半夏内生真菌的多样性及其药化研究

半夏内生真菌的多样性及其药化研究

发表时间：2015-08-31T10:33:49.663Z 来源：《健康必读》2015年第7期供稿作者：苏海林[导读] １云南经济管理学院２云南经济管理学院天然药物研究所而半夏当中的内生真菌也能够合成盐酸麻黄碱，大大提升其药用价值，利用高效液相色谱法能够检测。

苏海林（１云南经济管理学院云南昆明６５０１０６）（２云南经济管理学院天然药物研究所云南昆明６５０１０６）

【中图分类号】Ｒ２８４．２【文献标识码】Ａ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０７－０５３０－０１【摘要】植物与真菌在一定的条件下能够形成共生或寄生关系，这些真菌在寄主体内生长的过程中不会造成寄主感染或发病，部分寄生真菌还能够与宿主产生相似的新陈代谢产物。我国中医以中药治疗为主，其中大部分为植物性药物，所寄生的真菌能够产生大量有效药物成分，形成了新的药物资源。本文即是以半夏内生真菌的多样性和药化进行研究，首先探讨了半夏体内真菌的分离和鉴别方法，同时阐述了这些真菌所合成的盐酸麻黄碱的研究，以期能为相关工作提供参考。

【关键词】半夏；内生真菌；分离；种类；盐酸麻黄碱人类最早于１８９８年从黑麦草当中分离了内生真菌，但这类真菌对于植物本身不但不会造成影响，还会促进植物的成长，因此对于这类真菌的研究一直处于基础阶段。直到１９７７年人们发现能够导致中毒的内生真菌后，对于这类真菌的研究才真正开始，并且逐渐发展到了医疗领域，使得人们对于药材内生真菌的作用越来越感兴趣。１半夏内生真菌的分离和分类１．１半夏内生真菌的分离在对半夏内生真菌进行分离时，选取的材料应为采摘时间不超过４８的半夏药材。实验工具主要包括胶带、剪刀、镊子、滤纸、脱脂棉、三角瓶、培养皿、玻璃棒、接种环等，使用药剂包括青霉素、链霉素、甲基蓝、蛋白胨、蔗糖、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、乙醇等。实验设备包括恒温培养箱、光学显微镜、电干燥箱、天平、灭菌锅等。

首先为分离的真菌制备培养基，其中含有淀粉、葡萄糖、琼脂、蒸馏水等，将所有材料用水煮沸至３０，并在１２１℃的灭菌锅内进行杀菌，灭菌时间也为３０。在培养基冷却至４５℃时，将链霉素和青霉素加入到培养基当中，剂量分别为４０和３０。选择半夏的根茎、叶片、花瓣等进行清洗，用纱布擦干，然后再用无菌蒸馏水对样本进行反复清洗，大约３次，利用已消毒的吸水纸将样本表面水分吸干。将处理好的根茎切成１的小块，叶片和花瓣则切成４的小片。将处理好的样本在培养基上进行涂抹，不用部位按照不同的印迹进行处理。再选取其他的组织样本，用乙醇浸泡３，之后重复清洗３次，根据培养基上的印迹进行对照。

将已制备完成的培养基放入２７℃的恒温培养箱当中，在３至４内即可生长出菌丝，利用接种环将菌丝挑起转移到另外的培养基上，这样就可以得到半夏内生真菌的样本。再将形态不同的菌丝分别移植到其它培养皿上，通过镜检的方式观察真菌当中是否存在其它杂菌，保证真菌的纯度。１．２半夏内生真菌的分类将已经制备好的纯化菌丝接种到新的培养基上，采用点种的方式，利用接种环挑取少量的菌丝移植在培养皿的中心位置，并将其放置于２８℃的恒温培养箱内进行培养，在７到１４之后进行观察和分类。观察过程中需要注意的要点包括菌落直径的大小，菌落表面的颜色，菌落色素是否渗透培养基当中，菌丝纹路，菌丝密度，菌丝形态，菌丝高度，菌丝边缘形态，有无渗出物等。观察的方法是将菌株挑取放置在载玻片上，利用镜检方式进行观察。

从分类结果当中可以看出，共有３个属，２５种不同的菌株。其中菌落形态呈绒毛状，颜色为白色，在数天后变化为青绿色，菌落边缘整齐，孢子形态以镰刀形为主的为镰孢属真菌，共包括１１种。菌落生长速度较快，菌落呈淡黄色，少部分呈青黄色，菌丝微观观察分枝较少，分生孢子梗为无色，孢子头呈近球桩，为曲霉属，共１２种。菌落的中心颜色较暗，当菌落周围呈白色，形状为毛毡状，分生孢子梗颜色较暗，没有任何分枝，孢子本身颜色较暗，并且具有明显的横纵隔膜，孢子整体呈链状，为链格属，共２种。２半夏内生真菌合成的盐酸麻黄碱药化研究半夏当中所含有的生物碱化合物是其主要的药效成分，其中以麻黄碱为主，它可以替代人体肾上腺素，对神经具有兴奋作用，并且药效比人体自身合成的肾上腺素还要持久，采用口服方法就能够发挥效用，松弛平滑肌，收缩血管，能够有效缓解慢性支气管炎并发哮喘和低血压症状。而半夏当中的内生真菌也能够合成盐酸麻黄碱，大大提升其药用价值，利用高效液相色谱法能够检测。

根据研究显示，我国贵州、云南、广西等地所产出的半夏内生真菌合成物当中能够检测出麻黄碱，其中云南地区半夏内生真菌所产出的麻黄碱比率最高，可以达到７．０，而广西和贵州的半夏内生真菌麻黄碱产出率分别为１．６和２．０。导致这种情况发生的原因目前有两种解释，其一为寄生关系的两个物种之间能够形成基因水平传递情况，导致二者之间能够形成相同性质的次级代谢产物；其二主要是针对于共生关系，认为在生物体内一旦一种次级代谢产物产生，那么共生的其它物种就会将其进行利用，表现出促进作用，使得该有利次级代谢产物含量增加。３结语：半夏是我国中药当中主治哮喘和低血压的重要药物，其发挥药效的主要成分为麻黄碱，而在半夏内生真菌代谢产物当中也可以检测出麻黄碱物质，这说明了二者之间存在着互相促进的关系，大大提升了半夏的药用价值。

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