氨基酸的纸层析
氨基酸的纸层析法实验报告
氨基酸的纸层析法实验报告1. 引言嘿，朋友们，今天咱们来聊聊氨基酸的纸层析法。
这可不是一杯简单的饮料，而是一个神奇的科学实验，听起来很高大上，但其实也没那么复杂。
氨基酸嘛，就是咱们身体里蛋白质的小砖块，没了它们，咱们就像没有基础的房子，摇摇欲坠。
通过纸层析法，我们可以把这些小家伙分开，看看它们到底有多丰富多彩。
准备好了吗？让我们一起开启这段有趣的科学之旅吧！2. 实验材料与方法2.1 材料准备首先，咱们得准备一些实验材料。
这可不能马虎。
需要的东西有：氨基酸标准品，纸层析纸，移动相（比如水和乙醇的混合液），还有一根小刷子，嘿，别问我为啥，刷子可不是用来洗碗的哦！还有，一些试管和显色剂，听上去是不是有点像魔法工具？其实，科学就是这样的，越简单越好，咱们不需要搞得像厨房做大菜那么复杂。
2.2 实验步骤接下来，咱们就进入到实验步骤了。
首先，取一小块纸层析纸，在上面标记好氨基酸的起始点。
然后，取一点氨基酸溶液，用刷子沾取，轻轻一抹，别太用力，不然纸层析纸可受不了哦。
接着，把纸条放进盛有移动相的容器里，嘿，这时候你可以等着看好戏了。
移动相会慢慢爬上纸条，把氨基酸分开，像魔术一样！你可得耐心等，别心急，科学可不是速食面，得慢慢来。
3. 实验观察与结果分析3.1 观察结果时间一到，你会看到纸条上出现了一道道五颜六色的条纹，就像调色板上的颜料一样，哇，这个时候真的是太激动了！每种颜色代表着一种氨基酸，它们就像在纸上跳舞，简直让人看得目不暇接。
不同的氨基酸会有不同的移动速度，有的懒洋洋的，有的则飞快跑了。
这就是化学世界的魅力所在，真是让人惊叹不已！3.2 数据分析不过，光看颜色可不够，咱们还得做点数据分析。
通过测量每种氨基酸的迁移距离，咱们可以计算出它们的Rf值。
Rf值就像是氨基酸的身份证，能告诉我们它们的特性。
这时候，可能会有人问：“这些数据有啥用啊？”别急，科研可不是一蹴而就的，咱们通过这些数据，可以进一步研究氨基酸的结构和功能，这可是生物化学的基础呢。
氨基酸纸层析实验报告
氨基酸纸层析实验报告
目录
1. 概述
1.1 氨基酸层析原理
1.1.1 纸层析技术
1.1.2 氨基酸分离原理
1.2 实验材料和仪器
1.3 实验步骤
1.4 结果与分析
1.5 实验应用和意义
概述
在本实验中，我们将探讨氨基酸纸层析实验，通过这项实验来了解氨
基酸的分离原理以及纸层析技术的应用。
氨基酸层析原理
纸层析技术
纸层析技术是一种常用于分离物质混合物的方法，基于不同物质在纸
上移动的速度不同而实现分离的原理。
氨基酸分离原理
氨基酸具有不同的疏水性和亲水性，因此在纸层析过程中会根据它们
与试剂液之间的相亲和力不同而移动的速度有所不同，从而实现分离。
实验材料和仪器
本次实验所需材料包括：氨基酸样品、纸层析试纸、显色剂等。
实验
所用仪器主要有吸管、显微镜等。
实验步骤
1. 在纸层析试纸上加载混合的氨基酸样品。
2. 将试纸放入显色剂中进行显色反应。
3. 观察试纸上氨基酸斑点的分离情况。
结果与分析
根据实验结果可以得出各个氨基酸在纸层析试纸上的分离情况，进而分析其性质和相互作用。
实验应用和意义
氨基酸纸层析实验在生物化学和医学领域有着重要的应用价值，可以帮助科研人员了解氨基酸之间的关系和性质，为后续的实验研究提供参考依据。
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
【三、器材与试剂】
【三、器材与试剂】 器材： 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 试剂： 1、扩展剂 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液 及它们的混合液
显色： 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
计算Rf值
【五、实验结果与分析】
【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验 ： 实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应
值 日 生 值 日
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小实验
当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情…
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可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。
这就是纸色谱法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。
实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】
【二、实验原理】
层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
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固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告一、实验目的1、掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和操作方法。
2、学习如何根据氨基酸在层析纸上的迁移率（Rf 值）来鉴定氨基酸。
二、实验原理纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作为固定相，而有机溶剂作为流动相。
当有机相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相之间进行分配。
由于不同的氨基酸在两相中的分配系数不同，导致它们在滤纸上的迁移率不同，从而实现分离和鉴定。
Rf 值（比移值）是氨基酸在层析中的特征值，计算公式为：Rf ＝溶质移动的距离／溶剂移动的距离。
三、实验材料与仪器1、实验材料标准氨基酸溶液：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。
混合氨基酸溶液。
展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝ 4:1:5（体积比）。
显色剂：025%茚三酮溶液。
2、实验仪器层析缸。
毛细管。
喷雾器。
烘箱。
直尺。
四、实验步骤1、准备滤纸选用一张大小合适的滤纸，在距底边 2cm 处用铅笔轻轻画一条横线，作为起始线。
2、点样用毛细管分别吸取标准氨基酸溶液和混合氨基酸溶液，在起始线上轻轻点样，每个点的直径不超过 2mm，点样后自然风干。
3、层析将滤纸垂直放入装有展开剂的层析缸中，滤纸下端浸入展开剂约1cm，注意滤纸不要与缸壁接触，盖上盖子，进行层析。
当展开剂前沿上升至距滤纸顶端约 1cm 时，取出滤纸，用铅笔标记展开剂前沿的位置，自然风干。
4、显色用喷雾器将显色剂均匀地喷在滤纸上，放入烘箱中，在 80℃左右烘 5 10 分钟，直至斑点显色清晰。
五、实验结果与分析1、测量并计算 Rf 值用直尺分别测量标准氨基酸和混合氨基酸斑点中心到起始线的距离（a）以及展开剂前沿到起始线的距离（b），计算 Rf 值。
2、结果分析根据计算得到的 Rf 值，对照标准氨基酸的 Rf 值，鉴定混合氨基酸溶液中的成分。
六、注意事项1、点样时要避免毛细管的尖端刺破滤纸，且点样量要适中，过多会导致斑点扩散，影响分离效果。
纸层析法分离鉴定氨基酸
纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法是一种常用的分离和纯化化学物质的实验方法，被广泛应用于有机合成、生物化学和食品科学等领域。
本文将介绍纸层析法在氨基酸分析中的应用。
一、实验原理氨基酸的分离和鉴定是生物化学实验中常用的手段。
氨基酸分子中含有羧基和氨基，可以通过纸层析法实现其分离。
纸层析法是一种基于物质分子间不同的吸附性能而进行分离的方法。
在纸层析实验中，将试样涂在纸层析片（通常为滤纸）的一侧，并将其放入溶剂（通常为水、丙酮、甲醇等）中，溶剂会沿纸层析片向上移动，分离出不同物质组分。
氨基酸分子的羧基和氨基分别具有不同的亲水性和疏水性，因此在纸层析分离中会表现出不同的吸附行为。
例如，疏水性较强的疏水基团会被生物样品或溶剂吸附，从而较慢地从纸层析片上移动，这些氨基酸通常出现在较高位置；而亲水性较强的羧基团则会被水吸附，因此移动速度较快，这些氨基酸通常出现在较低位置。
二、实验步骤1、制备样品：取大约1mg的氨基酸标准品或被测样品，加入1mL的去离子水中，并轻轻搅拌，制成1mmol/L的溶液。
2、制备纸层析片：取一张长约50cm的滤纸，将其叠成4层，然后将中间部分剪成30cm的长条，每条的宽度为1cm左右，用铅笔在底部标记出位置，离开1cm到1.5cm的距离。
3、涂样：在每个标记位置上滴加不同氨基酸溶液，每次加约5µL。
所有样品均按照氨基酸的相对极性从小到大进行涂样，从左到右编号，以便于鉴定。
4、溶剂选择：选择一种适宜的溶剂，通常为水、丙酮、甲醇等。
将滤纸上端放入溶剂中，约1cm左右的位置即可。
5、开始实验：用三角架和夹子将滤纸张贴在玻璃板上，使其呈现较小的倾斜面。
在滤纸的底部悬挂一张白纸，以便于观察样品在纸层析上的位置变化。
待溶剂无法再升高时，实验结束。
6、结果读取：按照行（从上到下）顺序，观察样品的移动距离。
三、实验结果及分析纸层析法可以分离并识别出存在于试样中的氨基酸分子，在实验中，通过观察样品从纸层析片底部开始向上移动的情况，可以确认每个氨基酸的相对位置和含量。
氨基酸的纸层析一、实验目的1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和...（1）
氨基酸的纸层析一、实验目的1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。
2.学习纸层析法的操作技术，分析未知样品氨基酸的成分。
二、实验原理用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法，它是分配层析法的一种。
纸层析所用的展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成。
滤纸纤维的—OH 基的亲水性基团，可吸附有机溶剂中的水作为固定相，有机溶剂作为流动相，它沿滤纸自下向上移动，称为上行层析；反之，使有机溶剂自上而下移动，称为下行层析。
将样品点在滤纸上进行展层，样品中的各种氨基酸即在二相中不断进行分配，由于它们各自的分配系数不同，故在流动相中移动速率不等，从而使不同的氨基酸得到分离和提纯。
纸层析法主要是依据混合组分对二相分配系数的差异进行分离，但亦存在着某种程度的吸附作用和离子交换现象。
氨基酸经层析在滤纸上形成距原点不等的层析点，氨基酸在滤纸上的移动速率用R f 表示。
R f = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离只要实验条件(如温度、展层溶剂的组分、pH、滤纸的质量等)不变，R f 值是常数，因此可做定性分析参考。
如果溶质中氨基酸组分较多或其中某些组分的Rf 值相同或近似，用单向层析不宜将它们分开，为此可进行双向层析，在第一溶剂展开后将滤纸转动90度，以第一次展层所得的层析点为原点，再用另一种溶剂展层，即可达到分离目的。
由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析点显色，从而定性和定量。
三、仪器和试剂仪器层析滤纸、烧杯、剪刀、层析缸、培养皿、猴头喷雾器、微量加样器或毛细管、吹风机一个、直尺、铅笔等。
试剂1.混合氨基酸溶液(水解后的氨基酸干粉)甘氨酸溶液：50mg 甘氨酸溶于5mL 水中。
蛋氨酸溶液：25mg 蛋氨酸溶于5mL 水中。
亮氨酸溶液：25mg 亮氨酸溶于5mL 水中。
氨基酸混合液：甘氨酸50mg，亮氨酸25mg，蛋氨酸25mg 共溶于5mL 水中。
2.展层溶剂碱相溶剂：正丁醇∶12%氨水∶95%乙醇= 13∶13∶13(V/V)酸相溶剂：正丁醇∶80%甲酸∶水= 15∶3∶2(V/V)，摇匀后放置半天以上，取上清液备用。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
三、实验器材
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（1）大烧杯 （2）毛细管 （3）喷雾器 （4）培养皿 （5）层析滤纸 （6）直尺、铅笔：自备。 （7）鼓风干燥箱 （8）订书机 （9）塑料薄膜 （10）小烧杯
四、实验试剂
（1）扩展剂：将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放 入分液漏斗中，与5体积水混合，充分振荡，静 置后分层，弃去下层水层。 （2）氨基酸溶液：0.5%的已知氨基酸溶液5种 （赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸 及其它们的混合液（各组分浓度均为0.5%）。 （3）显色剂：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
一、实验目的
掌握氨基酸纸层析的方法和原理，学会分析待
测样品的氨基酸成分。
二、实验原理
1、色谱分析法（简称色谱法或层析法） 色谱分析法简称色谱法或层析法。1906年，俄国植物 学家Tsweet将CaCO3放在竖立的玻璃柱中，从顶端 倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚冲洗。在 柱的不同部位形成色带，因而命名为色谱。管内填充 物称为固定相，冲洗剂称为流动相。 层析法就是利用混合物中各组分在固定相和流动相中 分配系数不同，进行反复的吸附或分配，从而达到各 组分分开的目的。
五、实验操作
检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于 干燥箱内120℃烘干。 （1）平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析 缸或大烧杯倒置于塑料薄膜上，再把盛有约20mL展层 溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料 薄膜密封起来，平衡20min。
（2）规划：带上手套，取宽约 14cm、高约22cm的层析滤纸一 张。在纸的下端距边缘2cm处轻 轻用铅笔划一条平行于底边的直 线A，在直线上做6个记号，记号 之间间隔2cm，这就是原点的位 置。另在距左边缘1cm处画一条 平行于左边缘的直线B，在B线上 以A、B两线的交点为原点标明刻 度（以厘米为单位），参见左图。
氨基酸纸层析法注意事项
氨基酸纸层析法注意事项氨基酸纸层析法是一种常用的氨基酸分析方法，它利用氨基酸在纸上的移动性差异来分离和检测不同的氨基酸成分。
在进行氨基酸纸层析实验时，需要注意以下几个方面的问题。
实验前应做好充分的准备工作。
将所需的实验器材和试剂准备齐全，包括纸层析板、氨基酸溶液、显色剂等。
同时，实验室环境应保持整洁，避免杂质的干扰。
要注意选择合适的纸层析板。
通常情况下，使用常见的纸层析板即可，但如果要分析具有特殊性质的氨基酸，如相对疏水性较强的氨基酸，可能需要选择具有更好分离能力的纸层析板。
在进行纸层析实验时，要注意溶液的制备和样品的处理。
氨基酸溶液的浓度应适当，过浓或过稀都会影响实验结果。
另外，样品的处理也很重要，应避免样品中有杂质或其他干扰物质。
实验过程中，要注意操作的细节。
将纸层析板放入溶液中前，应先用纯溶剂湿润纸层析板，避免纸层析板吸收过多的溶液。
在纸层析板上滴加样品时，要控制好滴液的量，避免溶液溢出或滴液过多导致分离效果不理想。
实验过程中要注意避光。
有些显色剂对光敏感，暴露在阳光下或强光下会导致显色剂的分解或失效。
因此，在进行显色步骤时，要避免阳光直射或强光照射。
实验完成后，要进行结果的解读和分析。
根据显色剂的显色情况，可以判断出不同氨基酸的存在与否。
但需要注意的是，显色剂的颜色可能会受到其他因素的影响，如温度、pH值等，因此要进行对照实验和结果的进一步验证。
实验结束后要做好实验台和仪器的清洗工作。
将使用过的实验器材和废液进行妥善处理，保持实验室的整洁和环保。
进行氨基酸纸层析实验时，需要注意实验前的准备工作，纸层析板的选择，溶液的制备和样品的处理，操作的细节，避免光敏感显色剂的光照，结果的解读和分析，以及实验后的清洗工作。
只有严格遵守这些注意事项，才能得到准确可靠的实验结果。
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氨基酸的纸层析
一、 实验目的
1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。
2.学习纸层析法的操作技术，分析未知样品氨基酸的成分。
二、 实验原理
用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法，它是分配层析法的一种。纸层
析所用的展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成。滤纸纤维的—OH 基的亲水
性基团，可吸附有机溶剂中的水作为固定相，有机溶剂作为流动相，它沿滤纸自
下向上移动，称为上行层析；反之，使有机溶剂自上而下移动，称为下行层析。
将样品点在滤纸上进行展层，样品中的各种氨基酸即在二相中不断进行分配，由
于它们各自的分配系数不同，故在流动相中移动速率不等，从而使不同的氨基酸
得到分离和提纯。纸层析法主要是依据混合组分对二相分配系数的差异进行分
离，但亦存在着某种程度的吸附作用和离子交换现象。氨基酸经层析在滤纸上形
成距原点不等的层析点，氨基酸在滤纸上的移动速率用Rf 表示。
Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
只要实验条件(如温度、展层溶剂的组分、pH、滤纸的质量等)不变，Rf 值是常
数，因此可做定性分析参考。如果溶质中氨基酸组分较多或其中某些组分的Rf
值相同或近似，用单向层析不宜将它们分开，为此可进行双向层析，在第一溶剂
展开后将滤纸转动90度，以第一次展层所得的层析点为原点，再用另一种溶剂
展层，即可达到分离目的。由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析点
显色，从而定性和定量。
三、仪器和试剂
仪器
层析滤纸、烧杯、剪刀、层析缸、培养皿、猴头喷雾器、微量加样器或毛细管、
吹风机一个、直
尺、铅笔等。
试剂
1.混合氨基酸溶液(水解后的氨基酸干粉)
甘氨酸溶液：50mg 甘氨酸溶于5mL 水中。
蛋氨酸溶液：25mg 蛋氨酸溶于5mL 水中。
亮氨酸溶液：25mg 亮氨酸溶于5mL 水中。
氨基酸混合液： 甘氨酸50mg，亮氨酸25mg，蛋氨酸25mg 共溶于5mL 水中。
2.展层溶剂
碱相溶剂：正丁醇∶12%氨水∶95%乙醇 = 13∶13∶13(V/V)
酸相溶剂：正丁醇∶80%甲酸∶水 = 15∶3∶2(V/V)，摇匀后放置半天以上，取
上清液备用。
3.显色贮备液： 0.4mol/L 茚三酮—异丙醇∶甲酸∶水=20∶1∶5。
4.0.1%硫酸铜：75%乙醇=2∶38，临用前按比例混合。
四、实验步骤
(1)标准氨基酸单向上行层析法
1.画基线
戴上指套或橡皮手套，在长约20cm、宽约17cm 滤纸上，距短边2.5cm 处，
用铅笔画一条线，即为基线。
2.点样
在原线上，从距纸的长边4cm处开始，每隔3cm 用微量注射器或毛细管依次分
别点上甘氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和混合氨基酸溶液。点样点干后可重复点加1～
2次。每一点的直径不超过2mm，点样量以每种氨基酸含5～20ug 为宜。
3.展层
将点好样的滤纸卷成筒形，滤纸两边不相接触，用线固定好，将原线的下端浸入
盛有溶剂的培养皿中，不需平衡可立即展层。展层剂为酸性溶剂系统，在展层溶
剂中加入显色贮备液(每10mL 展层剂加0.1～0.5mL 的显色贮备液)进行展层，
基线必须保持在液面之上，以免氨基酸与溶剂直接接触。盖好层析缸，当溶剂前
沿距纸端2cm 时(大约3h)，取出滤纸。
4.显色
滤纸取出后，吹干或在80℃左右烘箱内烘3～5min，即出现紫红色的氨基酸层
析斑点。用铅笔划下层析斑点，可进行定性、定量测定。
(2)混合氨基酸双向上行纸层析法
1.滤纸准备
将滤纸裁成约28cm2的正方形，在距滤纸相邻两边各2cm 处的交点上，用铅笔
划下一点，做为原点。
2.点样
取混合氨基酸溶液(5mg/mL)10～15μL，分别点在原点上。
3.展层与显色
将点好样的滤纸卷成半筒形，立在培养皿中，原点应在下端。取少量12%的氨
水与小烧杯中，盖好层析缸，平衡过夜。次日，取出氨水，加适量碱相溶剂(第
一向)与培养皿中，盖好层析缸，上行展层，当溶剂前沿距滤纸上端1～2cm 时，
取出滤纸，冷风吹干。将滤纸转90o，再卷成半筒形，竖立在干净培养皿中，并
于小烧杯中至少量酸相溶剂，盖好层析缸，平衡过夜，次日将加显色剂的酸性溶
剂(每10mL 展层剂加0.1～0.5mL 的显色贮备液)倾入培养皿中，进行第2向展
层。展层毕，取出滤纸，用热风吹干，蓝紫色斑点即显现。
五、计算
单向层析的Rf 值，按 “Rf = 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距
离”计量后计算。双向层析Rf 值，由两个数值组成，在第一向计量一次，第二向
计量一次，分别与已知的氨基酸在酸碱系统的Rf 值对比，即可初步决定它为何
种氨基酸的斑点，将它剪下，在同一张纸剪下一块大小相同的空白纸作为对照，
用硫酸铜—乙醇溶液洗脱，用722型分光光度计测定其吸光度，在标准曲线上
查出氨基酸的含量。