猪肉中瘦肉精的检测
猪肉中瘦肉精的检测摘要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。
关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)【1】，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。
长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒【2】。
盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl ，相对分子质量为313.65。
目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。
中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。
对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。
下面将会对这三种方法逐一进行说明，并简单介绍毛细管电泳法（CE）【3】。
2 动物性食品（猪肉）中盐酸克伦特罗的检测方法2.1 气相色谱—质谱法(GC—MS)GC—MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机结合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。
GC—MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低【4】。
下面将以岛津公司采用的GC—MS法检测瘦肉精为例，对仪器与试剂的选择、样品的处理方法等方面进行介绍。
2.1.1仪器与试剂仪器：岛津GCMS—QP2010 Plus；试剂：盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准品，内标（Clenbuterol—D9，CLB—D9），N ，O—双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA），C18固相萃取小柱（100 mg，3 mL）标准溶液的配制：准确称取盐酸克伦特罗和内标的标准品，用甲醇配成浓度为1 mg/mL的标准储备液，放置于4℃冰箱中避光保存，使用时用甲醇稀释成1μg/mL的标准使用液和内标使用液。
2.1.2 分析条件色谱柱：Rtx—5MS (30 m×0.25 mm×0.25 μm)进样口温度：220℃柱温程序：70℃(0.6 min)—25℃/min—220℃(6 min)—25℃/min—280℃(5 min) 恒线速度方式，柱流量0.9 mL/min不分流进样，进样时间1 min接口温度：280 ℃离子源温度：200 ℃溶剂切割时间：8 min检测离子：CLB：检测m/z 86，187，243，262，CLB—D9：检测m/z 95，187，262以克伦特罗(m/z86) 与内标峰(m/z 95) 的峰面积比校准定量。
2.1.3 样品制备精密称取(2 ± 0.01) g 己绞碎的猪肉于具塞离心管中，加入4 mL 0.1 mol/L 盐酸溶液，旋涡振荡5 min，超声10 min，12000 r/min 离心5 min后，倾出上清液，沉淀再分别用0.1 mol/L 盐酸4 mL，2 mL 两次提取，提取方法同上，合并上清液。
将上清液全部上样至C18柱，用5 mL 水清洗小柱后，使用0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸溶液=1：1(v/v)的酸化甲醇解析，加磷酸缓冲液调至pH=7，定容至2 mL。
将该溶液以0.1 mL/min的流速推过聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）毛细管整体柱萃取后，用0.2 mL 的甲醇解析，加50 μL 的内标使用液后以氮吹仪浓缩至干。
加入100 μL 甲苯和100 μLBSTFA，涡旋混匀30 s，置于微波炉中小火衍生5 min。
衍生反应完成后取出冷却至室温后再加入300 μL 甲苯，充分混匀，待气质联用仪进样。
2.1.4 结论该法在样品提取后，用C18小柱和聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）整体柱进一步富集净化，经N ，O—双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA) 衍生，选择离子监测方式进行气相色谱质谱测定。
该方法具有检测限低、重现性好、回收率高、样品用量少等特点，适合于猪肉样品中盐酸克伦特罗的定性、定量测定。
但GC—MS的缺点是检测过程烦琐、检测时间长、需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。
2.2 高效液相色谱法(HPLC) 【5】HPLC适合测定热不稳定和强极性的β—激动剂及其代谢产物，而且HPLC 可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。
HPLC 法【6】中常用的检测器有电化学检测器、紫外检测器。
2.2.1 材料与仪器甲醇：色谱纯；试验用水：均为超纯水；其余试剂：均为分析纯；盐酸克伦特罗标准品：中国药品生物制品检定所；盐酸克伦特罗标准溶液：取盐酸克伦特罗标准品24. 98 mg置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配成含盐酸克伦特罗1 mg/mL的标准贮备液，贮于冰箱中，不同浓度的系列标准溶液由标准储备液稀释而得；Dionex AT330 (美国)高效液相色谱仪：由P680四元泵、UVD170U紫外检测器和AT330恒温箱组成；超声波提取器( SB25200BTD) ；离心机(6 000 r/min) ；DSY22型电热恒温水浴锅。
2.2.2 色谱条件色谱柱采用Diamonsil ODS2C18 柱( 5 μm，150 mm ×4. 6 mm I. D) ；检测波长为244 nm；流动相甲醇∶水=26 ∶74；流速1. 0 mL /min；柱温30 ℃；进样量20μL。
2.2.3 样品制备取10 g绞碎肉试样，加0. 1 mol/L高氯酸20 mL 匀浆，超声提取20 min，80℃加热30 min，冷却后离心(4 000 r/min) 15 min。
沉淀加0. 1 mol/L高氯酸5 mL洗涤、离心，将上清液合并，用1 mol/L氢氧化钠调pH至11，加入25 mL 乙醚，振荡提取20 min，回收有机相，再用20 mL乙醚重复萃取2次，合并有机相，蒸发至干。
用0. 1 mol/L HC1溶解，纯水定容至10 mL。
2.2.4 结论目前，中国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法，最低检测限范围为1～15ng/g，其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低，与GC—MS 法相比样品不必衍生【7】；缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制【8】。
2.3 酶联免疫吸附法(ELISA）目前，检测CLB较高效的免疫分析技术是ELISA技术。
早在1992年，Oriundi 就通过ELISA法对尿液和血清中的β—兴奋剂残留进行直接分析，该方法既适于实验室大量样品的检测，也适于屠宰场地少量样品的迅速检测【9】。
目前，英国的Randox Laborato—ries Ltd和德国的r—biopharm公司均开发出了检测肉品、饲料中CLB残留的ELISA试剂盒。
中国在应用EIA检测CLB方面的研究起步晚，但近几年取得了明显的进展，目前已有几种试剂盒研制开发成功【10】。
2.3.1 测定原理“瘦肉精”（克仑特罗）竞争酶标免疫检测的基础是抗原抗体反应。
酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体【11】（第2抗体）。
加入兔抗克仑特罗特异性抗体（第1抗体）与第2抗体结合而被固定，洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物（酶标记抗原），标准液或样品中的游离抗原与酶标抗原竞争兔抗克仑特罗特异性抗体上有限的结合位点【12】。
通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标抗原，加入酶基质（过氧化脲）和发色剂（四甲基联苯胺）并孵育，结合到板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的底物。
加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。
【13】在单波长450纳米处测吸光度，吸收光强度与样品中的克仑特罗浓度成反比。
2.3.2 样品制备取粉碎的肉样5克，与25毫升50 mmol/L HCl混合，振荡1.5小时。
称6克均质物，加入离心管中。
10~15℃条件下4 000转/分钟或更高的转速离心15分钟。
转移上清液到另1个离心管中，加300微升1摩尔/升氢氧化钠混合15分钟。
加入4毫升500毫摩尔/升磷酸二氢钾缓冲液（pH值3.0），简单混合，并在4℃保存至少1.5小时或过夜。
10~15℃条件下4 000转/分钟或更高的转速离心15分钟。
分离全部上清液，使其升至室温，然后用C18柱纯化【14】。
C18柱纯化样品必须在室温条件下，并严格控制过柱时流速。
用3毫升甲醇洗涤柱子，控制流速为1滴/秒。
用2毫升洗涤液（50毫摩尔/升磷酸二氢钾缓冲液pH值3.0）洗涤柱子。
将肉样的全部上清液进柱，控制流速为每4秒1滴。
用2毫升洗涤液，洗涤柱子，流速为1滴/秒。
用正压除去残留的流体并用空气或氮气吹2分钟，干燥柱子。
用1毫升甲醇洗脱样品，控制流速为每4秒1滴。
在50~60℃并在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇溶剂【15】。
用1毫升蒸馏水溶解干燥的残留物，取20微升进行分析。
取10克饲料样品，用10毫摩尔/升盐酸溶解，连续震荡10分钟，用滤纸过滤，在滤液中加入120微升1毫摩尔/升氢氧化钠进行中和，检查pH值，用氢氧化钠控制pH值在6.5~7.5之间，取上清液20微升进行分析，稀释倍数为25。
2.3.3 测定步骤所有试剂及样品在开始检测前必须回升至室温，测定操作在20~24℃下进行。
用盒中缓冲液以体积1∶10的比例稀释实际用量的克仑特罗抗体浓缩液，稀释前混匀抗体，不要猛烈振荡。
取出试验需要数量的微孔板条，足够标准品和样品，标准品和样品做2个平行试验，记录标准品和样品的位置。
屠宰环节瘦肉精自检要求
屠宰环节瘦肉精自检要求
瘦肉精是一种有害的化学物质，通常用于促进猪肉和牛肉的生长。
为了保证食品安全和屠宰环节的质量，以下是瘦肉精自检的要求：
1. 检测设备：应使用专业的瘦肉精检测设备，如高效液相色谱仪（HPLC）或质谱仪等。
2. 检测样本：应从屠宰场的猪肉和牛肉样品中取样进行检测。
取样应保持样品的完整性，并确保样品代表屠宰场的整体情况。
3. 检测方法：应根据国家相关标准或者行业规范进行检测。
常见的方法包括高效液相色谱法、质谱法等。
4. 检测指标：常见的瘦肉精指标包括鲍氏试验、克氏试验、巴氏试验等。
同时，还应进行对瘦肉精代谢物的检测，如瘦肉精的氯化物和亚硝基瘦肉精的检测。
5. 检测标准：瘦肉精的检测标准应符合国家相关规定，如国家标准GB2760-2014《食品安全国家标准食品中药品残留限量》等。
6. 检测频率：应根据风险分析和管理计划，制定合理的检测频率。
一般情况下，应每批次产品都进行检测，以确保产品的安全性。
7. 数据记录和报告：应准确记录检测结果和相关数据，并及时
生成检测报告。
相关数据应妥善保存，以备查。
需要注意的是，以上仅为一般性的瘦肉精自检要求，具体要求可能会因不同国家、地区的法规和行业标准而有所不同。
因此，在具体操作中，应遵循当地法规和标准的要求。
瘦肉精检测国家标准
瘦肉精检测国家标准
中国国家标准《瘦肉精残留量的检验》（GB/T 22987-2008）规定了瘦肉精的
检测方法和标准。
该标准主要包括瘦肉精的检测范围、样品的采集和处理、检测方法、仪器设备、试剂和标准品、操作程序、结果计算和报告等内容。
首先，瘦肉精的检测范围包括猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉等畜禽肉及其制品。
在采集样品时，应注意避免外界污染，保证样品的纯净度。
对于不同的样品，其处理方法也有所不同，需要根据具体情况进行处理，以确保检测结果的准确性和可靠性。
其次，该标准规定了瘦肉精的检测方法，主要包括高效液相色谱法和质谱法。
这些方法能够对样品中的瘦肉精进行准确、快速的检测，保证食品安全。
在进行检测时，需要使用相应的仪器设备、试剂和标准品，并严格按照操作程序进行操作，以避免人为因素对检测结果的影响。
最后，对于检测结果的计算和报告也有明确的规定。
在计算检测结果时，需要
按照标准中的公式进行计算，并将结果报告出来。
在报告中，除了包括检测结果外，还需要包括样品的信息、检测方法、仪器设备、试剂和标准品的使用情况等内容，以便他人对检测结果进行复核和评估。
总的来说，瘦肉精检测国家标准的制定和执行，对于保障食品安全、保护消费
者健康具有重要意义。
只有严格执行相关标准，才能有效地防止瘦肉精残留对人体健康造成的危害，确保食品安全。
希望相关部门和食品生产企业能够加强对瘦肉精检测国家标准的学习和执行，共同为食品安全保驾护航。
瘦肉精快速检测方法
既快速又精确目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室用于大量筛查，但便宜略低，尿液约胶体金快检简单3ppb;肉类1ppb ;饲短需要确证方法料5-10ppb一般企业会采用自己检测与外部有资质的机构测试相结合，因为样品数量巨大，如果均外部测试一是费用非常高，二是送样、检测、获得结果的周期长，效率低，无法满足实际应用的需求，所以自检也是顺应企业高效节约的宗旨的，对自己用检测岀值得怀疑的样本再送检测机构检测。
一."瘦肉精”快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。
人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。
目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA ）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。
研制的HPSPR-6000表面等离子共振生物分析仪用于盐酸克伦特罗快速检测，有效地克服了现有方法的缺点，其优点有：（1）盐酸克伦特罗的最低检出限约为 1.0ppb，接近和达到了高效液相色谱和酶联免疫等现行的方法的检出限（0.05〜1.0ppb）;（2）每个样品检测时间为10min，与目前常规方法最低需要2〜3h相比，检测时间缩短10倍以上；（3）样品前处理简单、免标记；（4）能够实时监控相互作用分子的结合、解离等动力学信息。
二•快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb （g g/Kg, ng/g ）的瘦肉精就能被测岀。
北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检岀限可达到1ppb，全程只需十几分钟。
瘦肉精相关检测标准汇总
瘦肉精相关检测标准汇总央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。
GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。
本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。
本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。
本方法检出限：第一法气相色谱—质谱法为0.5μg/kg;第二法高效液相色谱法为0.5μg/kg；第三法酶联免疫法为0.5μg/kg。
线性范围：第一法气相色谱—质谱法为0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng～4ng；第三法酶联免疫法为0．004ng～0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。
GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。
GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。
GB/T21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了β-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat-erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、马贲特罗（mapenterol）、溴代克仑特罗（brom- chlorbuterol）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。
瘦肉精快速检测方法[参考提供]
![瘦肉精快速检测方法[参考提供]](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/24879f7169eae009581becc4.webp)
既快速又精确目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室一般企业会采用自己检测与外部有资质的机构测试相结合，因为样品数量巨大，如果均外部测试一是费用非常高，二是送样、检测、获得结果的周期长，效率低，无法满足实际应用的需求，所以自检也是顺应企业高效节约的宗旨的，对自己用检测出值得怀疑的样本再送检测机构检测。
一."瘦肉精"快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。
人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。
目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。
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二．快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb（μg/Kg，ng/g）的瘦肉精就能被测出。
北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检出限可达到1ppb，全程只需十几分钟。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附法，在微孔条上预包被克仑特罗的单抗，克仑特罗的标准品（或样本中的残留物克仑特罗胺药物）与酶标记克仑特罗抗原竞争结合包被的莱克多巴胺抗体，酶标记物放大信号后，加入底物显色，终止液终止反应，酶标仪450 nm测定其吸光值。
屠宰企业瘦肉精检测制度
屠宰企业瘦肉精检测制度
根据国家食品安全有关规定和省市瘦肉精专项整治方案的要求，为了做好瘦肉精检测工作，特制定本制度。
一、明确由屠宰企业食品安全领导组负责，其检验机构具体实施。
二、按照有关要求，抽样比例为： 10—50头按抽检数不低于2%抽检，50头以上抽检数不低于3%抽检。
按每批检测数不少于2头。
但10头以下抽检数不低于1头。
有条件的实施全检。
三、检测瘦肉精种类和方法
盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇。
抽样方法依照《猪肉、猪肝、猪尿抽样方法》（NY/T763—2004）执行。
检测方法、限量标准和确证方法依照国家和农业部有关规定执行。
四、检测记录。
应记录货主、时间、生猪数量、抽检数量、检测结果、监管部门意见、备注等。
当日的检测记录及时报告本厂领导组和动物卫生监督所派出的监督机构，核查检测情况，并签注意见，在瘦肉精合格证明上加盖监管印章（监督所检疫检验印章）
五、检测结果的处理。
检测合格的出具瘦肉精检测合格证明。
不合格的上报有关部门采取措施。
瘦肉精
竞争酶联免疫吸附法测定猪肉中的瘦肉精（试剂盒）盐酸克伦特罗俗名“瘦肉精”欧美等发达国家纷纷严禁此类药物在畜牧生产中的应用，FDA和WTO还制定了畜产品中瘦肉精的最高残留限量。
检测瘦肉精常用的方法有高效液相色谱法(GC-MS)、气质联机法(HLPC)和酶联免疫吸附法(ELISA)，其中酶联免疫吸附法是目前最佳的检测方法。
ELISA检测方法有双抗体夹心法测抗原、间接法测抗体、竞争法测抗体等。
该次试验利用的是酶联免疫吸附法中的竞争法测抗体。
一、目的：限制瘦肉精在畜牧生产中的使用，对肉品卫生安全进行较好的监督。
二、原理：利用多克隆抗体既能与盐酸克伦特罗结合，也能与包被抗原结合。
这些包被抗原被固定在酶标板孔壁上，当样品中含有瘦肉精时，它与包被抗原竞争结合抗体中有限量的结合位点。
由于每一个孔中抗体的结合位点位点数相同，当样品中瘦肉精浓度低时，就有更多抗体的位点与包被抗原结合，更多的抗体被固定在酶标板壁上，就会与更多的酶标二结合，所以结果就呈现深蓝色。
相反，样品的瘦肉精浓度高，结果就呈现浅蓝色。
加入终止液后，蓝色相应变成黄色，然后用酶标仪进行测定。
三、实验材料与方法原料：无皮猪肉（易剔除杂质、脂肪）试剂：盐酸克伦特罗—酶联免疫试剂盒仪器：电热恒温水浴锅、DSY-1-2孔、酶标仪、离心机、匀浆机、微量加样器方法：1原料的处理：将精肉用高速捣碎机捣碎混合均匀，放置冰箱冷冻备用。
取捣碎的样品5g，加入25ml，50mmlHCL震动1.5h，以达到均质。
称取5g 均质物(相当于1g肝脏或肌肉），加入离心管中，1000r/min离心15min.取上清液至令一个离心管中，加1mol NaOH 300ul,混合15min.加入4ml,500mmolKH2PO4(pH3.0),迅速混匀置于4摄氏度的冰箱内保存至少1.5h.1000r/min，离心15min，分离上清液。
2洗板：所有试剂回温至室温。
将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释10倍。
瘦肉精快速检测方法
既快速又精确目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室一般企业会采用自己检测与外部有资质的机构测试相结合，因为样品数量巨大，如果均外部测试一是费用非常高，二是送样、检测、获得结果的周期长，效率低，无法满足实际应用的需求，所以自检也是顺应企业高效节约的宗旨的，对自己用检测出值得怀疑的样本再送检测机构检测。
一."瘦肉精"快速检测新方法初获成功盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精），是一种饲料添加剂，能改进脂肪性动物肉和脂肪的比例，加速动物生长，但是它能够长期残留在动物体内，一般的烹饪加热不能将其消除。
人们一旦食用了含有瘦肉精残留的动物性食品，便会对人们的健康造成严重危害。
目前已有的快速检测方法（试剂条等），均不能定量，而定量的检测手段，大都依赖于酶联免疫（ELLSA）和高效液相色谱（HPLC）等技术，这些方法有些步骤繁琐，非常耗时，有些则需要昂贵的仪器和熟练的操作人员，并且都不能实时地监视动态反应过程等。
研制的 HPSPR－6000 表面等离子共振生物分析仪用于盐酸克伦特罗快速检测，有效地克服了现有方法的缺点，其优点有：（ 1）盐酸克伦特罗的最低检出限约为1.0ppb，接近和达到了高效液相色谱和酶联免疫等现行的方法的检出限（0.05～1.0ppb）；（ 2）每个样品检测时间为 10min，与目前常规方法最低需要 2～3h 相比，检测时间缩短 10 倍以上；（ 3）样品前处理简单、免标记；（ 4）能够实时监控相互作用分子的结合、解离等动力学信息。
二．快检卡：猪肉方面，目前使用胶体金试纸，只需要取一些猪肉样品，放在离心管中，在水浴中煮10分钟，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液，混匀，用于检测即可，几个ppb（μg/Kg，ng/g）的瘦肉精就能被测出。
北京华安麦科生物技术有限公司自主研发生产的瘦肉精类快检卡可的检出限可达到1ppb，全程只需十几分钟。
瘦肉精相关检测标准汇总
瘦肉精相关检测标准汇总央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。
GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。
本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。
本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。
本方法检出限：第一法气相色谱一质谱法为0.5pg/kg第二法高效液相色谱法为0.5pg/kg；第三法酶联免疫法为0.5pg/kg。
线性范围：第一法气相色谱一质谱法为0.025ng〜2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng〜4ng；第三法酶联免疫法为0. 004ng〜0.054ng。
GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱(HPLC)方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。
GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。
GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法本标准规定了同步测定饲料中P -激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。
GB/T21313-2007动物源性食品中6-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法本标准规定了P -受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/ 质谱确证方法。
本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种P -受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。
GB/T22286-2008动物源性食品中多种B -受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林(terbutaline)、塞曼特罗(cimat-erol)、塞布特罗(cimbuterol)、莱克多巴胺(ractompamine)、克仑特罗(clenbuterol)、漠布特罗(brombu-terol)、苯氧丙酚胺(isoxsuprine)、马布特罗(mabuterol)、马贲特罗(mapenterol)、漠代克仑特罗(brom- chlorbuterol)残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析
关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析LINK链接猪肉是否含瘦肉精的迅速推断办法看该猪肉的脂肪(猪油)，如该猪肉在皮下就是瘦肉或仅有少量脂肪，则该猪肉就可能含有“瘦肉精(CLB)”。
含有“瘦肉精”的瘦肉外观特殊鲜红，纤维比较疏松，切成二三指宽的猪肉比较软，不能立于案，瘦肉与脂肪间有黄色液体流出，脂肪特殊薄。
而普通健康的瘦猪肉是淡红色，肉质弹性好，瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
购买时一定要看清该猪肉是否盖有检疫印章和检疫合格证实。
一、样品迅速检测办法 1.胶体金检测卡法(1)特点①操作容易、检测速度快，尿样检测时光约5min，组织约10min。
②无需其他仪器设备。
③样品量需求少。
④适用于大量样本的迅速步筛。
⑤结果推断容易明白。
(2)推断结果①阴性:C线条显色，T线条肉眼可见，无论色彩深浅均判为阴性。
②阳性:C线条显色，T线条不显色，判为阳性。
③无效:C线条不显色，无论T线条是否显色，该试纸均判为无效。
(3)检测对象猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品。
(4)适用单位生殖养殖场、屠宰场，农业、贸易等主管部门。
2.酶联免疫(ELISA)法(1)检测原理测定的基础是抗原抗体反应。
微孔板包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体。
克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标志物、标准或试样溶液。
克伦特罗与竞争性酶标志物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体衔接的克伦特罗酶标志物在洗涤步骤中除去。
将底物(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入孔中孵育，结合的标志酶将无色的发色剂转化为蓝色产物。
加入反应停止液后使色彩由蓝色改变为黄色。
在450nm处测量吸光度值，吸光度壁纸与克伦特罗浓度的自然对数成反比。
(2)试剂磷酸二氢钠、高氯酸、异丙醇、乙酸乙酯、0.1mol/L高氯酸溶液、1mol/L氢氧化钠溶液、pH=6的0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、针孔式微孔过滤膜(0.45μm，水相)、克伦特罗酶联免疫试剂盒、96孔板(12调×8孔)包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体、克伦特罗系列标准液(最少5倍比稀释第1页共4页。