猪抗原抗体检测方案
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猪抗原抗体检测方案
一、检测的目的
1．疾病预警
（1）了解疾病在场内的污染状况，制定相应策略
（2）提前了解免疫抗体的高低及整齐度，及时纠正
2．免疫程序的评估与优化
（1）了解母源抗体的消长情况
（2）疫苗接种的效果-----免疫抗体监控
3．疾病控制和清除计划：通过系统检测和措施，实施疾病的控制或清除计划
4．疾病诊断
二、重点进行监测三大猪病：猪瘟、蓝耳、伪狂犬
1. 猪瘟主要问题
（1） 抗体水平偏低
（2） 疫苗的选择及剂量：细胞苗？脾淋苗？，150 RID = 37 PD50
（3） 持续性感染猪的存在
2. 猪瘟抗原检测
（1） 常用方法：PCR、荧光抗体和ELISA
（2） 检测目的：引进种猪或后备母猪时的检查，疑似病例的确诊，猪群带毒率的定期评估
（3） 结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有可能是疫苗毒的干扰。
3. 猪瘟抗体ELISA检测要点:
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A.怎样评估母源抗体和免疫效果
1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50%以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首免日龄）
2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上才能代表免疫合格。
良好的种猪场要求：阳性率100%（>40），合格率90%（>50） cv<25%）
B. 剔除持续感染猪或无抗体反应猪。
1）持续性感染的种猪可间断性或持续性排出病毒，他们成为整个猪群的感染源。
2）首次使用应对母猪群进行检测，对抗体低下猪只进行补针后6周复检。若仍然没有抗体产生，应进行淘汰。
C. 猪瘟抗体检测结果分析
1） Cutoff值是 >1：16代表抗体阳性
2） 实际生产中至少要在1：64以上才有一定的保护，经产母猪多次疫苗免疫后抗体水平一般会在1：256到1：1024左右波动。
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D. 猪瘟抗体 ELISA检测时间表
品项 种类 时间 目的 取样数量
日常评估 后备母猪 在配种前 野毒感染和抗体水平 全部
经产母猪 3个月一次 评估母猪群的健康状态和抵抗力 20
商品猪 二免后4-6周 监控免疫效果 20
首免日龄
仔猪 21日龄 评估母源抗体衰减水平，选择最佳首免时间
15
28日龄 15
35日龄 15
42日龄 15
4.蓝耳病的主要问题
（1） 毒株的变异与交叉保护
（2） 疫苗的选择：灭活疫苗、弱毒疫苗
（3） 猪群稳定性评估
5.蓝耳病的检测方法
（1） 抗原：RT-PCR
（2） 抗体：ELISA
6.蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右，很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
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（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检查。
（4） 当S/P >2.5 – 病毒血症
（5） 当S/P >3.5-高于5.0 – 急性感染
（6） 6-7周龄时，多数仔猪抗体可变为阴性（无病毒循环）
（7） 引进种猪，要剔出阳性值SP>1.2的猪只，保证种群的稳定
（8） 公猪抗体阳性值SP>2.5的最好不要使用
（9） 母猪群间隔1-2个月对群体进行监控，了解猪群等稳定状态
（10） 仔猪了解病毒的感染时间，加强药物保健
（11） 当S/P >2.5时，猪群即呈现不稳定状态，需要采取措施进行控制
7.蓝耳病抗体检测时间表
品项 种类 时间 目的 取样数量
日常评估 后备母猪 在配种前 防止引入不稳定猪只 全部
经产母猪 2个月一次 了解猪群稳定性 20
商品猪 3个月一次 监控免疫效果和稳定性 20
8.伪狂犬的主要问题
（1）种猪群野毒抗体（gE抗体）阳性率居高不下
（2）中大猪的呼吸道问题
（3）散发性母猪繁殖障碍
（4）净化方案的选择
9.伪狂犬的检测方法
（1） PRVgB：总抗体，S/N值和阻断率（BLOCK值）
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（2） PRVgE（I）：野毒抗体
（3）通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免疫方案及措施。
10.伪狂犬清除计划
（1） 在阳性率低的种猪群，建议一次性淘汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪和种公猪，一般一年见效。
（2） 在阳性率很高的种猪群，保证引入阴性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。
11.伪狂犬检测时间表
品项 种类 时间 目的 取样数量
日常评估 后备母猪 在配种前 野毒感染和抗体水平（gB和gE抗体） 全部
经产母猪 3个月一次 评估母猪群的健康状态和抵抗力（gB和gE抗体） 20
商品猪 免疫后4周 监控免疫效果（gB抗体） 20
首免日龄
仔猪 70-80日龄免疫前 评估母源抗体衰减水平，选择最佳首免时间（gB抗体） 15
猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒使用说明书
猪繁殖与呼吸综合症抗体快速检测试剂盒使用说明书
1、检测原理
猪蓝耳病抗体快速检测试剂盒（胶体金法），系采用胶体金免疫层析技术，检测样品（血清、血浆或全血）中蓝耳病抗体的方法。在玻璃纤维纸上预包被金标记灭活猪蓝耳病抗体（Au-Agl）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被猪蓝耳病抗原（Ag2）和兔抗猪蓝耳病抗体。当检测样品为阳性时，样品中猪蓝耳病抗体与胶体金标记猪蓝耳病抗原（Au-Agl）结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的猪蓝耳病抗原(Ag2)形成“Au-Agl-猪蓝耳病抗体-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色，游离金标记抗原则在对照线处与兔抗猪蓝耳病抗体结合而富集显色。阴性样品则仅在对照线处显色。操作简便，快速，结果直观、准确，灵敏度高，容易判定。
2、试剂组成
“猪蓝耳病抗体”快速检测卡（20 块）； 说明书1份
3、用途
用于检测猪血清/血浆/全血样品中猪繁殖与呼吸综合症（又称蓝耳病，以下同，Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）抗体。
4、操作步骤以及结果判读：
⑴ 将检测卡从铝箔袋中取出，水平放置并做好标记。
⑵ 在检测卡的加样孔内加入2滴（70-100ul）待检血清/血浆/全血标本。
⑶ 20分钟内观察并记录实验结果。
阳性：对照线区（C）和检测线区（T）各出现一条紫红色线。检测线(T)的颜色越深，表明猪蓝耳病抗体的滴度越高。
阴性：只有对照线区(C)出现一条紫红色线。
无效：未出现紫红色线或只在检测线区（T）出现紫红色线，对照线区（C）未出现紫红色线。 5、储存及有效期：
原包装在2-30℃阴凉避光干燥处储存，有效期为12 个
月，批号和有效期见包装盒。
6、注意事项：
(1) 检测卡在室温下一次性使用。
(2) 自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
(3)实验环境应保持一定湿度，避风，避免在过高温度下进行试验。
基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报
基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的
间接ELISA方法的建立
摘 要：为探究非洲猪瘟病毒（ASFV）EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法，本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统，采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示，杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别，具有良好的免疫原性。以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立，经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5 μg/mL，ASFV阳性血清稀释比1∶1000时为最佳反应条件；以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259；特异性试验结果表明，该方法
仅与ASFV阳性血清发生反应，具有较强的特异性；重复性试验结果显示变异率小于10%，重复性良好。利用该方法对46份猪血清进行检测，与商品化试剂盒检测结果对比显示，符合率为91.3%，能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清。本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础。
关键词：非洲猪瘟病毒；杆状病毒；EP153R；ELISA中图分类号： S852.651 文献标志码：A 文章编号：1674-6422（2022）02-0074-10
Development of Indirect ELISA for Detection of African Swine Fever Virus
Antibodies Based on Recombinant EP153R Protein
CHENG Jia1, LI Yao1,2,3, LIU Yingnan2,3, ZHONG Qiuping2,3, SHI Xinjin2,3, WEI Changqing2,3,
XIE Zhenhua2,3, LIAO Xinxin2, SONG Yingying2,3, CHEN Hongjun2,3
疫苗使用标准和抗体检测要求
养殖事业部
第 - 1 -页养殖事业部疫苗使用标准和抗体检测要求1、疫苗采购流程1、各分公司根据猪群存栏、免疫程序、猪场健康状况、疫苗库存量向事业部技术处、采购处上报疫苗采购计划，见附件一：疫苗采购计划单。疫苗采购计划量按照每2-3个月一次采购量进行计算。2、疫苗使用计划经技术处批准后，转交采购处安排疫苗采购。3、采购处联系厂家或相关经销商进行疫苗采购。4、各疫苗厂家或经销商分别与分公司联系发货事宜。5、疫苗必须在规定期限内到场，到场后，由分公司对疫苗品质进行验收检查。6、疫苗厂家或经销商按照合同要求向分公司开具发票。二、疫苗验收标准和保存1、疫苗标准检查包装检查：颜色、包装、生产日期与有效期、批号。外观检查：是否瓶口有破损。浑浊度检查：检查疫苗中是否有杂质。细菌含量检查：检查疫苗中是否含有病菌。疫苗毒性检查：注射小鼠双倍剂量，观察24小时内的热源性变化。疫苗抗原量检查：采用分子生物学方法对疫苗抗原含量进行相关检查。2、疫苗保存疫苗均保存在4℃，除了特定的冻干苗需要保存在-20℃。疫苗在运输和保存中应避免强光、暴晒、高温造成损坏。三、疫苗使用种类、厂家和价格的规定海利勃林格哈药海波莱南农中岸永顺蓝耳疫苗2.4元15.8元猪瘟疫苗1.05元圆环疫苗28元8元口蹄疫疫苗伪狂犬疫苗1.25元3元支原体疫苗3元3元细小疫苗1.5元乙脑疫苗1.75元 养殖事业部
第 - 2 -页传胃二联疫苗2.7元备注：1、蓝耳疫苗，统一使用经典毒株疫苗，种猪使用勃林格（自己采购，要走合同评审，使用计划报技术处审核），仔猪使用海利（CH-1R株）。2、猪瘟疫苗全部使用脾淋苗或细胞苗。3、圆环疫苗，种猪使用勃林格（自己采购，要走合同评审，使用计划报技术处审核），仔猪使用南农（SH株）。4、口蹄疫疫苗全部从政府采购，疫苗使用厂家为中农威特兰兽研。5、支原体疫苗只免疫仔猪。6、细小疫苗只注射后备种猪以及经产母猪前三胎。7、乙脑疫苗只免疫后备种猪，以及每年3、4月份对种猪的普免。8、传胃二联疫苗在每年10月、11月对种猪进行普免，对母猪产前24天进行免疫（母猪产前免疫与普免冲突时可不再普免）。9、个别场发生副猪嗜血杆菌时，可使用中牧、海波莱、英特威品牌疫苗。使用计划报事业部技术处批准。10、个别场发生链球菌时，可使用海利品牌疫苗。使用计划报事业部技术处批准。11、个别场发生萎缩性鼻炎时，可使用中牧、海波莱疫苗。使用计划报事业部技术处批准。12、个别场发生异常传染病时，自家苗的制作须经事业部技术处批准后方可执行和使用。13、个别场在使用其它品牌的疫苗进行相关疫苗试验时，需经过事业部技术处批准后再进行相关疫苗试验。4、疫苗免疫程序 后备猪的免疫程序日龄疫苗场家注射剂量150口蹄疫中农特威 颈部注射2头份/2ml157猪瘟永顺颈部注射4头份/4ml162蓝耳勃林格颈部注射1头份/2ml168乙脑中岸颈部注射1头份/1ml175伪狂犬海博莱颈部注射1头份/2ml180口蹄疫中农特威 颈部注射2头份/2ml185猪瘟永顺颈部注射4头份/4ml190乙脑中岸颈部注射1头份/1ml190细小海利颈部注射2ml196伪狂犬海博莱颈部注射1头份/2ml203圆环勃林格颈部注射1头份/1ml后备母猪210细小海利颈部注射2ml 养殖事业部
如何正确认识猪蓝耳病，首先从看懂抗原抗体报告开始
如何正确认识猪蓝耳病，首先从看懂抗原抗体报告开始
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS,俗称猪蓝耳病)，是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSv)引起的一种高度接触性传染病,以繁殖障碍、呼吸困难、耳朵蓝紫、并发或继发其他传染病为主要特征。猪蓝耳病是当前危害养猪生产的重大传染病，已遍及全球，造成的经济损失占猪各类传染病总损失的30%以上，严重影响着规模化猪场的猪群健康、生产成绩和经济效益。
猪场检测猪蓝耳抗原抗体的意义
对于规模化养殖场来说,抗原和抗体水平检测是掌握猪群健康程度的一种有效方法。主要包括以下几个方面的意义：
1、确定猪群是否存在猪蓝耳病(经典蓝耳病和高致病性蓝耳病);
2、掌握猪蓝耳病感染的状态;
3、了解猪蓝耳病的免疫状况;
4、评价猪蓝耳疫苗的免疫效果;
5、制定合理的免疫程序和防控措施。
猪场检测猪蓝耳抗原抗体的准备
针对猪蓝耳病抗原抗体的检测需要我们提前做好相关的准备工作。1、根据猪场的规模确定采血的数量，一般达到猪群5%左右的比例即可。按猪群所在区域划分为产房阶段、保育阶段、生长阶段和育肥阶段;母猪划分为后备母猪和经产母猪(怀孕母猪和哺乳母猪)，并对上述阶段的猪群分别按比例进行采血。值得注意的是一般建议疫苗免疫后30天以上才抽血检测，以避开疫苗毒的干扰;2、采血后的样品要妥善保存，待血清析出后尽快分离并做好标记冷冻保存，确保样品不能有污染;3、清楚了解疫苗免疫状况，这有助于我们分析抗体检测的结果;4、与临床相结合，哪个阶段的猪群容易出现问题，主要有什么临床表现，有针对性的采集病料(如淋巴结、肺和扁桃体)做抗原(病原)检测，确定是否存在猪蓝耳病病毒的感染。
目前，针对猪蓝耳病抗原的检测采用的是PCR方法;而抗体检测采用的是ELISA。抗体检测结果常规用S/P值来表示。这个表示值是通过引物数值(对照值)计算出来的。值得注意的是对于猪蓝耳抗体的检测，同一份样品，不同的设备、不同的实验室、不同的人员检测可能结果会有所差异。因此，对检测结果要进行综合全面的分析，结合猪场的实际生产情况作出合理的判断。
规模猪场的免疫抗体监测
疫病防控 中国畜牧兽医文摘２０１３年２９卷第７期
规模猪场的免疫抗体监测
袁晔新 陆宏辉 （１．江苏省海门市余东镇农技站，江苏海门２２６１００； ２．江苏省海门市畜牧兽医站，江苏海门２２６１００）
免疫抗体监测就是运用免疫血清学方法，对免疫后动物所 产生的抗体水平进行测定，根据检测结果来检验免疫成效。在现 代养猪生产中，疫苗免疫已成为预防和控制某些传染性疾病的重 要手段， “一针定天下”的观念深入人心。然而在实际生产过程 中，免疫效果却并非都如预想的那么理想，免疫接种过程中的各 个环节都可能会对免疫效果产生重大的影响，包括疫苗品种、疫 苗运输与保存、疫苗质量、免疫接种的方法及免疫时机的选择、 动物的遗传特性、动物健康状况、饲料和环境条件等，许多猪场 免疫后仍然暴发该病的现象履见不鲜。规模猪场应该把免疫抗体 监测纳入到猪场的生物安全体系建设中，建立好完备的抗体监测 方案。 １抗体监测的意义 通过一定比例的免疫抗体监测，就可以反映出猪群抗体水平 的合格率、抗体的均匀度、抗体的维持时间，从而对免疫效果进 行科学的评估；通过对新生仔猪进行抗体监测，可以观察其母源 抗体水平的消长规律，为确定仔猪的首免日龄提供重要的依据； 对不同的疫苗运用比对实验可以进行疫苗质量的评价和选择；此 外还可以通过对免疫前后特定时间段抗体效价的分析，运用免疫 学规律对现行的免疫程序作科学的评估和修正。持续的抗体跟踪 监测可以有效地提高猪场相应的抗病能力。 ２抗体监测方法 抗体监测一般按照预先制定的免疫抗体监测方案，采集免 疫动物的血液，收集血清来检测血清中的抗体效价。检测的方法 有很多种，根据检验项目和检验目的的不同，采取相应的检测 方法。目前最常用的方法有正向间接血凝试验和酶联免疫吸附试 验。正向间接血凝试验是一种微量的定量反应，其原理是将抗原 吸附于红细胞表面，当与血清中相应的抗体结合，在有电解质存 在的条件下发生肉眼可见的凝集性反应。该方法操作简单，但实 验结果的稳定性较差，适用于基层兽医站或条件相对落后的地 区。酶联免疫吸附试验简称ＥＬＩＳＡ，其基本原理是将酶标记的抗 体或抗抗体与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合， 酶作用于底物出现颜色反应，颜色的深浅与样品中抗体的含量 成正比。ＥＬＩＳＡ具有灵敏性和特异性高、重复性好、速度快的特 点，是国际认可的标准化诊断方法，适用于大批量血清样品的检 测。此外，建立在单克隆抗体基础上的免疫抗体金标试纸条快速 检测卡，操作简单，不需要任何设备，更适合于基层兽医站及养 殖场，为动物疫病的早期诊断和适时免疫提供了新的技术手段。 ３抗体监测方案 规模猪场要做好免疫抗体监测，首先，要制订好科学完善的 抗体监测方案，主要包括以下几方面内容： ３．１监测项目 常规的监测项目包括口蹄疫免疫抗体、猪瘟免疫抗体、高致 病性蓝耳病免疫抗体、伪狂犬病免疫抗体、伪狂犬病野毒感染像 抗体。 ３．２监测对象 种公猪是规模猪场的核心部分，公猪群决定整个猪场生产性 能的同时，也决定了猪场的健康程度。母猪可以分为怀孕前期、 中期、后期和哺乳期。商品猪可分为乳猪、保育猪、生长和育肥 猪。 ３．３监测数量 采集样品的数量要满足检测的需要，数量太少，不能代表 该猪群的抗体水平，数量太多造成经济浪费。因此，要使检测结 果可信度高，具有较大的参考价值，必须按统计学的方法抽取一 定的数量进行检测，根据爱德士公司提供的建议是按９５％置信区 间取样，通常我们每个检测群体大概需要３Ｏ份样品。在实际生产 中，对于中等规模的养殖场，我们建议每个阶段分别至少采样２０ 头。由于考虑到种公猪的特殊重要性，建议公猪每头都要采样， 监测率为ｌ００％，母猪的采样数量在２０％左右，商品猪采样数量在 ５％左右。 ３．４监测时间 免疫抗体监测一般选择在疫苗接种以后，抗体水平达到高峰 时进行。通常活苗免疫后２周左右达到高峰，油乳剂灭活苗免疫后 抗体产生较慢，需３—４Ｎ时间达到高峰。 ３．５监测方式 监测的方式包括连续监测和常规监测，连续监测是对一定 数量的猪，在规定的时间内进行连续几次的抗体监测，并对监 测结果进行汇总、分析、比对，可用于不同生产厂家疫苗的评 估和选择以及制定和修正免疫程序、掌握母原抗体的消长规律 等。常规监测是每年定期对各猪群抽取一定比例进行抗体监 测，对监测不合格的猪群进行加强免疫，并查找原因。一般大 型的规模场３ ４个月进行１次常规监测，小猪模猪场每年至少进 行两次常规监测。
非洲猪瘟防控技术要点
非洲猪瘟防控技术要点
摘要：非洲猪瘟（AfricanSwineFever，ASF）是由非洲猪瘟病毒引起的一种热性、急性、高度接触性传染病，可感染不同品种和年龄段的野猪和家猪，病死率趋于100%。自1921年发现非洲猪瘟以来，该病毒已席卷全球畜牧业。给养殖户造成了巨大的经济损失，尽管经过多年的研究，对非洲猪瘟尚无行之有效的疫苗预防和治疗方案，目前仍以及时诊断疫情、隔离扑杀为主要的疾病控制手段。因此，开发快速、灵敏、准确的检测方法，对非洲猪瘟的防控具有非常重要的意义。
关键词：非洲猪瘟；防控技术；要点
引言
非洲猪瘟是一种以动物性循环方式为主的传染性疾病。该病的主要特征是急性、发热、接触性传染、各类器官衰竭、死亡率较高等，因此，一旦发生传染将对养殖业产生不可估量的影响。这种传染性疾病主要是由于免疫循环系统被破坏而产生的，截至目前，没有有效的疫苗作为防范手段，因此，该类病毒被我国列为一类动物传染病。近年来，随着经济和对外贸易的不断发展，防范病毒传染面临巨大的措施，为了降低这类传染病的传播范围，需要掌握该病毒的病原学、特征、诊断方式以及检测方式，从而降低该类病毒传播风险。
1非洲猪瘟的特点
非洲猪瘟既能在家猪中传播，也能在野猪中传播，但是以家猪为主。非洲猪瘟能以各种方式进行传播，如通过口腔、呼吸道、蜱虫、未消毒注射针头、一次性针头未替换等方式。通常非洲猪瘟有4~19天的潜伏期，而康复后的患病猪只仍会携带病毒持续数周或数月。当非洲猪瘟出现时，应立即隔离扑杀，病毒还会存活在粪便或腐败组织里一段时间，在血液中存活时间可长达18个月之久，因此还应及时对猪舍进行清理和全面消杀。非洲猪瘟的死亡率较高、持续时间较长、传播速度较快，且很难清除，因此，一旦发现有非洲猪瘟的病例，需要将养殖场内全部猪只进行扑杀，以防止疫情扩散，威胁到周边的养殖户。对于非洲猪瘟的防控具有很大的难度，主要因为该病传播速度较快、传播范围很广，在一定程度上给疫情防控人员和兽医造成较大压力。
十二、猪细小病毒检测方法猪细小病毒血凝抑制试验操作方法
十二、猪细小病毒检测方法
猪细小病毒血凝抑制试验操作方法
（一）材料准备
1．抗原：猪细小病毒浓缩抗原
2．PPV阳性及阴性血清3．被检血清：自被检猪的前腔静脉血或自耳静脉采血分离血清。
4．红细胞：按抗凝剂与血液1：4的比例心脏采集豚鼠血液，用PBS洗三
次，沉积红细胞配成0.5%悬液备。5．稀释液：用灭菌的PH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
6．25%白陶土：取白陶土25克，置离心瓶中，加入适量1mol/L盐酸溶液，
充分搅匀，2000转/分钟离心10分钟，弃上清，再加1mol/L盐酸溶液，搅匀，离心，反复洗三次，沉淀白陶土，用0.15mol/L生理盐水100毫升配成25%悬液，
然后用5mol/L氢氧化钠溶液调pH7.2左右,高压灭菌,置4℃备用,保存期不超过半
年。7．器材：96孔U型滴定板或V型滴定板，25微升稀释棒，25微升滴管，
微量振荡器，普通离心机。
（一）试验操作HA：用滴管在滴定板上从第一孔至试验所需稀释倍数孔，每孔滴加稀释液
25微升于第一孔再滴加抗原25微升，用稀释棒从第一孔开始依次稀释。置微量
振荡器上振荡15秒，最后每孔滴加0.5%豚鼠红细胞25微升，振荡30分钟，置室1小时判定并记录结果。
HI：用滴管在滴定板上从第一孔至所需稀释倍数孔各加稀释液25微升，于
第一孔滴加被检测血清25微升，然后每孔加4单位抗原25微升，振荡15秒，置4℃13小时或室温4小时，每孔加0.5%的豚鼠红细胞悬液25微升，振荡30
秒，置室温1小时判定结果。以完全抑制的最高稀释倍数做为HI价。同时设已
知阳性血清、已知阴性血清、不加抗原的被检血清及抗原、红细胞对照。抗原对照亦即第二滴定，复核使用单位。
（二）判定标准及注意事项
1．判定时先检查对照是否正确，唯有对照各孔准确方可证明操作和使用材料无误。
2．红细胞凝集现象的判定
（1）红细胞均匀的平均铺于孔底者可判为“++++”。（2）基本上与（1）相同，但边缘有下滑皱缩者为“+++”。
猪抗体检测报告怎么看
猪抗体检测报告怎么看
猪抗体检测报告是一份关于猪体内抗体水平的测试结果报告。在养殖和畜牧业上，猪抗体检测是必要的。通过猪抗体检测，可以判断猪是否患病或者进行了免疫接种，从而做出针对性的决策和措施。
一份猪抗体检测报告通常包括以下几个方面：
1. 检测单位信息：包括检测单位名称、地址、联系方式等。
2. 被检测猪的基本信息：包括猪的编号、品种、年龄等信息。
3. 检测项目：包括检测的抗体种类、检测方法等。
4. 报告结果：表明被检测猪所含抗体数量及阳性、阴性结果。
5. 解读说明：解释报告结果的具体含义。
在查看猪抗体检测报告时，需要注意以下几个方面：
1. 检测项目：确定猪抗体检测的方法和测试范围。
2. 报告结果：关注被检测猪含有的抗体数量及是否为阳性或阴性。
3. 解读说明：了解不同抗体水平的含义以及可能的原因。
4. 与历史数据对比：比较与以往结果的差异，评估猪的体内免疫水平。
总而言之，猪抗体检测报告可以提供重要的免疫水平信息，帮助人们更好地保护猪的健康。在查看报告时，需要仔细阅读和分析，根据不同的抗体水平做出相应的调整和养殖管理措施。
猪重点疫病的采样要求和监测方案
随着我国养猪业的持续发展，生 猪及其产品交易流通频繁，而目前我 国养猪场（户）生产设施和设备不够完 善，饲养模式和饲养理念滞后，生物安 全措施不够到位，导致疫病容易传播， 并呈现新的发病特点，如疫病品种增 多、病症复杂化和非典型化、混合感染 居多等等。要对猪场防患于未然，对疫 病进行准确的诊断分析，及时挽回经 济损失．从而为政府决策和疫病的预 防、控制、净化提供技术支持，必须实 施定期疫病监测和免疫抗体监测，其 中猪样品采集是一项重要的常规性和 前提性工作，由此动物疫控中心技术 人员或猪场兽医必须掌握正确的采样 要求，并了解和熟悉猪重点疫病的监 测方案。 １ 样品采集要求 １．１ 采样前应预先了解被检猪场 （户）的相关背景，包括免疫程序、常发 疾病、本次采样目的、猪群健康状态、 饲养方式、卫生消毒程序、采集的样品 种类和数量等．从而准备好相应的采 样器具。 １．２采样人员最好２人以上．需经过 专业培训．掌握熟练采样技巧，并遵循 严格的无菌操作原则。 １．３动物疫控中心技术人员到猪场 进行现场采样时，必须出示有效证件， 并严格遵守场方的有关消毒防疫等规 定，更衣换鞋后方可进入生产区。 １．４采样过程中应同时开展猪场流 行病学的调查。在疫情流行期间或受 到邻近地区威胁时。采样时应强化隔 离消毒，防止病原因子通过人员等媒 介发生传播。 １．５采样时应做好现场记录．规范填 写《动物样品送检单》，注明猪年龄、品 种、样品名称、样品数量等项目。每份样 品应作好标记，仔细校对瓶签。采样的 时间和地点应符合要求．并注意采样时 保持安全。． １．６采样部位：采血时肥育猪和成年 公母猪可选择耳静脉，哺乳仔猪、保育 猪和育成育肥猪选择前腔静脉，每头 猪采血量３～５ ｍＬ．如怀疑某种疫病感 染．最好分别采集发病期间和４周后康
收稿日期：２００８—０７—２３ 猪重点疫病的采样要求和
监测方案
４￣＿Ｖ－忠 孙泉云 （１．上海市南汇区动物疫病预防控制中心，上海２０１３００； ２．上海市动物疫病预防控制中心） 中图分类号：￥８５１．３４＋７．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８—０４１４（２００８）０９—００３９—０ｌ 复期血样．从而更具说服力和鉴别价值；采 集病死猪组织样品时．应选择具有典型病 症并濒临死亡的患猪，如有未进行任何治 疗的中后期患猪更好。根据不同病原的靶 组织采集内脏组织样品．一般可选脾脏、淋 巴结、扁桃体、心脏、肺脏、肝脏、肾脏、胆 汁、脑、肠等脏器并分别盛放，样品采集后 置于冷藏箱内，应保证新鲜直送。避免污 染。 １－７样品布点原则：坚持样品的代表性、 准确性、合理性和科学性的原则，一般每场 （户）每批次血清学检测样品不少于１５份， 病原学检测样品不少于５份。采集的样品应 涉及不同的猪群范围和圈舍、栋舍，有代表 性和涵盖面 １．８采样频率和时间：发生疫病时应及时 采样。日常监测，种猪场一年至少定期监测 ４次，每季度１次；规模化猪场１年至少定期 监测２次，时间分别选择每年４—５月和９—１０ 月：散养户则每年不定期监测１～２次。 １．９采样注意事项：血样采集后斜放，不 得摇晃或振动，待凝固后再包装带走。推荐 使用一次性采血器采集血样．要求采血器 有足够强度，使用灵活且方便可靠．无毒无 害且已经消毒处理，有良好的真空压力，外 包装完整未破损，在有效期内使用。组织样 品采集时应做好人员防护和无菌操作，防 止污染。 １．１Ｏ样品的运输和保存：样品装运前必 须逐件与样品送检单、样品标签进行核对， 核对无误后分类装箱。样品在运输过程中 严防样品的损失、混淆或沾污，应尽快专人 送往指定实验室内，由实验室安排立即检 测或冷冻保存。 ２疫病监测方案 ２．１ 根据《中华人民共和国动物防疫法》 和农业部《动物疫病监测方案》等有关要 求．由动物疫控中心每年发布猪场疫病监 测方案。养猪场（户）应配合动物疫控中心 进行的疫病监测工作，并调整和落实本场 （户）的具体疫病监测计划。 ２＿２猪场常规监测疾病的种类至少应 该包括口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬病、弓形 虫病、猪繁殖与呼吸道综合征（蓝耳 病）、细小病毒感染和布鲁氏杆菌病。除 上述疫病外，还应根据当地实际情况， 选择其它一些重点疫病进行监测。 ２．３所有养猪场从外面引进猪只时． 应将引进的猪只置于隔离猪舍．隔离观 察３０ ｄ以上．并在隔离期内根据购买地 的疫情状况选择进行某些重点疫病的 监测，证实健康无病后才可混群饲养。 ２．４猪重点疫病的监测方法：猪繁殖 和呼吸综合征免疫抗体检测可采用 ＥＬＩＳＡ试验，病原学检测可采用ＲＴ— ＰＣＲ试验：猪瘟免疫抗体检测采用 ＥＬＩＳＡ和间接血凝试验．病原学检测 则采用ＥＬＩＳＡ、免疫荧光试验和ＲＴ— ＰＣＲ试验：猪伪狂犬病免疫抗体和感 染抗体的检测可采用ＥＬＩＳＡ试验：检 测抗原常用ＰＣＲ试验和动物接种试 验；猪弓形虫病和衣原体病均采用间 接血凝试验检测感染抗体：猪传染性 胃肠炎和流行性腹泻的抗体检测使用 ＥＬＩＳＡ试验，检测抗原常用荧光抗体 试验：猪细小病毒感染采用ＥＬＩＳＡ试 验检测抗体．检测抗原采用ＰＣＲ试验： 猪乙型脑炎抗体检测可用ＥＵＳＡ试验 和乳胶凝集试验，检测抗原常用细胞 中和试验或ＲＴ—ＰＣＲ试验：布氏杆菌 病常用试管凝集试验检测感染抗体： 常见致病菌的检测常用细菌培养、染 色镜检和生化鉴定：附红细胞体采用 染色镜检检测：猪圆环病毒２型感染采 用ＥＬＩＳＡ试验检测抗体．检测抗原选 用ＰＣＲ技术；猪支原体性肺炎（气喘 病）抗体检测常用ＥＬＩＳＡ方法．检测抗 原可采用ＰＣＲ试验：猪流感采用ＥＬＩＳＡ 和血凝抑制试验检测抗体，检测抗原 采取猪鼻拭样品进行鸡胚接种试验分 离病毒或直接进行ＲＴ－ＰＣＲ试验。
猪、牛、羊口蹄疫和高致病性禽流感免疫抗体检测报告
２０１４年第ｌＯ期（总第２１３ 疾病防治 猪、牛、羊口蹄疫和高致病性禽流感免疫抗体检测报告 王辉 （山东省泰安市岱岳区畜牧兽医局２７１０００） 中图分类号：￥８５８＿３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００７－１７３３（２０１４）１０—００４１－０１ 为了防控重大动物疫病传播，确实掌握猪、牛羊口 蹄疫和高致病性禽流感疫苗免疫效果，为重大动物疫病 综合防控和制定合理免疫程序提供科学依据，本试验选 择不同养殖场（户）的猪、牛、羊和鸡，分别应用口蹄疫液 相阻断ＥＬＩＳＡ试验和血凝抑制试验开展了猪、牛、羊口蹄 疫灭活疫苗和高致病性禽流感Ｈ５Ｎ１亚型灭活疫苗免疫抗 体检测试验。现将试验结果报告如下： １试验材料 １．１ 试验动物 猪９６头，其中徂徕镇某养猪户３８头，房 村镇某养猪户５８头。牛１４６头，全部为奶牛，其中范镇某 养牛户７６头，化马湾乡某养牛户７０头。羊６８只，全部为 山羊，其中下港镇某养羊户２３只，黄前镇某养羊户４５ 只。肉鸡１０６只，下港镇某养鸡户６０只，黄前镇某养鸡户 ４６只。 １．２免疫疫苗 猪口蹄疫。型灭活疫苗，中农威特生物 科技股份有限公司生产，批号：１３１１ｌ１８；牛羊Ｏ．Ａｓｉａ Ｉ 型二价灭活疫苗，新疆天康畜牧生物技术股份有限公 司，批号：２０１３０２０；重组禽流感病毒灭活疫苗（Ｈ５Ｎ１亚 型，Ｒｅ．４＋Ｒｅ．６株），青岛易邦生物工程有限公司生产，批 号：２０１３０９０ １－３ 免疫抗体检测试剂 Ｏ型口蹄疫和亚洲Ｉ型口蹄疫液 相阻断ＥＬＩＳＡ检测试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究 所，批号：２０１３０８１８０２，禽流感Ｈ５Ｎ１亚型ＨＩ抗原，哈尔 滨维科生物技术开发公司生产，批号：２０１３０５０７０４；禽 流感亚型血凝抑制试验阳性血清，哈尔滨维科生物技术 开发公司生产，批号：２０１３０５。 ２试验方法 ２．１免疫接种 口蹄疫灭活苗采用颈部肌肉注射，猪、 牛２ｍｌ／头，羊ｌｍｌ／只。禽流感灭活疫苗采样胸肌注射， ０．５ｍｌ／只。 ２．２采血免疫后２１ｄ对所有试验动物采取血样，无菌分 离血清后送实验室检测。 ２．３免疫抗体检测 按照国家标准采用液相阻断ＥＬＩＳＡ 实验监测猪Ｏ型口蹄疫抗体和牛羊Ｏ．Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫抗 体。口蹄疫抗体采用液相阻断ＥＬＩＳＡ检测试剂盒进行，严 格按照试剂盒说明书进行操作。禽流感抗体检测采用血 凝抑制试验，严格按照《高致病性禽流感诊断技术》 ｆＧＢ／Ｔ １８９３６－－２００３）规定的操作方法进行。 ２．４结果判定根据“２００８年高致病性禽流感和口蹄疫等 主要动物疫病监测方案”农医发［２００８］２号规定：高致病 性禽流感灭活疫苗，家禽免疫后２１ｄ，ＨＩ抗体效价 为免 疫合格。猪。型口蹄疫和牛羊Ｏ－Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫型口蹄疫 液相阻断ＥＬＩＳＡ，免疫２１ｄ抗体效价 ２ 为免疫合格。 ３结果 （１）猪Ｏ型口蹄疫抗体合格率为９５．８％（９２／９６），其中 徂徕镇猪口蹄疫抗体合格率为１００％（３８／３８），房村镇猪口 蹄疫抗体合格率为８２．８％（４８／５８）。 （２）牛Ｏ型口蹄疫抗体 合格率为９７．３％（１４２／１４６１，其中范镇牛Ｏ型口蹄疫抗体合 格率为９８．７％（７５／７６），化马湾牛Ｏ型口蹄疫抗体合格率为 ９５．７％（６７／７０１。牛Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫抗体合格率为９５．２％ （１３９／１４６）；其中范镇牛Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫抗体合格率为 ９３．４％（７１／７６），化马湾牛Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫抗体合格率为 ９７．１％（６８／７０）。 （３）羊０型口蹄疫抗体合格率为９５．６％ （６５／６８），其中下港镇羊Ｏ型口蹄疫抗体合格率为８６．９％ （２０／２３），黄前镇羊Ｏ型口蹄疫抗体合格率为１００％（４５／４５）。 羊Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫抗体合格率为９７．１％（６６／６８），其中下港 镇羊Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫抗体合格率为９５．７％（２２／２３１，甘州区 羊Ａｓｉａ Ｉ型口蹄疫抗体合格率为９７．８％（４４／４５）。 （４）鸡高 致病性禽流感抗体合格率为９６．２％（１０２／１０６），其中下港镇 鸡高致病性禽流感抗体合格率为９１．７％（５５／６０１，甘州区鸡 高致病性禽流感抗体合格率为９７．８％（４５／４６）。 ４小结 试验结果表明：用猪Ｏ型口蹄疫和牛羊Ｏ．Ａｓｉａ Ｉ型二 价灭活疫苗灭活苗免疫后，猪０型口蹄疫和牛羊Ｏ．Ａｓｉａ Ｉ 型抗体效价基本处于同一水平，抗体水平完全能达到农 业部规定的标准。用禽流感Ｈ５Ｎ１亚型灭活苗免疫后，鸡 群的抗体水平完全能达到农业部规定的标准。因此，在 实际工作中，只要各级动物防疫人员严肃认真、态度端 正、严格按照免疫程序和方法进行操作，重大动物疫病 的免疫抗体水平定能达到农业部规定的标准。 （收稿日期：２０１４－－０７－２３） Ｉ－１＝ｍ ：－：’：’： ＝’Ｉ１Ｉ１－’＝Ｔ．１ ： ＝’＝ｌＩＴ：Ｔ－１＝ｌ－１＝’ 心肌纤维变性、坏死和间质水肿。肝细胞颗变性与脂肪 变性，中央静脉及肝窦淤血，小叶中心或周边带肝细胞 坏死。。肾小管上皮细胞颗粒变性或透明滴状变。肺泡壁 充血，腔内有浆液或血液，间质中有嗜酸性粒细胞和单 核细胞浸润。胃肠黏膜下层结缔组织增宽水肿，固有膜 及黏膜下层均有少数嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润，血 管充血与出血。 （收稿日期：２０１４＿０７＿２５）