非淀粉多糖酶对奥尼罗非鱼蛋白酶_淀粉酶活性影响的研究_王纪亭
木薯粉对罗非鱼营养物质表观消化率、肠道和肝胰脏消化酶活性以及血清非特异性免疫指标的影响
1.4.3 血清非特异性免疫指标的检测
采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化歧化酶活
性，采用比浊法测定溶菌酶活性，采用对硝基苯磷
酸盐法测定碱性磷酸酶活性，采用分光光度法测
定过氧化氢酶活性，所用试剂盒均购自南京建成
生物工程研究所。
1.5 试验数据的处理与分析
试验数据采用 Excel2007 进行初步处理后，
用 SPSS13.0 软件中 模 ANOVA 型进行单因素方
罗非鱼对含不同比例木薯粉饲料中干物质、
粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分以及钙、总磷的表观消
化率采用用内源性指示剂法，以 4 不溶 mol/LHCl
灰分 为指示剂 （AIA）
[9] 。
AIA含量的测定：准确称取 10 ～12 g（ 准确至
0.000 1 g）干燥、磨碎的样本（ 500 mL锥形瓶中，制备 2 份。
（对照） 和 、4%、8%、12%、16% 20%的等能等氮试验饲料，试验期为 8 周。 结果表明：与对照组相
比，饲料中添加 4%～20%木薯粉对罗非鱼粗脂肪和钙的表观消化率均无显著影响（P＞0.05）；饲
料中添加 4%～16%木薯粉对罗非鱼干物质、粗蛋白质、粗灰分和总磷的表观消化率无显著影响
（P＞0.05）；饲料中添加 4% 木 ～12% 薯粉对罗非鱼肠道和肝胰脏蛋白酶活性无显著影响（ P＞
差分析，多重比较采用 Duncan 氏法。 试验数据采 用平均值±标准差（ mean±SD） 表示，P＜0.05 为差 异显著。
2 结果与分析
2.1 木薯粉对罗非鱼营养物质表观消化率的影响
由表 2 可知，D4、D8、D12 和 D16 组干物质的
表观消化率与对照组差异不显著（ P＞0.05），D20
0.05）；饲料中木薯粉添加比例在 20%以内均可提高（P＞0.05）或显著提高（P＜0.05）肠道和肝胰
金属蛋白酶对奥尼罗非鱼生长、消化率及非特异性免疫功能的影响
３．Ｃ ｌｇ ｕｃｌ ｒ， ｕｎ ｄｎ ｃａ ｎ ｅ ， ｈ ｎ ａｇ５ ４ ２ ，Ｃ ｉａ） ｏ ｅｅ Ａ ａｕ ｕｅ Ｇ ａ ｇ ｏｇＯ ｅｎＵ ｗ ｍ ｌ ｏ ｑ ｆ ｔ Ｚ ａｆ ｎ ２ ０５ ｈｎ ｉ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｈ ｆ ｃ ｓｏ ｄ ｉｇ ｄ ｆ ｒｎ ｅ ｅ ｆ ｔｌ ｐ ｏｅ ｓ ｅ ｄ ｅ ｎ ｇ ｏ ｈ ｐ ｒ ｒ ｎ ｅ ｐ ａ ｅ ｔ ｉｅ ｔ ｉ ｔ ｎ ｏ —ｐ — ｓｒ ｃ ：Ｔ ｅ ｅｆ ｔ ｆ ｄ ｎ ｉ ｅ ｅ ｔ ｖ ｌ ａｌ ｒ ｔａ ｅ ｉ ｔ ｉｔｏ ｒｗｔ ｅｆ ｍａ ｃ ，ａ ｐ ｒ ｎ ｇ ｓ ｂ ｌ ｙａ ｄ ｎ ｎ ｓ ｅ ｅ ａ ｌ ｏ ｍｅ ｏ ｎ ｈ ｏ ｄ ｉ ｉ
２ ．Ｐｅ ｒ Ｒｉ ｒＦ ｓ ｅｉｓＲ ｓ ａ ｃ ｎ ｔ ｕｅ ａ ｌ ｖ ｉｈ ｒ ｅ ｅ ｒｈ Ｉ ｓｉ ｔ ． ｅ ｅ ｔ ｉ ｅｅ Ａａ ｅ ｙｏ ｉ ｅ ｃ ｎｅ， ｕｎ ｚｏ １ ３０ ｎ ｓ ｃｄｍ Ｆｓ ｒ Ｓｉ ｓ Ｇ ａ ｇｈ ｕ５０ ８ ，Ｃ ｉａ ｆ ｈｙ ｅ ｃ ｈｎ ；
ｅｆ ｍｍｕ ｅｏ ｉ ｐａ（ ｅ ｃ ｒｍｉ ｎｌｔ ｕ × Ｏ． ｕｅ￣ ） ｗｅｅ ｉｖｓｉａｅ ．Ｆ ｕ ｉｅｅ ｔｄｅｓｗｅｅｆｄ ｔ ｓ ｏ ６ ｄ ｙ ：ａ ｉｃｉ ｉ ｎ ｆｔ ａ ｉ Ｏｒｏｈｏ ｓ ｉ ｉ ｓ ｌ ｏｃ ａ ｒＨ ｒ ｎ ｅ ｔ ｔｄ ｏ ｒｄｆ ｒｎ ｉｔ ｇ ｉ ｒ ｅ ｏｆ ｈ ｆｒ５ ａｓ ｉ
摘要 ：在基础饲料 中分别添加 ０ ．３ 、０ ０ ％ 、０ １ ％的金属蛋 白酶 ，饲喂奥尼罗非鱼 ５ 。测定奥 尼罗非 、０ ０ ％ ．５ ．０ ６ｄ 鱼 的生长 、消化率及血清溶菌酶活力和超氧化物歧化酶活力 （ Ｏ 。结果 表明 ，添加 ０ １ ％的金属蛋 白酶显著 Ｓ Ｄ） ．０
3 5种乳酸菌对罗非鱼生长性能_体成分_血清生化指标及肠道菌群的影响_周晓波
蛋白质沉积率（ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ，ＰＤＲ，％） ＝ １００×（ 终末鱼体蛋白质含量－初始鱼体 蛋白质含量） ／ 摄入蛋白质量； 存活率（ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ，ＳＲ，％） ＝ １００× 终末鱼尾数 ／ 初始鱼尾数；
ｄｏｉ：１０．３９６９ ／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１４．０７．０００
５ 种乳酸菌对罗非鱼生长性能、体成分、 血清生化指标及肠道菌群的影响
周晓波１，２ 黄燕华２∗ 曹俊明２ 邝哲师３∗ 王国霞２ 黄文庆２ 刘小玲２
（１．华中农业大学水产学院，武汉 ４３００７０；２．广东省农业科学院动物科学研究所，广州 ５１０６４０； ３．广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，广州 ５１０６１０）
表 １ 基础饲料组成及营养水平（干物质基础）
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ
ｔｈｅ ｂａｓａｌ ｄｉｅｔ （ ＤＭ ｂａｓｉｓ）
％
项目 Ｉｔｅｍｓ
含量 Ｃｏｎｔｅｎｔ
原料 Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ 鱼粉 Ｆｉｓｈ ｍｅａｌ 豆粕 Ｓｏｙｂｅａｎ ｍｅａｌ 菜籽粕 Ｒａｐｅｓｅｅｄ ｍｅａｌ 卵磷脂 Ｌｅｃｉｔｈｉｎ 高筋面粉 Ｈｉｇｈ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｆｌｏｕｒ 豆油 Ｓｏｙｂｅａｎ ｏｉｌ 磷酸二氢钙 Ｃａ（ Ｈ２ ＰＯ４ ） ２ 维生素预混料 Ｖｉｔａｍｉｎ ｐｒｅｍｉｘ１） 矿物质预混料 Ｍｉｎｅｒａｌ ｐｒｅｍｉｘ２） 统糠 Ｃｒｕｄｅ ｒｉｃｅ ｂｒａｎ 沸石粉 Ｚｅｏｌｉｔｅ ｐｏｗｄｅｒ
７期
周晓波等：５ 种乳酸菌对罗非鱼生长性能、体成分、血清生化指标及肠道菌群的影响
不同水平饲料镉对罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性影响的研究
不同水平饲料镉对罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性影响的研究贾景涛;翟少伟;阙炳根【期刊名称】《农学学报》【年(卷),期】2012(002)010【摘要】为研究不同水平饲料镉对罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性的影响。
将300尾罗非鱼随机分为5个处理,饲料镉添加水平分别为0、50、100、200、400mg/kg,试验期为8周。
结果表明：与对照组相比,饲料镉添加组增重率和特定生长率均逐渐降低,200、400mg/kg添加水平组显著降低（P〈0.05）;各处理组之间摄食率、饲料系数和成活率均无显著差异（P〉0.05）。
饲料镉添加水平组罗非鱼肠道淀粉酶活性和蛋白酶活性均显著低于对照组（P〈0.05）,当饲料中添加50mg/kg镉时,罗非鱼肠道淀粉酶活性和蛋白酶活性即可显著降低（P〈0.05）;罗非鱼脂肪酶活性仅在饲料镉添加水平400mg/kg时显著低于对照组（P〈0.05）,其余各处理组间差异不显著（P〉0.05）。
表明罗非鱼对饲料镉耐受程度较高,饲料中镉达到200mg/kg时,才可显著影响罗非鱼增重率和特定生长率。
饲料中不同水平镉对罗非鱼肠道消化酶活性具有不同程度的抑制作用,饲料中添加50mg/kg镉时即可显著降低肠道淀粉酶和蛋白酶的活性,肠道脂肪酶活性仅在400mg/kg时显著降低。
【总页数】4页(P58-61)【作者】贾景涛;翟少伟;阙炳根【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】X503.225【相关文献】1.不同饲用乳化剂对吉富罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性的影响2.不同水平饲料镉对罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性影响的研究3.饲料中添加葡多酚对吉富罗非鱼生长性能、肠道消化酶活性、血脂水平和肝胰脏抗氧化能力的影响4.壳聚糖对饲料镉胁迫下吉富罗非鱼生长、肠道消化酶活性、血清生化指标及镉残留的影响5.饲料中添加抗菌脂肽对吉富罗非鱼生长性能和肠道消化酶活性的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
耐高温酶制剂对奥尼罗非鱼免疫和肠道结构的影响
通过 采用 独特 螯 合 离 子稳 定 化 处 理 技术 ， 高 产 提 品 的 耐 温 性 （ 高 可 耐 受 １０ ℃ ） 使 酶 活 性 更 最 １ ， 高 ， 稳定 ， 耐受 饲料 制粒 调制 、 更 能 后熟 化 、 烘干 等
过程 中 的高 温 。其 中 ， 白酶 活 力 ≥５０ ０ Ｕ ｇ 蛋 ０ ／ ， 纤 维 酶活 力 ≥１０ ０ Ｕ ｇ 葡 聚 糖 酶活 力 ≥２ ０ Ｕ ０ ／ ， ０ ／ ｇ 。将 酶制剂 与 其它原 料 一起混 合 ， 按正 常 鱼料 生
维普资讯
《 渔业现代 化 ￣０ ８年第 ３ 第 ３期 ２０ ５卷
２ ７
耐 高温 酶 制 剂对 奥 尼 罗非 鱼 免 疫 和 肠 道 结构 的 影 响
谢 骏 ，王广 军 ，邓岳松 ，余德 光 兰 ，乌 ，卢迈新
（ １中国水产科学研究 院珠江水产研究所 ，广 州 ５０ ０ ；２广州博仕奥集团 ， 州 ５０ ０ ） １ １０ 广 １ １０ 摘要 ：为 了验证耐高温酶制剂的使用效果 ， 试验 在基础饲料 中添加 ０ １ 的耐高温饲 用酶 ， 养奥尼 罗非鱼 ．％ 饲
为 一个 蛋 白酶 活 力 单 位 ） 测 定 出制 粒 前 后 各 阶 ，
段 的蛋 白酶 的 活力变 化 。
收 稿 日期 ：０ ８０ －３ ２ ０ －６０ ；修 回 日期 ：０ ８０ －２ ２ ０ －６１ 基 金 项 目 ： 州 市科 技 攻 关 计 划 项 目（０ ６ ２Ｅ０ １ ； 东 省 科 技 计 划 项 目（ ０ ５ ２ ３ １２ ，０５ ３２ １１ ； 东 省 自然 科 学 基 金 项 广 ２ ０ Ｚ ．０ ２ ） 广 ２０ Ｂ ０ ０ ０ ４ ２０ Ｂ ３ ０ ０２） 广 目（ ０４ ５ ； ５０ １９） 国家 “６ ” ８ ３ 高技 术研 发 项 目（ ０ ７ １Ｚ ３ ； ２ ０ ＡＡ ０ ２９） 农业 行 业专 项 （ ｙｙｘ７－ ４） 国家 科技 支撑 计 划专 题 项 目 ｎｈ ｚ －４ ； ０ ０
1饲料脂肪水平对奥尼罗非鱼幼鱼生长和血浆生化指标的影响
第18卷第1期上海海洋大学学报Vol.18,No.1 2009年1月JOURNAL OF SHANGHA IOCE AN UN I V ERSI TY Jan.,2009文章编号:1004-7271(2009)01-0035-07饲料脂肪水平对奥尼罗非鱼幼鱼生长和血浆生化指标的影响甘 晖1,2,李坚明2,3,冯广朋2,4,龚竹林1,黄 凯5,李家乐2(1.广西水产畜牧学校,广西南宁 530021;2.上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306;3.广西水产技术推广总站,广西南宁 530022;4.中国水产科学研究院东海水产研究所,上海 200090;5.广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530004)摘 要:研究了奥尼罗非鱼幼鱼的生长及血浆生化指标与不同脂肪含量饲料间的关系。
饲料脂肪水平为0%、2%、4%、6%、8%5个梯度组。
结果表明,5组不同脂肪水平的饲料对奥尼罗非鱼幼鱼的成活率无显著性影响。
随着饲料脂肪水平升高,奥尼罗非鱼幼鱼的增重率、肥满度和摄食量先上升后下降,而饲料系数则先下降后上升;肝脏重量、肝体比、肝脏与肌肉脂肪含量等4个指标均呈现逐渐升高的趋势。
饲料脂肪水平与奥尼罗非鱼幼鱼血浆中的胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白呈负相关,与高密度脂蛋白呈正相关。
随着饲料中脂肪含量的增加,试验鱼血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶、碱性磷酸酶等活性逐渐升高。
本研究条件下饲料脂肪水平超过6%容易导致奥尼罗非鱼幼鱼形成脂肪肝,对其摄食、体形特征、生长指标、相关组织脂肪含量以及血清中酶的活性等都有明显影响。
关键词:罗非鱼;饲料;脂肪水平;生化指标;生长中图分类号:S963.1 文献标识码:AEffects of di fferent li pi d levels on growth andhae matologi cal bi oche m istry i n juven ile til api a(O reoch ro m is n iloticus×O reoch rom is au reus)G AN Hui1,2,L I J ian2m in2,3,FENG Guang2peng2,4,G ONG Zhu2lin1,HUANG Kai5,L I J ia2le2(1.Guangxi A quaculture and A ni m al Husbandry School,N anning 530021,China;2.College of Fisheries and L ife,Shanghai O cean U niversity,Shanghai 201306,China;3.Guangxi Fisheries Technology Extension Center,N anning 530022,China;4.East China Sea Fisheries Research Institute,Chinese A cade m y of Fishery Sciences,Shanghai 200090,China;5.College of A ni m al Science and Technology,Guangxi U niversity,N anning 530004,China)Abstract:Juvenile tilap ia were fed by five diets f or70days t o study the relati onshi p bet w een diet li p id levels and fatty liver disease.L i p id content levels included0%,2%,4%,6%,8%.The results showed that five different diets didn’t affect survival rate of juvenile tilap ia significantly.Fish fed with6%and8%li p id levels收稿日期:2008203215基金项目:广西壮族自治区科技攻关项目(0537008-2E)作者简介:甘 晖(1976-),女,广西贵港人,硕士,讲师,主要从事水产养殖病害方面的研究。
微生物制剂对奥尼罗非鱼生长及消化酶活性的影响
２ １ 年 １ 月 ０ １ １
水 生 生 物 学 报
ＡＣ Ａ Ｔ ＨＹＤＲＯＢ ＯＬ Ｉ ＯＧＩ Ｉ ＣＡ ＣＡ Ｓ ＮＩ
Ｖｏ１ ．３５．Ｎ Ｏ． ６ Ｎ ＯＶ． ， ２ ０ １１
ＤＯＩ ０ ３ ２ ／ ＰＪ １ ３ ． ０ １０ ９ ８ ：１ ．７ ４ Ｓ ． ０ ５ ２ ｌ ． ０ ９
摘 要：选用 １２尾初 始体 ｉ （４５ ￣ ．５ ｇ的健康 奥尼 罗非鱼 （ ｅ ｃ ｒｍｉｎｌｔ ｕ Ｏ ａ ｒｕ，研究 在基 础饲 ９ ￣ ３ ． ０２ ） ２ ０ Ｏｒｏ ｈｏ ｓ ｉ ｉ ｓ ． ｕｅ） ｏｃ ｘ 料 中分别 添加相 同剂 量（ 菌含量 为 ３０ １ “ｃｕｋ 活 ．ｘ ０ ｆ／ｇ饲料 １ 的汉 逊德 巴利酵母 、枯 草芽孢 杆菌 和凝结 芽孢 杆菌 对 奥尼罗 非鱼 生长及 消化 酶活性 的影 响，试 验期 ５ ｄ ６ 。试 验结果 表 明，与对 照组 相 比，添加 枯草 芽孢 杆菌 和 凝 结 芽 孢 杆 菌 ，奥 尼 罗 非 鱼 的 增 重 率 分 别 提 高 １ ．７ ２２ ％和 ８５ ％（ ＜ ．５，饵 料 系 数 分 别 降 低 １ ．２ ．６ Ｐ Ｏ０ ） ０９ ％和 ８１ ％（ ＜ ．５ 。饲 料干 物 质表 观 消化 率分 别 提高 １ ．４ ．８ Ｐ ００ ） ０５ ％和 １ ．７ 尸 ００ ） 白质表 观 消化 率分 别 提高 ００ ％（ ＜ ．５，蛋
３ ．广 东 省微 生 物 应 用 新 技术 公 共 实 验 室 ，广 州 ５ ０ ７ ； ．广 东 省 华 南应 用 微 生 物 重 点 实 验 室一 ００４ １ 省 部共 建 国家 重 点 实验 室 培 育 基 地 ，广 州 ５ ０ ７ ； ．广 东 碧 德 生 物科 技 有 限公 司 ，广 州 ５ ０ ６ ） １０ ０ ５ １６３
离体消化法在筛选水产复合酶中的应用
离体消化法在筛选水产复合酶中的应用摘要采用胰蛋白酶来模拟水产动物消化酶，在胰蛋白酶的基础上添加复合酶，以探讨在水产料中添加复合酶的效果。
结果显示：复合酶 A 对鲤鱼料的消化率很低，仅为 3.72%，胰蛋白酶的基础上添加复合酶 A，鲤鱼料的干物质消化率从 11.55% 提高到 25.46%；复合酶 B 对饲料样品的消化率为 2.82%，在胰蛋白酶的基础上添加酶 B，鲤鱼料的消化率并没有提高。
表明在此试验条件下，以非淀粉多糖酶为主要酶类的复合酶 A 可有效破坏降解植物原料的细胞壁，促进消化酶对营养物质的消化，而复合酶 B 活性可能很低，对饲料消化率没有改善作用。
根据试验结果可以推测，对以植物原料为主的鲤科鱼类，复合酶 A 可能比复合酶 B 更合适。
关键词离体消化法；水产复合酶；消化率外源酶制剂可弥补内源酶分泌的不足，也可以提供某些动物体不能分泌的酶类，从而促进动物对饲料的消化利用，目前在畜禽料中已广泛应用。
水产用酶制剂日渐兴起，但问题突出，譬如多数水产复合酶制剂并非针对水产动物开发的，其酶的来源与酶活检测均以畜禽为参照等等；实际上，畜禽和水产动物的消化生理差异显著，不能仅凭酶活测定结果或厂家宣传就在水产饲料中推广应用，而需对水产酶制剂在水产饲料中应用的可行性进行评估。
养殖试验是最好的评估方法，但该方法费时费力，采用离体消化试验，将会节约大量的时间和精力。
本试验旨在于探讨离体消化法筛选水产酶制剂的可行性。
采用模拟无胃鱼消化环境 ( 温度、肠道 pH值等 )，采用一步消化法，用水产酶制剂消化鲤鱼料，测定其消化率，为酶制剂筛选提供参考。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 水产复合酶试验选用两种水产酶制剂 ( 酶 A 和酶 B)，主要酶活见表 1。
1.1.2 胰蛋白酶Trypsin 1∶250酶活力：1000～1500U/mg( 上海源聚生物科技有限公司 )1.1.3 饲料来源为市场购买某公司鲤鱼料，样品均通过105℃烘干处理，粉碎过 80 目筛保存备用。
奥尼罗非鱼无乳链球菌的鉴定、致病性及药物敏感性研究(精)
98%之间,用移液枪将菌悬液转移至 BiologGN3培 暂 养7d,确 认 无 任 何 疾 病 症 状 后 用 于 人 工 感 染
养板中,每孔接种菌悬液100μL,加盖30 ℃ 有 氧 培 试 验 。 养24h 后,经 Microstation 仪 自 动 读 取 细 菌 鉴 定 1.9 药物敏感实验
司。 1.2 病鱼来源及症状观察
海南省琼海市某水产养殖场饲养的奥尼罗非鱼 成鱼出现大批死亡。取该渔场发病鱼塘里濒死的奥 尼罗非鱼观察并记 录 其 症 状,剖 检 典 型 病 鱼 记 录 其 内脏病理变化。
罗非鱼的链球菌病提供依据。
1.3 病原菌分离和纯化
选取 具 有 典 型 症 状 的 濒 死 病 奥 尼 罗 非 鱼,在 无
落特征。取 BHI平 板 培 养 24h 的 培 养 物,革 兰 氏 index,CI)衡量分析结果的可靠性。
染色,OlympusCX41 型 显 微 镜 观 察 菌 体 形 态。 依 1.8 菌株毒力测定及其试验鱼
据 文 献 [4-5]进 行 生 理 生 化 特 征 的 测 定 ,包 括 接 触 酶
蘸取一定 量 的 单 菌 落 细 菌 至 无 菌 IF-A 接 种 液 中, 察 14d。 从 濒 死 的 试 验 鱼 的 肝 脏 、脾 脏 、肾 脏 等 部
制成菌悬 液,利 用 浊 度 仪 调 整 浊 度 范 围 在 92% ~ 位 再 次 分 离 致 病 菌 并 进 行 鉴 定 。 试 验 鱼 在 攻 毒 前
746
华中农业大学学报
第 29 卷
1.4 菌株形态观察与生理生化特性鉴定
比对,并用 MP(maximum parsimony,最大简约 法)
取纯 化 后 的 菌 落 分 别 接 种 在 普 通 营 养 琼 脂、 构建11 个 菌 种 系 统 发 育 树,用 自 展 法 (Bootstrap)
饲料中三种不同碳水化合物对大黄鱼生长性能和肝脏糖代谢关键酶活性的影响
袁 野 ， 王猛 强 ， 马红娜 ， 陆 游 ， 孙 蓬 ， 申屠 基康 ， 金 敏 ， 周 歧研 究 室 ，浙江 宁波 ３１５２１１： ２．宁波 市海 洋与 渔业 研 究院 ，浙江 宁波 ３１５０１２）
摘要 ：为研 究饲料 中添加３种不 同的碳 水化合 物对大黄 鱼生长 性能、饲料 利用 以及糖代
收 稿 日期 ：２０１６—０７—１３ 修 回 日期 ：２０１７—０４．１１ 资 助 项 目 ：国 家 自然 科 学 基 金 （３１２７２６７０）； 国 家 科 技 部 星 火 重 大 计 划 项 目（２０１４ＧＡ７０１００１）； 浙 江 省 重 点 研 发 计 划 项 目
（２０１７ＣＯ２Ｇｌ４６Ｏ８３４）； 浙 江 省 水 产 动 物 营 养 与 饲 料 科 技 服 务 团 队 项 目（ＺＪＡＮＦＴＳＴ ２０１７．２）；宁 波 市 农 业 科 技 攻 关 重 大 项 目（２０１２Ｃ１００２５）；浙 江 省 重 中 之 重 一 级 学科 （水 产 ）开 放 基 金 通 信 作 者 ：周 歧 存 ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｏｕｑｉｃｕｎ＠ｎｂｕ．ｅｄｕ．ｃａ
存 在 差 异 。
关键词 ：大黄鱼 ；碳水化合物 ；生长性 能；血糖 ；糖代 谢关键 酶
中图分 类号 ：Ｓ ９６３．７
文 献标 志码 ：Ａ
大 黄 鱼（Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ ｃｒｏｃｅａ）属 硬骨 鱼 纲 （Ｏｓ－ ｔｅｉｃｔｈｙｓ），鲈形 目（Ｐｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓ），石 首 鱼科 （Ｓｃｉａｅｎ— ｉｄａｅ），是 暖温性 近海 中下层 集群 洄游 性 鱼类 ，分 布 于 我 国黄 海 南 部 、东 海 、台 湾 海 峡 以 及 南 海 北 部 ，为 海 水 养 殖 的名 贵 经 济 鱼 类 ，是 我 国 传
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动物营养学报2008,20(5):599-605ChineseJournalofAnimalNutrition
非淀粉多糖酶对奥尼罗非鱼蛋白酶、淀粉酶活性影响的研究
王纪亭1 万文菊2* 吴淑勤3 石存斌3 计 成4*(1.山东农业大学动物科技学院,泰安271000;2.泰山医学院基础医学部,泰安271000;3.中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380;4.中国农业大学动物科技学院,北京100193)
摘 要:本文从生长性能角度研究了非淀粉多糖酶对奥尼罗非鱼肝胰脏、肠道(前、中后肠)蛋白酶和淀粉酶的影响。试验选用体重约60g的奥尼罗非鱼(Oreochromisniloticus@O.aureus)560尾,随机分成4组,每组7个重复,每重复20尾鱼,分别饲喂添加了不同水平非淀粉多糖复合酶制剂(0、0.01%、0.02%、0.04%)的基础日粮,喂料后0、1、3、5h对各组进行组织采样,研究非淀粉多糖酶对罗非鱼肝胰脏、肠道(前、中后肠)蛋白酶和淀粉酶的影响。结果表明:(1)添加0.02%和0.04%非淀粉多糖酶显著提高了奥尼罗非鱼的特定生长率、显著降低了饵料系数(P<0.05);(2)蛋白酶活性分别按肝胰脏、胃、肠道依次升高;(3)添加0.04%非淀粉多糖酶组罗非鱼肝胰脏、胃蛋白酶活性最大,均显著高于对照组;(4)除喂后5h采样结果外,其它时间采样检测结果均以添加0.01%非淀粉多糖酶组中后肠蛋白酶活性最高,显著高于对照组(P<0.05);(5)适量添加非淀粉多糖酶对肝胰脏淀粉酶活性影响不大,高量添加非淀粉多糖酶(0.04%)对肝胰脏淀粉酶活性具有抑制作用,在一定程度上提高了前、中后肠淀粉酶活性。关键词:非淀粉多糖酶;罗非鱼;蛋白酶;淀粉酶
收稿日期:2008-02-22基金项目:山东省中青年科学家科研奖励基金项目(2006BS06018)资助作者简介:王纪亭(1969-),男,汉族,山东阳谷人,博士,副教授,主要从事水产动物营养与免疫方向的研究。E-mail:jtwang@sdau.edu.cn*通讯作者:万文菊,副教授,E-mail:wwenju2003@yahoo.com.cn;计成,教授,E-mail:jicheng@cau.edu.cn
非淀粉多糖(non-starchpolysaccharides,NSP)分为水溶性和非水溶性两种,存在于植物原料中。而水溶性非淀粉多糖被认为具有很强的抗营养作用,如阿拉伯木聚糖、B-葡聚糖和果胶,是降低饲料中蛋白质、淀粉和脂肪等营养价值的主要因素[1]。另外,非淀粉多糖增加了动物肠道食糜黏度,增强肠道有害菌的繁殖。非淀粉多糖酶可以减少或降低非淀粉多糖的抗营养作用,减轻对动物生产的负面影响,同时,畜禽试验研究证明非淀粉多糖酶可以增加动物的免疫力[2]。鱼饲料中的植物性原料含有较多的非淀粉多糖,而自身消化道内没有相应的能够分解非淀粉多糖的酶类等,本研究选择罗非鱼为研究对象,在罗非鱼饵料中添加非淀粉多糖酶,研究其对罗非鱼内源蛋白酶和淀粉酶活性的影响,为非淀粉多糖复合酶制剂在罗非鱼及其他水产动物饵料中的应用提供可靠依据。
1 材料与方法1.1 酶制剂试验用非淀粉多糖酶是一种饲料用复合酶制剂,主要包括木聚糖酶5500ViscoUnit/mL(在pH5.5、30e测定条件下,水解底物,降低溶液的粘度,每min产生一个单位相对流度的变化所需要的酶量)、B-葡聚糖酶500AGLUnit/mL(在pH4.6、30e、20min测试条件下,水解底物释放出醇溶低聚糖,用标准底物(相对于标准酶活)在590nm处测定出的吸光值为0.820时所需要的酶量)、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶等。1.2 试验动物试验选用奥尼罗非鱼(Oreochromisniloticus@O.aureus)(90%以上雄性),试验前集中暂放养
于水泥池中,用配合饲料驯养3周,然后选择体重基本一致的健康鱼560尾,分养于长@宽@高为2m@1m@1m的网箱中,各处理组的初始体重无显著差异。动 物 营 养 学 报20卷 1.3 试验设计试验共分4个组,试验Ñ组为对照组,饲喂基础日粮,试验Ò、Ó、Ô组在基础日粮中分别添加0101%、0.02%、0.04%的非淀粉多糖复合酶制剂。每组设7个重复样,每个样本20尾鱼,正式试验前进行鱼体称重。1.4 试验日粮及饲养管理基础日粮组成及营养水平见表1。饲喂量按鱼体重的3%进行饲喂。每天分2次(09:00、16:00)投喂。每天记录水温、pH以及鱼尾数,预试期为7d,正式试验期为8周。试验结束前12h停止喂料,称取各重复组鱼重量。试验期间水温为25~30e,溶氧4.4~6.8mg/L,pH为6.8~7.5。表1 基础日粮及其营养成分(风干基础)Table1 Compositionandnutrientlevelsofbasaldiet(air-drybasis,%)项目Items含量Content组成Ingredients小麦Wheat2710豆粕Soybeanmeal1710鱼粉Fishmeal510菜籽粕Rapeseedmeal2510花生粕Peanutmeal915麦芽根Maltroot610磷酸氢钙CaHPO4115石粉Limestone115膨润土Bentonite310统糠Ricebran310预混料Premix1)115合计Total10010营养水平Nutrientlevels2)消化能DE(MJ/kg)11188粗蛋白质CP29100钙Ca1140磷P0197赖氨酸Lys1134蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys0195 1)每千克全价料提供Providedperkgofdiet:VA6000IU;VD31500IU;VE80mg;VK12mg;VB120mg;VB218mg;VB624mg;VC240mg;VB12(1%)3mg;叶酸folicacid6mg;烟酸niacin120mg;泛酸pan-tothenicacid60mg;生物素biotin(2%)6mg;肌醇inos-itol2mg;Cu5mg;Fe50mg;Zn15mg;Mn15mg;Mg350mg;Se016mg;I5mg;Co115mg。2)为实测值。Thedatawerethedeterminedvalues.1.5 罗非鱼生长性能指标的测定记录各组饲料消耗量,根据鱼试验前后体重变化,计算各组鱼的日增重、饲料转化效率等指标。特定生长率(SGR,%)=(InWt-InWo)/t@100饵料系数(FCR)=F/W式中,Wt为试验末鱼均重,Wo为试验初鱼均重,t为饲养天数,F为重复组饲料总摄入量,W为重复组总鱼体增重。1.6 组织样品的采集及酶液的制备在喂饲后0、1、3、5h,每组分别随机捕捞12尾鱼,3条鱼样品混合成一个样品。具体制备程序参照黄峰等[3]、黎军胜等[4]的方法并稍加修改。将鱼从网箱中取出,称重、测体长,立即断脊处死解剖,取出胃、肝胰脏、肠,放在有冰浴的表面皿上,一切操作都在0~4e条件下进行。剔除脂肪,沾去组织上的血块。将肠道、胃剪开,取出内容物。按照肠的长度(胃的容积按比例折算成肠长),以10mL/cm的比例用冰冻蒸馏水将其内壁冲洗干净,用滤纸吸去组织样品表面水分,装袋密封,置于-70e冰箱中保存备用。胃、肝胰脏或肠组织在4e下解冻后,剪碎,称重(精确至0101g),按1B20的组织样品重量比加入4e的蒸馏水,然后用匀浆机(4000r/min)匀浆,匀浆液用离心机以10000@g离心15min,取上清液,置于4e冰箱中保存,8h内测定完毕。1.7 蛋白酶活性测定采用Folin-酚法[5]:1g新鲜组织样品在pH715和温度30e条件下,1min水解酪蛋白产生1Lg酪氨酸量定为1个酶活力单位(U)。测定步骤:取匀浆粗酶液1mL,加015%酪蛋白溶液2mL(以015mol/LNaOH溶液,pH715磷酸缓冲液配制,测定胃蛋白酶则以012mol/L盐酸配制),于30e(胃蛋白酶40e)水浴中反应15min(胃蛋白酶10min)。然后加入10%三氯乙酸3mL过滤,取滤液1mL,加入0155mol/L碳酸钠5mL,再加入福林试剂1mL,于30e水浴中显色15min,在680nm波长处比色,同时以1mL已煮沸失活得酶液作空白对照。1.8 淀粉酶活性(A-淀粉酶及B-淀粉酶总活性)测定[5-6] 采用DNS还原糖法,以1%淀粉作为底物,在pH516,反应温度范围为40e条件下,1g样品鲜重反应5min产生的麦芽糖的毫克数定为一个酶活力
600 5期王纪亭等:非淀粉多糖酶对奥尼罗非鱼蛋白酶、淀粉酶活性影响的研究单位(U)。测定步骤:取匀浆粗酶液1mL,加当天配制的1%淀粉溶液2mL(以0102mol/L,pH516柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液配制),于40e水浴中糖化5min,取出后立即加入4mL014mol/LNaOH溶液使淀粉酶失活,得到糖化液。取糖化液2mL,加2mLDNS显色剂在沸水中煮沸显色5min,于520nm处比色。同时以2mL已失活的酶液作空白对照。1.9 数据处理与统计分析试验数据采用SPSS10.0统计软件进行方差分析,采用最小显著差数法(LSD)进行多重比较。
2 结 果2.1 非淀粉多糖酶对奥尼罗非鱼生产性能的影响由表2可知,奥尼罗非鱼的特定生长率随着日粮中酶制剂比例的增多而增加,0102%组和0104%组均显著高于对照组(P<0105),比对照组分别提高10161%和11136%且明显降低了奥尼罗非鱼的采食量(P<0105)。添加酶制剂组饵料系数显著低于对照组(P<0105),其中0102%组和0104%组又显著低于0101%组(P<0105),0102%组和0104%组的饵料系数比对照组分别降低了16113%和18199%。
表2 非淀粉多糖酶对奥尼罗非鱼生产性能的影响Table2 EffectsofNSP-enzymeongrowthperformanceoftilapia
项目ItemsÑÒÓÔ初始体重IW(g)60160?2133a61150?2115a60140?2126a61120?2139a期末体重FW(g)126170?2150a130120?5193a 136150?6142b139140?4124b平均耗料量AFI(g)184170?6161b181110?2100ab178130?4177a176150?2129a
特定生长率SGR(%) 1132?0104a1134?0103a 1146?0106b 1147?0102b饵料系数FCR 2179?0112c2164?0113b 2134?0115a 2126?0106a