红景天属植物根中红景天苷及其苷元酪醇含量的HPLC分析

双菌株协同发酵提高红景天中苷和酪醇含量的研究

时珍国医国药２０１０年第２１卷第１期ＬＩＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤ１ＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２０１０ＶＯＬ．２１　ＮＯ．１　双菌株协同发酵提高红景天中苷和酪醇含量的研究　宋伟舟，孙剑峰，刘玉应，冯　敏，蒋春，邓小晨　（四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川成都６１００６４）　摘要：目的从已分离的具有红景天苷转化能力的霉菌中，筛选能协同发酵红景天苷的双菌株组合。方法以重氯盐比色　法初步确定菌株组合和双菌株协同主要发酵条件，并用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法复筛。结果选出的最优双菌株组合编　号为３５—４２，该组合在最优发酵条件下，发酵后红景天中红景天苷和酪醇含量比原药材分别提高８６．２９％和ｌ１８．１４％，总　有效成分提高９４．６８％。结论表明双菌株的协同转化作用明显优于单菌株。　关键词：双菌株发酵；　红景天苷；　酪醇；　重氮盐．比色法；　高效液相色谱　中图分类号：Ｒ２８３．１　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００８－０８０５（２０１０）０ｌ－０１５６－０３　红景天为景天科（Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｅ）红景天属Ｒｈｏｄｉｏｌａ　ｃｒｅｎｕｌａｔａ　Ｈｏｏｋ．ｆ　ｅｔ　Ｔｈｏｒｎｓ植物的根及根茎　，我国红景天资源大多分布　在高寒地区。其有效成分主要是红景天苷及其苷元一酪醇，二者　均具有抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射、抗病毒、抗肿瘤等作用。红　景天制品是抗高原反应的必备品。随着红景天产品广泛开发和　应用，过度采挖使天然资源日趋枯竭　，对高原藏区生态环境的　破坏严重。因此，保护性开发野生资源，提高红景天有效利用率　显得更加重要。在其他一些植物药材中，苷是从无活性的苷元脱　去糖基获得的，可以采用酸解或酶法来水解糖基，简便易行。与　之不同，红景天苷和苷元生成是合成代谢，其前体来源不太清楚，　从而造成提高其有效成分研究的难度。目前已有的研究主要包　括：添加前体物和酶催化剂合成红景天苷、化学合成法　、植物　细胞组织培养和基因克隆等方法　’’，但与应用还有不小距离。　文章在前期研究中，已分离到对红景天苷具有转化能力的菌株，　通过单一菌株发酵，最高可使红景天原药材中苷含量提高　５２，８３％。本研究进一步采用双菌株协同发酵红景天，使其中苷　含量大大高于单一菌株发酵。混合菌株发酵提高红景天苷和酪　醇含量研究还未见报道，为利用生物技术提高野生藏药材资源利　用率提供新途径。　１材料　红景天购于成都五块石药材市场，经四川大学生命科学学院　许介眉教授鉴定系景天科（Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｅ）红景天属Ｒｈｏｄｉｏｌａ　ｃＦｅ—　ｎｕｌａｔａ　Ｈｏｏｋ．ｆ．ｅｔ　Ｔｈｏｒｎｓ。菌种：本实验室保存，除２号为米曲霉　外，其余菌株均为黑曲霉。培养基：红景天发酵培养基：红景天粉　与水以Ｉ：１０的比例。固体种子培养基：麸皮：水＝１：１。液体　种子培养基：麸皮：水＝１：５，煮沸２０　ｒａｉｎ，过滤，取滤液，加Ｍｇ—　ＳＯ４　０．０５％，ＫＨ２ＰＯ５　０．１％，（ＮＨ４）２ＳＯ４　０．１％。试剂：酪醇标准　品、红景天苷标准品均购于成都思科华有限责任公司，甲醇为一　级色谱纯。　２方法　２．１培养方法　２．１．１　孢子悬液制备将菌株接种于固体种子培养基，３０℃培养　４８　ｈ，加水洗下孢子，稀释至孢子浓度约１０　个／ｍｌ。　２．１．２　菌丝体制备按０．１％接种量将孢子悬液接人液体种子　培养基，３０℃，２００　ｒ／ｒａｉｎ，时间４８　ｈ。　收稿日期：２００９－０４．１０；修订日期：２００９－０７－２３　基金项目：四川省２００５年科技攻关项目（Ｎｏ．０５ＳＧ０ｌ１一ｌ９）　作者简介：宋伟舟（１９８２一），男（汉族），河北保定人，现为四川大学生命科　学学院２００６级在读硕士研究生，主要从事微生物发酵中药的研究工作．　通讯作者简介：邓小晨（１９５４．），男（汉族），四川成都人，现任四川大学　生命科学学院副教授，学士学位，主要从事工业微生物的研究工作．　・１５６・　２．１．３红景天发酵培养３０％，２００　ｒ／ｒａｉｎ，时间为２～４　ｄ。　２．２提取方法红景天发酵液用７５％的乙醇按照１：８的比例　分别提取３次，合并滤液，得到发酵提取液，用于重氮盐比色法测　定和ＨＰＬＣ检测。　２．３测定方法　２．３．１　重氮盐比色法　取发酵提取液５　ｍ１，加人１０％的醋酸　铅５　ｍｌ和饱和硫酸钠２　ｍｌ，定容至２５　ｍｌ，沉淀、离心，取上清液５　ｍｌ于２０　ｍｌ比色管中，其中加２％碳酸钠３　ｍｌ及重氮化试剂３　ｍ１，摇匀显色５　ｒａｉｎ，再加５％氢氧化钠０．５　ｍｌ，显色１５　ｒａｉｎ，整个　过程在４ｑ２以下进行，稀释ｌ０倍，在４８９　Ｄｉｎ波长下测定吸光度。　以吸光度高低作为总有效成分（苷和酪醇的总量）的初筛指标。　２．３．２　ＨＰＬＣ检测　色谱条件：岛津Ｌｃ一６Ａ高效液相色谱仪；　色谱柱为ＹＷＭ—Ｃ　（１Ｏｕ）２００　１１１１１×４．６　ｍｉｌｌ；流动相为　（甲醇）：　（高水）：２５：７５；检测波长２７５　ｉｌｍ；自然ｐＨ；柱温为室温；进样　量：２Ｏ　ｌ；流速１．０　ｍｌ・ｒａｉｎ～。精密称取红景天苷、酪醇标准品　２５．Ｏ０　ｍｇ，分别置于２５　ｍ１的容量瓶中，无水乙醇溶解定容，制成　浓度为１．００　ｍｇ・ｍ１。‘的标准品，取苷标准品溶液进样２，４，６，８，　１０，１２　１，酪醇标准品溶液进样ｌ，２，３，４，５，６　ｐ，ｌ，测定峰面积，以　峰面积（Ｙ）与对照液中红景天苷和酪醇的质量（　ｇ）作回归计　算，得到标准曲线。发酵产物中红景天苷和酪醇的含量测定按以　上条件进行。　３结果　３．１　双菌株初筛在本研究前期的菌株筛选工作中，已对重氮盐　比色法和ＨＰＬＣ进行对比测定，证明重氮盐比色法测定红景天总　有效成分的结果，与ＨＰＬＣ测定值有较好的相关性（另文发表）。　从已分离到的微生物中，选出发酵能力较高的８株霉菌，两两组　合，接种于红景天发酵培养基中进行混合菌株发酵，并与单菌株　发酵比较。结果见表ｌ和图１。　表１　双菌株发酵红景天总有效成分测定　吸光度　吸光度　吸光度　对照　０．３１０　２—３５　０．４２６　２～４２　０．３３ｌ　２　０．４１０　２—４３　０．３４６　４２—４９　０．３５８　３５　０　４０９　２—４８　０．４ｌＯ　４３—４８　０．３９０　４２　０．３１８　２—４５　０　２８９　４３——４９　０．３９０　４３　０．４Ｉ３　２—４９　０．５６５　４８—４９　０．３３８　４８　０．３０６　３５～４２　０．６４９　２—４４　０．２９５　４９　０．３２０　３５～４３　０．３９７　３５—４４　０．３８３　４４　０．４２７　３５～４８　０．３ｌＯ　４２—４４　０．３５４　４５　０．３２１　３５—４９　０．３９９　４３—４４　０．３３ｌ　４２～４３　０　３６５　４４—４８　０．４３６　４２～４８　０．６２３　４４—４９　０．５４２　

双菌株协同发酵提高红景天中苷和酪醇含量的研究 2

双菌株协同发酵提高红景天中苷和酪醇含量的研究

【摘要】目的从已分离的具有红景天苷转化能力的霉菌中，筛选能协同发酵红景天苷的双菌株组合。方法以重氮盐比色法初步确定菌株组合和双菌株协同主要发酵条件，并用高效液相色谱(HPLC)法复筛。结果选出的最优双菌株组合编号为35-42，该组合在最优发酵条件下，发酵后红景天中红景天苷和酪醇含量比原药材分别提高86.29%和118.14%，总有效成分提高94.68%。结论表明双菌株的协同转化作用明显优于单菌株。

【关键词】双菌株发酵；红景天苷；酪醇；重氮盐比色法；高效液相色谱

红景天为景天科（Crassulaceae）红景天属Rhodiola crenulata

Hook.f.et Thoms植物的根及根茎［1］，我国红景天资源大多分布在高寒地区。其有效成分主要是红景天苷及其苷元-酪醇，二者均具有抗缺氧、抗疲劳、抗微波辐射、抗病毒、抗肿瘤等作用。红景天制品是抗高原反应的必备品。随着红景天产品广泛开发和应用，过度采挖使天然资源日趋枯竭［2］，对高原藏区生态环境的破坏严重。因此，保护性开发野生资源，提高红景天有效利用率显得更加重要。在其他一些植物药材中，苷是从无活性的苷元脱去糖基获得的，可以采用酸解或酶法来水解糖基，简便易行。与之不同，红景天苷和苷元生成是合成代谢，其前体来源不太清楚，从而造成提高其有效成分研究的难度。目前已有的研究主要包括：添加前体物和酶催化剂合成红景天苷、化学合成法［3］、植物细胞组织培养和基因克隆等方法［4，5］，但与应用还有不小距离。文章在前期研究中，已分离到对红景天苷具有转化能力的菌株，通过单一菌株发酵，最高可使红景天原药材中苷含量提高52.83%。本研究进一步采用双菌株协同发酵红景天，使其中苷含量大大高于单一菌株发酵。混合菌株发酵提高红景天苷和酪醇含量研究还未见报道，为利用生物技术提高野生藏药材资源利用率提供新途径。

红景天中含红景天苷量的测定

郑玥，凌雪宇，刘文亮，裴福成

【摘要】为建立一个稳定可靠分离度好的方法测定红景天中含红景天苷的量.采用高效液相色谱法，色谱柱为BDS HYPERSIL-C18(4.6 mm×250 mm，5

μm)；以乙腈-0.03%磷酸为流动相进行梯度洗脱；流速1.0 mL/min；检测波长275 nm；柱温30 ℃.结果表明，红景天苷的进样量在1.25～10 μg范围内有良好的线性关系，平均回收率为98.16%，RSD为0.89%.该方法准确、可靠、分离度好，可用于红景天的质量评价.

【期刊名称】哈尔滨商业大学学报（自然科学版）

【年(卷),期】2014(000)005

【总页数】3

【关键词】红景天；红景天苷；高效液相色谱；梯度洗脱

【文献来源】https:///academic-journal-cn_journal-harbin-university-commerce-natural-sciences-edition_thesis/0201249678492.html

红景天为景天科植物大花红景天(Rhodiola crenulata H.Ohba)的干燥根和根茎[1].红景天的主要药效成分为红景天苷及其苷元酪醇、没食子酸及其苷类、黄酮类、草质素及其苷类等.在我国，红景天主要分布在西藏、四川、云南、新疆、青海、陕西等省份高山地区[2].红景天素有“高原人参”，“雪山仙草”等美称，具有滋补强壮、抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、延缓衰老、抗癌等作用[3].红景天的有效成分为红景天，本实验采用梯度洗脱的方法，能准确测定出红景天中含红景天苷的量[4-6]，分离度好.

1 仪器与试药 Agilent1100系列高效液相色谱仪(UVW检测器，四元泵，自动进样)，KQ-1000B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，METTLER AE240电子天平.

红景天(大花红景天产地：西藏)，红景天苷对照品(批号：110818-201005，中国药品生物制品检验所)；乙腈，磷酸均为色谱纯，水为纯化水.

不同产地红景天药材中红景天甙含量的测定

罗晓;杨庆雄;刘绣华;张颖君;杨崇仁

【期刊名称】《化学研究》

【年(卷),期】2006(17)3

【摘要】以红景天甙含量为指标建立了红景天药材的HPLC定量分析方法.色谱条件:C18柱(250 mm×4.6 mm, 25 μm),甲醇-乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长为275 nm.该法灵敏度高,重现性好.利用本方法对六种不同产地红景天药材中红景天甙的含量进行了分析比较.结果表明,产地不同,红景天甙的含量差别很大,其中以云南丽江地区产的含量最高.

【总页数】3页(P83-84,97)

【作者】罗晓;杨庆雄;刘绣华;张颖君;杨崇仁

【作者单位】中国科学院,昆明植物研究所,云南,昆明,650204;河南大学,化学化工学院,河南,开封,475001;云南云药实验室有限公司,云南,昆明,650032;河南大学,化学化工学院,河南,开封,475001;中国科学院,昆明植物研究所,云南,昆明,650204;中国科学院,昆明植物研究所,云南,昆明,650204

【正文语种】中文

【中图分类】R284.2

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HPLC法测定复方红景天制剂中红景天苷的含量

葛华;辛益妹;詹皓;白霜;王永新;李莺

【期刊名称】《解放军药学学报》

【年(卷),期】2012(028)002

【摘要】目的建立HPLC法测定复方红景天制剂中红景天苷的含量.方法色谱柱:Purospher star RP C18 (4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水-甲酸(8∶92∶0.05),流速:1.0 mL/min,检测波长:277 nm.结果红景天苷在1～10 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998),加样回收率为99.85％,RSD为3.0％(n=6).结论该法简便、准确、灵敏度高、重复性好,可作为控制复方红景天制剂质量的方法.%Objective To establish an HPLC method for determination of

salidroside in Compound Rhodioside. Methods The separation was

performed on Purospher star RP C18(4.6 mm × 250 mm,5 n,m)with a

mobile phase of acetonitrile and water and formic acid(8: 92 : 0. 05 ) at a

flow rate of 1.0 ml/min. The UV detection wavelength was 277 nm. Results

The linear range of rhodioside was 1-10 μg( r =0. 9998). The recovery was

99. 85% , and RSD was 3.0% ( n =6). Conclusion This method is simple,

accurate, sensitive with good reproducibility, which can be used for quality

HPLC法测定红景天饮料中红景天苷的含量

杨晓艳;芦启琴;沈建伟;王环;张晓峰

【期刊名称】《天然产物研究与开发》

【年(卷),期】2009(021)B05

【摘要】本文采用HPLC法测定红景天饮料中红景天苷的含量。应用Thermo—C18（4．6mm×200mm，5μm）色谱柱，以甲醇：水（15：85）为流动相进行检测，流速1．0mL/min，检测波长275nm，柱温25℃。结果显示红景天苷的线性范围为1．16-5．80μg；平均回收率为98．53％（RSD=1．00％）。提示该方法可用于红景天饮料中红景天苷的含量测定。

【总页数】3页(P138-140)

【作者】杨晓艳;芦启琴;沈建伟;王环;张晓峰

【作者单位】中国科学院西北高原生物研究所,西宁810008;中国科学院研究生院,北京100049

【正文语种】中文

【中图分类】Q946.91

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红景天注射液中红景天苷和酪醇的定性定量分析

杨婷嫒;李三鸣;李红菊;何媛

【期刊名称】《中成药》

【年(卷),期】2007(029)012

【摘要】目的:建立红景天注射液中的红景天苷和酪醇的定性定量分析方法.方法:采用薄层色谱法对红景天注射液中的红景天苷和酪醇进行鉴别:采用高效液相色谱法对红景天苷和酪醇进行含量测定.结果:薄层鉴别斑点清晰,重现性好.高效液相色谱法测定红景天苷和酪醇的平均回收率分别为97.6%和99.1%(n=5),RSD分别为1.10%和2.69%.结论:本实验所建立的分析方法简便,灵敏,可靠,可作为红景天注射液中红景天苷和酪醇的定性定量分析方法.

【总页数】3页(P1789-1791)

【作者】杨婷嫒;李三鸣;李红菊;何媛

【作者单位】沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016;沈阳药科大学,辽宁,沈阳,110016

【正文语种】中文

【中图分类】R927.2

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HPLC法测定景天虫草含片红景天苷的含量

李普衍;韩晓萍;魏玉海

【期刊名称】《陕西中医》

【年(卷),期】2006(027)008

【摘要】目的:建立HPLC法测定藏成药景天虫草含片红景天苷的含量.方法:采用C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm),甲醇-水(14:86),流速1.0 mL/min,检测波长225 nm.结果:红景天苷在0.108～0.54μg范围内,线性关系良好(r=0.9999),加样平均回收率为99.2%,RSD=0.52%(n=6).提示:该方法回收率好,精密度、重现性高,样品处理简单,分析快速.

【总页数】2页(P1003-1004)

【作者】李普衍;韩晓萍;魏玉海

【作者单位】青海省药品检验所,810000;青海省药品检验所,810000;青海省药品检验所,810000

【正文语种】中文

【中图分类】R2

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HPLC法测定不同溶剂对红景天中红景天苷提取率的影响

杨晓艳;芦启琴;张晓峰

【期刊名称】《分析试验室》

【年(卷),期】2008(0)S1

【摘要】建立用HPLC法测定甲醇、乙醇、水等不同溶剂对红景天苷提取率的影响。采用Thermo-C18(4.6 mm×200 mm,5μm)为色谱柱,V(甲醇)∶V(水)=12∶88为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长275 nm,柱温20℃。红景天苷的线性范围为1.74~6.38μg;平均回收率为99.24%(RSD=1.4%)。所建立的HPLC法可用于测定不同溶剂对红景天苷提取率的影响。

【总页数】3页(P295-297)

【关键词】红景天苷;HPLC;溶剂;提取率

【作者】杨晓艳;芦启琴;张晓峰

【作者单位】中国科学院西北高原生物研究所

【正文语种】中文

【中图分类】TQ461

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高山红景天主根与侧根中红景天甙的含量分析

郭义明

【期刊名称】《中国药业》

【年(卷),期】1999(008)004

【摘要】红景天是新一代环境适应药物，其研究及应用日趋广泛。红景天甙是红景天发挥致适应作用的主要有效成分。本文从红景天合理应用角度出发，采用水醇法提取红景天甙、紫外分光光度法测定红景天甙含量，研究分析高红景天主根与侧根中红景天甙含量差异。结果显示，高山红景天的红景天甙含量主根是1.02％(g／g)，侧根是0.79%(g／g)，主根与侧根含量有明明显差异。这一结论为高山红景天的加工生产和有效利用提供了依据。

【总页数】1页(P27)

【作者】郭义明

【作者单位】吉林省干部疗养院130012

【正文语种】中文

【中图分类】R282.71

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