免疫组化操作流程及注意事项
免疫组化的注意事项操作要点和技巧
免疫组化的注意事项、操作要点和技巧一些教训：1、对于多甲灌注固定的标本，如要长期保存，要先脱水后冻存，此法对于采用漂片法IHC 较适合。
正确操作：多甲灌注固定——多甲或甲醛后固定——蔗糖梯度脱水——负70度保存——冰冻切片错误操作：多甲灌注固定——多甲或甲醛后固定——负70度保存——蔗糖梯度脱水——冰冻切片，结果是会有大量冰晶形成。
2、如果能确认使用石蜡切片并使用贴片法进行下一步IHC，多甲或甲醛后固定后应尽快脱水并石蜡包埋。
要点和操作技巧：1.固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。
对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。
有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。
Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。
PLP液：即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛，适于固定石蜡切片。
适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2．组织脱水，透明：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。
3．切片时展片：有些组织在切片后难以在水中展开，这时可适当地在水中加入几滴乙醇。
4．烤片：60℃ 30分钟或37℃过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。
5．蜡块及切片的保存：最好在4℃保存6．脱片问题：Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)为目前免疫组化染色工作中最常用的一种防脱片剂，6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。
如不行，可用双重处理（APES和Poly-L-Lysine）的切片。
在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干，即可进行下一步。
7．灭活内源性酶：HRP系统：3%双氧水灭活；AP系统：3%HAc灭活。
Mayer'苏木素染液(免疫组化)使用说明及注意事项
Mayer'苏木素染液(免疫组化)使用说明及注意事项
货号：G1080
规格：10mL/100mL
保存：室温避光保存，有效期至少一年。
产品简介：
Mayer'苏木素染液(免疫组化)适合免疫组化中组织切片的复染，染色后细胞核呈蓝色。
本产品为工作液，可直接使用。
染色液可重复使用多次，但染色效果会逐渐降低。
使用方法：
1、免疫组化显色后，将组织切片浸入苏木素染色液，也可以直接滴加到样本上染色
5-10分钟(深染)，或0.5-2分钟（浅染）。
2、浸自来水中冲洗去除多余的染色液。
3、颜色过深可以在分化液（1%盐酸）中分化几秒钟，再用氨水(0.25%)或PBS(pH7.4)
冲洗返蓝，镜下观察结果。
4、染色、分化、返蓝时间都需要预实验优化至最佳，分化和返蓝步骤可选。
5、根据显色液的种类，用水性封片剂直接封片或梯度酒精脱水，二甲苯透明后用中性
树胶封片。
注意事项：
1、第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
2、室温避光保存，2-8℃保存最佳，至少一年有效。
3、染色过程推荐浅染，通常只需能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞质颜色。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
免疫组化检查要注意点什么
免疫组化检查要注意点什么免疫组化检查是一种常见的临床化验技术，主要用于检测体内免疫系统的功能和免疫相关疾病的发生及发展情况。
免疫组化检查的主要原理是利用抗原与抗体的特异性结合来检测样本中的分子，以达到诊断和评估疾病的目的。
在进行免疫组化检查时，有一些注意事项需要关注。
首先，样本采集和保存非常重要。
样本采集的质量直接影响到后续检测结果的准确性。
对于不同的免疫组化检测项目，样本的要求也不尽相同。
比如，某些检测要求新鲜样本，不能冷冻，而另一些则需要冷冻保存。
因此，在采集样本前，需要了解具体检测项目的要求，并按照要求进行适当的处理和保存。
其次，在进行免疫组化检查时，需要正确选择和识别抗原与抗体。
不同的免疫组化检测方法所用到的抗原和抗体可能存在差异，因此，在进行检测前需要准确选择所需的试剂和抗体。
同时，为了保证检测结果的准确性和可靠性，必须进行负对照和阳性对照的设定。
负对照用于排除假阳性结果的干扰，阳性对照用于确认试剂和仪器的灵敏度和准确性。
第三，免疫组化检查中的标本制备和处理也非常重要。
对于不同类型的标本，如血液、组织、细胞等，其制备和处理方法也各有不同。
在制备标本时，要注意避免样本的污染和破坏，同时要保证标本中目标分子的完整性。
常见的标本处理方法包括切片、固定、脱水、染色等，这些步骤的操作必须严格按照标准操作程序进行，以保证结果的可靠性。
此外，免疫组化检查中的实验条件控制也非常重要。
例如，温度、湿度、阴离子或阳离子含量、光照等因素都可能对结果产生影响。
因此，在进行检测时，需要严格控制这些条件，并在合适的环境中进行实验操作。
最后，对于检测结果的解读也需要谨慎。
免疫组化检查并不是绝对的诊断依据，而仅仅是一种辅助诊断方法。
结果的解读需要结合病史、临床表现和其他辅助检查结果来进行，必须进行全面综合分析。
总之，免疫组化检查作为一种重要的实验室技术，对于诊断和评估免疫相关疾病具有重要的意义。
在进行检测时，需要关注样本的采集和保存、正确选择和识别抗原与抗体、标本的制备和处理、实验条件的控制以及检测结果的解读等方面的注意事项。
冰冻切片免疫组化染色步骤
冰冻切片免疫组化染色步骤引言冰冻切片免疫组化染色是一种常用的实验方法，用于研究细胞和组织的分子表达。
它结合了冷冻样本的切片技术和免疫组织化学染色的原理，能够可视化特定分子在组织中的位置，从而帮助我们理解生物过程和疾病机制。
本文将介绍冰冻切片免疫组化染色的步骤和注意事项。
步骤一：样本制备1.收集组织样本，根据需要进行切割和处理。
2.快速冷冻组织样本，可用液氮或乙醚等方法冷冻，并保存在低温环境中。
步骤二：切片制备1.取出冷冻样本，将其置于切片机或切片冷冻器中。
2.进行组织切片，通常厚度为5-10微米，利用切片刀或者切片冷冻器的微调装置。
3.将切片收集在清洁的载玻片上，可以使用专门的载玻片来增强切片与载玻片间的附着力。
步骤三：固定和脱水1.将载玻片上的切片放入4%的中性缓冲福尔马林缓冲液中固定细胞和蛋白质。
2.固定15-30分钟后，用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将福尔马林去除。
3.将切片脱水，使用逐渐浓度的乙醇和脱水溶液，如70%乙醇、95%乙醇和100%乙醇。
步骤四：抗原修复1.对于有些抗原，如细胞核抗原，需要进行抗原修复。
这可以通过热、酸或酶消化等方法进行。
2.一种常用的抗原修复方法是将切片置于高温或高压下进行热诱导抗原修复。
步骤五：阻断和孵育1.使用蛋白质阻断剂，如牛血清蛋白、BSA等，在切片上进行孵育，以防止非特异性结合。
2.孵育时间通常为30分钟至1小时。
步骤六：一抗孵育1.加入一抗，即特异性抗体，与切片上的靶分子结合。
2.一抗浓度和孵育时间根据实验需要和抗体质量进行优化。
步骤七：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的一抗去除。
2.洗涤时间和次数根据实验要求和抗体特性进行优化。
步骤八：二抗孵育1.加入荧光标记的二抗，与一抗结合形成复合物。
2.二抗可以识别一抗的种类，常见的二抗有荧光标记的抗鼠IgG、抗兔IgG等。
步骤九：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的二抗去除。
一文读懂免疫组化步骤、结果分析及注意事项
一文读懂  免疫组化步骤、结果分析及注意事项...导语实验室花花师姐正在教导新来的师弟：“想拿高分文章，不学免疫组化怎么行？”免疫组化王子毛博旁边插话：“是这个理，今天我就豁出去，将我十多年的心得和经验奉献给小师弟你了。
”小师弟感激涕零，唯诺细听两位前辈的教诲......免疫组化，免疫组织化学技术（immunohistochemistry），是一项利用抗原抗体反应，通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原，对蛋白定位，定性的实验技术。
免疫组化主要用的是组织标本和细胞标本两大类，组织标本包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片。
石蜡切片，对组织形态保存好，保存时间也长，虽然对组织抗原暴露有影响，但可以抗原修复，所以石蜡切片仍然是首选的标本制作方法。
免疫组化步骤详解免疫组化结果分析很多时候，我们千辛万苦地染出了一张张漂亮的免疫组化片子。
但是却不知道如何正确地分析，得出理想的结果。
这实在是一件憾事。
如下图，正常的结果应该是这样的：镜下细胞核呈蓝色，阳性结果呈深浅不一的棕色。
结果分析主要有两种方法，阳性着色细胞计数法和评分法。
前者是在40*光镜下，随机10个视野下计数阳性着色细胞；后者则是在光学显微镜下按染色程度（0分阴性着色，1分淡黄色，2分浅褐色，3分深褐色）和阳性范围（1分0-25%，2分26-50%，3分51-75%，4分76-100%）评分，最终分数相加。
免疫组化结果分析是毛博的特长，以下是他传授的独门绝技。
1.对照染色和做实验的时候必须设立对照组一样，免疫组化也必须设立对照染色。
没有对照染色的免疫组化结果是不可信的。
对照一般有阳性组织对照，阴性组织对照，阴性试剂对照，自身对照。
一般来说，有一个阳性组织对照和一个阴性组织对照就足够了。
2.定位抗原表达必须在特定部位。
如LCA应定位在细胞膜上；CK 应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内等等。
不在抗原所在部位的阳性着色，不能视为确切的阳性结果。
免疫组化的基本原理操作流程及注意事项2021优秀文档
免疫组化操作步骤：（以DAKO试剂盒为例）
免疫组化质量控制
• 实验前：
•
包括标本固定、脱水、切片、抗体选择、人员素质、
实验室条件等等。
• 实验中：
•
各个关键指标的控制如抗原修复、一二抗孵育时间及
温度、抗体滴加、显色控制、对照等等。
• 实验后：
•
专家对结果的评判，室间质评，CAP教育等等。
固定
标本的固定和组织处理 • 固定液、固定时间：
• 对于一个新的抗体，应该摸索其染色条件 ，保证有足够的实验批次来检测其敏感性 和特异性。
验证实验
• 1、通过比较实验确定抗体滴度、抗原修复 的方法
• 2、孵育时间以及缓冲液的类型、PH值等最 适宜的实验条件，
• 3、结果的可重复性 • 4、同时通过多次的重复性检测来确定该试
剂的敏感性和特异性。
• 这对于文献报道较少的抗体尤其重要。
Anti-FLG antibody
Cat. No: HPA030189 (Sigma)
R28868
Produced in rabbit
Anti-TSLP antibody
Cat. No: LS-B614 (Life span)
LS13610
Produced in rabbit
R2a0bb1i2t i-so0ty8p-e3c1ontrol antibody
有用的上皮性标记但可表达于以下肿瘤肉瘤ssesmhf生殖细胞肿瘤胚胎性癌绒毛膜癌黑色素瘤特别是转移性淋巴瘤ck7ck20ck7ck20ck7ck20ck7ck20尿路上皮癌非小细胞肺癌结直肠腺癌鳞癌肺胰腺癌小细胞肺癌merkel细胞癌前列腺腺癌卵巢粘液性癌乳腺癌肾细胞癌非粘液性卵巢癌肝癌子宫内膜腺癌胸腺间皮瘤宫颈鳞癌常见共表达50少见共表达10子宫内膜腺癌宫颈管腺癌肾细胞癌结直肠腺癌唾液腺癌乳腺癌肉瘤样癌肺非小细胞癌甲状腺滤泡癌前列腺腺癌
免疫组化操作规程及操作流程
免疫组化操作规程及操作流程免疫组化技术是一种常用的细胞和组织学研究方法，广泛应用于病理学、生物学、药理学等领域。
下面将详细介绍免疫组化操作规程及操作流程。
一、实验前准备1.准备实验所需的试剂和试验设备，包括抗体、缓冲液、加标物、显色剂等。
2.检查免疫组化试剂的有效期，确保试剂的质量。
二、标本处理1.收集组织标本，如活检样本或动物组织。
2.快速处理标本，迅速取出，并选择适当的处理方法，如固定、包埋等。
3.处理过程中要避免标本的冻融、干燥等。
三、抗原回复1.对于经过固定的组织标本，使用抗原回复方法来恢复组织标本中的抗原活性。
2.选择适当的抗原回复方法，如热处理、酶解等。
四、非特异性结合阻断1.使用非特异性抗血清或蛋白质来阻断非特异性结合位点。
2.使非特异结合抗体活性降低，减少假阳性结果。
五、抗体处理2.优化抗体浓度，确保抗体与标本中的抗原结合。
3.对于特定抗体，可以进行荧光标记或酶标记等。
六、免疫组织染色1.用适当的缓冲液稀释抗体，并将其应用于组织标本上。
2.根据实验需求选择适当的孵育时间和温度。
3.利用显色剂或荧光显像剂对标本进行染色。
七、显微镜观察与分析1.将染色后的标本放置在显微镜下观察，并选择适当的增强荧光信号方法。
2.结合相关的正对照和负对照进行结果分析，确定一些蛋白质在组织中的表达情况。
3.分析结果并记录数据。
八、结果分析与报告1.根据观察结果，分析样本中目标抗原的表达情况。
2.比较不同样本之间的差异，得出结论并撰写实验报告。
九、实验后处理1.清洗使用过的实验工具和材料，避免交叉污染。
2.妥善处理废弃物和化学品，根据实验室内相应的安全操作规范进行处理。
免疫组化检测注意事项
免疫组化检测注意事项嘿，咱今儿就来说说免疫组化检测那些事儿！这免疫组化检测啊，就像是一场对细胞的大探秘，可不能小瞧了它。
你想想，细胞那么小，要搞清楚它们的情况可不容易。
就好像在一个满是人的大广场上，要找出特定的几个人一样。
免疫组化检测就是我们的法宝啦！但要做好这个检测，可得注意好多细节呢。
首先说样本，那可是检测的基础啊！样本要是没采集好，就好比盖房子没打好地基，后面可就麻烦啦。
采集样本的时候可得小心再小心，别把不该采的采进去了，也别把该采的给弄丢了。
就跟做饭似的，食材不好，怎么能做出美味佳肴呢？然后就是实验过程啦，这可得像走钢丝一样，小心翼翼。
各种试剂就像是不同的调味料，加多加少都不行，得恰到好处。
温度、时间这些也都得把握好，不然结果能准吗？这就跟烤蛋糕一样，火候不对，蛋糕不就烤砸啦？还有啊，操作的时候一定要仔细认真，不能有一丝马虎。
一个小失误可能就会让结果大不一样，那可就误大事了。
这就像绣花，一针一线都得精心，不然绣出来的花能好看吗？检测人员也得专业呀，他们就像是经验丰富的侦探，能从那些小小的线索中找出真相。
要是个新手，那能行吗？那不等于让个小孩子去破案嘛！而且做完检测后，分析结果也很重要。
不能看到个结果就随便下结论，得综合考虑各种因素。
这就像解一道难题，得一步一步分析，不能着急。
咱可得重视免疫组化检测呀，这可是关系到健康的大事呢！只有把每个环节都做好，才能得到准确可靠的结果，才能更好地帮助医生诊断和治疗疾病。
不然，那不是白忙活一场嘛！大家说是不是这个理儿呀？所以啊，大家一定要牢记这些注意事项，让免疫组化检测发挥出它最大的作用！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
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免疫组化操作流程及注意事项
免疫组化是一种常用的生物技术方法，在医学、药物研发、疾病诊断等领域有着广泛的应用。
在进行免疫组化实验时，需要遵循一定的操作流程和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。
一、实验前准备
1.检查仪器和试剂：在进行实验前，需要检查使用的仪器和试剂是否正常工作，以避免实验出现错误。
2.样本处理：选择合适的样本来源，并根据实验要求进行样本处理和处理，如组织切片、蛋白抽提等操作。
3.实验区域准备：为了避免实验中的交叉污染，需要保持实验区域的清洁和干净，避免灰尘、细菌等干扰实验结果。
二、抗体处理
1.抗体选择：根据实验需要选择合适的抗体，包括一抗和二抗，并进行正确的防止步骤。
2.抗体稀释：需要根据实验所需稀释抗体浓度，以确保实验中的可靠性和准确性。
3.透析：透析是为了去除抗体中的杂质和保持抗体的活性，可以使用多种透析方法，如葡萄糖、盐溶液透析等。
三、标记和显色
1.标记：将选择好的一抗和二抗进行标记，例如利用荧光标记、酵素标记等。
2.显色：根据实验需要，将标记好的抗体显色，可以使用多种方法，如荧光染色、染色素染色、酶标记染色等。
四、防止步骤
1.防止非特异性结合：在实验过程中需要使用防止多余的非特异性结合，如使用BSA、牛奶等进行防止。
2.防止地基自身活性：在实验中需要使用防止地基自身活性的方法，如将地基胶体蛋白进行处理。
3.防止非特异性染色：在实验中需要使用防止非特异性染色的方法，如对实验组和对照组进行多次染色。
五、实验数据分析
1.图像采集：采用高清数码系统进行图像采集。
2.数据分析：使用统计软件进行实验数据的处理，进行可靠性检测、误差范围的确定、结果的图表化呈现等等。
以上就是免疫组化操作流程及注意事项的一些基本介绍，虽然操作流程较为复杂，但是只有遵循操作流程和注意事项，才能够稳定的获得实验结果并进行进一步的研究分析。