DN模型大鼠肾脏OXGR表达变化
间充质干细胞对慢性间质性肾炎大鼠肾小管上皮细胞表型的影响
·989·· 论著 ·间充质干细胞对慢性间质性肾炎大鼠肾小管上皮细胞表型的影响李维，杨园园，姜红（中国医科大学附属第一医院儿科，沈阳 110001）摘要 目的 观察慢性间质性肾炎大鼠模型肾脏病理变化，以及间充质干细胞对肾小管上皮细胞表型相关细胞因子表达的影响。
方法 将30只雌性Wistar 大鼠随机分为对照组、治疗组、非治疗组。
对照组大鼠饮用水灌胃12周，治疗组和非治疗组大鼠关木通水煎剂灌胃12周。
第12周末，治疗组经尾静脉输入间充质干细胞，非治疗组和对照组经尾静脉注射等量生理盐水。
尾静脉注射后第8周末处死大鼠，留取血、尿、肾组织标本。
肾组织连续切片，分别用免疫组化、Western blotting 及半定量逆转录PCR （RT -PCR ） 方法检测细胞角蛋白18 （CK18） 蛋白和mRNA 的表达情况。
结果 与对照组和治疗组相比，非治疗组肾损伤严重、肾间质纤维化明显，而治疗组肾组织损伤减轻、纤维化明显改善。
免疫组化染色显示，治疗组肾脏CK18阳性表达明显多于非治疗组，但仍低于对照组。
RT -PCR 检测显示，治疗组CK18 mRNA 表达量明显增加，非治疗组CK18的表达明显减少甚至消失；肾脏Western blotting 分析显示同样的变化趋势。
结论 间充质干细胞通过上调肾小管上皮细胞CK18的表达，减少肾脏肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化，从而减轻肾组织病理损害和肾间质纤维化。
关键词 慢性间质性肾炎； 间充质干细胞； 上皮-间充质转化中图分类号 R69 文献标志码 A 文章编号 0258-4646 （2018） 11-0989-04网络出版地址 /kcms/detail/21.1227.R.20181030.1727.028.html DOI：10.12007/j.issn.0258‐4646.2018.11.007Effect of Mesenchymal Stem Cells on the Phenotype of Renal Tubular Epithelial Cell in Rats with Interstitial Nephritits LI Wei，YANG Yuanyuan，JIANG Hong（Department of Pediatric，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China ）Abstract Objective To observe the renal changes in rats with chronic interstitial nephritis，and the effect of mesenchymal stem cells （MSCs ） on the expression of cytokines in renal tubular epithelial cells. Methods Thirty female Wistar rats were randomly divided into control，treatment，and non -treatment groups. The rats in the control group received gastric lavage with drinking water for 12 weeks，and those in the other two groups received gastric lavage with aristolochia decoction for 12 weeks. At the end of week 12，MSCs were injected through the caudal vein in the treatment group，and normal saline was injected in the other two groups. Eight weeks after the injection，the rats were sacrificed，and blood，urine，and kidney samples were collected. The mRNA and protein expressions of cytokeratin 18 （CK18） were detected by immunohistochemistry，RT -PCR，and Western blotting. Results Compared with the control and treatment groups，the renal injury and interstitial fibrosis in the non -treatment group were severe，while they were significantly reduced in the treatment group. Immunohistochemical staining showed that the positive expression of CK18 in the treatment group was significantly higher than that in the non -treatment group，but it was still lower than that in the control group. RT -PCR showed that the expression of CK18 mRNA in the treat-ment group was significantly enhanced，while it was decreased and even disappeared in the non -treatment group. The results of the West-ern blotting showed the same trend. Conclusion MSCs can reduce the epithelial -mesenchymal transition by upregulating the expression of CK18 in renal tubular epithelial cells，thus reducing renal damage and interstitial fibrosis.Keywords chronic interstitial nephritis； mesenchymal stem cells； epithelial -mesenchymal transition慢性间质性肾炎是一组以肾小管萎缩、基膜增厚、间质纤维化和不同程度细胞浸润为主要表现的疾病［1］，引起间质性肾炎的原因很多，含马兜铃酸的中草药导致的慢性肾小管间质性肾炎统称为慢性马兜铃酸肾病 （chronic aristolochic acid nephropathy，CAAN ） 。
达格列净对糖尿病大鼠肾组织TLR4表达的影响
达格列净对糖尿病大鼠肾组织TLR4表达的影响[摘要] 目的研究达格列净对糖尿病大鼠肾组织Toll样受体4(TLR4)表达的影响。
方法 57只雄性SD大鼠，分为实验组（n=48）和正常对照组（n=9）。
实验组大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）50 mg/kg建糖尿病大鼠模型，正常对照组注射等剂量无菌枸橼酸钠缓冲液。
建模成功的45只大鼠随机分为5组，每组9只：达格列净5 mg/（kg·d），达格列净10 mg/（kg·d）组，达格列净5 mg/（kg·d）联合TLR4特异性抑制剂Eritoran 5 mg/（kg·d），达格列净10 mg/（kg·d）联合TLR4特异性抑制剂Eritoran 5 mg/（kg·d），未干预组。
达格列净采用灌胃的方法给药，对照组组给予等量生理盐水灌胃。
联合应用Toll样受体4（TLR4）特异性抑制剂Eritoran组于第5周给予腹腔注射Eritoran 5 mg/（kg·d），连续[1]周。
于第8周末各组大鼠留24 h尿液测量尿微量白蛋白，采用Western blot法检测肾组织中TLR4表达水平。
心尖部取血2 mL，测空腹血糖、血CRP。
免疫组织化学染色检测各组大鼠肾组织中TLR4及过氧化物酶体增殖增殖物激活受体γ（PPARγ）的表达。
结果与对照组相比，实验组大鼠 24 h 尿微量蛋白、血 CRP 含量显著增高；肾组织 TLR4的表达明显增加，治疗前与治疗后比较存在差异（P < 0.05）；与未干预组相比：各干预组大鼠 24 h 尿微量白蛋白、血 CRP含量下降，肾组织 TLR4的表达亦减弱，比较存在差异（P < 0.05）；10 mg/（kg·d）吡格列酮组与5 mg/（kg·d）达格列净比较，肾组织 TLR4的表达减弱，前后比较存在差异（P < 0.05）；10 mg/（kg·d）达格列净联合5 mg/（kg·d）Eritoran组与5 mg/（kg·d）吡格列酮联合5 mg/（kg·d）Eritoran组比较，肾组织 TLR4的表达均明显减弱，但无统计学差异（P > 0.05）。
重症急性胰腺炎大鼠肾脏1α—羟化酶表达与血钙变化的研究
重症急性胰腺炎大鼠肾脏1α—羟化酶表达与血钙变化的研究急性胰腺炎（acute pancreatitis）是一种临床上常见的急腹症，常由于全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭导致病情严重，在其病程中常伴有血钙降低，重症急性胰腺炎时血清钙水平可低于2.0 mmol/L。
国内外学者先后提出游离脂肪酸增多、低蛋白血症、低镁血症、甲状旁腺激素合成及分泌异常、降钙素水平升高等各种学说，各种学说之间仍存有争议，急性胰腺炎低钙血症的病理生理机制仍未完全阐明，是否还存在着其他的病理机制尚不得知。
本研究旨在探讨重症急性胰腺炎大鼠病程中，肾脏1α-羟化酶表达与血清钙水平变化是否有一定的相关性，从而为临床预防重症急性胰腺炎病程中低钙血症的发生提供依据。
1 材料与方法1.1 实验动物与分组SPF级雄性Wistar大鼠80只，年龄7～8周，体质量200～250 g，由湖北省实验动物研究中心提供。
随机（随机数字法）分为假手术组（SO组）和重症急性胰腺炎（SAP组），各组分为1、3、6、12 h 4个时间点，各时间点10只。
1.2 动物模型制备与处理造模前大鼠禁食12 h，不禁水。
SAP组：10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔注射麻醉大鼠，行上腹正中切口进腹，采用4.5号头皮针穿过十二指肠进乳头插入主胰管，5%牛磺胆酸钠溶液（0.1 mL/100 g）沿胰胆管逆行恒速（0.1 mL/min）注射造模，夹闭主胰管5 min后见胰腺出血、水肿，表明造模成功，关腹。
SO 组：麻醉大鼠，开腹后仅翻动肠管找到胰腺后关腹。
术后各组大鼠均皮下补液（2 mL/100 g）。
1.3 标本采集与处理造模后在相应时间点（1、3、6、12 h）用10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）经腹腔注射麻醉相应大鼠，经原始切口进入大鼠腹腔。
用5 mL注射器穿刺心脏采血5 mL，2000 r/min离心15 min后分离血清用于相关指标检测；取部分肾脏组织用多聚甲醛固定和电镜固定液固定用于制片，取部分肾脏组织-80 ℃保存备用。
肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织糖皮质激素受体的表达
肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织糖皮质激素受体的表达【关键词】肺纤维化；，，肾阳虚；，，糖皮质激素；，，受体摘要：目的探讨糖皮质激素受体(GR) mRNA在肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织的表达及其意义。
方法60只健康SD大鼠，随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及肾阳虚肺纤维化组(RYA)，每组再分成两亚组，每亚组10只，用博莱霉素气管内滴入及腺嘌呤灌胃复制肺纤维化及肾阳虚肺纤维化大鼠模型，于14 d及28 d取大鼠肺组织，运用组织芯片，通过HE及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量，通过原位杂交(ISH)对肺组织GRmRNA表达进行定位定量分析。
结果14 d时，肾阳虚组及肺纤维化组GRmRNA表达皆呈上调趋势，但无统计学意义(P>0.05)；28 d时，BLM组GRmRNA表达明显上调，与BLM组比较，RYA组GRmRNA表达则明显下调(P<0.05)。
结论肺组织GRmRNA表达的上调是糖皮质激素防治肺纤维化之所以有效的机理之一，而肾阳虚状态下肺纤维化肺组织GRmRNA表达下调是临床上许多肺纤维化病人对糖皮质激素不敏感的原因之一，同时，温阳药也极可能具有防治肺纤维化的作用。
关键词：肺纤维化；肾阳虚；糖皮质激素；受体Abstract：ObjectiveTo investigate the glucocorticoidreceptor(GR)mRNA expression in lung tissues in pulmonary fibrosis with renalyang asthenia and pulmonary fibrosis rat models and its clinical value.Methods60 healthy SpragueDawley rats were randomly pided into the NS group(NS)，the pulmonary-fibrosis group(BLM) and the pulmonary fibrosis with renal-yang asthenia group(RYA)，every group had 20 rats and were subpided into two subgroups by 14 days and 28 days courses，each subgroup had 10 rats.Pulmonary fibrosis rat models were established by blemycin-induced by way of oncedripping into trachea， in addition，pulmonary fibrosis with renalyang asthenia rat models as well as adding adenine by primed-stomach once each day，on day 14 and day 28 respectively，these rats were killed and the rat lung tissues were acquired;and by means of tissue microarray associated with computer-picture analysis technology，the severe degree of inflammation and fibrosis，collagen quantity in rat lungs，were estimated by HE and collagen dye， GR mRNA expression were detected by in situ hybridization way.ResultsGR mRNA expression in rat lung of BLM wereupregulated(P0.05)，however，those in RYA were downregulated(versus BLM P0.05) on day28; GR mRNA expression among three groups were not significant on day14.ConclusionGR mRNA upregulation in lung tissue couldbe one of the mechanism of glucocorticoid's effective cure for pulmonary fibrosis，and GR mRNA downregulation in lung tissue in renalyang asthenia syndrome could be one of cause of glucocorticoid's noneffective therapy for pulmonary fibrosis，in addition，the Chinese traditional medicine with warming Yang effect could be effective therapy for pulmonary fibrosis.Key words：Pulmonary fibrosis; Renal-Yang asthenia; Glucocorticoid ; Receptor肺纤维化的治疗目前临床上仍以糖皮质激素为主，虽有一定疗效，但病情的进展恶化往往难以逆转甚至延缓；肾阳虚证经研究证实主要为下丘脑-垂体-靶腺轴(肾上腺、性腺、甲状腺)功能减退所致，肾上腺轴功能减退致糖皮质激素分泌减少为其主要机制之一［1］；此外，糖皮质激素只有与其受体(GR)结合方能将信号传递而发挥作用，故明确GR mRNA在肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织的表达，对评价糖皮质激素及具温肾壮阳(温阳)作用的中药在肺纤维化防治中的作用和指导其临床应用将具有非常重要意义。
热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质中的表达变化
热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质中的表达变化毕慧欣;刘瑞洪;刘虹;孙林;袁曙光;黄谷香【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2015(025)020【摘要】目的建立单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化(EMT)模型,检测EMT过程中热休克蛋白47(HSP47)的表达变化.方法采用UUO模型,将雄性SD大鼠36只随机分为假手术组(Sham组)和模型组(UUO组),每组各18只.术后3、7和14 d分别处死两组大鼠.采用HE和MASSON染色法观察各组大鼠术后不同时间肾脏病理改变,用免疫组织化学检测HSP47、波形蛋白(Vimentin)及紧密连接蛋白(ZO-1)的表达.结果随着梗阻时间延长,UUO组大鼠肾小管损伤程度和肾间质纤维化程度逐渐增加,HSP47和Vimentin表达上升(P＜0.05),而ZO-1表达下降(P＜0.05).结论 UUO模型大鼠EMT过程中伴有HSP47的高表达,HSP47表达上升可促进EMT过程.【总页数】7页(P32-38)【作者】毕慧欣;刘瑞洪;刘虹;孙林;袁曙光;黄谷香【作者单位】中南大学湘雅二医院老年病科,湖南长沙410011;中南大学湘雅二医院老年病科,湖南长沙410011;中南大学湘雅二医院肾内科,湖南长沙410011;中南大学湘雅二医院肾内科,湖南长沙410011;中南大学湘雅二医院肾内科,湖南长沙410011;中南大学湘雅二医院老年病科,湖南长沙410011【正文语种】中文【中图分类】R692.33【相关文献】1.信号通路在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达变化及意义 [J], 白永恒;陆红;周琴;林成成;梁勇;洪炜龙;郑少玲;陈必成2.大鼠急性脊髓损伤热休克蛋白47的表达变化 [J], 何玉宝;杨晨;杨有庚;任宪盛3.热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用 [J], 毕慧欣;刘瑞洪;尹友生;刘虹;黄谷香;袁曙光;李清初;李康慧4.热休克蛋白27在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质损伤中的表达 [J], 周生国;陈荣华;黄松明;赵云峰;郭梅;费莉5.补肾活血方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中HGFmRNA表达变化的影响 [J], 高志卿;张宾;张俊;吕雁;李伟明;张琳琪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB影响的研究》
《地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB影响的研究》一、引言地龙，一种传统中药材，被广泛应用于治疗多种疾病。
近年来，其组分在医学领域的研究逐渐增多，尤其是在泌尿系统疾病的防治方面。
UUO（单侧输尿管梗阻）大鼠模型是一种常用的研究泌尿系统疾病的动物模型。
本篇论文旨在研究地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB的影响，以探讨地龙组分在泌尿系统疾病治疗中的潜在作用机制。
二、材料与方法1. 材料本实验采用地龙提取物及UUO大鼠模型。
实验过程中所使用的试剂、仪器等均符合实验要求。
2. 方法（1）建立UUO大鼠模型，并随机分为对照组和实验组，实验组给予地龙组分干预。
（2）采用免疫组化、Western blot等方法检测大鼠肾脏组织中p38MAPK、NF-κB的表达情况。
（3）分析地龙组分对p38MAPK、NF-κB表达的影响及其与UUO大鼠肾脏损伤的关系。
三、实验结果1. p38MAPK、NF-κB在UUO大鼠肾脏组织中的表达情况通过免疫组化、Western blot等方法检测发现，UUO大鼠肾脏组织中p38MAPK、NF-κB的表达明显升高，表明这两者在UUO大鼠肾脏损伤中发挥了重要作用。
2. 地龙组分对p38MAPK、NF-κB表达的影响实验组大鼠给予地龙组分干预后，p38MAPK、NF-κB的表达明显降低，与对照组相比具有显著差异。
这表明地龙组分能够抑制p38MAPK、NF-κB的表达，从而减轻UUO大鼠肾脏损伤。
3. p38MAPK、NF-κB与UUO大鼠肾脏损伤的关系p38MAPK、NF-κB的异常表达与UUO大鼠肾脏损伤密切相关。
抑制这两者的表达有助于减轻肾脏损伤，改善肾功能。
四、讨论本实验研究了地龙组分对UUO大鼠p38MAPK、NF-κB表达的影响，发现地龙组分能够显著降低这两者的表达水平，从而减轻UUO大鼠肾脏损伤。
这一结果提示我们，地龙组分可能通过抑制p38MAPK、NF-κB的活性，进而发挥其在泌尿系统疾病治疗中的潜在作用。
艾塞那肽对1型糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶亚单位表达的影响
艾塞那肽对1型糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶亚单位表达的影响刘晋津;郭志新;齐伟;吴杰萍;杜时晶;俞媛贤【摘要】目的观察胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂艾塞那肽对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶亚单位NOX4和p22phox,以及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨艾塞那肽对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制.方法 30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(A组,n=7)和糖尿病造模组(n=23).采用STZ诱导1型糖尿病大鼠模型,共有19只大鼠造模成功.将造模成功的糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组(B组,n=10)和艾塞那肽治疗组(C组,n=9).C组予以艾塞那肽5μg/kg,2次/d皮下注射,A组和B组给予等量生理盐水皮下注射.艾塞那肽治疗8周后放血处死动物,测定血生化指标及尿白蛋白排泄率,并计算肾脏指数,采用实时荧光定量PCR法测定肾脏NOX4和p22phox mRNA的表达,免疫组化法检测肾脏组织CTGF蛋白的表达及分布.结果与A组比较,B组糖尿病大鼠血糖、血脂、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率、肾脏指数、肾脏NOX4和p22phox mRNA以及CTGF蛋白表达均显著升高(p＜0.05).经艾塞那肽治疗后,大鼠血脂、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率、肾脏指数、肾脏NOX4和p22phox mRNA以及CTGF蛋白表达显著降低(P＜0.05),但血糖与B组比较无明显变化(P＞0.05).结论艾塞那肽可使1型糖尿病大鼠肾脏NOX4、p22phox和CTGF表达降低,尿蛋白减少,肥大减轻,对肾脏有保护作用.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2013(038)009【总页数】5页(P720-724)【关键词】胰高血糖素样肽1;糖尿病肾病;NADPH氧化酶;氧化性应激【作者】刘晋津;郭志新;齐伟;吴杰萍;杜时晶;俞媛贤【作者单位】030001太原山西医科大学第二医院内分泌科;030001太原山西医科大学第二医院内分泌科;030001太原山西医科大学第二医院内分泌科;030001太原山西医科大学第二医院内分泌科;030001太原山西医科大学第二医院内分泌科;030001太原山西医科大学第二医院内分泌科【正文语种】中文【中图分类】R587.1糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病常见的微血管并发症，也是1型糖尿病患者死亡的主要原因之一。
ALA对STZ诱导的DN大鼠肾组织中TGF-β1和CTGF表达的影响
ALA对STZ诱导的DN大鼠肾组织中TGF-β1和CTGF表达的影响李雪竹;王俊;严海东;庄守纲【期刊名称】《同济大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(032)006【摘要】目的探讨抗氧化剂α-硫辛酸(α-lipoic acid,ALA)对糖尿病肾病(DN)的肾保护作用及其对肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响.方法建立STZ诱导的DN大鼠模型,给予ALA (35 mg/kg·d-1)腹腔注射预防性治疗,分别于第12周和第20周处死动物.检测血糖、肾功能、24h尿蛋白定量,PAS染色观察肾组织结构改变,分光光度仪检测肾组织和血清中还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,GSH/GSSG比值.免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1和CTGF表达.结果与对照组相比,第12周和20周DN大鼠血糖明显升高,24 h尿蛋白定量增高,肾小球滤过率增加.病理组织PAS染色显示肾小球系膜增生、肾小管上皮空泡变性等改变.肾组织匀浆及血清中GSH水平下降,GSSG水平增高,GSH/GSSG比值降低,肾组织中TGF-β1和CTGF表达明显上调.而ALA组24 h 尿蛋白定量减少,病理改变减轻,GSH水平上升,GSH/GSSG比值增高,肾组织中TGF-β1和CTGF表达较DN组明显下调.结论 ALA可通过增强谷胱甘肽活性,减少氧化应激而下调肾组织TGF-β1和CTGF表达,进而改善DN大鼠肾组织结构和肾功能,在防治DN方面有良好的应用前景.%Objective To investigate the effects of α-lipoic acid ( ALA) on expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and connective tissue growth factor(CTGF) in the kidney ofstreptozocin(STZ) -induced diabetic rats. Methods Diabetes was induced by intraperitoneal injection of 60 mg/kg STZ in rats, and the diabetic rats were randomly divided into DN group ( n = 9, treated with physiological saline) and ALA group (n = 8, treated with ALA 35 mg/kg by intraperitoneal injection every other day). The rats of control group(n = 10) were given vehicle citrate buffer in the same dose. Rats were sacrificed at 12 weeks and 20 weeks of study. The three groups were comparedin terms of blood glucose, creatinine clearance, urine protein, renal pathological changes. The concentration of reduced glutathione ( GSH), glutathione disulfide ( GSSG) and the ratio of GSH/ GSSG were measured by spectrophotometry, and the expression of TGF-β1 and CTGF was detected by immunohistochemical staining. Results Compared with control group, the blood glucose level and urine protein in DN rats were significantly increased; the creatinine clearance decreased; and the GSH levels were decreased, the GSSG levels increased, the ratio of GSH/GSSG were increased; the expression of TGF-|31 and CTGF in kidney was greatly increased. Compared with DN group, the urine protein level, creatinine clearance and the intensity of GSSG in ALA group were significantly decreased; the levels of GSH and the ratio of GSH/GSSG were increased; the expression of TGF-β1 and CTGF decreased and the morphological changes were ameliorated significantly. Conclusion ALA can suppress oxidative stress, reverse histological changes of glomerulosclerosis and attenuates the overexpression of TGF-β1 and CTGF in diabetic nephropathy in rats.【总页数】7页(P9-15)【作者】李雪竹;王俊;严海东;庄守纲【作者单位】同济大学附属东方医院肾内科,上海200120;同济大学附属东方医院肾内科,上海200120;同济大学附属东方医院肾内科,上海200120;同济大学附属东方医院肾内科,上海200120【正文语种】中文【中图分类】R69【相关文献】1.山楂叶总黄酮对STZ-DN大鼠肾组织TGF-β1,BMP-7表达的影响 [J], 齐淑芳;贾秀月;欧芹;赵晓莲;孙睿;邵红;栾海艳;隋洪玉;杨利敏;孟德欣2.复肾汤对DN模型大鼠肾组织TGF-β1、CTGF及FN表达的影响 [J], 刘华东;李璇;刘必成;刘庆帮;马坤岭;刘芳;周成慧3.益肾解毒汤对5/6肾切除大鼠肾组织中HIF-1α、CTGF和TGF-β1表达的影响[J], 张骢翀;刘琨;于昊新;费秀丽4.梓醇对5/6肾切除大鼠肾组织TGF-β1、CTGF表达的影响 [J], 孙响波; 李永伟; 邓润钧; 张雪敬; 张法荣5.尿酸性肾病大鼠肾组织中TGF-β_1 CTGF mRNA的表达变化及补肾活血方对其影响 [J], 高志卿;张宾;张俊;陈以平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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α-酮戊二酸受体1及Vimentin在糖尿病肾病大鼠肾脏的表达及意义胡明1,2；张教斌1；韩春光1；虞积耀1,2；王恺1；邸婵娟1；刘永学1(1. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所, 北京100850; 2. 海军总医院海战伤救治研究中心, 北京100048)[摘要] 目的研究α-酮戊二酸受体1(oxoglutarate receptor 1, OXGR1)及Vimentin在糖尿病肾病大鼠肾脏的表达变化特点，并探讨其意义。
方法选用Wistar大鼠，设置正常对照组和糖尿病模型组。
通过注射链脲佐菌素，制作大鼠糖尿病模型；检测动物体重、血糖、24h尿蛋白及尿蛋白/尿肌酐比值的变化，并观察肾脏组织病理学的变化特点。
应用免疫荧光检测OXGR1及Vimentin在肾脏的表达。
结果正常对照组动物肾组织没有检测到OXGR1与Vimentin阳性重叠的区域。
模型组动物随着病程的进展，体重减轻并出现血糖升高；24h尿蛋白及尿蛋白/尿肌酐比值升高，提示肾功能异常。
免疫荧光发现模型组大鼠肾组织OXGR1或Vimentin阳性区域逐渐增强，同时两者阳性重叠区域逐渐增多。
结论糖尿病模型动物随着病程的进展，一方面肾脏功能受损并出现组织学改变，另一方面OXGR1与Vimentin阳性重叠的区域增多，说明OXGR1可能与糖尿病肾脏上皮-间充质转化关系密切，前者在后者的诊断中具有潜在的意义。
[关键词]α-酮戊二酸受体1；Vimentin；糖尿病肾病；上皮-间充质转化；免疫荧光Expression and significance of oxoglutarate receptor 1 and Vimentin in kidneys of rats with diabetic nephropathyHU Ming 1,2; ZHANG Jiao-bin1; HAN Chun-guang 1; YU Ji-yao1,2; WANG Kai1; DI基金项目：国家自然科学基金资助项目（No. 30973575）作者简介：胡明，辽宁朝阳人，博士研究生，研究方向：病理学与病理生理学。
通讯作者：虞积耀，刘永学，liuyx@Chan-juan1; LIU Yong-xue1(1. Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850, China; 2. Naval Battle Wound Rescue and Treatment Research Center, Navy General Hospital, Beijing 100048, China; 3. Department of Pathology, Navy General Hospital, Beijing 100048, China)Abstract: Objective To study the expression of oxoglutarate receptor 1 (OXGR1) and Vimentin in diabetic nephropathy, and its significance. Methods Wistar rats were randomly divided into normal control group and diabetes groups.Diabetes was induced in rats by using streptozotocin; body weight, blood sugar, urine protein in 24h and ratio of urine protein to creatinine in 24h were measured, and the pathological changes of kidneys were observed. Expression of OXGR1 and Vimentin in kidneys was detected by immunofluorescence(IF). Results In the normal control group, there was no OXGR1 and Vimentin overlapping region in the kidneys. In diabetes group, with the aggravation of diabetes, body weights of rats decreased, but blood sugar levels increased, and urine protein and ratio of urine protein to creatinine in 24h also increased, suggesting renal dysfunction; by IF, the OXGR1 or Vimentin positive regions gradually increased, and OXGR1 and Vimentin overlapping regions gradually increased, too. Conclusion With the progress of diabetes, the diabetic rats suffered from renal dysfunction, which was proved by pathological changes. Meanwhile, OXGR1 and Vimentin overlapping areas in the kidneys of diabetic rats increased, indicating OXGR1 may have a close relation with epithelial - mesenchymal transition in diabetic nephropathy, and the former might have potential significance in the diagnosis of the latter.[Key words] diabetic nephropathy; epithelial-mesenchymal transition; oxoglutarate receptor 1; immunofluorescence糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病（Diabetic Mellitus，DM）最严重的并发症之一，也是终末期肾病的主要原因[1]。
肾小管上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)是包括多种肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同通路[2]。
EMT的程度与肾功能减退的程度具有一定的相关性，因此它可以作为评价慢性进展肾病的重要功能指标之一。
OXGR1（oxoglutarate receptor 1，α-酮戊二酸（盐）受体1），又称GPR80或GPR99，是一种G蛋白偶联受体。
α-酮戊二酸或盐（α-Ketoglutarate，AKG）是其内源性配基[3]。
肾脏是该受体表达最丰富的组织器官[4]，但当前有关OXGR1在肾脏中的研究非常有限，对其生理功能及病理意义甚少涉及。
本研究旨在探讨OXGR1及Vimentin在糖尿病肾病大鼠肾脏的表达，并探索两者之间的内在联系。
1．材料与方法1.1实验动物雄性Wistar大鼠18只，体重180±20克，由军事医学科学院实验动物中心提供并统一饲养，室内温度21-23度，相对湿度60%。
1.2.主要材料链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)购自Sigma公司。
尿肌酐及尿蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程有限公司。
OXGR1兔抗人抗体购自Abnova公司，Vimentin小鼠抗人抗体购自中杉公司；山羊抗兔及山羊抗小鼠荧光二抗购自中杉公司。
1.3 动物分组及模型制备将大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组，制备0.1M枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，溶解STZ。
采用STZ诱导建立大鼠糖尿病模型，血糖>16.7mmol/L为糖尿病模型标准。
检测尿蛋白量>30mg/24h即为糖尿病肾病；并经病理学切片证实。
1.4 大鼠血糖、体重、24h尿蛋白及尿肌酐的测定大鼠STZ注射后不同时间点，称量并记录体重的变化；以血糖仪测定尾静脉的血糖。
以代谢笼收集大鼠24h尿液，考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白排泄量，以试剂盒测定尿肌酐含量。
1.4 双重免疫荧光标记将大鼠肾组织冰冻切片。
-80℃冰箱内保存待用。
使用前复温15分。
冰冻丙酮固定15min。
PBS洗3次，每次5min。
加OXGR1的一抗，37°孵育1小时。
PBS 洗3次，每次5min。
加抗Vimentin一抗，放在湿盒里，4度过夜。
PBS洗3次，每次5min。
加相应二抗37°孵育30min。
PBS洗3次，每次5min。
水溶性封片剂封片。
荧光显微镜观察。
1.5 结果判定免疫荧光结果使用Image-pro Plus 6.0进行分析，每例切片选10个高倍视野，将平均积分光密度（IOD）进行对比。
1.6 统计学分析使用SAS 9.2软件进行统计分析，采用方差分析进行比较，不同组间的两两比较采用SNK检验。
2 结果2.1 动物体重变化正常对照组大鼠生长状况良好，体重逐渐增加；模型组皮毛光泽差，大鼠懒动，尿量显著增加，体重明显下降（P<0.01），而且随着病程的进展，状况日渐加重（表1）。
表1 大鼠体重（g）的动态变化(n=6)0周16周32周正常对照组192.3±21.5 491.1±47.2 511.5±56.2模型组189.8±18.3 185.2±21.5**178.3±20.5****P <0.01，与正常对照组比较2.2 动物血糖变化正常对照组大鼠血糖平稳，波动在4.5~7.9mmol/L，模型组大鼠注射STZ后72h 血糖即开始明显升高，而且一直呈持续状态，平均值波动在22.2~28.4mmol/ L之间（表2）。
表2. 大鼠不同时期的血糖水平（mmol/L）(n=6)组别0周16周32周正常对照组 5.1±1.5 7.5±2.3 6.4±1.7模型组 4.9±1.3 25.4±3.1**25.8±6.2****P <0.01，与空白对照组比较2.3 动物24h尿蛋白和肌酐含量改变表3、表4的结果表明，在各检测时间点，模型组大鼠24h尿蛋白含量较对照组明显增加（P<0.01），尿蛋白/尿肌酐比值亦较对照组显著升高（P<0.01），该变化有随病程发展而加剧的趋势。