腺苷对缺氧复氧心肌细胞的保护作用_图文(精)
C5-siRNA对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用
Ｎ Ａ组显著高于 Ｈ Ｒ组及 Ｈ Ｒ＋空载体病毒组 ， ｃ ／ ／ 而 ５表达量 Ｈ Ｒ＋Ｃ 一 Ｒ Ａ组 显著低 于 Ｈ Ｒ组及 Ｈ Ｒ＋空载体病 ｆ ／ ５ｓ Ｎ ｉ ／ ／ 簪
Ｃ 一ｉＮ ５ｓ Ａ对 乳 鼠心 肌 细胞 缺 氧 复 氧 损 伤 具 有 保 护作 用 ， Ｒ 其机 理 可 能 与 降 低 ｃ 达有 关 。 ５表
文 献标 识 码 ： Ａ 关 键词 ： 一Ｒ Ａ 缺 氧 一 氧损 伤 ；Ｎ ｃ ｓＮ ； ５ ｉ 复 Ｒ Ａ干 扰 中 图分 类 号 ：３ １３ Ｒ３． ７
Ｐ ｏ ｃ ｖ ｆ ｃ ｏ Ｃ ． Ｒ Ａ ｏ ｙ ｏ ｉ ｒｏ ｙ ｅ ａｉ ｎｕ ｙｉ ｅｎ ｔ ｔ ａｄｏ ｃ ｔ Ｈ ｈ ｈｎ ． Ｕ Ｓ －Ｍ ． Ｕ ｒｔ ｔ ｅＥ ｅ ｔ ｆ ｇｓ Ｎ ｎｈ ｐ ｘ ／ ｅ ｘ ｇｎ ｔ ｎｉ ｒ ｎｎ ｏ ａ ｌ ａ ｒ ｉ ｅｉ ｉ ａ ｏ ｊ ａｒ ｅ ｍｙ ｙ ｓ ＥＺ ｉ ｏ ｇ Ｗ ｕｈ Ｓ ｅ － Ｄ －ｕ ，ｔ １ （ ｅａ ｍ ｍ ｏ ａｄ ｌ ｙ Ｙ ｎ ｕＨ ｓ ｔ ， ｏ ａ ２ ２ ７ Ｃ ｉ ） ｅ ａ ｅ ａ． Ｄ ｐ ｎ ｅ ｈ ｆＣ ｒｉ ｏ ， ａ ｂ ｏ ｉ ｌ Ｆ ｓ ｎ ５ ８ ４ ， ｈ ａ ｏｇ ｐａ ｈ ｎ
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何 志红 ， 素华 ， 吴 苏德 华 唐 ， 数 成伶俐 ，
腺苷在急性心肌缺血再灌注损伤中的应用
腺苷在急性心肌缺血再灌注损伤中的应用
陈威;李健;沈洪
【期刊名称】《世界急危重病医学杂志》
【年(卷),期】2006(003)003
【摘要】腺苷是具有重要心血管作用的物质，它通过结合细胞膜上的特异性腺苷受体而发挥其重要的生理效应。
目前已经发现腺苷在心肌再灌注损伤的三个阶段即缺血前期、缺血期及再灌注期均有特异性的心肌保护作用。
临床研究发现腺苷可以减小心肌梗死范围，降低心血管事件死亡率。
心肺复苏的过程就是全身缺血损伤及再灌注的过程，而且腺苷可以减少肾上腺素的副作用，冈而在心肺复苏中应用腺苷可能也会产生有益的影响。
【总页数】4页(P1309-1311,1314)
【作者】陈威;李健;沈洪
【作者单位】解放军总医院急诊科,北京100853
【正文语种】中文
【中图分类】R654.1
【相关文献】
1.自噬在缺血预适应减少急性心肌缺血-再灌注损伤中的作用 [J], 刘艺;徐卫娟;柯丽;李云桥;彭雯
2.腺苷与腺苷联合利多卡因对大鼠缺血再灌注损伤心肌的影响 [J], 陈鹏;邸涛;王雄
3.中医药在防治急性心肌缺血/再灌注损伤中的研究进展 [J], 朱文叶;王肖龙;高俊杰;陈骁康;陈铁军
4.L-精氨酸和腺苷联合应用抗心肌缺血再灌注损伤的临床研究 [J], 敦静;王伟;龚琪;王哲
5.缺血后适应在降低急性心肌缺血狗再灌注损伤中的效果观察* [J], 谢阳东;谢东阳;廖伟
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缺氧的机理是什么？缺氧分为几类？
缺氧的机理是什么？缺氧分为几类？
佚名
【期刊名称】《护士进修杂志》
【年(卷),期】2006(21)1
【摘要】正常人在静止状态下，每分钟耗氧量约250ml，而体内储存的氧仅1．5L，缺氧时储备的氧只能供组织器官消耗4～5min。
缺氧是向器官和组织运送氧减沙，或组织利用氧发生障碍，细胞氧化过程障碍，能量生成不足，细胞功能紊乱甚至结构改变而死亡。
中枢神经对缺氧最敏感，当动脉血氧饱和度低于25％时即可出现紫绀。
【总页数】1页(P30-30)
【关键词】缺氧;细胞功能紊乱;动脉血氧饱和度;组织器官;机理;氧化过程;能量生成;结构改变;中枢神经
【正文语种】中文
【中图分类】R364.4;R977.15
【相关文献】
1.水气病分为几类？其证候特征是什么？ [J],
2.急性缺氧动物吸入纯氧后再缺氧损伤机理的研究 [J], 牟信兵;高钰琪;刘福玉;郑碧海;郑建保;陈有;周小波;何艳梅
3.腺苷负性变导作用机理的初步探讨—兼论心肌缺氧时房室传导阻滞发病机理的一种新假说 [J], 孙继文
4.缺氧后处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其机理研究 [J], 祝筱梅;刘秀华;
蔡莉蓉
5.高体温、低体温、脱水、失血、缺氧……生与死的分界线是什么? [J],
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银杏叶片对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用研究
• 924 •浙江中医杂志2020年12月第55卷第12期注：与对照组比较,##P<〇. 05;与模型组比较,*P <〇. 05图2银杏叶片增加缺氧复氧损伤心肌细胞线粒体氧消耗量（n=6)比较采用One-way AN0V A 分析，P <0. 05认为差异有统 计学意义。
2结果2. 1银杏叶片增加缺氧复氧损伤心肌细胞的存活率及线粒体氧消耗量：MTT检测结果显示，缺氧复氧损伤后 心肌细胞存活率下降到60%左右，加人银杏叶片后能显 著提升细胞存活率(P<〇.〇5),而且在1/50~ 1/200范 围内，随着银杏叶片浓度升高，心肌细胞存活率有升高 趋势。
见图1。
线粒体氧呼吸率试验结果显示，缺氧复氧损伤后心 肌细胞线粒体氧消耗量显著下降，银杏叶1/50剂量组 显著提升缺氧复氧损伤后心肌细胞线粒体氧消耗量(P <0.05)。
见图2。
r 15〇nYinxinye注:与对照组比较，抑P <〇. 05;与模型组比较，*P <0. 05、 图1 银杏叶片增加缺氧复氧损伤心肌细胞的存活率（n=6)关键词银杏叶片心肌细胞缺氧复氧损伤在缺血基础上恢复血流后组织损伤加重，甚至发生 不可逆行损伤的现象称为缺血再灌注损伤，亦称为心肌 细胞缺氧复氧损伤，主要由能量代谢、氧化应激、钙离子 超载等因素所致。
自20世纪60年代，德国科学家发现银 杏叶中含有治疗心脑血管疾病的药效成分以来,越来越 多的研究表明，银杏叶提取物在心脑血管疾病的治疗中 具有很好的药理活性[12]。
银杏叶片是临床常用的心脑 血管保护制剂，具有活血化瘀通络之功效，本文在细胞 水平研究其对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用，以评 估其在临床心血管急症中的治疗价值。
1材料与方法1.1材料：Annexin V-FITC/P I 检测试剂盒（联科生 物），PBS缓冲液（吉诺生物医药技术有限公司h 流式细胞仪(05，？4〇5〇〇111;〇);酶标仪(赛默飞』1111^514311卩〇。
腺苷及A2A腺苷受体与缺氧缺血性脑病
12 8
A 2A R 活化后对中枢免疫炎症反应的调节呈现矛 盾现象。既有研究表明, 激活 A2A R 可以通过抑制免 疫炎性反应, 发挥与外周组织损伤类似的保护效应; 而在中枢损伤中, 成年小鼠 A2A R 的活化则可以促进 小胶质细胞的增殖活化, 进而释放大量炎性递质, 产 生的是促炎作用。各种脑损伤后, 外周的免疫细胞经 过血脑屏障迁移至损伤的脑组织, 研究发现骨髓源性 细胞表面的 A 2A R 是缺血性脑损伤的关键因素, 将这 些细胞的 A2A R 选择性去活化, 能够对抗 M CAO 引起 的缺血性脑损伤, 这种保护效应伴随脑组织内巨噬细 胞源性致炎介质 (如 IL - 1、IL - 6和 IL - 12) 的释放 减少以及抗炎因子 IL - 10表达的增加, 从而使脑梗 死范围显著减小, 提示缺血性脑损伤后 A2A R 活化具 有致炎效应 [ 18] 。 TNF - 和 IL - 1 能够通过 NF -
来源于细胞外的 ATP 分解代谢, 因而在星形胶质细 胞缺陷的成年转基因小鼠中发现突触的 ATP 及腺苷 水平明显下降 [ 4 ] 。研究发现, 在成年小鼠大 脑中动 脉闭塞 ( m iddle cerebral artery occlusion, MCAO )后 3h 内就下调了星形胶质细胞 ADK 的水平, 导致了细胞 外腺苷浓度的明显上升, 这可能是腺苷的急性内源性 保护机制 [ 7] 。实际上, ADK 的表 达水平在调节神经 元对抗脑损伤中起着重要作用, ADK 过度表达的成 年转基 因小鼠增 加了 M CAO 诱导的 海马神经 元死 亡 [ 8] 。而在 M CAO 造模前 1周的成年小鼠纹状体种 植 ADK 缺陷的神经或胶质祖细胞, 发现小鼠脑梗死 体积明显减少 [ 9] 。这些研究表明由脑缺血诱导的细
缺氧后处理对缺氧／复氧心肌细胞的保护作用及其机理研究
机制 。本实验在心肌 细胞缺 氧／ 氧（ ｙｏｉ ｒｏｙｅａｏ ， ／ 模型上 观察 Ｈ Ｒ及缺氧 后处理 （ ｙ 复 ｈｐｘａ ｅｘｇｎｆ ｎ Ｈ Ｒ） ／ ｉ ／ ｈ—
Ｔ ｏ ｅ ｔｖ ｆｅ ｔ ｏ ｐ ｘ ｃ Ｐ ｓ ｃ ｎ ｉｉｎ ｎ Ｈ Ｉｃ ｅ ￣ ／ｒ ｐ ｒ ｕ ｉｎ －ｎｄ ｃ ｄ Ｍ ｙ ｃ ｒ ｉｌ ｈｅＰｒ ｔｃ ｉ ｅ Ｅｆ ｃ ｆ Ｈｙ ｏ ｉ ｏ ｔ ｏ ｄ ｔ ｉ ｇ Ｏ ｓ ｈ ｎ ｉ ｅ ｅ ｆ ｓｏ Ｉ ｕ ｅ ｏ ａ ｏ ａ ｄａ
ｐｘｃ ｏｔ ｎ ｉｏｉｇＨ—ｏｔ ） Ｇ Ｐ ８ Ｃ Ｔ表 达以及 ｃｓａｅ１ ｏｉ ｐ ｓ ｏｄｔ ｎ ， ｐ ｓ 对 Ｒ ７ 、 Ｒ ｅ ｉ ｎ Ｃ ａｐｓ．２活化的影响 ， 探讨 内质 网应激 （ ｎｏ ｅｄ—
ｐ ｍ ｅｒ ｉ ｌｍ ｓ ｅｓＥ Ｓ 在 Ｈ－ｏｔ 护机制 中的意 义及 其细胞信号 转导机 制 。方法 ｌ ｉ ｅｃ ｕ ｔ ｓ，Ｒ ） ｓ ａ ｔｕ ｒ ｐｓ Ｃ保
抑 制作用 （ Ｃ Ｔ蛋 白 其 Ｒ 相对 水平较 Ｈ Ｒ＋ —ｏＣ组 高 ４．％ ） ／ Ｈ ｐｓ ｔ ７２ 。结论
Ｈ ｐｓ ． ｔ ｏ Ｃ可调控 Ｅ Ｓ反应 程 Ｒ
度． 抑制 Ｈ Ｒ诱导的过度 Ｅ Ｓ 减轻内质网凋 亡信号介 导的细胞凋 亡 的发生 。ｐ ８Ｍ Ｐ ／ Ｒ， ３ Ａ Ｋ及 Ｊ Ｋ信 号 Ｎ
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔ ｅ Ｉ ｈｍｃｐｓｏｄｉ ｉ （－ｏ Ｃ ｉ ａ ｐｒｎ ｅｄｇ ｏｓｐ ｔ ｔｅ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅ ｖ ｓ ｅ ｉ ｏｅｎｉ ｎ ｇ Ｉ ｓ ） ｓ ｎｉ ｏａｔ ｎｏｅ ｕ ｒｅ ｉ ｃ ｉ ｃ ｔ ｔ ｎ ｐｔ ｏ ｍ ｔ ｎ ｏ ｃｖ
腺苷对缺血再灌注后心肌的保护作用
腺苷对缺血再灌注后心肌的保护作用贺晓楠;李淑梅;郝淑美;陈宇;李强;贺小泉【期刊名称】《中国生物制品学杂志》【年(卷),期】2007(20)2【摘要】目的研究腺苷对大鼠心肌细胞凋亡及核因子κB(NF-κB)表达的影响。
方法制备对照组(C组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)和缺血再灌注前腺苷治疗组(AD组)的大鼠模型。
电镜、光镜下观察心肌结构变化,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学方法检测心肌组织NF-κB表达。
结果AD组大鼠心肌细胞凋亡数(2 645.0±326.0)及心肌组织中NF-κB的表达(32.21%±17.91%)明显低于I/R组(5 113.0±503.7和60.30%±10.36%),明显高于对照组(67.7±51.3和11.98%±3.65%)。
结论腺苷具有明显降低大鼠缺血再灌注后心肌细胞凋亡的作用,可能与腺苷减轻缺血再灌注心肌组织过度表达NF-κB有关。
【总页数】3页(P114-116)【关键词】心肌;缺血;再灌注;腺苷;细胞凋亡;核因子κB【作者】贺晓楠;李淑梅;郝淑美;陈宇;李强;贺小泉【作者单位】吉林大学第二医院心血管内科;吉林大学中日联谊医院心血管内科【正文语种】中文【中图分类】R972.1【相关文献】1.超声斑点追踪成像技术评价腺苷药物后适应对兔心肌缺血再灌注损伤的作用 [J], 赵会亚;任敏;田永梅;刘宇杰;邓颖;王旭东;田家玮2.腺苷后适应对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 [J], 李松;杨简;杨俊;丁家望;姜玉蓉;李莉;李稳慧;李书国3.三磷酸腺苷后处理对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究 [J], 王芳;廉哲勋;李妮妮;姚如永4.Sestrin2/一磷酸腺苷活化的蛋白激酶介导的细胞自噬在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及叔丁基对苯二酚预处理的保护作用 [J], 郭明;赵博;雷少青;邱珍;吴洋;夏中元5.注射用三磷酸腺苷辅酶胰岛素对心肌缺血再灌注损伤所致心肌梗死的保护作用研究 [J], 李亚丽;孙双勇;王维亭;郝春华;赵专友因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
腺苷对心肌缺血再灌注损伤的保护机制
心 肌缺血再 灌注损 伤 已成为 阻碍 缺血 心肌从 再灌注 疗 法 中获得 最佳疗效 的主要难 题 。越 来越 多 的研 究发 现 腺苷 （ ｄ ） 心肌 缺血 再灌 注损 伤 中一 个很 重 要 的介 Ａ ｏ是
质 ，ｄ Ａ ｏ可 以缩 小 梗 死 心 肌 面积 ， 少 无 复 流 面 积 ， 减 减 少 急性心 肌梗死 （ ＭＩ再 灌 注治疗后 的死 亡 和充血 性 Ａ ） 心 力衰竭 的发生 。本 文 复 习近 年 文献 ， Ａ ｏ对心 肌 就 ｄ 缺 血再灌 注损伤 的保 护机 制综述 如下 。
１ １ Ａ ｏ来源 ． ｄ
Ａ ｏ是一 种 内源 性 嘌 呤核 苷 酸 ， ｄ 其主
要来 源 ： 在能 量供应 减少 和耗 能的 情况下 ， ① 三磷 酸腺
苷 （ Ｔ ） 去 ２个 磷 酸 变 成 单 磷 酸 腺 苷 （ ＭＰ 。大 ＡＰ脱 Ａ ）
发现 ， 与对照 组相 比， ｄ 后 处理组 的 再灌 注 心肌 染色 Ａｏ 密度 和血浆丙 二醛 浓度 都 明显 降低 。Ｓ ｎ等 在 离体 ｕ
部分 Ａ Ｐ通 过 ５一 Ｍ 核苷 酸酶 作 用 脱 去戊 糖 变 成 Ａ ｏ ｄ。
② ｓ 苷 同型半 胱 氨酸 水解 后 产生 Ａ ｏ和同 型半 胱氨 腺 ｄ 酸 。③ 腺 嘌 呤 与 １磷 酸 核 糖 作 用 ， 成 Ａ ｏ和 磷 一 生 ｄ
酸 。Ａ ｏ主 要 在 血 管 内 皮 、 小 板 膜 、 性 粒 细 胞 ｄ 血 中
１ Ａ ｏ的 概 述 ｄ
２ ２ 抗氧 自由基 的损 害 许 多研究 表 明 ， 自由基暴 ． 氧
发在 心 肌缺 血再灌 注损 伤 中起 重 要 作 用 ， 它不 仅 参 与 生物 膜 的脂质 过氧化 反应 ， 而且在 触发 白细胞 激活 、 黏
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研究论文腺苷对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用王兴祥1,3,周利龙1,丁家望2,冯义柏1,程龙献11华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科,武汉430022;2宜昌市中心人民医院,宜昌443000摘要:本研究旨在探讨腺苷(adenosine,ADO对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R心肌细胞的保护作用及其分子机制。
将原代培养的新生大鼠心肌细胞分成H/R对照组和ADO(110μmol/L保护组。
用倒置相差显微镜观察心肌细胞的生长状态。
检测两组培养基质乳酸脱氢酶(LDH活性和心肌细胞Ca2+和丙二醛(MDA浓度。
用EL ISA法检测肿瘤坏死因子(TNF2α的表达,并用凝胶电泳迁移率改变法(EMSA测定核因子(NF2κB结合活性。
所得结果如下:(1心肌细胞H/R培养后皱缩、变圆,伪足减少,ADO组心肌细胞的形态变化小于对照组;(2 ADO减少缺氧和复氧期间心肌细胞LDH的漏出(bothP<0101;(3ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞内的Ca2+浓度(both P<0101;(4ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞MDA浓度(both P<0101;(5ADO抑制缺氧和复氧期间TNF2α的表达(both P<0101;(6ADO抑制缺氧和复氧期间心肌细胞NF2κB结合活性(both P<0101。
以上结果提示:(1外源性ADO可减轻心肌细胞的H/R损伤;(2外源性ADO抑制H/R期间心肌细胞TNF2α的表达;(3外源性ADO可能通过抑制心肌细胞NF2κB结合活性下调TNF2α的表达。
关键词:腺苷;缺氧/复氧损伤;心肌细胞中图分类号:Q463;R540Adenosine protects cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation injuryWAN G Xing2Xiang1,3,ZHOU Li2Long1,DIN G Jia2Wang2,FEN G Yi2Bai1,CHEN G Long2Xian1 1Depart ment of Cardiology,U nion Hospital A f f iliated to Tongji Medical College,Huaz hong U niver2 sity ofScience and Technology,W uhan430022;2Yichang People Hospital,Yichang443000Abstract:The aim of this study was to investigate the protective effect of adenosine(ADOon car2 diomyocytes following hypoxia/reoxygenation(H/Rand its molecular mechanism.Primary cultured cardiomyocytes of neonatal rats were dividedin to two groups,namely H/R(controland ADO(110μmol/Lgroups.The morphologic changes in cardiomyocytes were observed under an inverted phase2 contrast microscope.The following parameters of the two groups were determined:lactate dehydroge2 nase(LDHactivity,intracellular calcium concentration and malondialdehyde(MDAcontent.Tumor necrotic factor(TN F2αassay was performed using an EL ISA kit and N F2κB in the nucleus was analyzed by electrophoretic mobility shift assay(EMSA.The results are as follows:(1after H/R injury,car2 diomyocytes contracted,tending to get round in shape and its pseudopods decreased,while marked mor2 phological changes were not observed in ADO group;(2LDH leakage maintained at a lower level in ADO group than that in the control group during H/R(bothP<0101;(3ADO significantly reduced the concentration of calcium in cells and prevented calcium overload during H/R(both P<0101;(4 ADO markedly reduced the content of MDA during H/R(both P<0101;(5ADO inhibited the pro2 duction of TN F2αduringH/R(both P<0101;and(6ADO down2regulated N F2κB binding activity of cardiomyocytes during H/R(both P<0101。
The results suggest that(1exogenous ADO attenuatesReceived2002205207Accepted20022082263Corresponding author.Present address:Cardiovascular Disease Department,First Affiliated Hospital,Medical School of Zhejiang University,Hangzhou310003,China.Tel:+86257528061397;E2mail:wangxx19730312@yahoo1com1 cnH/R injury of cultured cardiomyocytes;(2exogenous ADO inhibits the production of TN F2αafter H/R injury;(3exogenous ADO prevents the activation of N F2κB,which may be the molecular mechanism of down2regulation of TN F2αexpression.K ey w ords:adenosine;hypoxia/reoxygenation injury;cardiomyocytes腺苷(adenosine,ADO作为心肌细胞的能量代谢产物,在缺血预处理的心脏保护中具有重要作用。
近来研究发现,ADO可下调人和大鼠缺血心肌组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor2α,TN F2α的表达,而TN F2α是中性粒细胞介导缺血/再灌注损伤的主要细胞因子[1]。
目前对ADO下调TN F2α表达的分子机制尚不清楚。
有作者报道,心肌组织缺血/再灌注时,核因子κB(nuclear factorκB, N F2κB活性持续增高[2~4],且最近有研究表明ADO可抑制离体心脏缺血/再灌注时的N F2κB活性[5]。
而后者参与了一系列炎症因子的表达调控,包括TN F2α。
本文通过观察外源性ADO对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R心肌细胞的形态结构、损伤指标、TN F2α表达及N F2κB活性的影响,进一步从细胞水平明确ADO的心脏保护作用及其机制,并初步探讨心肌细胞缺氧/复氧损伤时TN F2α与N F2κB活性的关系,为其临床应用提供理论依据。
1材料和方法111主要试剂和仪器胎牛血清和DM EM合成培养基购自G ibco公司。
胰蛋白酶(trypsin购自Difco公司。
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH试剂盒购自上海申能生物技术有限公司。
丙二醛(malondialdehyde,MDA和TN F2αEL ISA试剂盒购自北京邦定泰克生物技术有限公司。
N F2κB寡核苷酸序列、T4多核苷酸激酶、T4激酶缓冲液均购自Promega公司。
[γ232P]A TP购自北京福瑞公司。
ADO 购自Sigma公司。
其余试剂为国产分析纯级。
二氧化碳培养箱购自德国Heraeus公司;倒置相差显微镜购自日本Olympus公司。
112新生大鼠心肌细胞的原代培养取新生1~4 d SD大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物学部提供的心室肌组织并剪碎,用011%胰蛋白酶分次消化,分离心肌细胞。
用含10%胎牛血清、100U/ ml青霉素、100μg/ml链霉素的DM EM培养基制备细胞悬液,以差速贴壁法纯化心肌细胞,使纯度达到90%以上。
以115×106/ml 接种于预先用50 mg/L多聚赖氨酸涂布过的培养瓶中,瓶中置盖玻片供细胞贴附生长,在37℃、95%O2+5%CO2的二氧化碳孵箱内进行培养。
每2d更换一次培养基,取培养4d的单层细胞进行实验。
113H/R损伤模型的建立将心肌细胞用缺氧缺糖培养基培养后,培养瓶内立即充入215%O2+ 9215%N2+5%CO2(1L/min持续90s,以驱除瓶内氧气,37℃密闭培养2h。
将缺氧的心肌细胞换用饱含95%O2+5%CO2的含糖培养基,在正常培养条件下培养1h,建立缺氧/复氧损伤模型。
114实验分组将培养的单层心肌细胞分为2组: (1对照组:按照上述方法,制备缺氧/复氧损伤模型;(2ADO处理组:在培养基中加入ADO(110μmol/L后,立即按对照组程序处理。
各组均缺氧培养2h后再给氧1h。
收集缺氧前、缺氧后2h、再给氧1h后的培养基和心肌细胞用于后续实验指标测定。
各组均在上述心肌细胞培养条件下培养3批细胞并做6份重复测试。
115心肌细胞的鉴定心肌细胞的鉴定采用免疫组织化学方法。
116心肌细胞生长状态的检测心肌细胞复氧1 h后,利用倒置相差显微镜观察心肌细胞的形态学改变,用台盼蓝排斥试验检测心肌细胞的存活率。