间充质干细胞源性外泌体的检测方法
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research
2087 ·综述·
杨沁馨，女，1993年生，
四川省宜宾市人，汉族，
遵义医科大学在读硕士，
主要从事干细胞与创面修
复基础研究。
文献标识码:A
来稿日期：2019-10-15
送审日期：2019-10-17
采用日期：2019-11-19
在线日期：2020-01-17
Yang Qinxin, Master
candidate, Department of
Burn and Plastic Surgery,
Affiliated Hospital of Zunyi
Medical University, Zunyi
563000, Guizhou Province,
China
间充质干细胞源性外泌体的检测方法
杨沁馨，王达利，卫 雪(遵义医科大学附属医院烧伤整形外科，贵州省遵义市 563000)
DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2063 ORCID: 0000-0003-3297-2587(杨沁馨)
文章快速阅读：
文题释义：
外泌体：早期由多泡体通过膜内陷包裹内容物形成并在多泡体与细胞膜融合过程中被释放到胞外，是一类粒
径为30-120 nm，内含来源细胞中部分蛋白质、核酸、脂质等成分的蝶形膜性囊泡。外泌体能分泌及转运多
种生物活性成分并参与一系列生理病理过程。
间充质干细胞源性外泌体：由间充质干细胞旁分泌所得，具有来源细胞的特性。间充质干细胞源性外泌体能
促进受损区域细胞自我修复与组织再生，恢复组织内稳态，加速创面修复。不仅如此，间充质干细胞源性外
泌体在血管损伤修复、急性肺损伤、缺血性脑卒中、骨关节炎、心肌梗死等各个系统疾病中都具有重要作用。
摘要
背景：间充质干细胞源性外泌体因其众多优点被应用于多种疾病的诊断与治疗，因此精确有效以及低成本检
测出间充质干细胞源性外泌体对将来疾病的诊断和治疗至关重要。
目的：对间充质干细胞源性外泌体检测方法以及最新进展做一介绍。
方法：检索万方、百度学术、维普、CNKI、PubMed、Web of Science、Sinomed、Embase、Cochrane、
Web of Knowledge等数据库1997年6月至2019年6月期间关于间充质干细胞源性外泌体检测方法的文献，
检索词分别为“间充质干细胞”“外泌体”“检测方法”和“mesenchymal stem cells”“exosomes”“detection
methods”。排除重复与相关性弱的文献，将检索到的文献进行整理，共纳入60篇文献来进行分析。
结果与结论：①总结了间充质干细胞的定义、生物学特性及其旁分泌作用；②总结了间充质干细胞源性外泌
体的定义、生物学特性及其在临床治疗中较好的应用前景，例如调节机体免疫功能、促进受损组织再生等；
③总结了目前对间充质干细胞源性外泌体常用的检测方法以及最新研究进展；④上述研究为临床应用间充质
干细胞源性外泌体治疗疾病及在组织损伤修复中发挥作用提供实验基础。
关键词：
间充质干细胞；外泌体；检测方法；间充质干细胞源性外泌体；表征；组织修复
中图分类号：R459.9；R394.2；R319
基金资助：
国家自然科学基金(81871570)，项目负责人：王达利
Detection methods of mesenchymal stem cells-derived exosomes
Yang Qinxin, Wang Dali, Wei Xue (Department of Burn and Plastic Surgery, Affiliated Hospital of Zunyi Medical
University, Zunyi 563000, Guizhou Province, China)
文章特点—
(1)间充质干细胞源性外泌体拥有类似于间充质干细胞的诸多功能，如调节机体免疫功能、促进受损
组织再生等，在临床治疗与再生药物方面有巨大研究潜能；
(2)目前间充质干细胞源性外泌体检测方法有透射电子显微镜法、流式细胞仪法、蛋白质印记法、纳
米粒子追踪分析等；
(3)总结分析了目前对间充质干细胞源性外泌体常用的检测方法以及最新研究进展，以期为间充质干
细胞源性外泌体在组织损伤修复及其他疾病治疗中发挥作用提供实验基础。
间充质干细胞
旁分泌
间充质干
细胞源性
外泌体 检测方法 流式细胞仪 透射电子显微镜
纳米粒子追踪分析 蛋白质免疫印记
酶联免疫吸附试验 动态光散射 扫描电子显微镜 原子力显微镜
低温电子显微镜 电阻脉冲感测
受激发射损耗显微镜 拉曼光谱 一种或多
种方法组
合检测 杨沁馨，王达利，卫雪. 间充质干细胞源性外泌体的检测方法[J].
中国组织工程研究，2020，24(13):2087-2094. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2063
2088 Abstract
BACKGROUND: Mesenchymal stem cells-derived exosomes have been applied in the diagnosis and treatment of various diseases due to its
many virtues. Therefore, its accurate and effective detection with low cost is critical for disease diagnosis and treatment.
OBJECTIVE: To introduce the detection methods and newest progress of mesenchymal stem cells-derived exosomes.
METHODS: WanFang, Baidu Scholar, VIP, CNKI, PubMed, Web of Science, Sinomed, Embase, Cochrane and Web of Knowledge databases
were retrieved for the articles concerning the detection methods of mesenchymal stem cells-derived exosomes published between June 1997
and June 2019. The keywords were “mesenchymal stem cells, exosomes, detection methods” in Chinese and English, respectively. The
duplicated and poorly correlated articles were excluded, and finally 60 eligible articles were included for analysis.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The definition and biological characteristics of mesenchymal stem cells are summarized, and
mesenchymal stem cells have been found to treat diseases by paracrine approach. (2) The definition and biological characteristics of
mesenchymal stem cells-derived exosomes and its potential clinical application are summarized, including immunoregulation in vivo and
promotion of tissue regeneration. (3) The commonly used detection methods of mesenchymal stem cells-derived exosomes and the newest
progress are reviewed. (4) This review provides experimental basis for the clinical application of mesenchymal stem cells-derived exosomes
regarding disease treatment and tissue repair.
Key words: mesenchymal stem cells; exosomes; detection methods; mesenchymal stem cell-derived exosomes; characterization; tissue
repair
Funding: the National Natural Science Foundation of China, No. 81871570 (to WDL)
0 引言 Introduction
间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)
是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的非造血祖
细胞，可以从各种组织中分离出来，因其具有修复损伤
组织和免疫调节等作用，被广泛应用于多种疾病的研
究[1-2]
。间充质干细胞首次由FRIEDENSTEIN等[3]
在
1974年从人骨髓中获得。以往研究观点普遍认为干细胞
主要通过归巢分化来发挥修复损伤组织的治疗潜能，而
后有研究者从目前干细胞治疗的动物实验或临床试验
观察到的获益主要来源于干细胞的旁分泌效应[4]
，其中
外泌体(exosome)被认为是细胞旁分泌的主要参与者，
也日趋成为目前研究的热点，诸多研究已证实间充质干
细胞的修复功能与其分泌的外泌体密切相关。
外泌体又称为胞外体，早期由多泡体通过膜内陷包
裹内容物形成并在多泡体与细胞膜融合过程中被释放
到胞外，是一类粒径为30-120 nm，内含来源细胞中部
分蛋白质、核酸、脂质等成分的蝶形膜性囊泡[5]
。与所
有脂质囊泡一样，外泌体以1.13 g/mL(B细胞衍生的外
泌体)至1.19 g/mL(来自肠细胞的外泌体)的密度漂浮在
梯度蔗糖中[6-7]
。外泌体的蛋白质组成取决于所研究的外
泌体的细胞来源。但无论来源如何，在外泌体中都可以
找到几种常见的蛋白质，如外泌体常携带有膜融合蛋白
(GTPases、annexins、Hotillin)、CD抗原(CD9、CD63、
CD81、CD82)、热休克蛋白(Hsp70、Hsp90)、多泡体
相关蛋白(Alix、TSG101)、脂质相关蛋白质以及磷脂、
核酸等物质[8]
。研究表明，间充质干细胞能够旁分泌一
种有效的生物学活性物质——外泌体，而移植间充质干
细胞可以通过这种旁分泌作用在组织损伤中起到修复
干细胞外泌体质量控制标准化
干细胞外泌体质量控制标准化
一、细胞来源控制
干细胞外泌体的质量直接受其来源细胞的影响。因此，首先要对干细胞的来源进行控制，以确保外泌体的功能和安全性。干细胞来源应来自健康、无疾病、基因型匹配的供体，并且应通过适当的筛选和鉴定程序来验证其质量和稳定性。
二、分离和纯化方法
分离和纯化干细胞外泌体的过程对于保证其质量和产量至关重要。应采用高效的分离和纯化方法，如超速离心、亲和色谱或免疫吸附等，以确保获得高纯度的外泌体。此外，应定期监测和评估分离方法的效率和效果，以确保其可靠性和重复性。
三、储存和运输条件
干细胞外泌体的储存和运输条件对其质量和稳定性具有重要影响。应制定适当的储存和运输条件，如温度、湿度、光照等，以确保外泌体的结构和功能不受损害。此外，应定期监测和评估储存和运输条件的合规性和稳定性，以确保其符合质量控制标准。
四、外泌体大小和数量检测
干细胞外泌体的尺寸和数量是反映其质量和稳定性的重要指标。应采用适当的检测方法，如纳米粒度分析、动态光散射或电镜观察等，来对外泌体的尺寸和数量进行定期监测和评估。此外，应通过统计和分析数据，制定外泌体大小和数量的接受标准，以确保其符合预期的质量要求。
五、生物活性检测
干细胞外泌体的生物活性对其在临床治疗中的效果具有重要影响。应采用适当的生物活性检测方法，如细胞毒性试验、细胞迁移试验或基因表达分析等，来对外泌体的生物活性进行评估。此外，应通过统计和分析数据，制定生物活性的接受标准，以确保其符合预期的治疗效果。
六、安全性评估 干细胞外泌体的安全性对其在临床治疗中的风险具有重要影响。应进行全面的安全性评估，包括无菌性检查、内毒素检测、过敏性试验等，以确保外泌体的安全性和无不良反应。此外，应定期对外泌体的安全性进行评估和监控，以确保其符合质量控制标准。
七、质量控制标准制定
制定干细胞外泌体的质量控制标准是保证其质量和安全性的关键步骤。应根据上述控制点制定相应的接受标准和控制方法，形成一套完整的质量控制体系。此外，还应根据质量控制结果对外泌体的生产过程进行调整和优化，以提高其质量和稳定性。
《人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用及作用机制》
《人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用及作用机制》
一、引言
急性髓系白血病（AML）是一种常见的血液系统恶性肿瘤，其发病机制复杂，目前临床治疗手段仍存在一定的挑战。近年来，人骨髓间充质干细胞源性外泌体（BM-MSCs Exosomes）在肿瘤治疗领域的应用逐渐受到关注。BM-MSCs Exosomes具有独特的生物学特性和良好的生物相容性，在急性髓系白血病的治疗中表现出显著的潜力。本文将详细阐述人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用及其作用机制。
二、人骨髓间充质干细胞源性外泌体的概述
人骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）是一种具有多向分化潜能和免疫调节功能的细胞。BM-MSCs Exosomes作为BM-MSCs的分泌产物，具有传递生物信息、调节细胞间相互作用等功能。BM-MSCs Exosomes含有多种生物活性分子，如蛋白质、脂质和核酸等，这些分子在细胞间信号传导、免疫调节和肿瘤治疗等方面发挥重要作用。
三、人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用
1. 抑制肿瘤细胞增殖：BM-MSCs Exosomes可以通过抑制肿瘤细胞增殖来抑制AML的发展。研究显示，BM-MSCs Exosomes中的某些成分可以与AML肿瘤细胞表面的受体结合，从而抑制肿瘤细胞的生长和分裂。
2. 促进肿瘤细胞凋亡：BM-MSCs Exosomes还可以通过诱导肿瘤细胞凋亡来治疗AML。凋亡是细胞的一种自然死亡方式，通过激活特定的信号通路，使肿瘤细胞死亡。
3. 调节免疫系统：BM-MSCs Exosomes具有免疫调节作用，可以激活机体的免疫系统，增强机体的抗肿瘤能力。此外，BM-MSCs Exosomes还可以抑制免疫细胞的异常活化，从而减轻AML患者的免疫损伤。
四、人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用机制
1. 信号传导机制：BM-MSCs Exosomes通过与AML肿瘤细胞表面的受体结合，触发一系列信号传导通路，从而抑制肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡。这些信号通路包括MAPK、NF-κB等。
间充质干细胞外泌体的作用及其在口腔领域的研究进
间充质干细胞外泌体的作用及其在口腔领域的研究进
外泌体是由多种细胞分泌的直径约30~100nm的微小囊泡，电镜下为双层磷脂分子包裹的扁形或球形小体，部分为杯状。外泌体可传递生物信号分子包括蛋白质、mRNA、microRNA、DNA片段等，构成细胞间信息传递系统。外泌体广泛存在并分布于各种体液，包括血液、尿液、唾液、脑脊液及羊水等，与多种疾病的发生发展密切相关。外泌体具有低免疫原性、低毒性和高效性，能最大程度保留其所承载物质的活性。
间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）被认为是产生外泌体能力最旺盛的细胞之一，许多文献表明MSC来源的外泌体（MSC-exo）具有与MSC相似的特性，包括组织损伤修复、抗炎、免疫调节等，又能弥补MSC移植应用中的不足，因此其潜在的临床应用价值备受关注。本文将对外泌体特性、MSC-exo的治疗应用及其在口腔领域的研究进展加以综述。
1.外泌体的生物学特性
1）外泌体结构
外泌体表面富含胆固醇、神经鞘磷脂、脂筏、神经酰胺及磷脂酰丝氨酸等脂类物质，主要内容物为蛋白质，一类是在外泌体中普遍存在并参与结构构成的蛋白质，包括微管蛋白、肌动蛋白和微丝结合蛋白等细胞骨架成分；膜转运和融合相关蛋白Rab、膜联蛋白Annexins、脂筏标记蛋白Flotillin；多囊泡胞内体产生相关蛋白Alix、TSG101；热休克蛋白Hsp70、Hsp90；四跨膜蛋白超家族CD63、CD9、CD81和CD82等。
另一类蛋白质与细胞来源有关，蛋白成分随来源细胞的不同而存在差异，如抗原呈递细胞分泌的外泌体质膜上含有MHC-Ⅰ与MHC-Ⅱ，以及共刺激蛋白CD80与CD86；来源于血小板的外泌体质膜上有血管性血友病因子和整合蛋白CD41。除蛋白质外，外泌体还携带丰富的mRNA、miRNA、siRNA等生物信号分子。
外泌体形成
外泌体主要由其来源细胞通过“内陷-融合-外排”的过程进行分泌，该过程受多种因素调节，如钙离子载体、结合蛋白浓度、磷脂酰肌醇激酶的活性与细胞应激状态等。脉冲追踪发现外泌体是经由内体途径产生，晚期内体凹陷，形成并转变为具有动态亚细胞结构的多囊体（multivesicular body，MVB），当MVB与溶酶体融合后，管腔状囊泡降解继而与胞膜融合并以内出芽方式形成颗粒状小囊泡，释放入细胞外环境，即外泌体。
间充质干细胞来源外泌体治疗骨关节炎的研究进展
中国中西医结合外科杂志2021年6月第27卷第3期545
间充质干细胞来源外泌体治疗骨关节炎的研究进展
刘文彬
摘要：骨性关节炎（OA）是一种最常见的关节退行性疾病，其病理变化主要是细胞炎症介导的软骨细胞凋亡和软骨细
胞外基质（ECM）降解。由于间充质干细胞（MSC）在特定条件培养基诱导下可以分化为软骨细胞，基于此，MSC细胞
疗法给OA的治疗带来了新的希望。然而，MSC细胞疗法在技术上存在局限性，包括MSC扩增时去分化，注射后再生效
率降低，以及大规模细胞生产时质量控制不一致。为了克服这些缺点，学者探讨了基于MSC外泌体介导的软骨组织再生。
由于MSC的外泌体为细胞间的通讯载体，能在细胞间传递脂质、核酸以及蛋白质等生物活性分子，因此可以作为治疗OA
的替代疗法。近期的一系列体内研究表明，给予MSC来源外泌体可有效减少软骨细胞中炎症细胞因子的产生，增加软骨
ECM成分的表达，最终增强软骨组织再生。因此，本综述通过检索文献对MSC来源外泌体治疗OA的研究进展进行综述，
为OA的治疗提供新的思路。
关键词： 间充质干细胞；外泌体；骨性关节炎
中图分类号：R684.3 文献标识码：A 文章编号：1007-6948（2021）03-0545-04
doi：10.3969/j.issn.1007-6948.2021.03.036
软骨组织是一种具有弹性的结缔组织，由透明质酸、
胶原纤维、蛋白多糖和软骨细胞组成。软骨组织无血管
及神经结构。这些结构特征往往限制了软骨中氧气和营
养物质的充足供应，从而限制了受损软骨组织的有效再
生[1-2]。因此软骨组织在创伤、持续负重后易发生骨性关节炎（osteoarthritis, OA）[3-4]。目前，OA的发病机制尚
不明确。因此，针对OA的治疗尚无有效的治疗手段。目
前，OA的治疗方法主要包括：关节镜清理术、截骨畸形
矫正术、单髁表面置换术和全膝关节表面置换术。这些手
段往往存在外源植入物感染、植入物或组织替代物寿命
外泌体-活细胞吞噬异源物质后在细胞内形成内吞泡
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可编辑修改 外泌体(exosome)-活细胞吞噬异源物质后，在细胞内形成内吞泡，其中一部分内吞泡可以与溶酶体结合而降解，另一部分则在相关刺激因子的作用下，以出芽的方式向内凹陷，形成一个膜包围的结构，内含多个小囊泡
外泌体(exosome)-活细胞吞噬异源物质后，在细胞内形成内吞泡，其中一部分内吞泡可以与溶酶体结合而降解，另一部分则在相关刺激因子的作用下，以出芽的方式向内凹陷，形成一个膜包围的结构，内含多个小囊泡，称其为多泡内涵体(multivesicular bodies，MVBs)，小囊泡里主要成分是细胞质，由脂质双分子层包绕。多泡内涵体泡膜最终与细胞膜融合，通过胞吐作用释放其中的小囊泡至泡外空间，即成exosome。
学术术语来源——
人脐血间充质干细胞来源的外泌体：分离鉴定及生物学特性
文章亮点：
1 研究发现间充质干细胞是通过旁分泌有效生物学活性物质外泌体在细胞间进行信息传递，进而通过某种机制发挥组织损伤修复作用。外泌体是间充质干细胞分泌的膜性小囊泡，含有来源细胞的膜蛋白成分，可以选择性地将含有的蛋白质、RNA等递送至受体细胞，调节细胞间的信号传导。故可将间充质干细胞来源的外泌体开发成为一种既具有间充质干细胞的作用特点，又能规避其不良分化和肿瘤形成缺陷的新型治疗手段。因此，通过间充质干细胞来源的外泌体促进组织损伤修复是今后具有重要探讨价值的研究方向。
2 分离提取及鉴定外泌体是进行深入研究的基础，实验主要通过超滤及差速离心法分离出外泌体，通过透射电镜及流式鉴定相结合来鉴定，为后续的外泌体功能研究奠定基础。
3偏倚或不足：人脐血间充质干细胞源性外泌体生物学功能及相关机制还需要进一步分析；人脐血间充质干细胞的外泌体最终要移入体内研究，所以尚需建立动物模型。 欢迎下载，希望能帮到您
可编辑修改 关键词：
干细胞；脐带脐血干细胞；外泌体；人脐血间充质干细胞；分离鉴定；活性
干细胞外泌体质量控制标准化 2
干细胞外泌体质量控制标准化
干细胞外泌体（Extracellular vesicles，EVs）是一类质体直径在30-1000 nm之间的细胞外囊泡，包含细胞膜、细胞膜蛋白、信号分子和核酸（如mRNA、miRNA、lncRNA等）。EVs在细胞间进行物质传递、信号传导和免疫调节等许多生物学过程中起着重要作用。随着对EVs的研究不断加深，EVs作为一种新型治疗策略备受关注，干细胞外泌体作为一种重要的EVs类别于之前被广泛用于治疗多种疾病。
为了确保干细胞外泌体的质量和一致性，标准化的质量控制流程是至关重要的。本文将介绍干细胞外泌体质量控制的标准化方法，并详细描述每个步骤的实施。
一、细胞培养和扩增
首先，选择合适的细胞株进行干细胞培养和扩增。常用的干细胞源包括间充质干细胞、胚胎干细胞和诱导多能干细胞等。确保使用细胞通路清晰、来源稳定的细胞株，并使用严格的无菌操作和培养条件进行细胞扩增。
二、细胞存活和健康度检测
对干细胞进行存活和健康度检测是质量控制的重要步骤。常用的方法包括细胞形态观察、细胞计数、细胞周期分析和细胞凋亡检测等。确保使用活跃且健康的细胞用于外泌体的制备。
三、细胞处理和培养
在细胞达到一定的扩增程度后，进行细胞处理和培养。在处理前，细胞应进行适当的洗涤和筛选，去除杂质和死亡细胞等。之后，将细胞悬浮在特定培养基中进行培养。培养条件应根据特定的细胞株和研究目的进行优化，例如pH值、气体含量、温度和培养基成分等。
四、细胞刺激和EVs释放
为了促进细胞释放EVs，可以通过刺激剂的添加来诱导细胞产生外泌体。刺激剂可以是化学物质、细胞因子或其他生物活性物质等。在添加刺激剂后，细胞培养时间可以根据实验需求进行确定。
五、EVs收集和富集
待细胞培养一定时间后，可以开始收集并富集EVs。收集EVs可以使用超速离心或者其它分离技术，如分子筛、尺寸排除色谱等。在收集EVs前，应进行一定程度的多次离心，以去除细胞碎片和其它宏观颗粒物。EVs的浓缩和纯化也是非常重要的一步，可以使用密度梯度离心、滤膜、超滤等方法。
外泌体-活细胞吞噬异源物质后在细胞内形成内吞泡 2
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可编辑修改 外泌体(exosome)-活细胞吞噬异源物质后，在细胞内形成内吞泡，其中一部分内吞泡可以与溶酶体结合而降解，另一部分则在相关刺激因子的作用下，以出芽的方式向内凹陷，形成一个膜包围的结构，内含多个小囊泡
外泌体(exosome)-活细胞吞噬异源物质后，在细胞内形成内吞泡，其中一部分内吞泡可以与溶酶体结合而降解，另一部分则在相关刺激因子的作用下，以出芽的方式向内凹陷，形成一个膜包围的结构，内含多个小囊泡，称其为多泡内涵体(multivesicular bodies，MVBs)，小囊泡里主要成分是细胞质，由脂质双分子层包绕。多泡内涵体泡膜最终与细胞膜融合，通过胞吐作用释放其中的小囊泡至泡外空间，即成exosome。
学术术语来源——
人脐血间充质干细胞来源的外泌体：分离鉴定及生物学特性
文章亮点：
1 研究发现间充质干细胞是通过旁分泌有效生物学活性物质外泌体在细胞间进行信息传递，进而通过某种机制发挥组织损伤修复作用。外泌体是间充质干细胞分泌的膜性小囊泡，含有来源细胞的膜蛋白成分，可以选择性地将含有的蛋白质、RNA等递送至受体细胞，调节细胞间的信号传导。故可将间充质干细胞来源的外泌体开发成为一种既具有间充质干细胞的作用特点，又能规避其不良分化和肿瘤形成缺陷的新型治疗手段。因此，通过间充质干细胞来源的外泌体促进组织损伤修复是今后具有重要探讨价值的研究方向。
2 分离提取及鉴定外泌体是进行深入研究的基础，实验主要通过超滤及差速离心法分离出外泌体，通过透射电镜及流式鉴定相结合来鉴定，为后续的外泌体功能研究奠定基础。
3偏倚或不足：人脐血间充质干细胞源性外泌体生物学功能及相关机制还需要进一步分析；人脐血间充质干细胞的外泌体最终要移入体内研究，所以尚需建立动物模型。 欢迎下载，希望能帮到您
可编辑修改 关键词：
干细胞；脐带脐血干细胞；外泌体；人脐血间充质干细胞；分离鉴定；活性
干细胞外泌体的分离与应用指南
干细胞外泌体的分离与应用指南
引言
干细胞外泌体近年来引起了广泛的关注，并被认为是一种具有潜在临床应用价值的细胞外囊泡。本文将介绍干细胞外泌体的分离方法以及其在生物医学领域中的应用指南，为相关研究提供参考。
一、干细胞外泌体的分离方法
1. 超速离心法
超速离心法是目前最常用的干细胞外泌体分离方法之一。该方法主要包括以下步骤：首先，将干细胞培养基收集，并经过一系列离心步骤去除细胞碎片和大颗粒物质。然后，通过使用不同离心速度和时间的离心管进行干细胞外泌体的分离。最后，通过过滤和洗涤等步骤来净化外泌体。
2. 超滤法
超滤法使用特定孔径的超滤膜来分离干细胞外泌体。首先，将干细胞培养基经过低速离心去除细胞碎片，然后将上清液通过超滤膜的孔径进行过滤。根据需要，可以使用不同的孔径大小的超滤膜来筛选不同大小的外泌体。
3. 大度纯化法
大度纯化法是一种通过使用特定亲和性结合试剂来富集干细胞外泌体的方法。根据干细胞外泌体上表达的特定膜标志物或受体，在干细胞培养基中加入与其结合的亲和性结合试剂。通过一系列洗涤和离心步骤，可以将特定膜标志物或受体相关的外泌体富集到样品中。
二、干细胞外泌体的应用指南
1. 作为疾病标志物的诊断应用 干细胞外泌体中富含的蛋白质、核酸和微RNA等生物标记物，可以作为疾病的潜在标志物。通过分析干细胞外泌体的组分和数量，可以为多种疾病的早期诊断提供参考，如肿瘤、心血管疾病和神经系统疾病等。
2. 治疗性应用的潜在价值
干细胞外泌体具有促进组织修复和再生的潜在能力。其中包含的生物活性分子，如细胞因子、生长因子和转录因子等，可以促进受损组织的修复和再生。因此，干细胞外泌体可用于治疗各种疾病，如创伤、心肌梗死和神经退行性疾病等。此外，干细胞外泌体具有较低的免疫原性和良好的稳定性，使其成为替代整个细胞治疗的一种可行选择。
3. 药物递送系统的应用
干细胞外泌体作为一种天然的纳米颗粒，其小尺寸和稳定性使其成为一种理想的药物递送系统。通过将药物包装在外泌体中，可以增强药物的稳定性，并提高药物在靶组织中的富集。此外，干细胞外泌体可以通过受体介导的内吞作用，将药物递送到具体的细胞和组织中。
人源间充质干细胞外泌体
ICS 00. 000
CCS X ?
团 体 标 准
T/ XXXX-XXXX
人源间充质干细胞外泌体
Human mesenchymaI exosomes
（征求意见稿）
XXXX -XX-XX 发布 XXXX -XX-XX 实施
中国食品药品企业质量安全促进会 发布目 次
前言 ................................................................................. III
1范围 .................................................................................. 1
2规范性引用文件 ........................................................................ 1
3术语和定义 ............................................................................ 1
3.1 干细胞 ...................................................................... 1
3.2 人源间充质干细胞 ............................................................ 1
3.3 3外泌体 ...................................................................... 1
4外泌体可溯源性资料信息分类标识要求缩略语 .............................................. 1
5人源间充质干细胞要求 .................................................................. 2
间充质干细胞来源的外泌体的制备方法及应用 (2)
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＡＴＯＭＹＶ０１．３９Ｎｏ．５２０１６解剖学杂志２０１６年第３９卷第５期
间充质干细胞来源的外泌体的制备方法及应用
严冰浩１张燕１方硕２王越３刘厚奇１△
（第二军医大学，１转化医学院，２长海医院整形外科，３组织学与胚胎学教研室，上海２００４３３）
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｘｏｓｏｍｅｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ
ＹａｎＢｉｎｇｈａ０１，ＺｈａｎｇＹａｎｌ，ＦａｎｇＳｈｕ０２，ＷａｎｇＹｕｅａ，ＬｉｕＨｏｕｑｉｌ△（１．ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｌａｓｔｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＣｈａｎｇｈａｉＨｏｓｐｉｔａｌ，３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙａｎｄＥｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，ＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００４３３，Ｃｈｉｎａ）
间充质干细胞是一类多能干细胞，来源于发育早期的中胚
层和外胚层，可以在骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉和脐带等多种
组织中分离，经诱导后可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧
带、神经、肝、心肌和内皮等多种组织细胞［１］。过去，常常认为间充质干细胞可巢居到受损部位后直接定向分化为靶细胞来发挥
作用。然而，有研究表明，间充质干细胞巢居到损伤部位的比例
和分化为靶细胞的数量都是非常有限的，而且分化为所需靶细
胞的这一过程非常短暂，与观察到的治疗效果在时问上互相矛
盾。现在越来越多的研究倾向于认为间充质干细胞主要通过旁分泌机制来分泌多种细胞因子作用于其他细胞来发挥作用［２］。
外泌体是一种直径在４０～１００ｎｍ的脂质双分子层囊泡，最早在
１９８３年研究羊的网织红细胞成熟过程中分泌的囊泡而提出，其
可携带细胞特异表达的蛋白、脂质和核酸等物质，然后通过与细胞的接触直接将所携带的物质传递给邻近或者远距离的细