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sirna氢键断裂的温度

sirna氢键断裂的温度

sirna氢键断裂的温度
Sirna氢键断裂的温度是指在哪个温度下,sirna(小干扰RNA)的氢键会被破坏。

sirna是一种长度为21-25个核苷酸的小RNA,能够通过与靶基因的mRNA杂交,介导mRNA的降解或抑制其翻译,从而实现基因靶向表达调控。

sirna的活性和稳定性与其二级结构密切相关,其二级结构的稳定性主要由氢键的数量和强度决定。

因此,研究sirna氢键断裂的温度具有重要的生物学意义。

研究表明,sirna的氢键断裂温度与其碱基组成和配对方式有关。

在常见的四种碱基中,C-G的氢键最强,A-U的氢键最弱,G-U的氢键稍强于A-U。

因此,C-G配对的sirna的氢键断裂温度最高,而A-U 配对的sirna的氢键断裂温度最低。

此外,sirna的二级结构还受到环境因素的影响,如离子浓度、pH值、有机溶剂等。

相对于室温下的条件,高离子浓度和碱性环境可以提高sirna的氢键断裂温度,而有机溶剂则会降低其氢键断裂温度。

综上所述,sirna的氢键断裂温度受到多种因素的影响,包括碱基组成、配对方式、离子浓度、pH值和有机溶剂等。

在实际应用中,了解sirna的氢键断裂温度有助于优化其活性和稳定性,提高其在基因治疗和基因工程等领域的应用价值。

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RNA干扰技术的原理与应用

RNA干扰技术的原理与应用

RNA干扰技术的原理与应用RNA干扰技术是一种基因沉默技术,利用特定的RNA分子靶向破坏特定基因的mRNA分子,从而沉默该基因的表达。

一般来说,RNA干扰技术分为两种:siRNA和shRNA。

一、siRNA的原理与应用siRNA(小干扰RNA)是由外源体切割的21-25个核苷酸的双链RNA,它们与RISC(RNA诱导的沉默复合物)结合后,在靶基因的mRNA上形成RNA/RISC复合体,从而沉默靶基因的表达。

siRNA是一种非常特定的干扰技术,可以实现精确地调节基因表达。

siRNA技术在研究基因功能和药物开发等领域发挥着重要作用。

例如,研究发现某些癌症患者的基因中存在高度具有变异性的序列,而它们的表达与癌症的发展有关。

因此,通过siRNA技术靶向破坏这些序列,就可以达到治疗的目的。

另外,在昆虫和植物领域,RNAi技术还可以用来控制害虫和杂草,从而达到环保和粮食安全的目的。

siRNA技术的应用前景非常广阔,是研究者们不断探索和研究的热点之一。

二、shRNA的原理与应用shRNA(短发夹RNA)是一种由人工构建的RNA,其结构为一个小的RNA环,环内有一个十分特殊的序列,可以与相应的RISC相结合,从而靶向破坏mRNA分子,实现对基因表达的调控。

与siRNA相比,shRNA的优点是能够更长时间地沉默基因表达。

在实际应用中,shRNA技术被广泛用于研究多个基因的相互作用以及各自在复杂生命现象中所起的重要作用,如疾病的发生和发展等。

另外,shRNA技术还能够实现不同发展阶段组织特异性的沉默基因表达,这为研究发育遗传学以及疾病治疗等提供了很好的工具。

总结RNA干扰技术是一种利用RNA靶向破坏基因表达的技术,其应用领域涵盖了基因功能研究、药物开发、害虫、杂草的控制等众多方面。

siRNA和shRNA是RNA干扰技术的重要手段,各自具有其独特的优点和应用场景。

随着生命科学和医疗技术的快速发展,RNA干扰技术将会在未来的研究中发挥更加重要的作用。

RNA干扰了解RNA干扰技术如何用于研究蛋白质表达

RNA干扰了解RNA干扰技术如何用于研究蛋白质表达

RNA干扰了解RNA干扰技术如何用于研究蛋白质表达在细胞和分子生物学研究中,RNA干扰(RNA interference,简称RNAi)技术被广泛应用于研究蛋白质表达以及基因功能的调控。

本文将介绍RNA干扰的原理、应用以及在蛋白质表达研究中的重要作用。

一、RNA干扰的原理RNA干扰是一种通过特定的双链RNA干扰子引起特定mRNA分子水平下降的现象。

这种现象主要是由两种类型的RNA干扰子介导的:小干扰RNA(siRNA)和小分子干扰RNA(miRNA)。

1. 小干扰RNA(siRNA)小干扰RNA是由外源的双链RNA或由基因内转录的长双链RNA 通过核酶Dicer酶切产生的,长度通常为21到23个核苷酸。

siRNA可直接与靶基因的mRNA互补结合,导致mRNA降解或抑制翻译过程,从而使靶基因的表达水平下降。

2. 小分子干扰RNA(miRNA)miRNA是一类内源性RNA干扰子,长度约为20到25个核苷酸。

miRNA通过与mRNA的3'非翻译区结合,介导RNA识别复合物(RISC)的形成,进而抑制靶基因的翻译或促使其mRNA分解,从而抑制或降低靶基因的表达。

二、RNA干扰的应用RNA干扰技术广泛应用于基因功能研究、药物开发以及疾病治疗等领域。

以下是RNA干扰技术的一些常见应用:1. 基因敲除通过设计目标基因的siRNA或miRNA,可以有效地抑制目标基因的表达,实现基因敲除的效果。

这对于研究特定靶基因的功能和调控机制非常重要。

2. 蛋白质功能研究RNA干扰技术可以帮助研究人员评估蛋白质的功能和相互作用。

通过靶向特定基因的RNAi,可以引起靶基因表达的改变,并进一步观察对其他蛋白质或生物过程的影响。

3. 药物开发RNA干扰技术为药物开发提供了新的思路和目标。

通过靶向特定病原体或基因的RNAi,可以研发出具有高效和特异性的药物,用于治疗各种疾病,如肿瘤、病毒感染等。

4. 疾病治疗RNA干扰技术在疾病治疗中也有广阔的应用前景。

小干扰rna调节基因表达的机制

小干扰rna调节基因表达的机制

小干扰rna调节基因表达的机制
小干扰RNA(siRNA)是一类短链RNA,它在生物体内通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)机制,与靶基因mRNA 结合并引导RISC复合物切割靶基因mRNA,从而使其沉默或
减少表达。

具体来说,小干扰RNA的作用机制为:
1. 寻找靶基因mRNA并结合:在RNA干扰的起始阶段,小干扰RNA与RISC(RNA-inducing silencing complex)复合物结
合形成小干扰RNA/RISC复合物,在该复合物的指导下,小
干扰RNA寻找并与靶基因mRNA结合。

2. 诱导靶基因mRNA降解:靶基因mRNA与小干扰
RNA/RISC复合物结合后,在RISC复合物的作用下,靶基因mRNA被切割并降解,从而无法翻译成蛋白质,从而达到下
调基因表达的目的。

此外,小干扰RNA还能抑制转录过程中的启动子或信号通路,也能通过某些机制增强基因表达。

小干扰RNA的这些作用是
通过RNA干扰机制中多重靶向和剪接调节等机制实现的。

siRNA与shRNA区别

siRNA与shRNA区别

siRNA与shRNA区别siRNA是合成的,从公司买回来,可以直接用于短暂性的转染,用完就没有了。

优点是快速便利。

shRNA是基于质粒的。

需要自己克隆,也有公司卖不过较自己克隆要贵得多。

因为是质粒,所以可以无限制的扩增,不会有用完的一天。

质粒的转染效率跟siRNA类似,不过shRNA被表达出来需要时间,所以效果可能没有siRNA直接快速。

但是shRNA质粒一般含有抗生素选择基因,这就允许你筛选稳定细胞系,不过这个很花时间(1-3个月)不过一旦稳定细胞系筛选成功,你就再不用做转染实验了,一劳永逸。

所以两者各有所长,要看你的实验性质。

如果只是补个数据,果断用siRNA。

如果建立起稳定细胞体系以后还有很多实验,建议用shRNA,医学科研中易混淆的概念解释之siRNA篇:1siRNA和shRNA,虽然都是干扰RNA类型,但是siRNA和shRNA却有着天壤之别。

siRNA是单链RNA干扰,通过结合mRNA,阻止蛋白的表达。

shRNA其实是一类病毒,整合至基因组中进行基因干扰。

因此siRNA 和shRNA的最大区别就在于是否整合进入了基因组中以及转染有效性的长短。

两者在转染效率上现在已经没有特定的差别。

2通路阻断剂和siRNA之间的区别。

有些实验会使用通路阻断剂,例如akt通路阻断剂LY294002,有些老师也会使用siRNA来阻断Akt的激活。

两者之间有什么区别?最大的区别在于阻断剂是影响蛋白的活性(例如乙酰化、磷酸化和泛素化激活等);而siRNA是直接降低蛋白的表达。

因此,在细胞需要某些蛋白的时候,最佳的方式是使用阻断剂而不是用siRNA,因为蛋白表达下降很可能会造成额外的阳性结果出现。

3siRNA和非编码RNA。

siRNA不属于非编码RNA类型,是属于和mRNA具有互补作用的RNA单链。

而非编码RNA是细胞内没有基因编辑功能的RNA总称。

siRNA可能会影响非编码RNA的稳定,而非编码RNA是无法通过siRNA进行抑制和下调的。

miRNA和siRNA的功能和应用研究

miRNA和siRNA的功能和应用研究

miRNA和siRNA的功能和应用研究细胞内RNA分为许多不同的类型,而miRNA和siRNA是其中两种具有重要生物学功能和研究意义的RNA。

在这篇文章中,我们将探讨这两种RNA的共同点和区别,并介绍它们的生物学功能和在生物医学研究中的应用。

miRNA和siRNA都是非编码RNA,它们不能直接编码蛋白质。

它们通过干扰RNA的转录和翻译来调节基因表达。

在某些情况下,miRNA和siRNA甚至可以诱导某些基因的沉默。

这使它们成为细胞内常见的基因调节因子之一。

miRNA和siRNA的区别在于它们被形成的方式和作用机理。

miRNA通常由一个主RNA分子产生,该分子由核酸酶Dicer催化切割而成。

miRNA随后结合到RISC复合物中,该复合物通过与靶向RNA结合来实现RNA干扰。

相比之下,siRNA是由双链RNA产生的,通过Dicer和Argonaute蛋白复合物来实现RNA干扰。

miRNA在调节许多生物学过程中扮演重要角色。

例如,miRNA可以通过靶向mRNA来抑制 mRNA的翻译或促进mRNA的降解,从而调节基因表达。

miRNA的异常表达与多种疾病相关。

许多研究人员正在探索将miRNA作为潜在的诊断工具和治疗手段的可能性。

siRNA的应用更加广泛。

它们被广泛应用于基础科学研究和药物研发。

在基础科学研究中,siRNA可用于研究基因功能和信号转导途径等。

在药物研发中,siRNA可用于开发针对多种疾病的治疗方法。

siRNA药物在癌症治疗中具有巨大潜力。

在实验室研究中,科学家们使用siRNA成功地抑制了癌症细胞的增殖和扩散。

许多siRNA药物正在进行临床试验。

总之,miRNA和siRNA是细胞内极为重要的RNA分子。

它们通过不同的机制调节基因表达,并对许多生物学过程和疾病有深刻的影响。

miRNA和siRNA的研究已经为我们提供了新的工具,用于治疗和预防癌症和其他疾病。

随着我们对miRNA和siRNA的理解不断深入,我们有望在更多的医学领域中使用这些RNA 来开发新的治疗方法。

rna干扰的名词解释

rna干扰的名词解释

rna干扰的名词解释RNA干扰:探索基因调控的新领域近年来,一个名词在生物学领域频繁出现,它就是“RNA干扰”。

作为一种重要的基因调控机制,RNA干扰在生物学研究中扮演着重要的角色。

本文将带您深入了解RNA干扰的概念、机制和应用。

一、RNA干扰的概念RNA干扰,全称为RNA interference,是一种通过RNA分子调控基因表达的过程。

简而言之,它是一种通过降解或抑制特定基因产物的方式,来调节这些基因表达和功能的现象。

二、RNA干扰的机制1. 小干扰RNA(siRNA)的产生RNA干扰的开始是由于产生小干扰RNA(siRNA)。

当外源的双链RNA (dsRNA)或内源性的转录产物具备一定的结构特征,即能够被核酸内切酶识别并切割,从而形成长度约为20-24核苷酸的小干扰RNA。

2. siRNA的导入产生的siRNA会与RNA诱导复合物(RISC)结合,这个复合体能够识别和结合与siRNA序列互补的mRNA分子。

导入过程确保siRNA与目标mRNA结合,从而催化这些mRNA的降解或抑制翻译。

3. mRNA降解或抑制翻译一旦siRNA与特定mRNA结合,RISC会切割这些mRNA分子,导致它们在细胞内降解。

如果切割发生在编码区,会导致部分或完全的mRNA降解;如果切割发生在非编码区,会引起mRNA的转译抑制,从而阻止蛋白质的合成。

三、RNA干扰的应用1. 基因沉默研究RNA干扰为研究基因功能提供了强有力的工具。

通过选择性地抑制或沉默特定基因,在细胞和生物体中观察这些变化,可以揭示基因在发育、分化、疾病等方面的重要作用。

2. 药物研发RNA干扰技术为药物研发提供了新途径。

通过利用siRNA特异地靶向基因表达,可以高效地减少特定蛋白质的产生,从而对许多疾病进行治疗。

例如,肝癌、糖尿病和病毒感染等疾病的治疗已经取得了一定的成功。

3. 农业和食品安全RNA干扰不仅在医学领域应用广泛,也在农业和食品安全领域有着巨大潜力。

siRNA和shRNA:通过基因沉默抑制蛋白表达的工具

siRNA和shRNA:通过基因沉默抑制蛋白表达的工具

siRNA和shRNA:通过基因沉默抑制蛋白表达的工具RNA干扰(RNAi)是有效沉默或抑制目标基因表达的过程,该过程通过双链RNA(dsRNA)使得目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。

RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。

沉默机制可导致由小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)诱导实现靶mRNA的降解,或者通过小RNA(miRNA)诱导特定mRNA翻译的抑制。

这篇综述将重点介绍shRNA和siRNA是如何导致蛋白质表达抑制的。

通过几种蛋白的活性(下面讨论),通过短反义核酸(siRNA和shRNA序列)锁定细胞mRNA,从而实现其随后的降解。

这反过来阻断了该蛋白的进一步表达/聚集,导致其水平的下降,最终实现抑制作用。

[放大]图1.siRNA和shRNA结构。

(A)siRNAs是短的RNA双链,在3‘端有两个碱基的游离。

(B)shRNA由正义链和反义链通过环状序列隔开共同组成。

(C) shRNA构建用于插入表达载体。

源自 [1, 2] 。

背景调控途径的发现和组成元件早在1984年人们就发现反义RNA能够抑制基因的表达。

1993年,Nellen和Lichtenstein提出了一个模型来解释这个观察。

然而,直到1998年,Fire等人发表了在线虫RNA干扰的结果,他们发现双链RNA在抑制基因表达方面实际上比单链RNA更有效。

最终确定小RNA 途径涉及的蛋白质组分有许多与RNA 干扰途径一样。

表一总结了RNA 干扰机制的主要元件。

它们包括锁定靶基因的双链RNA (siRNA 或shRNA )、Dicer 酶,Argonaute 蛋白家族的蛋白质(具体来说是Ago-2)、Drosha 、RISC 、TRBP 和PACT 。

术语描述 siRNA 小干扰(siRNA ),有在3’端有两个碱基的游离,可激活RNA 干扰,通过与目标mRNA 互补结合序列特异性地实现mRNA降解。

shRNA 短发夹RNA (shRNA ) ,包含一个环结构,可加工成siRNA ,也可通过与目标mRNA 互补结合序列特异性地实现靶mRNA 降解.Drosha 是一种核糖核酸酶III 的酶,可加工细胞核中的前体-miRNA和shRNA 。

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吉玛公司提供的siRNA是双链的还是单链的?吉玛公司的siRNA是双链的,而且也是按照双链来定价的。

吉玛公司RNA寡核苷酸使用什么纯化方法?吉玛公司运用国际上通用的HPLC纯化,如果特殊需要可以进行PAGE纯化。

合成RNA寡核苷酸的最大长度是多少?目前RNA寡核苷酸的最大长度是40碱基。

我们需要提供什么信息用于siRNA的合成?你们可以帮助免费设计吗?您需要准确地提供siRNA的19个核苷酸的靶序列和悬垂的合成物,或者您也可以提供相应地基因的GeneID 或者Accession Number,由我们公司技术人员为您免费设计。

如何选择siRNA的悬垂组成?悬垂的序列组成是由顾客自行选择的。

最近研究表明悬垂的组成在mRNA靶识别和酶解中不是很重要。

悬垂可能在形成RISC的过程中起结构的作用。

很多研究人员选择dTdT是因为研究表明脱氧核糖核苷能保护siRNA免受酶解。

合成序列最重要的是确定靶mRNA的19个碱基的核心结构。

针对人体基因设计的siRNA对其他物种是否也有效?一般siRNA都具有物种特异性,很少与其他物种有相同的靶位点,所以针对人体基因设计的siRNA不会沉默其他物种的同源序列。

然而,也有研究表明siRNA经过特异性设计后能对两个或两个以上的物种有效,这需要仔细进行siRNA设计和生物信息学分析。

你们提供的siRNA是怎样装运的?如果在常温下放置了一个星期,还有效吗?吉玛公司为您提供的siRNA是冻干粉包装的,在常温下运输。

这些冻干的样品在室温下能稳定保存2-4个星期,所以放置一个星期不会影响其沉默效果。

但我们建议您收到样品后最好保存于-20℃或-70℃有霜冷冻箱中。

在体外实验中,需要多少量的siRNA?我们建议您用于实验的siRNA的浓度为100nM。

1nmol siRNA的量对于一个24孔板或是96孔板的实验已经足够了。

用100nM 的siRNA转染时只得到50%沉默效率,我可以把siRNA的浓度增加到200nM甚至400nM吗?增加siRNA的浓度一般不能改进沉默效率。

高浓度的siRNA将可能导致去靶作用和对细胞的毒性。

siRNA 的高基因沉默效率来自于合理的设计,在100nM 甚至更低的浓度都可能有75%的沉默效率。

另外,低的转染效率会导致低的沉默效率,建议您更进一步优化siRNA的导入条件。

定量RNA的公式是什么?研究者可以用Beer法则定量RNA:吸光度(260nm)=(摩尔消光系数)*(浓度)*(路径长度,cm)。

为了便于理解,等式变为:浓度=(吸光度,260nm)/[(摩尔消光系数)*(路径长度,cm)]。

当使用一个标准的10mm比色皿时,在公式中路径长度这个变量等于1。

6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有多少ug的siRNA?首先计算含有多少nmol的siRNA:a. 等式: ? nmol = (6 uL)(10 umol/L);b. 单位换算: ? nmol = (6 uL)(10 umol/L)(1 L/1,000,000 uL)(1,000 nmol/umol);c. 答案: ? nmol = 0.06 nmol。

然后利用siRNA的平均分子量(13,300 g/mol)把nmol变为ug:a. 等式: ? ug = (0.06 nmol)(13,300 g/mol);b. 单位换算: ? ug = (0.06nmol)(13,300 g/mol)(1mol/1,000,000,000 nmol)(1,000,000ug/g);c. 答案: ? ug = 0.798≈0.8 ug。

所以6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有0.8ug的siRNA。

我需要浓度为20uM的样品,如何计算重悬siRNA缓冲液的量?样品浓度的计算如下:(siRNA的量,nmol)/(重悬体积,uL)=样品浓度,umol/L。

在解答前应先统一单位,确保单位可以抵消。

例如:您购买了20nmol的siRNA,想溶解为50uM的样品。

可按以下方法计算重悬缓冲液体积:a. 等式: (20 nmol)/ ? uL = 50 umol/L;b. 解答未知量: ? uL = (20 nmol)(1 L/50 umol);c. 单位换算: ? uL = (20 nmol)(1 L/50 umol)(1 umol/1,000 nmol)(1,000,000 uL/1 L);d.答案: ? uL = 400 uL。

因此,应该使用400uL缓冲液去重悬20nmol的siRNA,溶解后为50uM的样品。

一定需要阴性对照吗?是,阴性对照是RNA干扰实验中不可缺少的。

由于在超过200 nM的浓度下,siRNA有可能会导致非特异性的压力反应,在实验体系中必需设置阴性对照。

它能够帮助我们确认基因表达水平的降低是否是序列特异性的RNAi的结果。

由于siRNA的合成方法和工艺以及转染试剂等因素可能导致广泛的基因沉默现象。

如果没有阴性对照,研究人员很可能错误地将广泛的、非特异性基因沉默当作由RNAi引起的基因特异性沉默。

常用的阴性对照有哪些类型?常用的阴性对照大体分为两种,一种是使用通用阴性对照序列,该序列已经被上千篇文章使用;另一类是使用和靶基因siRNA打乱序列的siRNA作为阴性对照,这样的阴性对照和通用序列相比较,一方面是按照定制产品价格合成的,另一方面,由于打乱序列是没有经过验证的序列,有可能会产生off-target现象。

因此,除非有非常特殊的要求,最好使用通用序列作为阴性对照。

在阴性对照体系中和实验体系中观察到同样的实验结果,这是什么原因?这个结果充分说明了设置阴性对照的必要性。

该结果表明您所观察到的表型不是序列特异性knockdown产生的表型,您需要降低siRNA的工作浓度。

为什么说阳性对照在RNA干扰实验中很重要?阳性对照作为一个实验系统检查是很重要的。

也就是说,当您看到siRNA阳性对照的预期实验结果时,您能确保在您的实验方法中您的转染、RNA提取物和检测方法是可靠的。

通常最好的阳性对照是内在的对照。

你们能提供预先合成的siRNA对照么?可以。

吉玛能提供许多预先合成的用于RNA干扰实验的对照双链。

用于对照的siRNA的最佳浓度是多少?阳性对照和阴性对照的siRNA的浓度都应该与基因特异性的siRNA的浓度相同。

不同工作浓度下1OD siRNA可以使用多少次工作浓度 1 OD siRNA可以使用孔数(孔)96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板100mm dish5nM 5000 2500 1000 500 250 5010nM 2500 1200 500 250 125 2520nM 1250 625 250 125 60 1250nM 500 250 100 50 25 5100nM 250 125 50 25 12 2150nM 160 80 30 15 8 1200nM 120 60 25 12 6 1300nM 80 40 16 8 4 -400nM 60 30 12 6 3 -在siRNA 上进行标记的最佳位点在哪里?反义链的5'端标记会影响siRNA的沉默活性,所以不推荐标记这个位点。

在其他三个末端进行标记对沉默活性几乎没有影响。

有研究表明正义链的5'端标记是最有效的化学合成位点。

荧光标记的siRNA是不是可以作为良好的对照?如何检测荧光标记的siRNA?已经有为数不少的实验室研究过荧光标记的siRNA的荧光检测结果和knockdown效率之间的正相关关系。

荧光标记双链是最常用的优化转染条件的方法。

可以用流式细胞仪或者荧光共聚焦显微镜检测标记的siRNA。

荧光素的最大吸收率和发射率各在哪个波段?荧光素在495nm处有最大吸收率,在520nm处有最大发射率。

如何筛选转染试剂?好的转染试剂有以下特点:1、对siRNA有较高的转染率;2、对细胞的毒性小。

在mRNA水平检测siRNA导入的效果比用看家基因的siRNA阳性对照检测更为准确。

转染过程中发现大量细胞死亡,我应该如何处理?如果出现细胞大量死亡,意味着您的转染条件仍然需要优化:转染条件的优化一般包括以下几个方面:1. 调整转染试剂的浓度;2. 在转染后适当的时间内更换无转染试剂的培养液,3.调整细胞的生长状态;一般处于良好生长状态的细胞对转染试剂就有更好的耐受性;4.调整转染试剂和siRNA的比例;如果同一管转染试剂在不同实验中对细胞的毒性有差异,一般说来应该是实验过程本身带来的差异;如果已经做了以上几项工作,转染效率仍然得不到提高,建议您更换一种转染试剂。

如何将siRNA导入到细胞内?使用什么样的转染方法,很大程度上取决于您使用的细胞系:1.贴壁的、易转染的细胞,我们推荐使用RNAi-mate;2.悬浮的或原代的细胞,我们推荐使用电击转化方法;3.电击转化效率仍然很低的细胞,需要选择载体系统。

上海吉玛除提供化学合成的siRNA以外,还提供完整的载体系统,请参阅产品资料。

我的课题主要是研究细胞凋亡相关基因,我手上有一些新基因需要使用RNA干扰进行深入研究,我该如何选择对照系统?用RNAi进行pathway研究,是RNAi主要应用之一。

在这样的课题中,对照系统的选择尤其重要。

已经发表的和已经验证的siRNA为RNA干扰研究提供了系统性对照。

用RNAi进行细胞凋亡相关基因的研究,以往已经有众多的文献报道,可以查阅上海吉玛网站www.吉玛公司.com。

我刚刚开始接触RNA干扰技术,从文献上看,不同细胞应该选用不同的转染试剂,不同的研究目的,应该使用不同的siRNA,我的经费有限,如何有效确定我的研究体系?在开始RNA干扰研究之初,需要确定以下几个方面:使用化学合成的siRNA还是使用载体构建shRNA?我们推荐您使用化学合成的方法来筛选有效的目的片段,然后把您筛选出来的目的片段插入到载体,进行抗性筛选,得到稳定表达的细胞株,再做长期研究。

反义核酸和RNAi有何差异?反义核酸和RNAi从作用原理到使用的范围都有很大差异。

这里只能做一个简单的介绍:从原理上说,反义核酸是一段与靶基因配对的单链DNA或类似DNA的片段与靶基因结合,结果阻止靶基因的转录或是翻译,以往的研究表明在反义核酸的研究中,序列的有效性和有效序列的非特异性往往有比较高的正相关性,这就在一定程度上限制了反义核酸的应用。

RNAi的作用机理是双链的RNA进入细胞内,导致靶基因的切割和降解。

siRNA的序列可以选择在高度特异针对靶基因的位置,也就为RNAi作为药物研究提供了高效、低副作用的空间。

自从RNAi技术问世以来,国外很多专业从事反义核酸研究的公司都纷纷转向RNAi研究, ISIS是一个非常就有代表性的例子。

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