色谱柱安装与保养
一.毛细管柱的安装
（一）毛细管柱安装前的检查项目
（1）检查气瓶压力以确保有足够的载气、尾吹气和燃气。载气的纯度不低于99.995％；（2）清洁进样口，必要时更换进样口密封垫圈，进样口衬管和隔垫；
（3）检查检测器密封垫圈，必要时更换。如有必要，清洗或更换检测器喷嘴；
（4）仔细检查柱子是否有破损或断裂。
（二）毛细管柱的安装
（1）从柱架上将色谱柱两端各拉出大约0.5 m，以用于进样口和检测器安装，避免色谱柱锐折；
（2）在柱两端安装柱接头和石墨密封垫圈，向下套柱接头和密封垫圈，离端口大约５厘米；（3）标记和切割柱子。在柱距两端大约４－５cm处用标记笔标记，拇指和食指尽量靠近切割点抓牢，轻轻地拉并弯曲柱子, 柱会很容易折断。如果柱子不容易折断，不要用力强行折，换个在离柱端更远的地方再刻一下，使其折断口处光滑。为确保柱两头切口截面没有聚酰亚胺和玻璃碎片, 可用放大镜检查切口；
（4）在进样口安装色谱柱时，先查看仪器说明书找到正确的插入距离，并且用涂改液把这个距离标出来。将色谱柱插入检测器，用手指拧紧柱螺帽直到它固定住色谱柱，然后再拧螺帽1/4-1/2圈，这样当加压时色谱柱不会从接头脱出来；
（5）打开载气，确定合适的流速。设定柱头压力，分流比和隔垫吹扫至合适的水平。如果使用分流和不分流进样口，检查清洗分流阀至ON(开)状态，确认载气流过色谱柱，将色谱柱一端浸入丙酮瓶中检查是否有气泡；
（6）将色谱柱安装到检测器上时，查看仪器说明书所提供的正确插入距离；
（7）检查有无泄漏。在未仔细检查色谱柱有无泄漏之前对柱子不能加热；
（8）清洗系统中的氧气至少数10 min，如果色谱柱被打开暴露到空气中很长时间（几天），那么需要更长时间（1~2h）来清洗系统以排除所有的氧气；
（9）设定正确的进样器和检测器温度；
（10）设定正确的尾吹气和检测器气流。点火、打开检测器至ON状态下；
（11）注射非保留物质[甲烷（FID）、乙晴(NPD)、二氯甲烷(ECD)、空气(TCD)、.氩气（质谱）]以检验进样器是否正确安装。如果出现对称峰则安装正确，如果有峰拖尾，重复进样口安装程序。
（三）毛细管柱的老化
（１）在比最高分析温度高20℃或最高柱温（温度更低者）的条件下老化柱子两h，如果在高温10min后背景不下降，立即将柱子降温并检查柱子是否有泄漏；
（２）如果用Vespel密封垫圈的话，老化完后重新检查密封程度；
（３）注射非保留物质以确定合适的平均线速度。
二.毛细管柱的保护
在使用毛细管柱过程中，主要是防止固定液流失，因为固定液流失会使柱效能降低。事实上色谱柱固定液流失是自然的、是热力学平衡过程。色谱柱固定液聚硅氧烷通过聚合物本身的取代基形成环状分子。聚合物碎片之间由于取代基作用也可形成一些短键聚合物碎片。当这些碎片从色谱柱流出，它们会被检测到，从而导致信号的增强。在毛细管柱使用的全过程中这种反应一直发生。因此，所有的色谱柱都有不同程度的流失。氧是导致严重柱流失的主要
因素，在色谱分析时尽量减少色谱仪气路系统氧的含量、使用好材料的部件以及选择正确的操作条件，可降低柱固定液的流失，延长柱子使用寿命。下面介绍几点注意事项：
1、使用高纯度的载气。氧气含量不宜高于1 x10-6g/g；
2、利用净化器可以除去较低级别气体中的氧和碳氢化合物杂质。通常杂质含量可减少到100 x10-6g/g或更少；
3、聚合物材料通常不稳定。因此，调节器主体，阀盘座，密封圈和隔膜应首选金属材料；
4、管线只能使用没有油或其它污染物的铜管或不锈钢管，推荐使用制冷级铜管。
5、Ｏ形圈或其它聚合物垫圈的阀最好用有焊接金属、波纹形密封垫。
6、整个系统必须无泄露，并且确保样品中不存在非挥发性物质。因为氧和污染物对固定液的分解有催化作用，会导致柱流失增强；
7、在柱子安装后加热柱箱之前，柱子必须用干净的载气清洗15 min。如果色谱仪是新的，或进样器和仪器管线进行维护或修理过，仪器应当再清洗15至30 min；
8、各种固定液的热稳定性不一样，柱流失对背景信号的影响随固定液种类和所受温度变化而变化。当柱箱温度接近于柱温的上线时柱流失也会增加。所以应当尽量在较低的温度下工作以延长柱子的使用寿命；
9、一旦柱子损坏，由于固定液降解的程度不同，重新老化后有可能改善柱性能。
正确安装毛细管柱
毛细管色谱柱安装步骤
1．检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等；
2．将螺母和卡套装在柱上，并将色谱柱两端口小心切平；
3．将色谱柱连于进样口上；
4．接通载气；
5．将色谱柱连于检测器上；
6．进行气体捡漏；
7．确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查；
8．色谱柱的老化；
9．设置确定载气流速；
10．柱流失检测；
11．分析测试实验混合样品。
需要的安装工具和附件
1．切割工具如金刚石头或碳头笔、宝石笔头或瓷楔；
2．放大镜（10—20X）；
3．标尺；
4．扳手；
5．卡套；
6．溶剂瓶；
7．干净的注射针；
8．适用的非柱保留化合物样品；
9．色谱柱测试混合样品；
10．流量计；
11．其他附件：进样垫、干净的衬管、衬管卡套/O形环等。
步骤1：检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等
检查进样垫和气体过滤器，保证辅助气和检测器用气通畅有效。如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口衬管清洗或更换。
步骤2：将螺母和卡套装在柱上，小心切平柱子两端口
在色谱柱的一端装上相应的螺母和卡套，此时色谱柱端口无前后之分，色谱柱支架的支撑部分应总是朝向着柱箱门。安装好螺母和卡套后，将色谱柱端口切平，并用放大镜进行检查。
［熔融石英毛细管和切割］将色谱柱所要切割的部分用一根手指顶住，用合适的切割工具（见需要的安装工具和附件列表）在外壁轻轻的划上一个标记，不要直接进行切割。然后捏柱子在标记处折断。再使用放大镜对切割后的端口进行检查，以确定切口和管壁成直角，并且没有残留的碎屑，没有毛边或不平的切割面（见图2）。如果没有问题，最好在切割一次。
步骤3：色谱柱连于进样口上
色谱柱在进样口中的嵌入溶度根据所使用的GC不同而不同。正确合适的嵌入能最大可能地保证实验结果的重现性。通常来说，色谱柱的顶端应保持在进样口衬管中的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后，如果针尖与衬管中的色谱柱顶端相差1-2cm，这就是较为理想的状态（具体的嵌入浓度和方法参见所使用GC的随机手册）。
从色谱柱架上取出需要连接的足够的长度，并按步骤2切割柱子，连接到进样口。避免用力弯曲压挤
毛细柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与色谱柱接触摩擦，以防柱身断裂或受损。
连接螺母的安装：将色谱柱正确嵌入进样口后，用手把连接螺母拧上，拧紧后（用手拧不动了）用钣手再多拧1/4-1/2圈，如果色谱柱还有松动，在拧1/4圈，保证安装的密封程度。因为不紧密和安装，不仅会引起装置的泄漏，而且有可能对色谱造成快速永久的损害。在螺母完全连接后，小心不要再将色谱柱柱上下移动。
注意：如果在进样口或检测器有一定温度时安装色谱柱，安装效果可能会更好，因为卡套，特别是那些材质为石墨/Vespel的，在一定温度下会软化，易变形，也就更容易封住所要密封的部位。色谱柱装好后，等进样口或检测器的温度降下来，再安装其他部件。
步骤4：接通载气
当色谱柱与进样口连接好后，接通载气。调节柱前压力得到合适的载气流速（见表2）。在色谱柱的另一端（空端），插入装有己烷的样品瓶中，正常情况下，我们可以看见瓶中稳定持续的气泡，如果没有气泡，就要重新检查一下整个气路有无泄漏。等所有问题解决后，将色谱柱端口从瓶中取出，擦拭干净，保证柱端口无溶剂残留，再进行下一部安装。
警告：当空气中氢气的含量在4-10%时，这样的混合气体就有爆炸的危险。虽然气体本身的扩散会降低爆炸的可能，但还是有一定的危险性，所以一定要保证实验室有良好的通风系统，防止氢气过分的聚集。
步骤5：将色谱柱连于检测器上
其安装和所需注意的事项与以上色谱柱与进样口联接（步骤3）部分所讲述的大致相同。如果在应用中系统所使用的是ECD或是NPD等，那么在老化色谱柱时，使它不与检测器相接，那么这一类的检测器会更快地达到稳定，关于色谱柱老化请见步骤8的内容。
步骤6：进行气体检漏
在色谱柱加热前，一定要对GC系统进行检漏，当我们对进样口和检测器进行载气捡漏时，使用电子检漏是最为有效的方法之一。建议不要使用Snoop等肥皂泡，它有可能由被检测处进入色谱柱和其它装置中，从而对系统有所损害。而且不能使用Snoop对正在加热的进样口和检测器装置进行检漏。如果一定要用液体检漏，建议使用50/50的异丙醇/水的混合溶液。
步骤7：确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查
警告：如果不通入载气就对色谱柱进行加热操作，就会快速并且永久性地损坏色谱柱。
当色谱柱安装好后，在依照步骤4对载气流量进行确定，或者使用非保留化合物样品进行检测，我们可以通过分析得到的样品谱图来确定进样口和检测器的安装是否正确。表3
中列出了常用的非保留化合物样品。
实验过程：如果使用分流/不分流进样口，将色谱柱的温度保持在35-40 ℃，使用分流模式进1-2mL样品。如果使用的是不分流大口径进样口，由于样品不被分流进样，进样前应先对样品进行稀释，以免得到饱和的平头峰形。这样，我们应该得到一张峰形尖锐的谱图，而使用不分流大口径进样口，色谱柱可能会有轻微拖尾。如果得不到色谱图，有可能是根本就没有载气通过系统。那就需检查一下调节器、气体附件和流量控制器的设置是否正确。当然也可能是检测器、记录仪和注射针等出了问题。如果色谱峰有明显的拖尾现象，可能是进样口有泄漏，或是色谱柱安装不完整，也有可能是分流比设置得太低等。我们需要重新对色谱柱进行安装并对进样口进行检漏。只有完全解决了这个问题，才能进行下一步。
表3。常用的非保留化合物样品
检测器化合物1
FID
甲烷，乙烷
TCD 甲烷，乙烷，氩气，空气
ECD 二氯甲烷2，SF6，CF2C12
NPD 乙腈2，3
PID 乙烯，乙快
MS
甲烷，乙烷，氩气，空气
1．对于PLOT柱，以上大多数化合物都有明显地保留吸附
2．不要直接液体进样；建议使用顶空进样装置
3．当温度小于是100℃时，乙腈在大多数的色谱中都有保留。使用时需将色谱柱的温度提高到100℃或设置更高的线速度
步骤8：色谱柱的老化
色谱柱安装和系统检漏工作完成后，就可以对色谱柱进行老化了。对色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至高于最高操作10-20℃左右。但是一定不能超过色谱柱的温度上限，那样极易损坏色谱柱。升温速度一定要快，不要将程序声升温的速度设定的太慢。当得到老化温度后，记录并观察基线。比例放大基线，以便容易观察。初始阶段，基线应持续上升，在到达老化温度后5-10分钟开始下降，并且会持续30-90分钟。当达到一个固定的值后，基线就会稳定下来。如果在2-3小时后基线仍无法稳定在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能系统装置有泄漏或污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降至40℃以下，尽快地检查系统并解决相关问题。如果还是继续地老化，不仅对色谱柱有损害，而且始终得不到正常稳定的基线。另外，老化的时间也不宜过长，不然会降低色谱柱的使用寿命。
一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间较长，而弱极性固定较厚涂层的色谱柱所需的时间较短。而PLOT色谱柱的老化方法又各不相同，具体步骤请参阅随柱子的操作说明书。
如果在色谱柱没有与检测器连接就进行老化，那么老化后，色谱柱末端部分可能已被破坏。要先把柱子末端10-20cm部分截去，再将色谱柱连接到检测器上。
温度限定是指色谱柱能够正常使用的应用温度范围。如果操作温度低于色谱柱的温度下限，那么分离效果和峰形都不会很理想。但这样对色谱柱本身并无什么损害。
温度上限通常有两个数值，数值较低的是恒温极限。在此温度下，色谱柱可以正常使用，而且无具体的持续时间限制。较高的数值是程序升温极限。该温度的持续时间通常不多于十分钟。高于温度上限的操作则会降低色谱柱的使用寿命。
步骤9：设置确认载气流速
对于毛细管色谱柱，载气的种类首选高纯氦气或氢气。建议不要使用氮气做载气。载气的纯度最好大于99.995%，而其中的氧气含量越少越好。通常载气级或超高纯度氦气和氢气中氧气的含量小于2ppm。
如果您使用的是毛细管色谱柱，那么依照载气的平均线速度（载气流动的速度cm/sec）而不是利用载气流速（载气流量mL/min）来对载气作出评价，这样不仅简单而且非常方便。因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度，而不是体积流速。
我们进一针非保留样品（见表3），确定它的保留时间。然后按下列公式计算平均线速度（V）
V = L/tr
V = 平均线速度（cm/sec）
L = 平均线速度（cm/sec）
tr = 非保留样品色谱峰的保留时间（sec）
推荐平均线速度值：He，30-40 cm/sec；H2，50—80cm/sec
不要使用色谱仪上的流量计去设置载气流速，可能不准，表4中列出了非保留样品色谱峰的保留时间和对应的流速范围。大多数情况下，采用流速范围的中间值较为合适，载气速度（流速）会随着柱温的改变而改变，请在温度恒定的情况下测量其具体数值。
表4。在几种推荐的线速度下非保留样品的保留时间（min）
氦气（He）
色谱柱长度(m) 线速度cm/ses
30 35 40
15 0.83 0.71 0.63
25 1.39 1.19 1.04
30 1.67 1.43 1.25
50 2.75 2.38 2.08
60 3.33 2.86 2.50
75
4.17 3.57 3.31
105 5.83 5.00 4.38
氢气（H2）
色谱柱长度(m) 线速度cm/sec
50 60 80
15 0.50 0.42 0.31
25
0.83 0.69 0.52
30 1.00 0.83 0.63
50 1.57 1.39 1.04
60 2.00 1.67 1.25
75 2.50 2.08 1.56
105 3.50 2.92 2.19
载气杂质过滤器：在载气的管线中加入气体过滤器装置不仅可以延长色谱柱寿命，而且很大程度地降低了背景噪声。参考下图，建议最好安装一个高容量氧气或一个可指标氧气过滤器。而在氧气过滤器前再安装一个水分过滤器，不仅可以延长氧气过滤器的使用寿命，而且可以降低背景噪声，使用ECD系统时，最好能在其辅助气路中安装一个氧气过滤器。
步骤10：柱流失检测
在色谱柱老化过程结束后，利用程序升温做一次空白实验（不进样）。一般是以每分钟10 ℃从50 ℃升至恒温极限，达到恒温极限后保持10min。这样我们就可以得到一张流失图（见图3）。我们可以看出到一定程
度，基线会快速上升。使用记录装置将基线记录下来，并记录下50 OC和恒温极限的信号值。这些数值可能对今后做对比试验和实验问题解决有帮助。
色谱柱 DM-5， 30m×0.25mm×0.25um
货号 7221
载气 He at 40cm/sec
温度 50-325℃ at 10/min
325℃ for 5 min
进样分流1：100，250℃
检测器 FID, 300℃
N2 makeup gas at 30mL/min
在空白实验的色谱图中，不应该有色谱峰出现。如果出现了色谱峰，通常可能是从进样口部位来的污染物。如果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值将会增高。另外，如果在很低的温度下，基线的信号值明显大于初始值（与最初使用得到的结果比较），那么最有可能的是色谱柱和GC系统有污染。
步骤11：分析实验混合测试样品
最后，我们利用对混合测试样品的分析来确定色谱柱的安装和性能，建议使用我们提供的对色谱柱质量检定所提供的标准样品。有时，对于一些比较特殊的分析，我们采用合适鉴定系统性能的样品进行分析。每一根新色谱柱都带有一张柱性能测试谱图，在相同于图中实验条件和测试样品的情况下，我们应该得到与标准测试相同或相近的谱图。如果试验的重复性很差，有可能是色谱柱的安装，实验的操作或仪器本身出现了问题。那么在正式做其他样品之前，要解决掉所出现的问题。
其他
色谱柱的保存：用进样垫将色谱柱的两端封住，并放回原包装。再安装时，要将色谱柱的两端截去一部份，保证没有进样垫的碎屑残留与柱中。
毛细柱化学稳定性：键合和交联固定相不会因为样品中有水或有机溶剂而受到损坏。如果分析结果不理想，有可能是有其他一些溶剂和固定相产生了作用，但对色谱柱一般没有什么损害。尽量不要使样品中含有机酸（盐酸，硫酸，磷酸和硝酸等）和碱（氢氧化钾和氢氧化钠等），它们对固定相有很大的破坏。如果出现了化学性的损害，截去柱前端0.5-1米，一般都可以确保柱性能的恢复。
非键合相毛细柱在进样过程中极易流失，建议在色谱柱前加上3-5米的预柱。这样可以最大限度地减少固定相的损坏，特别是在采用柱上进样和不分流进样时。
毛细管柱分析故障排除
1. 分流进样方式
现象可能的原因解决方法
峰面积低，峰丢失，产生新峰进样口太热降低进样口温度50℃
进样口太脏清洗/更换衬管
与金属接触用玻璃柱衬管
化合物易变衍生化样品或冷柱头进样
活性填充去除填充物
活性衬管使用硅烷化衬管
停留时间太长增加柱流量或增加分流量
迟洗脱物的面积低溶剂沸点太低使用高沸点溶剂
针污染进样口温度太低增加进样口温度50℃
针停留时间太长使用快速自动进样器
进样口歧视进样口温度太高降温50℃
进样口停留时间太短降低分流流量
衬管中无玻璃毛更换衬管
衬管位置不对衬管聚中
分流太高降低分流流量
进样量太大降低进样量
宽峰分流速太低增加分流流量
进样口脱附更换衬管
移去填充物
增加进样的温度
色谱柱过载增加分流流量
面积不重复分流比波动检查流速控制器
检漏（隔垫衬管柱）
样品返回降低样品量
降低进样口温度
使用大的衬管
进样量不稳定检查进样技术
使用自动进样器
降解去除衬管填料
降低进样口温度
保留时间不重复过载增大分流比
进样少一些
柱降解切去柱端0.5米
更换柱子
2. 不分流进样
现象可能的原因解决方法
失峰，变形峰，假峰进样口太热降温50℃再试一次活性填料（降解）去除/减少填料
活性衬管更换衬管
减灭活衬管
衬管太小用大容量衬管
保留时间长增加柱流速
宽峰无溶剂效应降低炉温
用高沸点溶剂
无固定相聚集降低起始柱温
峰形分叉溶剂/柱子不匹配换一种溶剂
用Retention gap
面积不重复样品回返降低进样量
使用高沸点溶剂
用更大衬管
吹扫时间或柱流变化查吹扫开/关时间
保留时间不重复不准确的清洗延迟检查并校正
不匹配的溶剂用Retention gap
3. 直接进样
现象可能的原因解决方法
峰面积小，丢失峰，新峰产生温度太高降低进样口温度50℃重新评价
进样口脏清洗/更换衬管
与金属接触使用玻璃柱衬管
停留时间太长增加流速
化合物易变衍生物样品
使用冷柱头进样
峰拖尾进样口有活性使用玻璃/减活衬管
使用玻璃柱
载气流速不正确检查和校正
温度太低增加温度50℃再试一次
温度太高降低温度50℃再试一次
系统无效检查柱的安装
面积不重现进样技术差用自动进样器
用热针慢速进样
隔垫泄漏更换隔垫
样品返回减少进样量
用大容量衬管
降低进样口温度
增加流速
保留时间不重现隔垫泄漏更换隔垫
宽峰柱流速不正确校正柱流速
聚焦不足降低起始炉温
鬼峰样品返回进样少一些
用大容量衬垫
降低进样口温度
隔垫问题更换隔垫类型
更换隔垫
降低进样口温度
气相色谱仪维护保养知识
气相色谱仪的维护保养知识 俗话说得好：没有不好骑的马，只有骑不好马的骑师。只有把GC当朋友，好好了解它的习性、掌握维护保养要领并坚持保养它才能服服帖帖听你的话。 GC主要有载气系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统共五个主要组成部分，要做好保养首先得先了解GC各部分构造以及可更换或清洁的零部件，这部分知识可参考各种GC产品使用说明书。 下面主要就GC各功能部分维护保养经验、要领一一列举： 一、载气系统： 载气系统主要包括气源（气体钢瓶或发生器）、减压阀、限流器、净化器、载气管路等部分，载气系统最主要的维护工作就是检漏，可采用厂家提供的检漏液或者自行配制肥皂水振摇起泡，涂抹在管路连接或阀等有缝隙的地方察看。卸下高压、低压表头检定过的国产减压阀大部分用不了多长时间就会发生泄漏。检漏工作应定期作，周期示实际情况而定。每次更换气瓶、减压阀等也需要检漏。需要注意的是，不要将载气管路长时间放空，应采用堵头堵住两端，尽量避免空气进入载气管路。在质谱应用中，如果拆卸过载气管路，可看到水峰（18）和氮气峰（28）等长时间下不来，此时可稍微拧松GC入口管路螺帽，开载气吹半个小时或更长时间。 净化器在载气系统中作用很大，可以帮助去除气体源中污染设备和影响分析结果的水分、烃类、氧气等等杂质。净化管有很多种选择，主要有氧气净化管、水分净化管、烃类净化管、综合净化管等等。除了部分水分及烃类净化管可以再生处理以外，一般均为一次性使用，寿命示实际情况而定。可再生类净化管一般有显色指示，根据指示确定是否需要再生处理，再生处理步骤为取出吸附剂，烘箱中加热烘烤，最后干燥冷却后重新填装连接管路。 二、进样系统（进样口）： 目前各厂家GC进样口主要有填充柱进样口、分流/不分流柱进样口、PTV (温度可编程蒸发进样口) 、VI (挥发物接口) 、COC(冷柱头进样口) 、气体进样阀接 口 (气体样品)等多种进样口类型以及ALS(自动进样器) 、顶空进样、吹扫捕集进样等进样附件。其中主要以填充柱进样口、分流/不分流柱进样口应用最广，填充柱进样口主要在老的标准方法以及气体分析、大体积进样分析等应用中常用，目前主流的进样口主要为分流/不分流柱进样口，由于其分析要求一般比较高（如农残分析等），维护工作尤其重要，如维护不到位，其分析结果差异较大。
色谱柱的维护及注意事项
色谱柱的维护 更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱） 注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端 2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧 3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网 4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料 5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平 6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端 7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入 8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平 平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡 如何平衡色谱柱？ 平衡过程中，将流速缓慢地提高 用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡） 色谱柱的再生进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。 表1 建议用来冲洗的溶剂体积 色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积 125-4 1.6ml 30ml 250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法： 极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水** 非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：
液相色谱仪色谱柱使用及维护
液相色谱仪色谱柱使用及 维护 Prepared on 22 November 2020
液相色谱仪色谱柱使用及维护 每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！ 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装（不加预柱） 1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片 4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧 5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手 注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 卡套柱的安装（加预柱） 1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片 4．将"子弹头"预柱放入卡套片内
5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧 6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手 更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱） 注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端 2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧 3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网 4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料 5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平 6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端 7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入 8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平 平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会
常用高效液相色谱柱SOP
常用高效液相色谱柱S O P Prepared on 24 November 2020
常用高效液相色谱柱SOP 1 目的： 色谱柱的使用和保养：液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。 建立高效液相色谱柱日常维护与保养规程，保证能正常使用。 2 适用范围： 本规程适用高效液相色谱柱的维护与保养。 3 责任人： 液相色谱柱使用者。 4 液相色谱柱的安装： 液相色谱柱的结构： 4.1.1 液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。 柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。空柱各组件均为不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。 压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。
密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。 4.1.2柱填料： 液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。 正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3-10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合-CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。 反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。 常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3-10 μm之间。 色谱柱的安装： 4.2.1拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。 4.2.2拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。 4.2.3 按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57 mm、内径为-0.3 mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止。
液相色谱仪色谱柱使用及维护
液相色谱仪色谱柱使用 及维护 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
液相色谱仪色谱柱使用及维护 每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！ 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装（不加预柱） 1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片 4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧 5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手 注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 卡套柱的安装（加预柱） 1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片 4．将"子弹头"预柱放入卡套片内
5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧 6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手 更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱） 注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端 2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧 3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网 4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料 5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平 6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端 7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入 8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平 平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会
色谱柱管理规程
色谱柱管理规程 1.目的 本文件规定了色谱柱的采购、接收、使用、保养和保存，以确保色谱柱达到合理应用和规范应 用的管理规范。 2.适用范围 本文件适用于本公司色谱分析用色谱柱的管理。 3.责任 3.1.本文件由质量部QC负责起草，质量部部长审核，生产技术副总经理批准。 3.2.质量部QC负责实施。 3.3.QC主管负责监督检查。 4.内容 4.1.色谱柱的采购 QC根据检验需要提出购买申请，注明柱子固定性类型、购买数量、规格、用途等，QC主管审核批准。由供应部从定点供应商处购买。 4.2.接收 4.2.1.编号、登记 对于新购进的色谱柱必须造册编号登记，贴上标签,注明编号。编号用阿拉伯数字表示，以此类推不重复使用。 填写色谱柱登记表，内容包括:生产公司、品名、型号规格、编号、购进时间、启用时间、固定 相类型、单价等。 4.3.存放 色谱柱分类存放。不同的色谱柱按柱子当时柱效不同放入不同的盒中，并标注不同状态以便区分避免混淆。色谱柱按照不同的柱效分为三类，使用良好；需要保养；停止使用。 保养前放入“需要保养”的盒中； 保养后并能提高柱效达到检验要求的放入“使用良好”的盒中； 保养后不能提高柱效并影响检验结果的放入“停止使用”的盒子中。 4.4.使用与保养 每启用一根色谱柱,在色谱柱标签上填写启用日期，放入“使用良好”的色谱柱盒中。 对于不同的样品可使用不同的色谱柱，也可使用同一根色谱柱，但必须确保色谱柱类型、柱效符 合要求。 对于一些使用频率少的柱子,因为放置时间长,容易干柱影响柱效, 每根柱子每三个月保养一次, .
每一次做好保养记录。 频繁使用的柱子，因为使用时间长，造成柱效降低或柱压增高等不利于检验结果的现象时，也要 对柱子作出相应的保养处理，并做好保养记录。 4.5.使用后清洗 色谱柱每次使用后要对柱子进行冲洗。冲洗分为两个方法：方法一（流动相为简单的有机相与水 混合的）用50%的甲醇冲洗15-30分钟，最后用纯甲醇冲洗15-30min；方法二（流动相中含磷酸或盐类或缓冲液的）先用重蒸馏水冲洗15min，然后用50%的甲醇冲洗15-30min，最后用纯甲醇冲洗15-30min。色谱柱的使用和冲洗方法都体现在高效液相色谱仪使用记录里面。 4.6.色谱柱的保存 4.6.1.气相色谱柱 对于暂不使用的色谱柱，应小心存放，可用硅橡胶块、帽或其他方式将两端封闭，置于盒中。 4.6.2.液相色谱相 首先色谱柱必须清洗干净后才能贮存,柱子不能贮存于水或水性溶剂中,否则会引起微生物的滋生。反相色谱柱可以贮存于甲醇或乙腈中，正相色谱柱可以贮存于经脱水处理后的正已烷中， 离子交换柱可以贮存于含5%甲醇或含0.05%叠氮化钠的水中，并将色谱柱两端密封，以免干燥，室温保存。 4.7.色谱柱的保养方法 应按所附说明书的要求对色谱柱进行保养。不同的色谱柱采用不同的保养方法。对于较昂贵的液相色谱柱,可以在柱前加一保护柱(预柱),防止样品中杂质污染分析柱,对于制备柱,因其进样量大,使用保护柱尤为重要。 4.8.报废 对于柱效完全不符合要求的色谱柱或由于其他原因已不能使用的色谱柱，经QC主管批准后，做好停用记录,不能随意丢弃,存放与“停止使用”的盒子中。每年集中清理一次，废弃处理。 5．记录 色谱柱的相关记录由QC整理,QA收集归档保存三年. 6.相关记录 R-SMP07047-01色谱柱登记记录 R-SMP07047-02色谱柱保养记录 R-SMP07047-03色谱柱停止使用记录 .
C18色谱柱维护与保养
C18色谱柱的维护与保养 1、新柱的处理： 我们每次新买的柱子虽然是经厂家测试过并密封好的，可是有的柱子到达手中时已经过很长的时间了，因此，我们每拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。首先，是配制好65%的乙腈/水，再把色谱柱正确的连接在色谱仪上，出口放空（注意：出口端切不可连上检测器，以免污染了检测器），以低流速0.1ml/min~0.5ml/min（如果是LC/MC柱子，则应以0.3ml/min进行）均可，不可以高流速进行，等看见柱子出口有液体流出后，过20分钟后再接上检测器，以循序渐进的方法将流速调至1.0ml/min（如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行），继续冲洗2~8小时。 2、新柱的使用： 首先我们确认所分析样品流动相的PH是不是在色谱柱PH的耐受范围(2~8)之内，以免损伤柱子!如果，确认在柱子的使用范围之内，就用做样品的流动相平衡柱子(如果流动相中含用缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5%甲醇或5%乙腈去过渡30分钟以上。再用带盐的流动相去平衡色谱柱。)当色谱柱平衡了足够时间，基线非常平稳的时候，方可进样分析。不管是分析什么样的产品，由于各种各样的因素，样品中总有杂质。因此，最好在色谱柱前端加上保护柱。以增加色谱柱的使用寿命！ 3、色谱柱清洗： ①如果样品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的流动相，在做完样品之后可直接用55%~65%乙腈/水或者用55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟，然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟，即可保存；②如果样品分中流动相里含用
缓冲液或酸或离子对试剂的流动相，在做完样品之后的清洗必须按照如下步骤进行清洗柱子:先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水，以1ml/min,冲洗1.5小时以上(如果色谱柱更长，则还需要增加适当时间);然后用55%~65%甲醇//水冲洗色谱柱30~60分钟.最后用甲醇或乙腈以1ml/min冲洗30分钟。 4、色谱柱的再生： 当色谱柱用过很长的时间之后，就可能发生柱压力升高、分离度不好、柱效降低、峰形不好等等情况，这时我样就需要对色谱柱进行再生，以延长色谱柱的使用寿命。具体方法有如下：先用5%甲醇/水或者是5%乙腈/水，把色谱柱反向以1ml/min,冲洗60分钟以上.然后用四氢呋喃以1ml/min冲洗30分钟以上；再用65%甲醇/水或者65%乙腈/水，以流速1ml/min冲洗60分钟。最后用纯甲醇或乙腈冲洗30分钟保存即可。 备注：甲醇、乙腈、四氢呋喃均要用质量好色谱纯。水用是重蒸留水。
(完整版)色谱柱的使用及维护
前言 液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以 固定相中流出而得到分离。因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护 色谱柱的知识非常必要。色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。引起这些问题的内在原因有: (1) 硅羟基的死吸附。色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。 (2) 重金属。色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。 (3) 碳流失。固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。 (4) 缓冲液中盐的析出。在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。 (5) 色谱柱变干。如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。 2 色谱柱的使用 新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。认真阅读说明书及性能测试报告,了解新柱子的最佳性能指标,如某色谱条件下的柱压、柱效等。有时分析用的流动相与柱子的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。反相C18 柱通过出厂测试后多保存在乙腈中,可用10～20 倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流速要缓慢提高,如开始0. 3～0. 5mL/ min , 10～15min 后可慢慢加快。 硅胶柱和极性色谱柱通过出厂测试后一般保存在正庚烷中。如果分析时需要使用含水的流动相,则使用前须用乙醇或异丙醇冲洗,流速0. 1～0. 3mL/ min ,将正庚烷冲洗干净后,再用流动相平衡。 实验过程中可以记录色谱柱的一些性能指标,如柱效、柱压等,供今后参考。每次分析样品前,要用流动相对色谱柱进行平衡,待基线平稳后再进样分析。梯度洗脱用初始流动相平衡。一次样品分离完成后,要有足够的时间使系统恢复平衡,再进行下一次分析。一般流动相平衡时间为30min ,若系统中有盐或水,平衡时间应延长。 3 色谱柱的清洗与保存 色谱柱清洗是日常的重要维护工作。如果样品分子残留在柱子、接头、流通池中,会污染系统,影响对其它样品的分析,降低柱效。因此分析工作结束后,要用适当的溶剂清洗系统中残留的样品。在反相系统中, 若流动相中无酸、碱、盐类物质, 可用90 %甲醇冲洗30～60min ,若含酸、碱、盐类物质,则要先用10 %甲醇或乙腈,或用与分析用流动相相同的
色谱柱使用维护保养操作规程
目的：建立色谱柱使用维护保养操作规程，规范色谱柱的使用、维护行为。 范围：适用于色谱柱的使用、维护和保养。 依据： 责任：药分部 内容: 1.操作规程 一般要求是一根柱子用于同一个系列的产品，稳定性试验用专用柱。 1.1.新色谱柱在使用之前，首先应查看说明书，检查柱子的pH值范围是否与待验产品的要求相一致，确认柱子和仪器的接头以及管路是否相匹配，并注意柱子上标示的流向箭头，一切确认无误后，编上编号，在《色谱柱启用、报废台帐》上登记开始使用时间、生产厂家、型号规格等。 1.2.使用时，应按各色谱柱的要求进行色谱柱的维护保养，并在色谱柱使用登记表中登记使用日期、所测产品的名称及批次、使用前后维护保养的具体内容； 1.3使用后，及时填写《色谱柱使用台帐》。 2.维护规程 2.1.液相色谱柱的维护 2.1.1. 色谱柱使用时，确认柱子的编号、型号规格与待验产品的要求相一致，流动相的pH值应与柱子说明书上规定的pH值相适应，然后旋开两端的封头，接到高效液相色谱仪上，使色谱柱的箭头指向与流动相流向一致。 2.1.2.流动相应经过0.45um滤膜过滤并脱气后使用，柱压不要超过300bar（3000psig），最高操作温度不得超过60℃。 2.1. 3.流动相如果是非盐类的，用流动相冲洗约30min，按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作，然后进行样品的检验。如果是盐类的，用有机相：水=10：90的溶液冲洗约10min，再换上相对应的流动相，按《高效液相色谱仪操作规程》进行操作，然后进行样品的检验。 2.1.4.检验完毕，如流动相中含有盐类物质，应先用有机相：水=10：90的溶液以1ml/min的流速冲洗约40min，然后用HPLC级的乙腈或甲醇以1ml/min的流速冲洗约30min，关闭液相色谱仪，取下色谱柱，在柱两端旋上封头，以防止柱内的有机溶剂流失而使柱内填料发干变松，柱效下降。不用的色谱柱放入液相色谱分析室的专用贮存柜中。 2.1.5.拿用时要轻拿轻放，避免剧烈震动。 2.1.6.不允许反向连接和冲洗柱子。 2.1.7.柱子的再生：每使用二十次，就按以下程序进行再生一次，以延长柱子的使用寿命。冲洗程序：按柱子上所示箭头方向，依次用高纯水－甲醇－氯仿－甲醇以1ml/min的流速分别冲洗约
色谱柱常见问题与维护保养
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
https://www.360docs.net/doc/c82069761.html,
色谱柱常见故障与排除
1. 柱压问题 2. 峰形异常 3. 保留时间
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
https://www.360docs.net/doc/c82069761.html,
正常的色谱柱柱压升高：
1. 色谱柱老化
2. 使用了更小填料粒径、更细内径或更长的色谱柱 3. 使用了粘度更高的流动相 4. 多相系统混合梯度会带来更高的柱压。
*选择合适的流速和色谱柱温度，保证色谱柱在正常操作的压力范围之内。
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
https://www.360docs.net/doc/c82069761.html,
系统或操作不当引起的柱压升高：
1.色谱柱过滤筛板堵塞 2.色谱柱污染 3.保护柱或在线过滤器堵塞
*请选择合适的流动相并尽可能除去流动相或被测样品带入的杂质。
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
https://www.360docs.net/doc/c82069761.html,
开始
洗脱剂中 盐析出 No 断开C压 力还是高 Yes 断开B压 力还是高 Yes No
Yes Yes No
冲洗后压力还是高
No
盐洗出 ?重新考虑洗脱剂的组分 ?下一次进样前冲洗系统
检测器管路被堵
?清洗检测器 ?更换新的管线
柱子堵
压力低于柱子可 承受的最大压力 Yes Yes
No
柱子老化 ?替换新柱子 ?考察柱子是否 是好的
柱子堵 替换新柱子 断开A压 力还是高 Yes 是否使用 在线过滤器 Yes 在线过滤器堵了 No 泵管路被堵 No 进样器堵
No
过滤流动相 和样品
?清洗进样阀 ?替换新的进样阀 ?替换泵里的过滤器 ?清洗泵 ?替换泵里的管线
"Better Surface Chemistry for Better Separation."
?清洗在线过滤器 ?替换新的在线过滤器
https://www.360docs.net/doc/c82069761.html,
液相色谱仪色谱柱使用及维护
液相色谱仪色谱柱使用及维护 每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！ 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装（不加预柱）1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片 4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧 5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手 注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。 卡套柱的安装（加预柱） 1．将卡套架套入柱芯 2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图） 3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片 4．将"子弹头"预柱放入卡套片内 5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧 6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端 7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手 更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱） 注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端 2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧 3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网 4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料 5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平 6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端 7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入 8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平 平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗 注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书。 色谱柱维护保养是很重要的，关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性，所以任何人用过色谱柱之后，一定要对色谱柱进行保养，管理人员和使用者互相监督。 总的原则是色谱柱要轻拿轻放，避免损坏填料；另外没有使用的情况下，一定要保证两端的堵头封好。对于具体的色谱柱，下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项，以便使用者参考。 对于未启用的新的色谱柱，先用甲醇或乙腈以小流速（0.2ml/min缓慢升高到0.5ml/min）不接检测器冲洗色谱柱30分钟后，将色谱柱与检测器连上，流速调为1.0 ml/min冲洗色谱柱60分钟，然后不断降低有机相的比例（如80%、50%、10%甲醇或乙腈）各冲洗至少30分钟。若色谱柱暂时不用，则将色谱柱保存在高比例有机相中（如80%甲醇或乙腈，或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中）；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂（将缓冲盐溶液换成水）冲洗色谱柱15分钟，然后再换成流动相进行样品分析。 样品分析完后，色谱柱维护与保养方法： 流动相中若含酸、碱、盐类物质，则要先用10%甲醇或乙腈冲洗，1.0ml/min 的流速冲洗至少30min，再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min，柱子保存在80%甲醇或乙腈里（具体问题具体分析，洗脱程序可以是梯度洗脱程序，注意如果最后色谱柱保存的是高有机相，第二天用之前一定要用高水相过渡一下，再换成流动相）。如柱子长时间未用，则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里。 对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，柱子应采用梯度洗脱，一般用乙腈-水系统（水：90-10；乙腈：10-90）冲洗时间要稍长些，然后保存于90%乙腈。 需要特别强调的是，目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间（1小时以上）冲洗，除非有专门耐水的专用柱，否则，用纯水长时间冲洗色谱柱，会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷，损坏色谱柱。
C18色谱柱维护 常识
【讨论】高效液相色谱柱的保护 各位同仁，为保证我们的分析效果，延长色谱柱的使用寿命，大家一起来贡献一下自己在色谱柱使用过程中的护柱秘诀吧。 我先来聊聊，算是抛砖引玉了 1、最好用预柱。（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了） 2、每次做完分析，都要进行冲洗， 分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90％甲醇冲洗30～60min； 若分析用流动相中含以上物质，要先用10％甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90％甲醇冲洗30～60min（若用多元泵）。有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。 若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。 3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。 4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。 5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。 6、定期测柱效，有下降，可以用10％异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善，可以再生，甲醇－二氯甲烷－甲醇。 呵呵，还有的一时想不起来了，各位有经验的战友请发表高见！ 1．样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤，流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。 2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围 3．避免流动相组成及极性的剧烈变化。 4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。 5．每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱250×4.6mm柱体积3.2ml）。如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。 6．压力升高是需要更换预柱的信号。 1：溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm） 2：样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm） 3：泵，进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器 4：柱内不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！ 还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生： 1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或
HPLC色谱柱使用维护与保养规程
公司 标准操作规程编号：STD-SOP－EM－033－00题目液相色谱柱使用维护与保养规程颁发部门分析测试中心 制定日期 审核日期 批准日期 分发分析测试中心研发部 目的：建立HPLC色谱柱使用、维护与保养规程 范围：HPLC色谱柱 职责：分析测试中心对本规程的实施负责 正文： 1.色谱柱的构造 色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。 2.液相色谱柱的使用： 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 2.1样品的前处理： 2.1.1最好使用流动相溶解样品。 2.1.2使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 2.1.3使用0.45μm（或0.45μm以下）的过滤膜过滤除去微粒杂质。 2.2流动相的配制： 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此
要求流动相具备以下的特点： 2.2.1流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。 2.2.2流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。 2.2.3流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。 2.2.4流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。 2.2.5流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 2.2.6在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。 2.3流动相流速的选择： 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。 注意： 2.3.1由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。 2.3.2对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。 2.3.3含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不
色谱柱的使用和维护
一.安装、启用和维护中重点注意事项 色谱柱既是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重和关怀。如避免强烈的碰撞和震动，尽管色谱柱从1米高的实验台掉落到水泥地上不至于100%会损坏，但50%的可能损坏你也承受不起。另外不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。 1. 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配 色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。上图表明柱连接的6种不同方式（数字单位是英寸），如果两者类型不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。
2. 溶剂的匹配转换 色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新柱永久不可逆地损坏。正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。 3. 新柱使用前的平衡和老化 厂家出厂检验时一般都已进行过平衡，但色谱柱到最终用户时间不一，用户正式测定前最好对色谱柱再次平衡。最好的平衡兼老化一起进行的方法是运行几次完整的分析程序（包括进样），直到观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止。所谓“老化”是借用了气相的术语，目的是达到分析物在色谱柱以及整个液相系统流路中的吸附饱和。对某些特定的待测物，如分子量大于1000的，因扩散速度慢，老化时间相应要长，可采取大浓度进样或在同一个洗脱周期内连续进样多针的方式加快老化。 4. pH使用范围 一般认为硅胶基质柱子的pH使用范围是2-8，这是很粗略的。硅胶类型、使用温度、硅胶表面所键合的固定相类型以及缓冲盐的不同，对此均有影响。硅胶比孔容小、键合密度大的填料pH耐受范围要大
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗 2
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗 注意:每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书. 色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后，一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督。 总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料；另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好。对于具体的色谱柱，下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项，以便使用者参考。 对于未启用的新的色谱柱，先用甲醇或乙腈以小流速（０．2mｌ/min缓慢升高到0。５ml/min)不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上，流速调为１．0 ｍｌ／min冲洗色谱柱6０分钟,然后不断降低有机相的比例（如80%、5０％、10%甲醇或乙腈）各冲洗至少3０分钟。若色谱柱暂时不用，则将色谱柱保存在高比例有机相中(如８0%甲醇或乙腈，或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中)；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂(将缓冲盐溶液换成水）冲洗色谱柱１５分钟,然后再换成流动相进行样品分析。 样品分析完后，色谱柱维护与保养方法: 流动相中若含酸、碱、盐类物质，则要先用１0％甲醇或乙腈冲洗,1。0ml/ｍiｎ的流速冲洗至少30ｍin，再用80％甲醇或乙腈冲洗至少３０miｎ,柱子保存在80％甲醇或乙腈里(具体问题具体分析，洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相，第二天用之前一定要用高水相过渡一下，再换成流动相）.如柱子长时间未用,则柱子保存在100％的甲醇或乙腈里。 对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等，柱子应采用梯度洗脱，一般用乙腈—水系统(水:９０-10；乙腈：10-９０）冲洗时间要稍长些,然后保存于9０％乙腈。 需要特别强调的是,目前所有的C１8柱均不能用纯水进行长时间(1小时以上）冲洗,除非有专门耐水的专用柱，否则，用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷，损坏色谱柱。
毛细管气相色谱柱的保养与维护
毛细管气相色谱柱的保养与维护 本文综述了毛细管气相色谱柱的保养与维护。就毛细管柱分析使用中常遇到的一些问题，例如如何避免色谱柱的断裂，固定相的损伤，色谱柱的污染以及如何解决一些不能避免的问题和应采取的措施、步骤。 如何保养与维护毛细管气相色谱柱，如何避免色谱柱的破损、固定相的损伤、色谱柱的污染以及如何解决一些不能避免发生的问题，是色谱工作者极为关注的焦点。因为这对更加有效地延长毛细管柱的使用寿命，减少不必要的误工时间，改进色谱柱的重现性和分析结果的可靠性等方面都是极为重要的。本文将就毛细管气相色谱柱的破损、固定相的损伤和色谱柱的污染进行综述。 1、毛细管色谱柱的破损 弹性石英毛细管色谱柱是由,%-./-/%0等人在）1#1年首先拉制成功的2）3。通常在毛细管柱内涂渍一层聚合体固定相$如聚硅氧烷类、聚乙二醇类等&，在它的外面常涂有一层聚酰亚胺涂层。聚酰亚胺涂层具有较好的强度和耐热性，在"**4左右柱温下均可使用。但在特殊高温条件下，聚酰亚胺涂层经受不住高温老化，所以近年来出现了镀铝层弹性石英毛细管柱，可耐56*4高温。涂有聚酰亚胺涂层的石英毛细管柱只要保存在惰性环境中，其本身就固有较高的抗张强度。但它对潮湿水分比较敏感，一旦柱子外侧聚酰亚胺保护层破损，这就为水分的进入提供通道，从而导致石英柱的断裂2 3。 错误处置的毛细柱也会在柱子表面留下不经意的擦痕。这些擦痕与水分接触并不断蔓延，经过一段时间最终导致柱子断裂$图）&。如果在高温运作时发生柱子断裂，那么柱子通常由于接触空气而受到破坏。柱子断裂的程度往往与柱子直径有关。*!7"88内径毛细管柱往往要比窄径毛细管柱$*! 788内径或更细内径&容易断裂。预防柱子断裂的方法十分简单，避免粗糙的柱表面，生硬的柱处理和将柱子弯曲成绷紧的状态。内径*!7"88的柱子不能耐受9 （8半径范围的弯曲，*! 788内径的柱子不能耐受9）（8半径范围的弯曲。施加于柱上的压强越大， 柱子则越容易断裂。如果柱子断裂不是发生在柱子末端$既柱中间某一部位&，则可以通过柱子连接部件将其接通。如果柱子末端发生断裂，可以将其破损面切除，重新使用。 2、固定相损伤 尽管柱断裂是一个不可忽略的问题，但比起毛细管柱柱流失来说，固定相损伤则是一个更为常见的问题。固定相损伤往往会造成对极性溶质柱活性的增加、柱效的下降和柱流失加重等后果。其症状为由于柱活性的增加，造成出现脱尾峰和峰高强度降低；由于柱效和分辨率的下降，出现峰变宽和由于过量的柱流失造成基线漂移。如果固定相损伤比较严重，那么柱活性升高、柱效下降和过量柱流失会同时发生。图表明用一
色谱柱的管理
目的：建立色谱柱管理的标准操作规程并严格执行 适用范围：适用于检验室气相色谱仪和液相色谱仪用的所有色谱柱相关部门：检验室 内容： 1色谱柱购入管理： 1.1新色谱柱购入时，验收人检查外包装、封口和标签是否完好，在包装盒空白处贴上色谱柱专用标 签填写编号、购入日期，并在色谱柱上贴上简单标签，登记于V附件- ＞「色谱柱购入登记表」，依规定存放至特定位置。 1.2色谱柱专用标签格式： 1.3色谱柱编号色谱柱种类编号： □□…-□□□ □□…：色谱柱种类 □□□:序号 例如：C18-001 2色谱柱存放和保养： 2.1每启用一根新色谱柱，在色谱柱上贴上标签并注明启用日期，启用前依据柱子的使用说明（注射 前润湿程序、清洗程序和保养程序）对相关人员进行培训并纪录。 2.2色谱柱使用一段时间后，常遇到柱子被污染，柱效会有一定程度的下降，采用适当的方法（具体 参照柱子的使用说明）对色谱柱进行保护，可以延长色谱柱的使用寿命。 2.3如果必要,需进行样品的预处理。溶解的样品进样前用滤膜过滤，以除去不溶物。 2.4流动相中如有不纯物质将影响柱效，所以溶剂尽量使用色谱级别的，至少是分析纯级别,流动相使 用前用微孔薄膜过滤。 2.5色谱柱分类存放，按不同柱分类，装入对应的包装盒中。随柱说明书也相应贴上柱子的标签放在 文件夹中归档（归于检验室档案柜中）保存。 2.6每根柱子每两个月保养一次，特别是对于一些使用频率少的柱子，因为放置时间长，容易干柱, 每一次做好保养记录同时记录于V附件二〉「色谱柱使用记录」。 3色谱柱使用 3.1每次使用完色谱柱后，填写V附件二〉「色谱柱使用记录」
3.2对于确已失效的柱子，申请停用，填写v附件三〉「色谱柱停用记录」不能随意丢弃, 专门存 放。 附件一 色谱柱购入登记表