常用样品分析方法--可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量的测定
淀粉含量的测定常用方法
淀粉含量的测定常用方法
淀粉含量测定常用啥方法？那必须得说说酶水解法呀！这方法的步骤呢，先把样品处理好，然后加入酶进行水解，接着通过一些化学试剂来测定淀粉的含量。
嘿，听起来是不是挺简单？但这里面的注意事项可不少呢！比如样品处理得要精细，不然会影响结果。
还有酶的用量和反应时间也得把握好，不然结果可能就不靠谱啦！那这过程安全不？放心吧！只要按照正确的操作方法，那是相当安全的。
稳定性也不错，只要操作规范，结果一般都挺稳定的。
这方法的应用场景可多啦！像食品行业啦，农业啦，都能用得上。
它的优势在哪呢？可以准确地测定淀粉含量呀！而且操作相对来说不是那么复杂。
咱来个实际案例瞅瞅。
有个食品加工厂，就用酶水解法测定淀粉含量，结果可准啦！这样就能更好地控制产品质量，做出更美味的食品。
淀粉含量测定的酶水解法真的超棒！操作规范就安全稳定，应用场景广，优势明显，实际效果又好。
咱要是需要测定淀粉含量，就选它准没错。
试验分析方法
试验分析方法伊灵燕一、取样时期：齐口花时采样。
二、测定指标（每处理茎/叶各称：12个0.5g；4个1g；8个2g。
叶绿素另取）：（一）形态指标1、株高：用直尺测量2、茎粗（最粗处）：用游标卡尺测量3、节间长：株高/节数4、叶长、叶宽、叶柄长：用直尺测量5、植株鲜、干重：分为整株、根、地上部、菜薹重和叶重（包括叶片和叶柄）6、比叶重：用打孔器，每个重复打20个圆片，烘干，称干重（二）叶片色素：参照张宪政（1986）的方法，（三）品质指标：分为叶片和菜薹1、硝酸盐：比色法（李和生，2000）。
2、抗坏血酸（VC）含量：比色法，李合生（2000）3、可溶性糖：蒽酮比色法（李和生，2000）。
4、可溶性蛋白: 考马斯量兰比色法（李和生，2000）。
5、游离氨基酸：茚三酮显色法，李合生（2002）6、类黄酮、可溶性酚：比色法7、纤维素（薹干样0.2g）：四、指标测定方法：1. 叶绿素参照张宪政（1986）的方法，菜心叶片鲜样0.5g浸泡在25ml丙酮/无水乙醇（1:1，V:V）溶液中，至叶片发白。
测定OD645、OD663和OD440。
叶绿素a浓度（mg/L）＝12.7×OD663－2.69×OD645叶绿素b浓度（mg/L）＝22.9×OD645－4.86×OD663总叶绿素浓度（mg/L）＝8.02×OD663+20.20×OD645类胡萝卜素浓度（mg/L）＝4.7× OD440－0.27×总叶绿素浓度叶绿体色素的含量（mg/g）＝（色素浓度×提取液体积）/样品鲜重2. 硝酸盐比色法李和生（2000）（1）500μg/ml硝态氮（NO3-）标准液：精确称取烘干至恒重KNO3 0.7221 g （0.8145g）溶于去离子水中，定容至200ml（100ml）。
（2）5%水杨酸-硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱中保存1周有效。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法叶绿素是植物体内含量较高的绿色色素，它在光合作用中起着重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物的生理过程和生态体系具有重要意义。
本文将介绍几种常用的测定叶绿素含量的方法。
1. 直接萃取法：直接萃取法是最常用的测定叶绿素含量的方法之一。
具体步骤如下：(1) 取新鲜叶片，将其切碎并放入含有乙醇或丙酮的试管中。
(2) 在测定之前，将试管置于黑暗中，以避免光照对叶绿素的破坏。
(3) 将试管加热至60-80摄氏度，使用超声波震荡器震荡一段时间，以使叶绿素从叶片中完全溶解到溶液中。
(4) 将溶液离心，收集上层液体，并使用分光光度计测定其吸光度。
(5) 根据吸光度测定值和标准曲线来计算叶绿素的含量。
2. 酸碱法：酸碱法是测定叶绿素含量的一种简便方法。
具体步骤如下：(1) 取新鲜叶片，用醋酸乙酯将其完全浸泡。
(2) 在测定之前，将其放在黑暗中保护叶绿素不受光照。
(3) 将浸泡叶片的醋酸乙酯溶液转移到一个离心管中，再添加一些酸性乙醇（如95%乙酸）。
(4) 离心一段时间，使叶绿素溶于酸性乙醇中。
(5) 将上清液转移到一个试管中，并用乙醚稀释，使其适合测定。
(6) 使用分光光度计测定溶液的吸光度，并根据标准曲线计算叶绿素的含量。
3. 间接法（叶绿素含量的计算）：间接法是一种根据叶片在不同波长下吸光度的差异来推测叶绿素含量的方法。
具体步骤如下：(1) 使用分光光度计测定叶片在不同波长下的吸光度，包括440 nm、645 nm和663 nm。
(2) 根据以下公式计算：非光合色素 Chl (a+b) = 0.0073 A663 + 0.036 A645叶绿素 a = 0.0127 A663 - 0.00269 A645叶绿素 b = 0.0205 A645 - 0.00488 A663叶绿素 a/b = (0.0127 A663 - 0.00269 A645) / (0.0205 A645 - 0.00488 A663)(3) 使用所得结果进行各种关于叶绿素含量的统计分析。
植物生理学中各项生理指标的测定方法
一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。
80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。
三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。
植物生理学中各项生理指标的测定方法
一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。
80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。
三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。
可溶性糖、淀粉、蛋白质
植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。
二、原理（一）分离提取原理在80~85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。
（二）测定原理1．蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。
蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10min后出现，而核糖在相同温度下，加热3min后出现。
此法灵敏度高，糖含量达30μg即可测定。
2．茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570nm下有最大光吸收。
在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。
3．考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595nm，在一定范围内（0~1000μg/mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。
此法快速灵敏，反应在2min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。
三、实验用品（一）实验材料：植物样品。
（二）器皿：1.25mL刻度试管×8，15mL试管×20；2.10mL离心管×2；3.容量瓶：50mL×1，25mL×1；4.移液管：5mL×2；2mL×4，1mL×2，0.1mL×2；5.恒温水浴锅；6.离心机；7.电子天平；8.分光光度计。
植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定
植物组织中可溶性糖和淀粉含量的测定一、原理淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料：红薯块根。
（二）试剂1、浓硫酸（比重1.84）。
2、9.2mol/L高氯酸。
3、80%酒精4、葡萄糖标准液（称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成100ml 溶液，既得1mg/ml的标准液）；5、蒽酮试剂：[100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加水至100ml）]。
（三）仪器设备电子天平，容量瓶（100mL、50 mL），漏斗，小试管若干支，恒温水浴锅，刻度吸管（0.5mL、2.0mL、5 mL），分光光度计，记号笔。
三、实验步骤1. 标准曲线制作。
取标准糖溶液将其稀释成一系列0-100μg/μl的不同浓度的溶液中，按上述方法分别测定OD625nm值，然后绘制标准曲线。
管号0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液（μL）0 20 40 60 80 100 糖含量（μg）0 20 40 60 80 100加入的水(μL) 100 80 60 40 20 0蒽酮试剂（mL） 1 1 1 1 1 1 OD62502. 样品提取（1）可溶性糖含量测定称取 50～100mg粉碎过100目筛的烘干样品，置于15mL刻度试管中，加入6～7mL 80％乙醇，在80℃水浴中提取30min，取出离心（3000rpm）5min，收集上清液。
重复提取两次（各10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于85℃恒温水浴，使乙醇蒸发至2～3mL，转移至50mL容量瓶，以蒸馏水定容。
吸取上述上清液1ml，加入5ml蒽酮试剂混合，沸水浴10min,取出冷却。
在625nm处测定OD值，从标准曲线上得到提取液中糖的含量（ug）。
（2）淀粉含量的测定向沉淀中加蒸馏水3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化15min 。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法## 叶绿素含量测定方法叶绿素是植物体内重要的色素分子，对于植物光合作用起着关键的作用。
因此，测定叶绿素含量是植物生理学和植物生态学研究中常用的重要参数。
下面介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
### 1. 委派-法（Wet-Ox）法测定叶绿素含量Wet-Ox法是一种简单、快速的叶绿素含量测定方法，适用于大多数植物。
该方法使用乙醇和二氧化碳溶液将植物细胞中的叶绿素从叶片中提取出来。
提取液中的叶绿素含量可以通过测量其吸收的光强来确定。
测定步骤如下：- 从待测样品的叶片中取0.1克左右的叶片切碎；- 将切碎的叶片加入10毫升的乙醇和二氧化碳溶液中，然后用果汁机将其搅拌均匀；- 将混合液倒入离心管中，离心10分钟；- 取上清液，放入紫外可见分光光度计中，测量在663和645纳米波长的吸光度；- 根据波长吸光度值计算叶绿素含量。
### 2. 非溶剂测定法非溶剂测定法是一种不使用有机溶剂的测定方法，广泛应用于叶绿素含量测定。
该方法使用光度计或多光束分光光度计测量叶片的透射和反射光谱，然后使用数学模型计算叶绿素含量。
测定步骤如下：- 将待测样品的叶片置于光谱仪中，测量叶片的透射光谱；- 测量叶片的反射光谱；- 使用数学模型计算叶绿素含量。
### 3. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种准确而有效的叶绿素含量测定方法。
该方法利用高效液相色谱仪测量样品中叶绿素的峰值，通过对照峰面积或峰高计算叶绿素含量。
测定步骤如下：- 将待测样品的叶片切碎，加入提取液中，震荡均匀；- 过滤提取液，将过滤液注入高效液相色谱仪中；- 设置色谱检测条件，进行色谱分离；- 通过对比样品峰值与标准品峰值计算叶绿素含量。
### 4. 气相色谱法气相色谱法是一种基于叶绿素与有机溶剂的分配系数不同而进行测定叶绿素含量的方法。
该方法需要使用气相色谱仪进行测量。
测定步骤如下：- 从待测样品的叶片中提取叶绿素；- 使用有机溶剂溶解叶绿素，并注入气相色谱仪中；- 设置气相色谱仪的条件，并进行测定；- 根据样品峰面积或峰高计算叶绿素含量。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法
1.酒精提取法
这是一种简单、常用的叶绿素含量测定方法。
首先，将待测样品中的叶绿素溶解到酒精中，然后通过分光光度计测定酒精溶液的吸光度。
根据已知浓度的叶绿素标准溶液的吸光度与浓度之间的关系，可以计算出待测样品中叶绿素的含量。
2.乙醚提取法
这是一种更精确的叶绿素含量测定方法。
首先，将待测样品中的叶绿素溶解到乙醚中，然后通过离心将悬浮液分离成上层乙醚相和下层水相。
接下来，测定乙醚相的吸光度，并根据已知浓度的叶绿素标准溶液的吸光度与浓度之间的关系，计算出待测样品中叶绿素的含量。
3.高效液相色谱法
这是一种更为准确的叶绿素含量测定方法。
首先，将待测样品中的叶绿素提取出来，并经过预处理后注入到高效液相色谱仪中进行分析。
高效液相色谱法可以准确地分离出叶绿素及其衍生物，并通过检测器测定它们的吸光度，从而计算出叶绿素的含量。
4.气相色谱法
这是一种用于测定叶绿素含量的高灵敏度方法。
首先，将待测样品中的叶绿素提取出来，并经过预处理后注入到气相色谱仪中进行分析。
气相色谱法可以准确地分离出叶绿素及其衍生物，并通过检测器测定它们的吸光度，从而计算出叶绿素的含量。
需要注意的是，不同的测定方法在操作和结果上可能存在差异，因此在进行叶绿素含量测定时应选择合适的方法，并根据具体情况进行校正和修正。
总之，准确测定叶绿素含量对于研究植物的生长和光合作用具有重要意义。
通过选择合适的方法并进行准确的操作，可以获得可靠的叶绿素含量数据，为相关研究提供有力的支持。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法有多种，下面列举几种常用的方法：
1. 酸醇提取法：将待测样品中的叶绿素提取到酸醇溶液中，然后用紫外可见分光光度计测定其吸光度，根据叶绿素和酸醇溶液之间的摩尔吸光系数，计算出叶绿素的含量。
2. 差示吸光度法：将待测样品中的叶绿素提取到有机溶剂中，然后用紫外可见分光光度计分别测定样品在630 nm和680 nm两个波长下的吸光度差，再根据已知浓度的标准曲线进行计算。
3. 荧光法：通过叶绿素在受激发时发射的荧光进行测定。
将待测样品中的叶绿素悬浮于缓冲溶液中，用荧光分光光度计测定其发射光谱，根据标准曲线计算叶绿素的含量。
4. 高效液相色谱法（HPLC）：将待测样品经过酸醇提取或其他方式提取叶绿素，然后用高效液相色谱进行分离和定量分析。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据实际的研究目的和实验条件来确定。
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常用样品分析方法——可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量测定
一、可溶性糖和淀粉含量的测定方法
可溶性糖和淀粉含量的测定方法为硫酸---蒽酮比色法。
测定原理为：淀粉是由葡萄糖残基组成的一类多糖物质，在酸性条件下加热可使其水解成单糖葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，单糖葡萄糖可以脱水生成糠醛或羟甲基糠醛类化合物，然后利用蒽酮试剂与糠醛化合物反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，即可比色进行定量测定。
测定步骤如下:
1. 标准曲线的制作
1.1 100ug/ml葡萄糖标准液的配制
将分析纯葡萄糖在80℃下烘干，用0.0001g分析天平精确称取1g葡萄糖，转入50ml烧杯中，然后加入少量蒸馏水搅拌溶解，接着将溶解液转入100ml容量瓶，然后再往烧杯中加入少量蒸馏水润洗，最后将润洗液转入上述100ml容量瓶，重复上述润洗操作三次(注意溶解液和三次润洗液的体积总和控制在80ml 以内，以免超过容量瓶量程)，然后定容至容量瓶刻度线，塞上塞子，上下颠倒5次以，得到10mg/ml的葡萄糖溶液｡用移液枪吸取1ml葡萄糖标准液转入100ml 容量瓶，定容至刻度线，所得溶液即为100ug/ml的葡萄糖标准溶液。
1.2蒽酮乙酸乙酯试剂的配制
用0.0001g分析天平精确称取分析纯蒽酮1g溶于50ml乙酸乙酯试剂中，贮藏于棕色瓶中，置于黑暗中保存｡
1.3标准曲线制作
编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
12
100ug/ml葡萄糖溶液(ml) 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
蒸馏水ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8
稀释液葡萄糖浓度（ug/ml）0
10 20 30 40 50 60
注:1 2为一个重复，以此类推｡
取13支20ml试管并分别编号为0-12，按照上表加好相应体积的葡萄糖溶液与蒸馏水并混匀后，再依次向每支试管中分别加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，加入浓硫酸时要缓慢以免反应过快液体飞溅，然后小心震荡，将试管放入沸水浴(100℃)1min，取出后自然冷却至室温，以编号为0的试管为空白对照，于620nm波长处测定吸光值，然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值（OD 值）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，并拟合出方程（R2=0.99）。
本研究所有指标测量所用分光光度计均为岛津UV2600（SHIMADZU UV2600）。
2. 样品可溶性糖及淀粉含量测定
a．可溶性糖的提取：用0.0001g分析天平准确称取20mg干燥待测样品粉末于10ml离心管中，加入80%乙醇5ml，然后于80℃水浴锅中提取30min 后取出，冷却至室温后放入离心机中（2000r，10min），然后吸取上清液至另一干净的10ml离心管中，并加蒸馏水容至10ml，此溶液即为可溶性糖提取液。
b．淀粉的提取：向a中10ml离心管的残渣中加入1ml蒸馏水，摇匀后置于沸水中15min进行糊化，取出冷却至室温，再加入3ml 9.2mol/L高氯酸(约取78ml高氯酸，加蒸馏水定容至100ml)，搅拌均匀，提取15min后吸出提取液加蒸馏水定容至10ml，此溶液即为淀粉提取液。
c．显色反应：分别吸取上述a, b步骤中样品提取液0.5ml于20ml具塞玻璃试管中，再加入蒸馏水1.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂0.5ml、浓硫酸5ml，塞上塞子后充分摇匀，将试管放入沸水浴1min。
空白对照用2ml 蒸馏水和
0.5ml 蒽酮试剂反应液，再缓缓加入5ml浓硫酸，然后一起置于沸水浴1
min。
取出自然冷却到室温，然后于620nm波长下测定吸光值｡
3. 样品可溶性糖及淀粉含量的计算
可溶性糖含量(%)=
（步骤2a所测吸光值可用于计算样品中可溶性糖含量）
淀粉含量（ug）=还原糖(ug)×0.9
(步骤2b所测吸光值可用于计算由淀粉还原而来的可溶性糖含量) 样品中淀粉含量百分比（%）=
二、总酚含量的测定
福林酚法测定植物叶片中总酚含量。
此方法的化学原理是：多酚与FoLin-CiocaLteu试剂发生特异性反应，反应产物对特定波长的有最大吸收，且吸光值与多酚的量在一定浓度范围内成线性关系。
先以标准酚类物质建立标准曲线，再测定待测样品吸光值，据此可求出待测样品中多酚的含量。
测定步骤如下：
1、标准曲线的制作
1.1 1mg/ml单宁酸标准液的配制
用0.0001g分析天平准确称取0.1g单宁酸（Sigma公司，美国）放入烧杯中并加入约30ml纯水，充分搅拌使单宁酸溶解，然后把溶液转移到100ml容量瓶，再将烧杯用纯水润洗三次（润洗液体积总和注意不要高于50ml以免超出容量瓶量程），并把全部润洗液转入上述容量瓶中，定容，塞上塞子并上下颠倒五次摇匀，所得溶液即1mg/ml的单宁酸标准液，备用。
1.2 7.5%碳酸钠溶液的配制
用0.0001g分析天平准确称取7.5g碳酸钠粉末放入烧杯中，并加入30ml左右的蒸馏水，然后用玻璃棒充分搅拌使其溶解，将溶解液转入100ml容量瓶内，然后再用蒸馏水将烧杯润洗三次（注意控制三次润洗液体积总和在50ml以内，以免超出容量瓶量程），并将全部润洗液转入上述100ml容量瓶，充分震荡后定容，塞上塞子并上下颠倒五次使其均匀，备用。
1.3标准曲线制作
编号 1 2 3 4 5 6 7
单宁酸标准液（ml）0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
蒸馏水（ml） 2 1.99 1.98 1.97 1.96 1.95 1.94
0 5 10 15 20 25 30
稀释液单宁酸浓度
（ug/ml）
取7支具塞玻璃试管分别编号1-7，按照上表依次加入对应体积的单宁酸标准液和蒸馏水，摇匀后立即往每支试管中加入0.5ml福林酚试剂和1.5ml 7.5%碳酸钠溶液。
塞上塞子摇匀后放置于80℃水浴锅中水浴十分钟，以编号为0的试管为空白对照，在750nm波长下测定吸光值，并以单宁酸浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制单宁酸标准曲线，并拟合出方程（R2=0.99）。
2 样品总酚含量的测定
2.1 植物叶片中总酚的提取
将植物叶片放置于40℃烘箱中三天至恒重，然后置于-20℃冰箱中冷冻保存。
测定总酚前再于40℃下烘干半天，然后在研钵中研磨成粉末。
用0.0001g分析天平准确称取8-10 mg样品粉末放于2ml Eppendorf管中，加入1.5 ml 80%的丙酮，然后将Eppendorf管平放在纸盒内，黑暗提取6小时后，3500r/min离心10分钟，将上清液转入另一个2ml Eppendorf管，保存于4℃冰箱。
残余物再次加入1ml 80%丙酮，黑暗提取6小时，3500r/min离心10min后合并两次的上清液，即为提取液（该提取液包含总酚类及其他一些在750nm波长下能够显色的物质）。
2.2 PVPP空白的制作
取上述提取液1 ml于已经加入35mg PVPP（polyvinylpolypyrrolidone）(Sigma
公司，美国)的2ml Eppendorf管中作PVPP空白（PVPP 在酸性或者中性条件下才有效结合为酚类为不溶），在4℃冰箱中保存过夜。
2.3显色反应
取两支试管，分别加入0.5ml 非PVPP提取液和PVPP空白液，再分别加入1.5ml蒸馏水，然后立刻加入0.5ml的Folin-Ciocalteau 试剂(鼎国，中国) 和1.5 ml 7.5%碳酸钠溶液，在80℃水浴锅中显色10分钟，取出，冷却至室温，以蒸馏水为空白，用UV2600分光光度计（SHIMADZU, Japan）在750nm处测定显色液的吸光值。
用非PVPP提取液的吸光度值减去PVPP空白吸光值既为样品中总酚含量的吸光值。
然后将吸光值代入单宁酸标准曲线，求出样品中总酚的含量。
三、叶绿素含量的测定
（1）色素提取液的制备：
取新鲜植株叶片3-5片，洗净擦干后去除主叶脉，剪碎，然后用0.0001g分析天平准确称取0.1g新鲜叶片放入10mL离心管中，再加入10ml 80%丙酮放置于不透光的盒子里黑暗提取36-48h至色素全部被提出，叶片组织呈白色。
然后低速离心1min，小心抽取上清液即为色素提取液，待测。
（2）测定吸光度：先将比色皿用蒸馏水润洗两次，然后倒入少量色素提取液润洗一次，再将适量色素提取液小心倒入比色皿中，倒入的提取液高度至少为比色皿高度的2/3，然后用擦镜纸将比色皿外壁及底部擦干净，放入UV2600分光光度计中。
将分光光度计波长设置为645nm和663nm两个波长，用80%丙酮做空白对照进行调零，然后分别测定色素提取液在上述两个波长下的吸光度。
（3）叶绿素含量计算：将提取液在645nm和663nm波长处测得的吸光值带
入下列公式中，即可算得叶绿素a和叶绿素b的浓度（mg/L）及相对含量（mg/g）：叶绿素a = 12.7×A663 - 2.69× A645；
叶绿素b = 22.9×A645 - 4.68×A663
叶绿素含量（mg/g）= C×V / (A×1000)
其中：A663，A645分别为663nm及645nm处的吸光值；C为叶绿素浓度（mg/L）；V 为提取液总体积（10ml）；A 为取样鲜重（0.1g）。