Rh类抗体在临床输血中的研究

实验与检验医学２０１４年２月第３２卷第１期Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎ　，Ｆ　．至Ｑ　．　至，　：　Ａｈ类抗体在临床输血中的研究　・论著・　

章昊　，葛洪达　ｆ１、深圳市血液中心，广东深圳５１８０３５；２、大连医科大学，辽宁大连１１６０２３）　摘要：目的研究Ｒｈ类抗体的血清学特征，分析其在输血医学中的临床意义。方法以盐水法、抗球蛋白法、微柱凝胶　法同时对免疫性溶血病患者血浆中抗体及自身红细胞血型抗原进行鉴定，分析其抗体的特异性并以分子生物学技术分析了　Ｒｈ血型分型　结果该５例患者血浆中的抗体均被鉴定为Ｒｈ类抗体：抗一Ｃｅ、抗一ｅ、抗一ｃ、抗一Ｅｃ抗体，具有明确的抗体特异　性．并且相关抗原为阳性。针对血浆中抗体的特异性，均配合了相容性血液供临床输注。结论Ｒｈ类抗体在ＡＩＨＡ病患者　中是最具特异性的自身抗体．在临床输血中同样会引起溶血性输血反应。基于Ｒｈ血型抗原等位基因与抗原免疫力强弱的　表现．如何科学并合理地选择相关抗原的血液以避免Ｒｈ其他连锁抗体的产生值得探讨。　关键词：Ｒｈ类抗体；自身抗体；同种抗体；临床输血；血液制品　中图分类号：Ｒ４５６７．１＋ｌ，Ｒ４４６．６２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７４—１１２９（２０１４）０１—００１４—０３　ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４－１　１２９．２０１４．Ｏ１．００５　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｒｈ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．ＺＨＡ　ＮＧ　Ｈａｏ，ＧＥ　Ｈｏｎｇｄ￣Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　５１８０３５，Ｃｈｉｎ￣　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｒｈ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅ　ｉｔｓ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｄ　ｃｅｌｌ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｉｎ　ＡＩＨＡ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｓａｌｉｎｅ　ｗａｔｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ，　ａｎｔｉｇｌｏｂｕｌｉｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｃｏｌｕｍｎ　ｇｅｌ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｂｕｔ　ａｌｓｏ　ｔｈｅ　Ｒｈ　ｂｌｏｏｄ　ｇｒｏｕｐ　ｈａｄ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ　ａｎ—　ｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｒｈ—ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｉｎ　ＡＩＨＡ　ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ａｎｔｉ—Ｃｅ，ａｎｔｉ—ｅ，ａｎｔｉ—Ｃ　ａｎｄ　ａｎｔｉ—Ｅｃ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　Ｒｈ　ａｎｔｉ・　ｇｅｎｓ　ｗｅｒｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｎ１ｅ　Ｒｈ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｉｎ　ＡＩＨＡ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　ａｌｓｏ　ｃａｎ　ｃａｕｓｅ　ｔｈｅ　ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ．Ｈｏｗ　ｔｏ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｌｌｙ　ａｎｄ　ｒａｔｉｏｎａｌｌｙ　ｓｅｌｅｃｔ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ　ａｎｄ　ａｖｏｉｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｔｈｅｒ　ｃｈａｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｏｆ　Ｒｈ　ａｒｅ　ｗｏｒ－　ｔｈｙ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｉｍｉｌａｒ　Ｒｈ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；Ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ；Ｂｌｏｏｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ．　

大多数自身免疫性溶血性贫ＩＩ￣（ＡＩＨＡ）患者血　浆中可以检测到高效价的自身抗体．自身抗体主　要分为温自身抗体与冷自身抗体，其性质以ＩｇＧ抗　体为主。也有ＩｇＭ、Ｉ　和ＩｇＤ抗体。自身抗体的检　测与鉴定对判断病情的活动程度、协助临床治疗、　观察治疗效果、指导临床用药与选择合适的血液　制品或合适输血时机等具有重要的作用【ｌＪ　往往患　者血浆中的自身抗体没有明显的特异性．在临床　输血中是最难以解决的问题．因为很难选择到相　容的血液制品　然而也有部分自身抗体表现出相　类似血型的抗体特异性．如类似于Ｒｈ血型系统的　抗体特异性　Ｒｈ血型系统中绝大部分抗体是由妊　娠或输血等免疫产生的．也有部分抗体是由于自　身免疫系统发生紊乱而产生的Ｒｈ“类似抗体”　（ｓｉｍｉｌａｒ　ａｎｔｉｂｏｄｙ），如抗一Ｄ、抗一Ｃ、抗一ｃ、抗一Ｅ和抗一　ｅ等抗体。其中以抗一ｅ最为常见『２Ｉ　３ｌ。笔者在近期的　基金项目：深圳市科技计划重点项目ｆ２０１２０１０１５１　作者简介：章吴，女，副主任技师，主要从事输血医学免疫学研究。　临床实验工作中发现了类抗一Ｃｅ、抗一ｅ、抗一ｃ、抗一　Ｅｃ等自身抗体　近年来输血调查发现Ｒｈ血型抗　原不合的输血中Ｅ、Ｃ抗原不合的免疫机率比Ｄ、　Ｃ－，ｅ抗原高．表明了Ｒｈ系统抗原不合的输血，产生　抗一Ｅ、抗一Ｃ的机率较大。除了Ｒｈ　Ｄ抗原配合性输　血之外．抗一Ｅ、抗一Ｃ已成为现今输血引起的最常　见的同种免疫抗体　针对受血者体内存在Ｒｈ血型　系统类似的自身抗体而红细胞上相关抗原阳性的　案例而又急需输注血液制品的选择．笔者作了相　关的分析　１材料与方法　１．１样本来源深圳市各大医院送到本实验室检　测的疑难交叉配血样本以及ＡＢＯ血型正反定型不　相符的样本　本文探讨的５个病例均为具有特征　代表性的自身免疫性溶血性贫血疾病患者．临床　常规交叉配血中主、次侧凝集、直接抗球蛋白试验　强阳性或ＡＢＯ血型鉴定为正反定型不相符的血液　样本　实验与检验医学２０１４年２月第３２卷第１期Ｅｘｏｅｆｉｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｅｂ．２０１４，Ｖｏｌ＿３２，Ｎｏ．１　・１５・　１．２主要试剂直接抗球蛋白血清由Ｉｍｍｕｃｏｒ（ＵＳ．　Ａ１公司生产．谱试剂红细胞由本中心血型参比实验　室自制．由１２组Ｏ型红细胞组成，均来自随机抽　选的Ｏ型、健康无偿献血者血样，均含括了常见的　１　１大血型系统相关抗原型别．经血型血清学鉴定　后以液氮保存．用于血清学的抗体筛查与鉴定。　ＰＣＲ—ＳＳＰ基因分型试剂由美国Ｇ＆Ｔ公司提供。　１－３方法本实验室应用盐水法、抗球蛋白法以及　微柱凝胶法对相关样本进行不规则抗体筛选与鉴　定。因患者红细胞直接抗球蛋白试验强阳性，说明　患者红细胞上包被了自身抗体，以抗血清进行血　型血清学鉴定其结果不可靠．因此使用ＰＣＲ—ＳＳＰ　法检测ＲｈＤ、Ｃ、ｃ、Ｅ、ｅ基因型，鉴定其红细胞血型。　最后筛选相关抗体对应抗原阴性的红细胞进行血　液相容性配合试验．选择最大相容性血液供临床　输注。据输血后跟踪调查发现．患者的血色素均有　不同程度的提高并未发现溶血性输血反应　２结果　２．１血清学试验在本中心血型参比实验室检测　发现临床送检的５例样本血浆中均存在不同类型　的Ｒｈ类抗体　以抗球蛋白法与微柱凝胶法检测发　现患者直接抗球蛋白试验为ｆ３＋～４＋）强阳性、不规　则抗体筛选或鉴定结果与谱试剂红细胞的Ｒｈ系　统的抗～Ｃｅ、抗一ｅ、抗一ｃ、抗一Ｅｃ特异性相符。谱细胞　反应格局见表１。本研究的５例患者．为临床中典　型的已被确诊为自身免疫性疾病的患者．血浆中　存在的相关抗体对应的红细胞的抗原均为阳性　因此．该５例患者血浆中的抗体鉴定为自身抗体．　但具有型别特异性。　

表１红细胞反应格局表及５例样本对应试验鉴定结果　试验结果　１　２　３　４　５　３＋　３＋　３＋　３＋　３＋　３＋　０　０　３＋　３十　３＋　３十　３＋　３＋　３＋　３十　３＋　３＋　０　０　３＋　３十　３＋　３＋　

２．２基因检测验证因患者的直接抗球蛋白试验　呈阳性反应．血清学方法无法准确鉴定Ｒｈ血型。　所以使用ＰＣＲ—ＳＳＰ法鉴定该５例样本的ＲｈＤ、Ｃ、　ｃ、Ｅ、ｅ五个抗原的基因型。结果见图１。　

一　

图１　ＰＣＲ—ＳＳＰ法检测５例样本的ＲｈＤ、Ｃ、ｃ、Ｅ、ｅ基因型　从实验中发现．红细胞上抗原阳性的案例其　

血浆中同样会存在针对该抗原的自身抗体。见表　

２。　２．３临床输血以相应抗体对应的阴性抗原血液　

进行主侧盐水法、抗球蛋白法与微柱凝胶法交叉　

表２　５例患者的血清学与基因分型检测结果　配血．同时做相应抗原阳性的血液做相容性对照。　交叉配血试验结果显示．抗体对应的抗原阴性红　细胞与受者血清反应．其凝集强度比阳性对照弱　并无溶血现象．依此进一步验证了所检血清中抗　体持异性的类型。虽然红细胞上存在相应的抗原，　但血浆中同样可以存在相应抗原的类抗体。据临　床输血的跟踪调查发现．血浆中存在Ｒｈ类抗体而　输注相应抗原阴性的血液后．患者血红蛋白有了　明显的提高并未出现溶血性输血反应。　３讨论　．１６．　实验与检验医学２０ｌ　生　旦箜　鲞第！塑　卫　望　望ｔａｌ　ｎｄ　堕！　盟丛　，　．　Ｑ　，　！１　２，　Ｑ：　临床输血中的自身抗体是指在患者免疫调节　功能紊乱的情况下．血清中存在针对自身红细胞　的不规则抗体．而自身抗体又是该病患者输血中　最难以解决的难题之一。在红细胞血型系统中．Ｒｈ　血型系统的抗体所引起的溶血性输血反应严重程　度仅次于ＡＢＯ血型系统．如果输入不相容的血液．　由抗一Ｄ、抗一Ｃ、抗ｃ、抗一Ｅ、抗一ｅ所引起的溶血性输　血反应（ＨＴＲ）是较为严重的．虽然大多数以迟发性　溶血反应为主．但在少数情况下，如果患者血浆中　存在效价较高的Ｒｈ抗体时．输人不相容的血液．　也会发生急性溶血性输血反应［４１　红细胞表面的Ｒｈ复合物上存在丰富的抗原　表位．至今已发现的有４９种＿５１。通常情况下．Ｒｈ抗　体是通过输血、妊娠的红细胞免疫而产生，虽然也　有一些Ｒｈ抗体是“天然产生”的．或者由于患者的　疾病为恶性病质而导致红细胞Ｒｈ血型抗原性减　弱而获得的，到目前为止，其途径还不十分清楚。　基于Ｒｈ血型基因有紧密联锁的关系．其紧密联锁　的基因为：Ｄ和ｄ，Ｃ和Ｃ，Ｅ和ｅ　，相关抗原Ｃ与　ｃ、Ｅ和ｅ也存在紧密联锁的关系。在通常情况下，　如果Ｃ抗原阴性时，ｃ抗原为阳性；Ｃ抗原阴性时．　Ｃ抗原为阳性；Ｅ抗原阴性时，ｅ抗原为阳性：ｅ抗　原阴性时，Ｅ抗原为阳性。在本研究中，５例患者血　浆中的抗体均为Ｒｈ类抗体．并且本身红细胞上含　有相应抗体对应的抗原．这时针对Ｒｈ类抗体存在　时选择供者血液会存在这样的矛盾，例如：如果患　者的Ｒｈ类抗体为抗一ｅ或抗一Ｃ时，其对应抗原ｅ、Ｃ　也可能为阳性，则其Ｅ、Ｃ抗原往往为阴性，如果选　择ｅ或ｃ抗原阴性的血液供患者输注．这时供者的　红细胞上Ｅ或Ｃ抗原阳性为阳性．输人的红细胞　就会刺激受血者的淋巴细胞免疫产生相应的同种　抗体：同样道理．如果患者的Ｒｈ类抗体为抗一Ｅ或　抗一Ｃ或混合抗一Ｅｃ、抗Ｃｅ时，选择相对应抗原阴　性的血液供患者输注．而相关连的ｃ、ｅ抗原阳性细　胞会刺激供者血液的淋巴细胞免疫而产生相应的　同种抗体。并且，临床输血中以抗Ｅ、抗一Ｃ抗体的　出现率往往较高．也就是在Ｅ或Ｃ抗原阴性的患　者体内输入Ｅ或Ｃ抗原阳性的血液时．患者较容　易产生抗一Ｅ或抗一Ｃ抗体　如果患者再一次需要输　血．而血浆中同时存在同种抗体与对应连锁抗原　的Ｒｈ类抗体时．选择供者血液就会存在一定的困　难　因此，对血浆中存在Ｒｈ类抗体的患者在前期　输血时该如何选择相关抗原的血液制品值得商　讨。　本研究中的５例患者在输血时．笔者站在“最　大相容性为主要输血原则”的基础上选择了交叉　配血中主侧凝集最弱的洗涤红细胞供临床输注．　并未考虑对应连锁抗原存在所引起的输血后问　题　据跟踪调查．输注最大相容性血液制品后的患　者．他们的血色素均有不同程度的提高并无溶血　性输血反应．协助了临床的治疗．患者的病情得到　了缓解　遗憾的是没有对输血后的患者进行抗体　监测跟踪．缺少了输入相对应连锁抗原阳性血液　后是否产生了相关的同种抗体或同种抗体与Ｒｈ　类抗体同时存在的患者进行详细的考证．这有待　更进一步的调查研究　参考文献　【１］万本愿，李胜远，姜青龙．自身抗体检测的临床应用与质量控制【Ｊ】，　实验与检验医学．２０１３．３１（１）：５２—５５．　［２］Ｂｅｌｌ　ＣＡ，Ｚｗｉｃｋｅｒ　Ｈ，Ｓａｃｋｓ　ＨＪ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ　ａｎｅｍｉａ：　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｓｅｒｏｌｏｇｉｃ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｐａｔｈｏｌ，１９７３，６０：９０３—９１　１．　［３］Ｉｓｓｉｔｔ　ＰＤ，Ｐａｖａｎｅ　ＢＧ，Ｇｏｌｄｆｉｎｇｅｒ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉ—Ｗｒｂ，ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ａｎ—　ｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｆｏｒ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｄｉｒｅｃｔ　ａｎｔｉｇｌｏｂｕｌｉｎ　ｔｅｓｔｓ　ｉｎ　１５０　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｈａｅｍａｔｏ１　１９７６，３４：５－１８．　［４］Ｌｉｚｚａ　Ｃ，Ｍｙｅｒｓ　Ｊ．Ｂｌｏｏｄ　ｇｒｏｕｐｓ，Ｉｎ：Ｐｅｔｚ　ＬＤ（ｅｄ）：Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｉｏｎ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ【Ｍ］．３ｔｈ．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ　Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ　Ｉｎｃ，　１９９６：８０．　［５］Ｄａｎｉｅｌｓ　ＧＬ，Ｃａｒｔｒｏｎ　ＪＰ，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ　Ａ．ＩＳＢＴ　ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ　ｏｎ　ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　ｒｅｄ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ　ｒｅｐｏｒｔ【Ｊ］．Ｖｏｘ　Ｓａｎｇ，　２００３，８４（３）：２４４．　［６】朱自严．人类血　Ｍ］．北京：科学出版社，２００７：２３２—２９６．　【７］李勇，马学严．实用血液免疫学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００６：２０５—