总抗氧化能力测定(FRAP法)
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。
随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。
以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。
1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。
实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。
2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。
实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。
3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。
实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。
4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。
实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。
5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。
实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。
6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。
实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性 (antioxidant activity)描述了化学物质在抑制或减少氧化反应中所起的作用。
抗氧化物是一类具有亲电子的分子，它们容易被氧化，从而中和自由基。
抗氧化物具有重要的生物学和医学意义，因为氧化损害是许多疾病和老化的主要原因。
因此，抗氧化物活性测定方法是目前研究的热点之一，现将抗氧化物活性测定方法进行总结:1. DPPH法：该方法是一种常用的体外抗氧化测定方法。
含有DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）的溶液表现为紫色，DPPH自由基上的氢原子被抗氧化物夺取后，DPPH自由基变成无色，从而可以通过紫外可见光谱测定其吸光度的降低来表示抗氧化物活性。
2. ABTS法：该法通过测定2,2’-联氮双(3-乙基苯并咪唑啉硫酸铵) (ABTS)自由基的消除能力来测定抗氧化活性。
该法也是一种体外抗氧化测定方法，溶液发生颜色变化，从而通过紫外可见光谱测定其吸光度的降低来表示抗氧化物活性。
3. ORAC法：ORAC（氧化还原能力值）法对不同化学物质的体内抗氧化活性进行定量测定，其原理是将抗氧化剂加入与有氧气气氛接触的荧光染料溶液中，由于受到氧自由基的攻击，染料随着时间流逝会逐渐减少。
为了确定不同化学物质的抗氧化活性，十分重要的是应该不断输入氧自由基。
4. FRAP法：铁还原能力 (FRAP) 方法测量样品对Fe3+的还原能力，其原理是将含有Fe3+的试液与抗氧化剂反应后，Fe3+被还原为Fe2+，测试Fe2+的含量即可评估抗氧化剂的抗氧化性能。
5. TBARS法：该方法是用于评估脂质过氧化物含量，从而推断抗氧化剂的能力。
该评估方法是通过测定细胞膜上的脂质过氧化产物（丙二醛）来分析抗氧化剂活性。
6. Total Phenolic Content (TPC)法：该方法最初是用来测定葡萄酒和咖啡中酚类化合物含量的。
后来发现大多数植物成分含有大量的酚类化合物，故也用于测定植物中的酚类含量。
抗氧化剂抗氧化能力测定法
抗氧化剂抗氧化能力测定法English Answer:Antioxidant Capacity Assay Methods.Antioxidant capacity assays are widely used to evaluate the ability of a substance to inhibit oxidation. Various methods have been developed to measure antioxidant capacity, each with its own advantages and limitations. Here are some commonly used methods:(1) DPPH Assay (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)。
The DPPH assay is a simple and widely used method to measure the radical scavenging capacity of antioxidants. In this assay, DPPH, a stable free radical, is reduced to its non-radical form by antioxidants, leading to a color change from purple to yellow. The reduction rate and extent are proportional to the antioxidant capacity of the sample.(2) FRAP Assay (Ferric Reducing Antioxidant Power)。
The FRAP assay measures the ability of antioxidants to reduce ferric ions (Fe3+) to ferrous ions (Fe2+). Antioxidants reduce Fe3+ to Fe2+ in the presence of a chromogenic substrate, resulting in a color change that can be quantified spectrophotometrically. The FRAP assay is commonly used to assess the reducing power of antioxidants.(3) ABTS Assay (2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid))。
FRAP法测定水果不同部分抗氧化活性_郭长江
3.16 ±0.16
-
3.89
李子
0.71 ±0.01
8.09 ±0.55
0.65 ±0.06
9.45
荔枝
0.59 ±0.11
2.86±0.12 22.36±0.97 25.81
金桔
0.50 ±0.05
0.25 ±0.05
0.66 ±0.03
1.41
玫瑰葡萄
0.49 ±0.04 11.02±1.83 55.54±1.62 67.05
0.77 ±0.12
4.58
龙眼
0.94 ±0.05
3.98±0.30 24.26±2.79 29.18
菠萝果
0.87 ±0.06
-
-
0.87
红香蕉苹果 菠萝
0.80 ±0.05 0.80 ±0.08
3.24 ±0.39 2.01 ±0.03
0.84 ±0.09
4.88
-
2.81
香蕉
0.73 ±0.11
目前大多数测定抗 氧化活性的方法是针对某一种自由基 而言 , 如国 外 应用 较多 的 氧自 由基 清 除力(oxygen radical absorbance capacity , ORAC)法〔6 ,7〕 , 用来测定样品清除 ROO 、OH 等 的能力 , 该法需要昂贵的全自动生化分析仪 , 手工操作费时费 力 , 国内一 般 实 验室 很 难推 广 应用 。 Benzie 和 Strain 建 立 的 FRAP 法 原理明确 , 操作简 便 , 不需特 殊仪器 , 易 于标 准化 , 已 用于测 定 不 同 抗 氧 化 物 质 、食 物 与 生 物 样 品 的 抗 氧 化 活 性〔4 , 8, 9〕 , 它反映的不是 样品 针对 某一种 自由 基的 清除 活性 , 而是样品总还原能力 , 一些 学者因 此认为 该法测 定结果 可用 来反映样品总抗氧化活 性 。
抗氧化测定方法流程
一DPPH自由基清除能力仪器及药品：酶标仪、紫外-可见分光光度计、甲醇、DPPH等DPPH 即1，1-二苯基-2-苦肼基自由基，是一种稳定的自由基，其甲醇溶液呈紫色，并在517 nm处有强吸收。
参考Braca et al. (2001)的方法进行测量。
取0.1 ml样品，加入3 ml 0.004％DPPH 甲醇溶液（质量分数）。
（0.02g溶于500ml甲醇溶液。
）混合均匀后，静置30 min后在517 nm处测定吸光值。
抑制率采用公式[(A0－A1)/A0] · 100计算，其中A0（加0.1ml甲醇和3mlDPPH甲醇溶液）为加入样品前的吸光值，A1 为加入样品后的吸光值。
（空白样采用甲醇。
用甲醇溶液调零。
）配置各个级分不同浓度的甲醇溶液，浓度范围可以先做预实验，大致在1mg-1000mg/l 之间：测定吸光值计算DPPH自由基清除率，绘制吸收曲线，找出其IC50二FRAP法测定抗氧化能力药品：醋酸纳、醋酸、三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ）、盐酸、FeCl3·6H2O、维生素C（L-Ascorbic Acid）（1）300mmol/L的醋酸盐缓冲液（pH=3.6）：3.1g C2H3NaO2·3H2O ＋16mL C2H4O2 溶于1L容量瓶中定容。
（或着是1.869g醋酸钠）（2）10mmol/L三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ，分子量312.33）溶于40mmol/L HCl中：称取0.312g三吡啶基均三嗪溶于50ml小烧杯中，加入0.34ml浓HCl（约11.7mol/l）搅拌均匀，然后定容到100ml容量瓶中。
（3）20mmol/L FeCl3·6H2O溶液，称取2.703gFeCl3·6H2O溶解于200ml蒸馏水中，然后定容到500ml容量瓶中FRAP试剂：25mL 醋酸盐缓冲液＋ 2.5mL TPTZ溶液＋ 2.5mL FeCl3·6H2O溶液（10:1:1）标准样：0.1-1mmol/L的维生素C（L-Ascorbic Acid）溶液FRAP分析步骤：取0.1 ml 样品放入10ml试管中，加入新鲜的FRAP试剂3.0 ml，然后置于25℃恒温水浴中，5 min后用紫外分光光度计在波长为593 nm处测吸光值，（空白样采用去离子水。
电化学法测试TAC氧化能力
总抗氧化能力TAC对于什么是总抗氧化能力，相信很多人无法清楚表述。
总抗氧化能力是指一个体系中大小分子和酶总和的水平，也就是抗氧化自由基，就代表该体系的总抗氧化能力。
目前有多种方法可以检测，我们下面一一讨论。
那为什么要测试总抗氧化能力呢？怎样量化总抗氧化能力这个参数呢？首先回答第一个问题，越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。
如果能够消除过多的氧化自由基，对于许多自由基引起的及老化相关疾病都能够预防。
例如常见的癌症、动脉硬化、糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆、关节炎等，这些疾病都被认为与自由基相关。
研究抗氧化能力，可以有效克服其所代理的危害，为人类身体健康带来重大突破，所以被化妆品企业、保健企业以及饮料食品企业还有生命科学届所关注。
3.第二个问题，我们该怎样量化总抗氧化能力这个参数，用什么方法来测试？FRAP法、电化学法、e-BQC电化学总抗氧化能力测试法。
1.FRAP法是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma(FRAP)方法，对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的方法。
植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。
FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric- tripyridyltriazine (Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。
AntioxidantFe3+-TPTZ ——————> Fe2+-TPTZ (蓝色)由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。
抗氧化测定方法流程
抗氧化测定方法流程一DPPH自由基清除能力仪器及药品：酶标仪、紫外-可见分光光度计、甲醇、DPPH等DPPH 即1，1-二苯基-2-苦肼基自由基，是一种稳定的自由基，其甲醇溶液呈紫色，并在517 nm处有强吸收。
参考Braca et al. (2001)的方法进行测量。
取0.1 ml样品，加入3 ml 0.004％DPPH 甲醇溶液（质量分数）。
（0.02g溶于500ml甲醇溶液。
）混合均匀后，静置30 min后在517 nm处测定吸光值。
抑制率采用公式[(A0－A1)/A0] · 100计算，其中A0（加0.1ml甲醇和3mlDPPH甲醇溶液）为加入样品前的吸光值，A1 为加入样品后的吸光值。
（空白样采用甲醇。
用甲醇溶液调零。
）配置各个级分不同浓度的甲醇溶液，浓度范围可以先做预实验，大致在1mg-1000mg/l 之间：测定吸光值计算DPPH自由基清除率，绘制吸收曲线，找出其IC50二FRAP法测定抗氧化能力药品：醋酸纳、醋酸、三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ）、盐酸、FeCl3·6H2O、维生素C（L-Ascorbic Acid）（1）300mmol/L的醋酸盐缓冲液（pH=3.6）：3.1g C2H3NaO2·3H2O ＋16mL C2H4O2 溶于1L容量瓶中定容。
（或着是1.869g醋酸钠）（2）10mmol/L三吡啶基均三嗪（2,4,6-Tripyridyl-s-triazine，TPTZ，分子量312.33）溶于40mmol/L HCl中：称取0.312g三吡啶基均三嗪溶于50ml小烧杯中，加入0.34ml浓HCl（约11.7mol/l）搅拌均匀，然后定容到100ml容量瓶中。
（3）20mmol/L FeCl3·6H2O溶液，称取2.703gFeCl3·6H2O溶解于200ml蒸馏水中，然后定容到500ml容量瓶中FRAP试剂：25mL 醋酸盐缓冲液＋2.5mL TPTZ溶液＋2.5mL FeCl3·6H2O溶液（10:1:1）标准样：0.1-1mmol/L的维生素C（L-Ascorbic Acid）溶液FRAP分析步骤：取0.1 ml 样品放入10ml试管中，加入新鲜的FRAP试剂3.0 ml，然后置于25℃恒温水浴中，5 min后用紫外分光光度计在波长为593 nm处测吸光值，（空白样采用去离子水。
DPPH和FRAP法测定苦参中抗氧化物的活性
分离纯化技术课程论文学院：生命科学技术学院班级：10级生技植物班学号：2010193023姓名：李胜程DPPH法和ＦＲＡＰ法测定苦参体外抗氧化活性李胜程（甘肃农业大学,兰州，730070）摘要:为了测定苦参中抗氧化的活性。
实验采用粉碎机研磨破碎细胞，无水乙醇、水、乙酸乙酯、甲醇作溶剂加热对药物进行提取，抗氧化能力的测定使用分光光度计，应用DPPH（二苯代苦味酰基自由基）和FRAP（铁离子还原法）进行测定。
通过测定苦参提取液对DPPH 自由基的清除能力和FRAP 值，表征其抗氧化能力[1]。
结果表明: 根据DPPH法测得,苦参的4种提取物对DPPH自由基的清除能力表现为: 蒸馏水<乙酸乙酯<甲醇<无水乙醇。
采用铁还原/抗氧化能力（FRAP法）测得抗氧化性由大到小为:乙酸乙酯>甲醇>无水乙醇>蒸馏水。
关键词：苦参;抗氧化物;DPPH;分光光度计;FRAP;苦参, （英文名Ligh tye llow Sophora Root）别名为野槐根、山槐根、干人参、苦骨。
属豆科植物, 落叶亚灌木。
根黄色。
苦参又叫地参, 以叶似槐, 所以又叫野槐,为豆科槐属植物, 根部入药。
秋冬二季采挖, 除去根头及泥土, 晒干切片备用[2]。
中医学上以根入药, 性寒, 味苦。
主治清热燥湿, 杀虫利尿; 用于热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风; 外治滴虫性阴道炎[3]。
通过现代医学分析化验, 苦参根含有多种苦参碱, 如苦参碱( mat rine) 、氧化苦参碱( oxymat rine ) 、羟基苦参碱( sophoranol ) 、别苦参碱( allomat rine) 、野靛碱( cyt is ine) 、甲基野靛碱( methlcyt isine ) 、臭豆碱( an agyrine) 、赝靛叶碱( b apt if oline) , 还含有黄酮类、皂甙类、氨基酸类、脂肪类、挥发油等复杂化合物, 并由此产生多种药理作用[4]。
测定抗氧化的六种方法是
测定抗氧化的六种方法是
1.自由基清除能力测定法：通过测定样品对自由基的清除能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括DPPH（2,2-二苯基-1-苦基肼）自由基清除法和ABTS（2,2'-联氨基二-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)）自由基清除法。
2.氧化还原能力测定法：通过测定样品在氧化还原反应中的电子接受能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括还原能力测定法和Ferric reducing antioxidant power（FRAP）法。
3.金属离子螯合能力测定法：通过测定样品对金属离子的螯合能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括铁离子螯合能力测定法和铜离子螯合能力测定法。
4.脂质过氧化抑制能力测定法：通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括脂质过氧化抑制能力测定法和TBARS（硫代巴比妥酸反应物）测定法。
5.蛋白质氧化抑制能力测定法：通过测定样品对蛋白质氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括蛋白质碳氧化酶活性测定法和蛋白质过氧化物酶活性测定法。
6.细胞抗氧化能力测定法：通过测定样品对细胞内氧化应激的保护作用来评估其抗氧化能力。
常用的方法包括细胞活力测定法和细胞内氧化应激指标测定法。
抗氧化性测定方法
抗氧化性测定方法
抗氧化性测定方法是一种用于测试物质对氧气自由基、过氧化物和其他氧化性物质的抵抗能力的方法。
以下是常见的抗氧化性测定方法：
1. DPPH自由基清除法：使用一种紫色自由基DPPH，通过测定反应前后DPPH 吸收峰的差异来评估样品的自由基清除能力。
2. ABTS自由基清除法：使用一种蓝色自由基ABTS，通过ABTS的光谱变化来衡量样品对自由基的清除能力。
3. ORAC法：利用ORAC反应器测量被测样品对氧化过程中产生的自由基的清除能力。
4. FRAP法：利用FRAP反应器测量被测样品对铁离子的还原能力。
5. TAC法：通过测量总抗氧化能力评价样品的抗氧化能力。
6. 超氧化物歧化酶(SOD)活力测定法：利用SOD对超氧化物的清除作用来评估物质的抗氧化能力。
以上方法中，DPPH和ABTS自由基清除法是较常用的评估抗氧化性的方法。
抗氧化性是很多食品和保健品评估其品质和功效的重要指标，因此，准确测定物质
的抗氧化性对于推广新产品、提高产品质量和开发功能性食品有着重要意义。
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小麦叶片总抗氧化能力测定（FRAP法）
一、实验原理
FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tri-pyridyl-tria-zine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。
由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。
并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。
由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。
Antioxidant
Fe3+-TPTZ（橘黄色）——————> Fe2+-TPTZ (蓝色)
二、实验步骤
1.FRAP工作液配制：
0.3 M pH 3.6 醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL，
用1M HCl调节pH至3.6；
10mmol/L TPTZ溶液25mL：0.078g TPTZ用40mM 盐酸溶液定容至25mL；
20mmol/L FeCl
溶液50mL：2.78g用RO水定容至50mL；
3
上述溶液以10:1:1的比例混合（现配现用）。
2.取叶片0.1g，加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取1.5mL 12000g离心10min
（4o C），取上清液。
3.在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37o C条件下水浴10min，
于593nm处测定吸光度，
4.标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSO
的标准液替代样品绘制标准曲线。
4
三、结果计算
以1.0mmol/L的FeSO
为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个
4
FRAP值，计算结果。
[1]Benzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a Measure of “Antioxidant Power”: The FRAP Assay[J]. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70-6.
[2]Katarzyna Szafrańska, Rafał Szewczyk, Krystyna Maria Janas. Involvement of melatonin applied to Vigna radiata, L. seeds in plant response to chilling stress[J]. Central European Journal of Biology, 2014, 9(11):1117-1126.。