wu Chu-tse, Academician, Investigator, Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education, and Department of Pharmaceutical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China; Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 10039, China Accepted: 2014-01-18 人脐带源间充质干细胞分离培养方法的改进 李艳琪1，王洪一2，姚 尧2，刘晶晶3，徐 潇2，张 宇2，刘 洋3，吴祖泽1，4，靳继德4(1天津大学化工学院制药工程系系统生物工程教育部重点实验室，天津市 300072；2解放军沈阳军区总医院，辽宁省沈阳市 110016；3北京工业大学生命科学与生物工程学院，北京市 100022；4军事医学科学院放射与辐射研究所，北京市 100039) 文章亮点： 在脐带干细胞的培养过程中，实验特色性的对传统的组织块贴壁法进行了改进，将传统组织贴壁法中本应丢弃的组织转移到新的培养瓶中，进行二次贴壁培养，在较短时间内获得更多数量的间充质干细胞。通过二次贴壁法得到的细胞经流式细胞仪检测符合间充质干细胞的特性，且增殖能力旺盛，具有体外多向分化潜能，可成为临床研究和应用的细胞来源。 关键词： 干细胞；脐带脐血干细胞；脐带；间充质干细胞；分离培养；二次贴壁 主题词： 干细胞；脐带；间质干细胞；细胞培养技术 摘要 背景：脐带来源的间充质干细胞因其具有高度的自我更新和多向分化潜能，以及取材方便等优点而日益受到关注。 目的：建立一种改进的人脐带间充质干细胞分离、培养方法，并对其生物学特性进行分析。 方法：无菌条件下获取足月妊娠分娩胎儿脐带，利用改良的组织块贴壁法分离培养脐带间充质干细胞，即将传统组织贴壁法中本应丢弃的组织转移到新的培养瓶中进行二次贴壁培养，取第3代脐带间充质干细胞进行生物学特性分析。 结果与结论：组织贴壁后第5-7天可见有梭形细胞从组织块边缘爬出，第10天左右可形成明显的细胞克隆。将组织块转移到新培养瓶中继续培养，2 d后即可见有细胞爬出，细胞生长速度较快，5 d即可形成细胞克隆。传代后的细胞形态均一，呈成纤维细胞样的长梭形。流式细胞仪检测细胞高表达CD90、CD105，不表达CD34、CD45、HLA-DR。细胞增殖能力旺盛，平均倍增时间为50 h左右，41.24%的细胞处于G2/S期。体外可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。上述实验结果证明二次贴壁培养出的细胞也具有间充质干细胞的生物学特性，而且通过这种培养方法获得的原代间充质干细胞数是传统方式培养的2倍。 李艳琪，王洪一，姚尧，刘晶晶，徐潇，张宇，刘洋，吴祖泽，靳继德. 人脐带源间充质干细胞分离培养方法的改进[J].中国组织工程研究，2014，18(10):1609-1614. An improved method for isolation of human umbilical cord mesenchymal stem cells Li Yan-qi1, Wang Hong-yi2, Yao Yao2, Liu Jing-jing3, Xu Xiao2, Zhang Yu2, Liu Yang3, Wu Chu-tse1, 4, Jin Ji-de4 (1Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education and Department of Pharmaceutical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China; 2the General Hospital of Shenyang Military Region, Shenyang 110016, Liaoning Province, China; 3College of Life Sciences and Bio-engineering, Beijing University of Technology, Beijing 100124, China; 4Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 10039, China) Abstract BACKGROUND: Human umbilical cord mesenchymal stem cells with capabilities for self-renewal and multi-differentiation have attracted widespread attention. OBJECTIVE: To develop an efficient method for isolation and culture of human umbilical cord mesenchymal stem cells, and to analyze the cell biological features. METHODS: Mesenchymal stem cells were isolated and cultured from human umbilical cord by improved tissue cultivation. Immunophenotype and cell cycle were analyzed by flow cytometry. Growth curve was determined by MTT assay, and differentiation ability was evaluated by in vitro osteogenic and adipogenic induction as well. RESULTS AND CONCLUSION: Some fusiform cells crawled out from human umbilical cord tissues after cultivation for 5 days and formed colonies about 10 days later. When the removed tissues were further cultured, more cells appeared again within 2 days and formed colonies after 5 days. The isolated cells exhibited similar morphology of fibroblast-like shape after passage. Furthermore, the cells expressed CD90, CD105, but were negative for the markers of CD34, CD45, HLA-DR. Population doubling time of the cells calculated from the result of MTT was about 50 hours and cell cycle analysis showed that 41.24% cells were in the G2/S phrase. Therefore, the isolated cells had a high prolification ability. In addition, the isolated cells could be induced into osteoblasts 李艳琪，等. 人脐带源间充质干细胞分离培养方法的改进
P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org 1610 and adipocytes in vitro. In a word, the results of this study demonstrated that the cells from the second tissues culture possessed the biological characteristics of mesenchymal stem cells and more primary umbilical cord mesenchymal stem cells were acquired through the improved method. Subject headings: stem cells; umbilical cord; mesenchymal stem cells; cell culture techniques Li YQ, Wang HY, Yao Y, Liu JJ, Xu X, Zhang Y, Liu Y, Wu CT, Jin JD. An improved method for isolation of human umbilical cord mesenchymal stem cells. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2014;18(10):1609-1614. 0 引言 Introduction 间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的一类具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可在体外分化成脂肪细胞、成骨细胞、心肌细胞、血管内皮细胞和表皮细胞等[1-5]。早在20世纪70年代，Friedenstein等[6]发现在骨髓中存在长梭形成纤维细胞样的塑性贴附细胞，后来有学者利用梯度离心方法得到了占细胞总量0.001%-0.01%的高纯度的成纤维样贴壁细胞，这些细胞可以重复出以往Fridenstein等所进行的关于干细胞特性的所有实验，鉴于它们最终都可以分化为间质系统细胞，所以又将其定义为间质干细胞[7-8]。体外培养的间充质干细胞形态均一，平行生长或漩涡状生长，能够表达多种表面抗原，如高表达间质细胞标志(CD44、CD90、CD105)，不表达造血干细胞标志(CD34、CD45、CD14)、内皮细胞标志(CD31、CD33)及人白细胞抗原(HLA-DR、-DP、-DQ)等[9]。 后来实验证明间充质干细胞分布广泛，存在于脂肪、脐带、皮肤、滑膜等多种组织中[10-11]，其中脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)因取材方便、无免疫排斥等优势而成为组织工程理想的种子来源。目前分离脐带来源的间充质干细胞主要有组织块贴壁法和酶消化法。酶消化法获得的细胞纯度略低、状态不均一、部分可能因消化酶的损伤无法贴壁生长；组织贴壁培养法得到的细胞纯度较高，对细胞伤害小，操作相对简单，将组织块剪碎、贴壁后加培养基培养即可，但原代培养所需周期较长、获得细胞数量相对有限。 本实验拟采用一种改良的二次组织贴壁培养方法，将传统组织贴壁法中本应丢弃的组织转移到新的培养瓶中，进行二次贴壁培养，以便在相对短的时间内获得更多数量的间充质干细胞，为临床研究和应用提供充足的细胞来源。 1 材料和方法 Materials and methods 设计：细胞学观察实验。 时间及地点：2012至2013年在军事医学科学院放射与辐射研究所实验室进行。 材料： 脐带标本：取自解放军301医院的足月健康婴儿脐带组织，产妇及家属同意将脐带用于实验研究，产妇无传染性疾病，胎儿无先天性疾病。 实验方法： 脐带间充质干细胞的分离、培养：将无菌条件下取得的足月妊娠分娩胎儿脐带，用PBS洗3次，去掉残留的血细胞。把脐带剪切成2.0 cm左右的片段并剔除血管(1条脐静脉，2条脐动脉)，取出其中的凝胶状组织，将其剪成大小约1 mm3的组织块，然后置于培养瓶中。6 h后，加入含体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 mg/L链霉素的DMEM/F12培养基，放置在37 ℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养。3 d后半量换液，1周后再次换液，此后每隔3 d换液1次。观察贴壁组织周围的细胞生长情况，当细胞达到80%-90%融合度时，用胰酶消化传代，并将组织转移到一个新的培养瓶中，按上述方法继续培养，获得第二次组织块贴壁培养的细胞。取第二次组织培养得到的脐带间充质干细胞进行下述实验。 细胞免疫表型鉴定：取第3代脐带间充质干细胞，0.05%胰酶消化后制备成单细胞悬液。用预冷的PBS洗2次后重悬于0.5 mL PBS，分别加入FITC-CD34，PE-CD45、PE-CD90、PE-CD105、PE-HLA-DR抗体或小鼠IgG对照，4 ℃避光孵育30 min，PBS洗涤2次，于流式细胞仪检测分析。 MTT法测定细胞生长曲线：取第3代脐带间充质干细胞，以1×107 L-1的细胞浓度接种于96孔板，每孔200 μL，各设6个复孔，于37 ℃、体积分数为5% CO2的培养箱中培养。每天在固定时间点取出96孔板，每孔加入20 μL MTT (5 g/L)，37 ℃培养箱中放置4 h；轻轻吸掉培养基上清，然后每孔加入二甲基亚砜150 μL，用酶标仪(波长490 nm)测定各孔吸光度值，以时间为横轴、吸光度值为纵轴绘制生长曲线。按公式计算倍增时间(Population doubling time，PDt)：
人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性
人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性
徐燕;李长虹;孟恒星;郝牧;邱录贵
【期刊名称】《中国组织工程研究》
【年(卷),期】2009(013)032
【摘 要】背景:由于大量获取骨髓细胞存在困难,并且骨髓间充质干细胞随年龄的增加出现数量及分化潜能下降,因此需要寻找其他间充质干细胞来源.目的:优化人脐带间充质干细胞的分离培养条件,进一步明确其生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-09/2008-03在中国医学科学院血液学研究所国家重点实验室完成.材料:17份脐带标本取自健康足月新生儿,由天津市中心妇产医院提供.方法:脐带采集后在6 h内分别用植块法、胶原酶消化法、胶原酶与胰酶联合消化法进行分离培养,于培养第14天计数集落数,超过50个细胞计为集落.当细胞达70%～80%融合时,胰蛋白酶-乙二胺四乙酸混合消化,以(2.5～5.0)×103/cm2密度传代培养.主要观察指标:比较不同培养方法所获贴璧细胞的形态学特征、细胞产率,应用流式细胞技术分析细胞增殖活性、免疫表型,特异性染色方法鉴定细胞的多向分化潜能.结果:植块法培养6～10 d可见成纤维样细胞从植块边缘爬出,形态与骨髓间充质干细胞相似,散在分布或形成小克隆,原代可获得(5.2±1.7)×105个贴壁细胞/0.5 cm脐带组织,至少可稳定传15代,平均每代扩增6.2倍,在原代细胞克隆数、细胞产率、传代时间及扩增倍数上与胶原酶消化法比较存在明显差异(P＜0.05);而胶原酶与胰酶联合消化法接种后未见明显贴擘细胞.人脐带间充质干细胞的倍增时间为45
h,72.09%细胞处于G0/G1期,不表达造血细胞及内皮细胞标记,高表达整合素和黏附分子CD44,CD90,CD95以及CD73,CD105,在特定诱导条件下,人脐带间充质干细胞能够向成骨及成脂肪细胞方向分化.结论:应用植块法可以从人脐带组织中简便高效地分离出一群具有高增殖活性及多向分化潜能的间充质干细胞,其免疫表型类似于骨髓间充质干细胞.
人骨髓间充质干细胞分离鉴定方法的改进
文章编号(ArticleID):1009-2137(2006)03-0557-04 论著
人骨髓间充质干细胞分离鉴定方法的改进
吴洁莹,廖灿,许遵鹏,陈劲松,辜少玲
广州市妇婴医院,广州脐血库,广州,510180
摘要 本研究的目的是建立一种基于临床移植需要的分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem
cells,MSC)的方法,为配合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础。采用Percoll分离液(1.073g/ml)从新鲜成
人骨髓穿刺液中分离MSC,应用贴壁筛选法传代培养,流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨诱导体系(地塞米松0.
1μmol/L、β-甘油磷酸钠10mmol/L、抗坏血酸磷酸盐50μmol/L)及脂肪诱导体系(地塞米松1μmol/L、牛胰岛素
5mg/L、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤0.5mmol/L、消炎痛60μmol/L)分别诱导MSC定向分化,通过细胞形态观察及
免疫化学染色进行鉴定。结果表明:从成人骨髓液中分离培养出MSC,稳定表达CD73、CD105、CD166,不表达
CD34、CD45。定向诱导的成骨细胞表达碱性磷酸酶活性,脂肪细胞内出现明显的脂滴。结论:采用密度梯度离心
联合贴壁筛选法并通过流式细胞术检测及定向诱导分化,能够从成人骨髓液中分离出MSC,并完成细胞表型及多
向分化潜能的初步鉴定。本操作方案具有一定的临床应用价值。
关键词 间充质干细胞;分离方法;鉴定方法;细胞培养;定向分化
中图分类号 R329.28文献标识码 A
AmodifiedMethodtoIsolateandIdentifytheAdultMesenchymalStem
CellsfromHumanBoneMarrow
WUJie-Ying,LIAOCan,XUZun-Peng,CHENJin-Song,GUShao-Ling
GuangzhouCordBloodBank,GuangzhouMaternalandNeonatalHospital,Guangzhou510180,China
人脐带源间充质干细胞静脉移植治疗大鼠肝纤维化
人脐带源间充质干细胞静脉移植治疗大鼠肝纤维化
张英杰;李玉云;郝晓娜;郝艳梅
【摘 要】BACKGROUND:Recent studies verified that other tissues-derived
stem cells can be homing to the liver, possibly participate in the
regeneration of liver tissues, which provides new hope for stem cells in
treatment of liver disease. OBJECTIVE:To observe isolation and culture of
human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells, to observe the
repairing effect of umbilical cord-derived mesenchymal stem
celltransplantation on hepatic fibrosis, and then to provide a reliable
theoretical basis for further clinical application of umbilical cord-derived
mesenchymal stem cells. METHODS:Human umbilical cord-derived
mesenchymal stem cells were isolated and purified by natural adherent
method, and then cultured and amplified in vitro. A rat model of hepatic
fibrosis was prepared using subcutaneous multi-point injection of CCl4. A
脐带间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞样细胞的研究
脐带间充质干细胞体外诱导分化为
肝细胞样细胞的研究
任红英。赵钦军，刘拥军，卢士红，李妍涵，韩忠朝
（中国医学科学院血液学研究所，天津３０００２０） 山东医药２００８年第４８卷第３０期
［摘要】 目的探讨人脐带问充质于细胞（ｕｃ—ＭＳＣｓ）体外诱导分化为肝细胞的可行性和方法，观察分化后的 细胞白细胞表面抗原表达的改变。方法 采用酶学法从脐带全层组织中分离ＵＣ．ＭＳＣｓ，采用改良的肝分化培养体 系体外诱导ＵＣ ＭＳＣｓ向肝细胞分化。诱导后２、４周，观察细胞形态，免疫荧光细胞化学染色法检测甲胎蛋白 （ＡＦＰ）、白蛋白（ＡＬＢ）；ＲＴ－ＰＣＲ检测肝细胞标志性基因ＡＦＰ、ＡＬＢ和ＣＫ１９ ｍＲＮＡ。ＥＬＩＳＡ法检测诱导后的细胞培养 液中ＡＬＢ水平。流式细胞仪检测诱导后细胞白细胞表面抗原ＨＬＡ—ｌ和ＨＬＡ－Ⅱ。结果 从人脐带基质中分离培 养的ＵＣ．ＭＳＣｓ在向肝细胞诱导分化培养体系的培养下，细胞形态由长梭形逐渐转化成为多角形或类圆形，并且表 达ＡＦＰ、ＡＬＢ ｍＲＮＡ和蛋白，诱导后的ＵＣ—ＭＳＣｓ以时间依赖方式产生ＡＬＢ，诱导后的细胞不表达ＨＬＡ－ＤＲ。结论 ＵＣ．ＭＳＣｓ具有向肝细胞分化的潜能，分化后的Ｍ细胞仍具有低免疫原性。 ［关键词］脐带；问充质干细胞；肝细胞；分化；白细胞表面抗原 ［中图分类号］Ｒ７３７．１４ ［文献标识码］Ａ ［文章编号】１００２—２６６Ｘ（２００８ Ｊ３０—００２４—０３
Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａＩ ｃｏｒｄ ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ
ｉｎｔｏ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ—ｌｌｋｅ ｃｅｌｌｓ Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＨＯＮＧ Ｙｉｎｇ－ｒｅｎ，ＱＩＮ Ｊｔｔｌ￣ｚｈａｏ，ｕＵ Ｙｏｎｇ－ｊｕｎ，ＬＵ Ｓｈｉ－ｈｏｎｇ，
ＬＩ Ｙ￣ｎ－ｈａｒｔ．ＨＡＮ ｚｈｏｎｇ－ｃｈａ，￣
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆＭｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００２０，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｉｎｄｕｃｉｏｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ （ＵＣ—ＭＳＣｓ）ｔｏ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ａｌｏｎｇ ｈｅｐａｔｉｃ ｌｉｎｅａｇｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ａｎｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ－ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ＵＣ—ＭＳＣｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｓｔｒｏｍａ．Ｔｒａｎｓｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｆｉｏｎ ｏｆ ＵＣ—ＭＳＣｓ ｉｎｔｏ ｈｅｐａｔｉｃ ｌｉｎｅａｇｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ．２，４ ｗｅｅｋｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｗｅｒｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃａｌｌｙ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅ，ｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ，ａｌｐｈａ ｆｅｔｏｐｍｔｅｉｎ（ＡＦＰ）ａｎｄ ａｌｂｕｍｉｎ（ＡＬＢ）ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｅｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ． Ｆｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ａｌｂｕｍｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ（ＨＬ～）ｗａｓ ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅ￣ｅｎｃｅ－－ａｃｆｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ—ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｈｅｐａｔｉｃ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＵＣ—ＭＳＣｓ ｗａｓ ｉｎ— ｄｕｃｅｄ ｉｎ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ，ＵＣ—ＭＳＣｓ ｇｒａｄｕａｌｌｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ｉｒｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｒｏｕｎｄ ｉｎ ｓｈａｐｅ，ｏｒ ｐｏｌｙｇｏｎａｌ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｓｔｅａｄ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ ｍ唧ｈｏｌｑ ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ＡＦＰ ａｎｄ ａｌｂｕｍｉｎ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ＵＣ・ＭＳＣｓ ａｆｔｅｒ ｈｅｐａｔｉｃ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ ｂｙ ａ／１ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡＬＢ ｉｎ ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＭＳＣｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ（：０ｒｄｓ ａｒｅ ａｂｌｅ ｔｏ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｔｏ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ—ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ—ｌｉｋｅ ｃｅｌｌｓ ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ ｌｏｗ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏＭ；Ｍｅ￣ｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ；ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ
一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法
1 一种改进的人脐静脉内皮细胞的培养方法
作者：李琴山 冯赞杰 刘洋 徐海燕 钱民章
【关键词】 ,内皮细胞；脐静脉；细胞培养
【Abstract】 AIM: To establish a stable method to isolate
and culture human umbilical vein endothelial cells (hUVEC) in
vitro. METHODS: Endothelial cells of vein from newborn umbilical
cord were successfully isolated using a combination of
collagenase and trypsin (1∶1). Cells were not digested with
trypsin until the cells reached confluence over 80%. The
composition of culture medium was simplified by not adding
vascular endothelial cell growth factor and heparin. The
cultured cells were verified as hUVEC by morphology and
immunofluorescence staining. RESULTS: The endothelial cells
initially spread on the bottom of the dishes in 4 h, then
coalesced and grew to form confluent monolayers of polygonal
cells within 7-10 d. The cultured cells had a cobblestone
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定
人脐带间充质干细胞的分离、培养及鉴定
韩华;薛改;张俊勤;闫萍;李艳丽
【摘 要】目的：探讨人脐带华通胶间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及冻存、复苏的方法。方法收集健康足月新生儿脐带组织，采用组织块贴壁法分离、培养脐带间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表面抗原，将细胞冻存3个月后复苏，鉴定复苏后细胞的特性。结果组织块贴壁法获得脐带间充质干细胞成功率高；细胞表面高表达CD29、CD44、CD90和CD105，不表达造血干细胞表型CD34、CD45等；冻存后再复苏细胞活性高达80％～90％。结论组织块贴壁法可以从人脐带华通胶中较好的分离、培养出间充质干细胞，为干细胞移植实验研究和临床治疗提供了理想的细胞来源。%Objective To explore
isolating,culturing,identifying,freezing and thawing mesenchymal stem
cells(MSCs)approach from Wharton j elly of human umbilical cord.Methods
The MSCs were isolated from neonate umbilical cord,cultured by tissue
explants adherent method.The surface markers were identified by flow
cytometry.Passage cells,frozen 6 months, were thawed,then their biological
characteristics were identified.Results MSCs were easily obtained from
Wharton j elly of human umbilical cord via the proposed approach of
脐带间充质干细胞培养操作细则
脐带间充质干细胞分离培养操作细则
一、样本接收
1. 观察运输箱的温度是否符合要求，采集瓶有无渗漏。
2. 查看客户信息是否与交接表一致。
3. 样本采集瓶外表面喷酒精擦拭消毒，并粘贴样本编码，填写样本接收记录，传入洁净区准备制备。
二、脐带间充质干细胞分离与接种
1）准备耗材试剂：10cm培养皿、15ml离心管、50ml离心管、离心管架、10ml移液管、T75培养瓶、离心管架、无尘布、50ml注射器针头、封口膜、灭菌止血钳、灭菌镊子、灭菌剪刀、废液缸、无血清干细胞培养基（常温复温）、生理盐水、75%酒精（已过滤）。
2）仪器设备准备及预热：电动移液枪、生物安全柜、离心机
3）将75%酒精喷到台面，用无尘布擦拭台面，包括侧面及玻璃。
4）将生物安全柜开紫外30min通风10min，样本喷酒精擦拭，放入生物安全柜中，电动移液枪、移液管、离心管、离心管架喷酒精擦拭放入生物安全柜中，无菌棉球放入到广口瓶中加75%酒精放入生物安全柜中。50ml、15ml离心管放到离心管架上，10cm皿5-7个。将装有灭菌器械的灭菌盒喷酒精擦拭放入生物安全柜中。
5）取5个10cm皿依次摆开，1，2，4，5号皿依次加入适量的生理盐水，3号皿加入适量的已过滤的75%酒精。拿出灭菌盒中已灭菌的止血钳，将脐带从保存瓶中取出放到第一个皿里，并取适量样本保存液留样送检支原体。使用两个止血钳将脐带在第一个皿里清洗尽量去除脐带外表面的血污以及动静脉的血液和血凝块，将
脐带转移至2号皿中，同样的方法再次清洗一次并测量其长度。
6）将清洗干净的脐带转移到装有已过滤75%酒精的3号皿中浸泡1min左右（不要超过两分钟），计时结束后，将脐带转移至4号皿中，同样的洗涤方法去除酒精。清洗结束后将脐带剪成1-2cm短节，放入5号皿中，再次洗涤尽量去除血管内的血污。再次拿两个10cm皿，加入适量的生理盐水，去一皿的盖子加少许盐水湿润底部及可。
7）将1-2cm的脐带小段转移到新的皿里，用带齿口的镊子取一段脐带，将脐带展开，再按血管走势剔除脐带的两条动脉，一条静脉。用组织镊将华通氏胶撕下，并放入到新的加有生理盐水的培养皿中。
人脐带间充质干细胞的分离培养及超微结构特点研究
第３８卷第１期 ２０１３年２月 贵 阳 医 学 院 学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵＩＹＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ＶＯｌ－３８ Ｎｏ．１ ２０１３．２
人脐带间充质干细胞的分离培养及超微结构特点研究木
张芬熙，洪 艳 ，梁文妹
（贵阳医学院组织学与胚胎学教研室，贵州贵阳５５０００４）
［摘 要］目的：分离和培养人脐带间充质干细胞（ｈＵＣＭＳＣｓ），研究其生物学特性及超微结构特点。方法：采
用组织块植入法培养原代ｈＵＣＭＳＣｓ，绘制细胞生长曲线，根据细胞生长状态选第３代ｈＵＣＭＳＣｓ进行实验。流式 细胞术、透射电镜和免疫细胞化学等技术研究ｈＵＣＭＳＣｓ的生物学特性。结果：第１～２天为ｈＵＭＳＣｓ生长潜伏 期，第３～５天为对数增长期，第６天进人平台期。ｈＵＣＭＳＣｓ阳性表达ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ２９和ＣＤ１０５，阴性表达 ＣＤ３４和ＣＤ４５。诱导培养可促使ｈＵＭＳＣｓ向成骨及成脂细胞分化。电镜下ｈＵＣＭＳＣ形态不规则，核大，核质比 大，核仁明显，核内染色质稀疏，胞质较少，符合原始细胞的超微结构特点。结论：采用组织块植入法获得的 ｈＵＣＭＳＣｓ具有较强的增殖能力，在体外诱导培养下可向成骨和成脂细胞分化。 ［关键词］人；脐带；间充质干细胞；细胞周期；超微结构 ［中图分类号］Ｒ３２９．２１；Ｒ３２９．２４ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１０００－２７０７（２０１３）０１－０００５－０５
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ Ｃｏｒｄ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ
Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ Ｔｈｅｉｒ Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
ＺＨＡＮＧ Ｆｅｎｘｉ，ＨＯＮＧ Ｙａｎ，ＬＩＡＮＧ Ｗｅｎｍｅｉ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）
人脐带间充质干细胞的分离培养与鉴定
１Ｔｒ 技术通讯…一５～．１ Ｊａｎ．，２０１４Ｓ ＩＮ Ｂ１０ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＶＯＩ．Ｚ ＩＮ０ Ｊａ ＬＥＴＴＥＲ · ８７ ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００９—０００２．２０１４．０１．０２１ 人脐带间充质干细胞的分离培养与鉴定 研究报告 胡培 ，王小莉 ，李东升 ，严世荣 ，陈玲 ，杨晓文 １．武汉大学中南医院，湖北武汉４４３０７１；２．湖北医药学院ａ．胚胎干细胞重点实验室；ｂ．基础医学院生化教研 室；Ｃ．附属太和医院检验科；湖北十堰４４２０００ ［摘要］ 目的：建立并优化人脐带间充质干细胞分离纯化方法，并对其表面标志与多向分化潜能进行鉴定。方法：收 集健康足月产胎儿脐带组织，采用组织块贴壁法进行原代培养，流式细胞仪对其表面标志进行检测，通过向成骨成脂 分化对其多向分化潜能进行鉴定，ＲＴ—ＰＣＲ对其干细胞特性基因Ｏｃｔ４、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ２、Ｎｅｓｔｉｎ进行检测。结果：采用组织 块贴壁法可在２周左右获得大量间充质干细胞，培养的细胞经流式细胞仪检测，高表达ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６， 低表达ＣＤ３４、ＣＤ４５；经成骨成脂诱导２周后可分化为成骨细胞和成脂细胞，ＲＴ—ＰＣＲ检测发现原代细胞表达Ｏｃｔ４、 Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ２、Ｎｅｓｔｉｎ基因。结论：人脐带间充质干细胞可在体外扩增培养，具有多向分化潜能，可作为组织工程种子 细胞来源。 ［关键词］ 人脐带间充质干细胞；原代培养；分离鉴定 ［中图分类号］ Ｑ２５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］ １００９—０００２（２０１４）０１—００８７—０４ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ Ｃｏｒｄ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ＨＵ Ｐｅｉ · ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ—Ｌｉ。 ＬＩ Ｄｏｎｇ—Ｓｈｅｎｆ ，ＹＡＮ Ｓｈｉ—Ｒｏｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｌｉｎｇ ，ＹＡＮＧ Ｘｉａｏ—Ｗｅｎ １．Ｚｈｏｎｇｎａｎ Ｈｏａｐｉｔａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４４３０７ １；２．ａ．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅ— ｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ；ｂ．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ｅ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔａｉｈｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉ— ｔａｌ；Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｉｙａｎ ４４２０００，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｇｒａｃｅｙａｎ＠１６３．ｃｏｍ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ （ＭＳＣ）ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅｉｒ ｓｕｒｆａｃｅ ｍａｒｋｅｒｓ ａｎｄ ｍｕｌｉｔｉｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ＭＳＣ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｎｅｏｎａｔｅ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ，ｃｕｈｕｒｅｄ ｂｙ ｔｉｓｓｕｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ｍｕｌｔｉ—ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃａｐａｃｉｔｙ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｍａｒｋ— ｅｒ ｇｅｎｅ Ｏｃｔ４，Ｎａｎｏｇ，Ｓｏｘ２ ａｎｄ Ｎｅｓｔｉｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＭＳＣ ｃａｎ ｂｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ａｔ ａｂｏｕｔ ｔｗｏ ｗｅｅｋｓ，ＣＤ２９，ＣＤ４４，ＣＤ１０５ ａｎｄ ＣＤ１０６ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ，ｗｈｉｌｅ ＣＤ３４，ＣＤ４５ ｗｅａｋｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｓｕｒｆａｃｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ２ ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅｓｅ ｃｅｌｌｓ ｃａｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｉｎｔｏ ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｃｅｌｌｓ．ＲＴ—ＰＣＲ ｒｅｓｕｈｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｓｅ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ Ｏｃｔ４，Ｎａｎｏｇ，Ｓｏｘ２ ａｎｄ Ｎｅｓｔｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ＭＳＣ ｃａｎ ｂｅ ｃｕｌ— ｔｕｒｅｄ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ｔｈｅｓｅ ｃｅｌｌｓ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｎｅｗ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｃａｐａｃｉ— ｔｙ ｏｆ ｍｕｈｉｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｃｅｌｌ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 虽然胚胎干细胞具有全能性，可分化为各个胚 层的细胞，但其来源还存在伦理和法律上的争议，且 致瘤性目前还无法控制 。与胚胎干细胞相比，间充 质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＭＳＣ）则因具有 多向分化潜能、易培养、扩增能力强、来源广等优势 而被大量用于实验和临床研究。在各种成人干细胞 收稿日期：２０１３—０６—０４ 基金项目：国家自然科学基金（８１０７０６１４） 作者简介：胡培（１９８９一），男，硕士研究生 通信作者：严世荣，（Ｅ—ｍａｉｌ）ｇｒａｃｅｙａｎ＠１６３．ｃｏｎ 中，目前研究较多的是骨髓ＭＳＣ，因其可以作为自体 移植的干细胞来源。但骨髓的获取属于侵入性检 查，来源有限，且骨髓ＭＳＣ的量、增殖效率、分化潜 能有着明显的个体差异，会随着年龄的增加而显著 减少口 ，因此寻找新的干细胞来源成为当务之急。 研究发现，可以从多种组织如骨髓、脂肪组织、 脐带血、胎盘等中分离得到ＭＳＣ［ 。相比骨髓，脐带 属于医用废弃物，具有较低的免疫原性，容易获得， 相对纯净，不会给供者带来痛苦，致瘤性、病毒和细 菌污染的可能性均较骨髓ＭＳＣ低口】
脐血间充质干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究
１＿困美容医学２０１３年４月第２２卷第７期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａ］ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ａｐｒ．２０１３．Ｖｏ１．２２．Ｎｏ．７ ７３５
・基础研究・
脐血问充质干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究
潘丽杰，陈妍，袁杰
（哈尔滨医科大学附属口腔医学院口腔预防保健科黑龙江哈尔滨 １ ５０００１） ・论著・
［摘要］目的：分离培养人脐血间充质干细胞（ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉ ｌ ｉ ｃａ ｌ ｃｏｒｄ ｂ１ｏｏｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓ ｔｅｍ
ｃｅ ｌ ｌ ｓ，ｈＵＣＢ—ＭＳＣ），体外观察其生长特性，并在特定条件下诱导分化，探讨其成脂成骨分化能力。方法：采用
沉降法和密度梯度离心结合贴壁培养法自脐血中分离间充质干细胞，倒置显微镜下观察其形态及生长情况； 流式－￣ＷｌＥ仪分析细胞周期并检测细胞表面标志物；用茜素红染色和油红０染色分别鉴定其成骨成脂分化能
力。结果：纯化的ｈＵＣＢ－ＭＳＣ贴壁生长，呈均一梭形，具有较强的增值能力，流式细胞仪分析Ｐ３代ｈＵＣＢ－ＭＳＣ稳 定表达间充质干细胞表面抗原标志ＣＤ７ ３，ＣＤ］０５和ＣＩ）９０等，不表达造血标志ＣＤ３４和ＣＤ４５；成骨诱导后
３周后细胞茜素红染色阳性；成脂诱导３周后细胞油红０染色阳性。结论：本实验分离的ｈＵＣＢ—ＭＳＣ具有较强 的增殖能力，表达间充质干细胞的表面标记，具有成骨成脂分化潜能
［关键词］脐血；间充质干细胞；分４ｔ５；鉴定 ［中图分类号］Ｑ８１ ３．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１ ００８－６４５５（２ ０１ ３）０７—０７ ３５－０４
ｌｓｏｌａｔｉｏｎ，ＣｈａｒａＣｔｅ ｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ－
ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ
ＰＡＮ Ｌｉ—ｊｉｅ，ＣＨＥＮ Ｙａｎ，ＹＵＡＮ Ｊｉｅ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ＯｒａＩ Ｈｅａｌｔｈ，ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ