SD大鼠和ICR小鼠血液学及血清生化参考范围的建立及比较

SD大鼠和ICR小鼠血液学及血清生化参考范围的建立及比较摘要：目的：建立SD大鼠和ICR小鼠常用血液学及血清生化指标正常值参考范围，并比较不同性别，周龄，及供应商动物结果之间的差异。

方法：血液常规分析使用迈瑞BC5300-vet动物专用五分类全自动血液细胞分析仪，血清生化使用迈瑞BS-380全自动生化分析仪。

使用SPSS 17.0统计学软件对检测结果进行t检验。

结果：获得4~5周龄和8~9周龄不同性别和供应商SD大鼠和ICR小鼠血液学和血清生化平均值及正常参考范围；应用SPSS软件T检验分析表明性别、周龄及供应商不同时，同一品系动物的部分血液学和血清生化结果有显著性差异。

结论：在动物实验中，对血液学和血清学检测结果进行评价时应考虑不同性别、周龄及来源对数据的影响。

关键词：SD大鼠；ICR小鼠；血液学；血清生化；正常值参考范围SD大鼠和ICR小鼠作为药物的药代动力学，药效学及毒理学实验中最常用的啮齿类动物，其血液学及血清生化指标是评价动物健康状况和实验结果的重要指标。

通过正常值参考范围的建立，可以为药物的药效学和毒理学安全等评价提供依据，在后续的相关实验中起到重要的指导作用。

为了满足药物研发临床前实验的需求，本实验对4~5周龄和8~9周龄SD大鼠和ICR小鼠的常用的23项血液学和23项血清生化指标进行了测定，实验动物分别购自上海的两家啮齿类实验动物供应商。

1.材料与方法：1.1实验动物实验用动物为SPF级ICR小鼠和SD大鼠，164只动物购自上海上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号SCXK（沪）2012-0002；158只动物购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号SCXK（沪）2013-0016。

雌雄动物分笼饲养于PVC笼盒中，食物购自北京科澳协力饲料有限公司，自由饮水和进食，室温20~29oC，湿度30%~70%，每天12小时光照。

动物于约4周龄和约8周龄时购买，在上海睿智化学研究有限公司适应环境约1周后进行实验。

进行动物饲养、采血和样品处理的实验室已通过国际实验动物评估和认可委员会认证，实验方案已通过动物管理及使用委员会的批准。

1.2仪器和试剂血常规使用迈瑞BC5300-vet动物专用五分类全自动血液细胞分析仪和配套试剂与质控；血清生化采用迈瑞BS380全自动生化分析仪和配套试剂与质控。

实验之前仪器经过校准，仪器本底计数和批内精密度均符合要求。

测定时按照仪器标准操作规程和试剂使用说明书操作。

1.3样品采集所有样品于上午10：00~12：00进行，乙氟烷麻醉后使用眼眶静脉采血的方法。

所得的全血样品中用于血常规检测的部分用EDTA-K2抗凝；用于血清生化检测的部分不添加抗凝剂，静置约半小时后离心取上清。

采样后动物使用二氧化碳安乐死，尸体冷冻保存并集中无害化处理。

1.4测定方法1.4.1血液学检测血液学检测指标包括白细胞总数（WBC），嗜中性粒细胞计数（Neut#），淋巴细胞计数（Lym#），单核细胞计数（Mono#），嗜酸性粒细胞计数（Eos#），嗜碱性粒细胞计数（Baso#），红细胞总数（RBC），血红蛋白浓度（HGB），平均红细胞体积（MCV），平均红细胞血红蛋白（MCH），平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC），血红细胞分布宽度（RDW），红细胞压积（HCT），血小板总数（PLT），平均血小板体积（MPV），血小板分布宽度（PDW），血小板压积（PCT）。

1.4.2血清生化检测谷丙转氨酶（ALT）采用紫外-乳酸脱氢酶法，谷草转氨酶（AST）采用紫外-苹果酸脱氢酶法，碱性磷酸酶（ALP）采用AMP缓冲液法，γ-谷氨酰转移酶（g-GT）采用IFCC法，总胆红素（T-bil）采用重氮盐法，直接胆红素（D-bil）采用VOX法，总蛋白（TP）采用双缩脲法，白蛋白（ALB）采用溴甲酚绿法，尿素氮（BUN）采用紫外-谷氨酸脱氢酶法，葡萄糖（Glu）采用己糖激酶法，总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）采用氧化酶法，钙（Ca）采用偶氮胂III 法，镁（Mg）采用二甲苯胺蓝法，无机磷（P）采用磷钼酸法，肌酸激酶（CK）和a-淀粉酶（a-AMY）采用连续监测法，乳酸脱氢酶（LDH）采用IFCC/DGKC法，脂肪酶（LIP）采用酶显色法，球蛋白（GLB）和ALB/GLB比值（A/G）由TP和ALB的值计算所得，肌酐（CREA）采用改良JAFF法，总胆汁酸（TBA）采用第5代循环酶法。

1.5血液学和血清生化测定值以平均值（M）标准差（s）表示；统计学分析应用SPSS 17.0软件，进行数据正态分布t检验，参考范围推荐采用M±1.96SD方法。

2.结果2.1血液学检测结果见表 1，血清生化检测结果见表 2，表中仅列出了购自上海斯莱克实验动物有限责任公司的SD大鼠的数据，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司的SD大鼠及所有ICR小鼠的检测结果未列出；数值在表格中的表示方法为平均值±标准差（M±s）。

3.讨论在本次实验中，血常规结果中的MCHC、RBC和HGB在SD大鼠和ICR小鼠中均随着周龄的增加而增加，而MCV和RDW值随着周龄的增加而降低。

血清生化结果中TP和ALB随着周龄的增加而升高，ALP、γ-GT和P的值随着周龄的增加而降低。

RBC、HGB和ALP随周龄变化的趋势与胡建武[2]文献中的报道一致；另有个别参数随周龄变化的趋势在SD大鼠和ICR小鼠中相反，如AST和CK值在ICR小鼠中随周龄增加而升高，在SD大鼠中却随着周龄增加而降低，这也与胡建武[2]文献中报道的结果一致。

其余血常规和血清生化参数没有与周龄增加相应的变化趋势。

相当一部分参数的测得值与文献报道有一定的差异[2－3]，这些差异可能与动物来源，环境，不同仪器的偏差等因素有关。

在人的临床检测中，通常有广泛适用的血液学和血清学检测的正常值参考范围，但是在实验动物中，动物的种类、品系、年龄和来源等因素往往使结果千差万别，所以需要建立不同的参考体系，以提供评价实验的结果的依据。

本实验的结果也证明，不同周龄、性别和供应商的SD大鼠和ICR小鼠的相当一部分参数之间具有明显差异。

因此在建立参考范围的时候有必要进行比较详细的分类，各实验室若有条件也应建立自己的参考范围，以排除由不同仪器和试剂导致的误差。

临床前药动、药效和毒理实验多使用6至8周龄的啮齿类动物，所以本实验选用了4~5周龄和8~9周龄的动物。

但是一些药效和毒理实验往往持续1~2个月或者更长的时间，还有的实验在一开始就会使用周龄较大的动物；若有的血常规和血清生化参数随着周龄的增加而继续变化，本实验在这些实验中的适用性将大打折扣。

另外本实验中每组的样本量为15至21例不等，若增大样本量也可以提升参考范围的代表性。

有的企业或单位，例如美国Charles River公司，作为实验动物供应商和CRO公司，收集整理了其实验室数年甚至更长时间段里的血常规和血清生化数据，针对不同品系如SD大鼠[4]和wista han[5]大鼠等，建立了从低至3周龄，高至150周龄不等的数个周龄段动物的参考范围，每个周龄段的动物数量从数个至数百个不等。

这样建立的参考范围由于样本量大，持续时间长，可以弥补短期集中检测和较少样本量下建立范围的不足，但是这需要企业及临检工作员工的长期坚持，以及保证历史数据保存的完整性和相关信息的准确性。

致谢：感谢本部门动物实验组的同事在动物样品准备工作当中提供的帮助，同事李增刚在统计学分析数据质控方面提供的帮助。

参考文献：[1]Malcolm J. York. Clinical Pathology [M]// Ali S. Faqi，A Comprehensive Guide to Toxicology in Preclinical Drug Development. London. Academic Press，2013：167–211[2]胡建武，卢胜明，车路平，贺争鸣，王洪，刘双环，等. 10种常见SPF级实验大、小鼠血液及生化指标正常参考值的探讨[J]. 实验动物科学，2007，24（2）：5~10.[3]孙劲，徐元宏. SD大鼠常见血液学检测指标参考范围的建立[J]. 输血与检验. 2008，10（3）：253~255[4]Clinical Laboratory Parameters for Crl：CD（SD）Rats March，2006 Information Prepared by Mary L.A. Giknis，Ph.D. Charles B. Clifford，D.V.M.，Ph.D. CHARLES RIVER LABORATORIES [http：///files/pdfs/rms/ cd/rm_rm_r_clinical_parameters_cd_rat_06.aspx][5]Clinical Laboratory Parameters for Crl：WI（ha）Rats March，2008 Information Prepared by Mary L.A. Giknis，Ph.D. Charles B. Clifford，D.V.M.，Ph.D. CHARLES RIVER LABORATORIES [http：///files/pdfs/rms/wistarhan/rm_rm_r_wistar_han_clin_lab_parameters_08.aspx]。