鸡传染性支气管炎的研究进展
鸡传染性支气管炎的研究诊断
2
文 献 综 述
题 目： 鸡传染性支气管炎的研究进展
3 鸡传染性支气管炎的研究进展
摘要 鸡传染性支气管炎（Avian Infedtious Bronchitis，简称IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Avian
Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起的鸡的一种急性高度接触性传染病，主要侵害鸡的呼吸、泌尿生殖和消化系统。IBV往往引起混合感染，也可引起产蛋鸡的产蛋量和鸡蛋品质的下降，甚至造成成年鸡的死亡，从而加重了对鸡群的危害，也给养鸡业造成很大的损失，是目前危害我国养禽业的主要疫病之一。我国在80年代初发现有IB的存在，随后IB在国内相继爆发，且流行十分广泛。IBV的血清型至少有29种之多，并不断出现新型。在生产过程中，免疫失败的现象时有发生，传染性支气管炎成为禽病防治工作中的一大难题。因此，研究不同地区IBV的发生，血清型的鉴定和分子病原学研究，揭示IBV分子变异机理，对于从根本上控制传支，具有重要意义。
关键词 鸡、冠状病毒、传染性支气管炎、IBV
1.IB的历史
IB于1931年由shalk首先报道于美国，1936年Beach和Schalm确定了该病原[1]。在我国，20世纪40年代，传支主要以呼吸道症状、产蛋量下降为主。1962年，Winterfield和Hitchner在美国报道了肾病变型IB，证实IBV的某些毒株可主要引起肾脏病变。1972年在广东首次发现本病。1985年EI-Houadtih和Jone在摩洛哥分离了一种以致肠道病变为主的IBV肠型变种，该毒株除引起气管、肾脏和生殖道的的病变外，还可以造成肠道损害[2]。1994-1995年，江苏、山东等省爆发了腺胃型传支，但该病的病因尚有争论[3]。1997年王玉东报道的腺胃病变型鸡传染性支气管炎，多数学者认为是由冠状病毒引起的鸡传染性支气管炎就是禽流感的代名词。也有人从腺胃病变中分离到新城疫病毒和网状内皮组织增殖病病毒等。
2.病原学
2.1形态
IBV属于冠状病毒科，冠状病毒属，单股正链RNA，呈螺旋对称，形态多样，大都数为球形，直径为80-120nm，囊膜表面呈松散状，上有均匀排列的花冠状的纤突样蛋白，纤突长约20nm，其末端呈球状，易从病毒粒子上脱落，纤突不如副粘病毒的棒状纤突排列紧密，有间隙，使病毒外形酷似皇冠。IBV内部有RNA和蛋白质组成的螺旋状核衣壳组成，宽约9-16nm，呈长颈瓶样或圈样[4]。 鸡传染性支气管炎的研究诊断
4 2.2理化特征
IBV对外界环境的抵抗力不强，多数毒株56℃15min及45℃90min即被灭活。耐酸不耐碱。0.1%的福尔马林可使其完全灭活。IBV对乙醚、氯仿及一般消毒剂敏感，但20%的脂溶剂只能降低病毒的滴度而不能使其完全灭活。0.2%的去氧胆碱钠溶液在常温作用下10min能完全灭活鸡胚尿囊液中的病毒。可被0.1%的甲醛、0.1%去氧胆酸盐、0.05-0.1%β丙内酯灭活。10%葡萄糖对IBV有稳定作用。该病毒对低温保存稳定，鸡胚尿囊液中的病毒科在-30--60度条件下存活几个月，病毒在PH=7.8时稳定性最好。
2.3基因组特点及结构蛋白
具有冠状病毒基因组的一般结构特点，Boursnell等测定了其全部序列，共有27608nt，比目前所知的任何RNA病毒都大得多，5＇末端和3＇末端有明显的同源性，5＇末端20kb为1个单个基因，它很可能转录翻译成依赖于RNA的RNA聚合酶。分析此20kb基因序列，发现有两个开放的阅读框架（ORF），分别为OFR1和ORF2＇，负链RNA转录成的6种mRNA具有相同的3＇末端，5＇末端的先导序列约为60nt，mRNA
E、C、A分别编码病毒的3种主要结构蛋白[5]。
IBV含有三种结构蛋白，即纤突蛋白S、膜蛋白M和核衣蛋白N。S蛋白往往分解为S1和S22个亚单位糖蛋白，S1蛋白能够诱导机体产生IBV特异性中和抗体和血凝抑制蛋白。M糖蛋白和核衣壳N蛋白相对保守，他们和S1、S2一起，在免疫过程中起作用。
3流行病学
IB自然感染仅发生于鸡，各种年龄的鸡均易感，但感染主要侵害1-4周龄的幼鸡和雏鸡，并引起死亡，随鸡年龄的增长，抵抗力逐渐加强。IBV自然感染通常在48h内出现症状；人工接种后24h到第7d始终可从鸡气管、肾、法氏囊中分离出病毒。雏鸡感染后死亡率为20%-30%，有报道腺胃型IB雏鸡死亡率可达95%[6]。本病主要通过呼吸道感染，也可因污染的饲料、饮水、用具等经消化道感染，病鸡康复后带毒时间可长达数周。本病一年四季均可发生，但以冬季最为严重。炎热、寒冷、拥挤、通风不良及维生素、矿物质、微量元素的缺乏都可以促使本病的发生。
4 临床症状和病理剖检变化
IBV自然感染潜伏期较长，有母源抗体的雏鸡可长达6d以上，人工感染的一般为18-36h，IBV感染的症状与感染的毒株、鸡的日龄、鸡场的管理水平、免疫水平和应激状况及是否并发症有关。IB在临床上分为呼吸型，肾型，腺胃型等3种类型。呼吸系统 5 的鸡的病理变化主要是鼻炎，支气管炎，偶有气囊浑浊增厚；由侵害肾的毒株致病时，肾脏肿大苍白，泄殖腔内稀薄粪便中夹杂白色尿酸盐泡状物；有侵害消化道毒株引起的病变，可见腺胃肿大，肌胃瘪缩，肌肉弛软，胸腺鸡法氏囊严重萎缩，肌肉苍白，肝脏肿大充血。
4.1呼吸型传支[7]
呼吸型IB，多发生于5周龄以内的雏鸡，雏鸡往往突然出现呼吸道症状，并很快波及全群，病鸡主要临床症状为：精神不振，呼吸困难，气管啰音，咳嗽，打喷嚏，夜间寂静时较明显。病鸡眼湿润，流鼻液；但大于6周龄的鸡常无鼻液。幼鸡死亡率约25%，雏鸡可达75%-90%。成年鸡感染主要表现为产蛋下降，产乱壳蛋、畸形蛋和粗壳蛋，蛋白稀薄如水，蛋黄与蛋白分离。
剖检时见呼吸道内有浆液性、卡他性和干酪样渗出，气囊浑浊，含有黄色干酪渗出物。在大的气管周围可见小面积的肺炎。产蛋母鸡可见卵黄性腹膜炎，腹腔内可发现液体状的卵黄物质，卵巢正常或充血、出血、变形。输卵管萎缩，其长度和重量明显减少或发生囊肿。雏鸡早期感染IBV，有时可导致生殖系统的损伤，如一些产蛋鸡，外观食欲均正常，但不产蛋，原因是卵子发育不良，输卵管管壁较薄，短缩，甚至积水。
4.2 肾型传支
肾型IB，目前发生较多，流行广。是在90年代初期、中期广泛发生和流行的疾病。主要发生于20-50日龄的雏鸡，早期有的可见呼吸道症状。排白色粪便，有时肛门周围粘满粪便。病鸡食欲下降，饮欲增强，呼吸症状以啰音为主，迅速波及全群，出现精神沉郁，羽毛松乱，水样排泄物及饮水量增加。40日龄以后的鸡发病较少，成年鸡很少发生。特征性病变时肾脏肿大，较正常的大1-2倍，整个肾脏呈斑驳状花肾，肾小管和输尿管扩张，内充满白色尿酸盐，直肠后段鸡泄殖腔均可见到灰白色稀薄含尿酸盐的粪便。部分病鸡的心包、肝、脾和肠道表面散布许多石灰样物，与痛风病变相似。
4.3 腺胃型传支
腺胃型IB多发生于已免疫过的鸡群，主要发生于20~90日龄的鸡群，患病初期表现咳嗽，甩鼻子，少数病鸡有呼吸啰音，饮食无明显变化；有的机眼睑肿胀，眼角有泡沫状液体流出，约两周左右呼吸症状消失或减轻，病鸡日益消瘦，鸡冠苍白，羽毛蓬松，闭目嗜睡，饮食减少，废绝，排白色绿色水样便，最后衰竭死亡[8]。开产鸡除呼吸道症状外，还可看到产蛋量和质量的下降，产畸形蛋、软皮蛋。下降程度与产蛋阶段和致病毒株有密切关系，而且产蛋水平多不能恢复到感染前水平；此外种鸡蛋孵化率下降，但死亡率一般很低。 鸡传染性支气管炎的研究诊断
6 主要剖检病变时鸡体消瘦，腺胃肿大，呈球状，腺胃壁增厚，腺胃粘膜出血和溃疡，个别腺胃乳头周边出血，膜充血、出血。使用传统的疫苗和肾传支疫苗，不能降低发病率和死亡率。
5 诊断
5.1 病原的分离与鉴定
在感染鸡出现临床症状时采用气管拭子法采集病料，或病鸡死后取病料组织如肺、气管、支气管、肾、输卵管盲肠等。
将气管拭子、组织病料置于2~3ml无菌的磷酸胰蛋白胨肉汤中，低速离心，取上清用微孔滤膜过滤，滤液备用。将肺、肾等组织病料置于加双抗的TPB中，用玻璃匀浆器匀浆，过滤，取上清备用。初代次分离病毒一般采用鸡胚[9]。由于ND疫苗的广泛使用，病料常被NDV污染，因此，分离IBV应首先排除NDV[10]。1990年李康然建议按如下程序分离IBV效果较好：病料→匀浆过滤加双抗于4℃4-6h后→接种9-10日龄鸡胚48h后→鸡胚盲传3-5代→HA检查阴性，NDV干扰试验阳性、侏儒胚阳性者→进一步做IBV鉴定。通过此方法一些变异株被不断发现，张安国等分离出腺胃型IBV[11]，杜元钊分离到IBV变异株YVVF7[12]，朱站波等鉴定分离出肾型IBV毒株MK、M2[13]。
5.2 血清学诊断技术
IB的血清学诊断方法有琼脂扩散试验（AGP），血凝试验(HI),免疫荧光试验(IF)，免疫扩散（D），酶联免疫吸附试验（ELISA），斑点-酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）及中和试验（VN）等。目前应用最广泛的是IFA和ELISA。ELISA在IB的近期感染、持续感染中均可应用，Wif采用抗体捕获ELISA检测IBV特异性IgM获得成功，一些研究表明[15]（Hong等；Stein等）日粮采食量水平、蛋白质含量和饲养水平会改变单一饲料原料的消化率，不同原料之间也存在互作关系，急性期感染敏感性为83%~100%，Ignjafovie[15]建立的ELISA也具有较高的敏感性。Wang[16]利用IFA与分子生物学技术在IBV鉴定应用上比较发现IFA在两种毒或更多毒株同时感染时，敏感性较低，但具有快速和成本低的特点。VN作为常规诊断的方法费力费时，对野毒需育结3-4代鸡胚才会发生典型病变[17]。AGP就诊断效果与ELISA得一致性较好，但由于沉淀抗体在感染后几周内消失，所以AGP只适用于近期感染的诊断[18]；HI对近期感染、持续感染都可适用，总之，血清学检验具有良好的特异性和不同毒株抗原交叉关系复杂，所以标准很难统一，单抗和标准化诊断抗原可解决这一问题，有关研究正在进行中。 7 5.3分子生物学技术
应用PCR技术制备放射性标记或生物素标记的核酸探针，用于IBV的检测，具有敏感、特异、快速等优点。采用聚合酶联氏反映（RT-PCR）结合限制性片段长度多胎性分析，对PCR产物进行限制性的内切酶消化，不同血清型IBV的PCR产物可产生不同数目、不同长度的DNA片段，参照标准毒株便可鉴定血清型。其结果和中和试验结果完全一致，目前这种方法很多。总之，IB的诊断与其他并相比有不少的困难，一是由于IB血清型和突变株较多，不同的毒株之间的抗原交叉关系非常复杂；二是诊断抗原制备复杂，并且不同的毒株，实验的结果也有差异。随着科学及生物技术的发展，相信会有更适用的诊断技术出现。
6防治
由于IB是病毒引起的疾病，一旦发生后无特效药物治疗，主要采取综合防治措施。故应注意预防，平时加强饲养管理，严格检疫、隔离、消毒、免疫等一系列综合性防治措施。如不要从疫区引种鸡，加强饲养管理，供给适宜的饲料及微量元素等，保护好环境卫生，定期消毒，适度通风，舍温、适度要合适，饲养密度合理，减少应激。作好常规的免疫接种，国内运用中草药制剂已取得良好的治疗结果，同时给集群应用抗菌药物，对防止继发感染有良好的作用。
鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展(下)
⑧中同采禽２００２年第２４卷第１７期 Ｃｈｉｎａ Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｖｏ１．２４，３１ｏ．１ ７．２００２ 鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展ｃ下， 舒黛廉 ，杨增歧 ，赵余放 ，康佐文 （１．郑州牧业工程高等专科学校，河南郑州４５０００８； ２．西北农林科技大学，陕西杨凌７１２１００； ３．河南省平顶山市环境监测中心站，河南平顶山４６７０００） ４ ＩＢＶ基因组ＲＮＡ的结构特征及生物学特性 ＩＢＶ基因组为一线状单股ＲＮＡ，５ 端有帽子结 构，３ 端有聚（Ａ）尾，具有感染性，故为正链，大小约 ２０ｋｂ。Ｂｏｕｒｓｎｅｌｌ等（１９８７）测定了ＩＢＶ的基因全序列，共 有２７６０８个核苷酸组成［包括聚（Ａ）尾，不同毒株可能 有差异］，分子量为８ｍｄ，它比目前所知的任何稳定的 Ｒ２ｑＡ病毒要大很多，ＩＢＶ基因组被分为６个区域，至少 有１０个开放读码框架（ＯＲＦ）。在ＩＢＶ感染细胞内可检 出６种ｍＲＮＡ，从小到大分别命名为ｍＲＮＡ Ａ、Ｂ、Ｃ、 Ｄ、Ｅ、Ｆ。ＲＮＡ酶切后的指纹图谱说明，这些ｍＲＮＡ的 ３ 末端具有共同的核酸序列，５ 末端的长短不同，构成 了一个巢样结构，其中ｍＲＮＡ Ａ最短，ｍＲＮＡ Ｂ、Ｃ、 Ｄ、Ｅ、Ｆ依次延长，ｍＲＮＡ Ｆ与病毒基因组同长。一般 认为，只有在５ 末端的单一序列才具有编码功能。现 在已确定，ｍＲＮＡ Ａ、Ｃ、Ｅ分别编码ＩＢＶ的３个主要结 构蛋白——核衣壳蛋白（Ｎ）、基质蛋白（Ｍ）、纤突蛋 白（Ｓ）。ｍＲＮＡ Ａ、ｍＲＮＡ Ｃ和ｍＲＮＡ Ｅ的总长为 ８．９ｋｂ，毒基因组ＲＮＡ的示意图如下： ５ 一ｌｌ—ｌｓ，Ｉｌｓ’Ｉ＿一ｌＭＩ—ｌＮＩ—Ａ Ａ Ａ ３ ｍＲＮＡ Ｂ、Ｄ分别编码７．５ｋｄ，９．５ｋｄ和６．７ｋｄ， ７．４ｋｄ，１２．４ｋｄ共５种小蛋白。而ｍＲＮＡ Ｆ则可能编码 依赖ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶，但尚缺乏直接证据。 ＩＢＶ基因组ＲＮＡ和ｍＲＮＡ ５ 末端有一个约为６０ 碱基的引导序列，其中Ｇ、Ｃ各占１２％，Ａ为３２￣，６，Ｔ为４３％。 ＩＢＶ ｍＲＮＡ的结构同真核ｍＲＮＡ的结构相同，但它并 不是由前体ｍＲ．ＮＡＪＪ／Ｉ工得到的，而是直接由引物起始 转录形成的。ＩＢＶ进入感染细胞后，正链Ｒ Ｎ＾先转录出 一条负链Ｒ２＇ｑＡ。引导序列先从负链模板上独立转录出 来，在引导序列３ 末端有一５ＬＣＴ（Ｔ／Ｇ）Ａ Ａ Ｃ Ａ Ａ一 ３ 序列，可与负链模板上各基因起始处的３ －ＧＡ（Ａ／Ｃ） ｕ ｕ Ｇ ｕ ｕ一５ 序列配对，从而引导ｍＲＮＡ的合成。 ｍＲＮＡ￣成是不连续的。未合成完全的ｍＲＮＡ可以从 模板上脱落形成游离的ｍＲＮＡ中间体。这些中间体又 可重新接合到模板上继续合成。在混合感染的情况下， 这种重新结合可能发生在不同毒株的ＲＮＡ模板与 ｍＲＮＡ中间体之间，造成了不同毒株间的基因交换。 １９８５年，Ｍａｔｔｈｅｗｍ等人采用ＰＢＲ ，获得了ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｄ／￣Ｓ蛋白的ｃＤＮＡ克隆，并对其核苷酸序列和编 码蛋白质的ＡａＪ￣ｌＪ进行了详细的分析。首次采用链终 止法获得了ＩＢＶ ｓ蛋白的完整编码序列，其转译产物为 一段有１１６２个 ，分子量为１２７００６ｗｔ的多肽。通过对Ｓ 末端部分的Ａａ分析，确定ＴＯＲＦ￣编码Ｓ，末端氨基酸 的准确位置，并证明在前期转录中形成的１８个 并不 包含在后来转译的ｓ，蛋白上。 １９８６年，Ｊ．Ｄ．Ｋ．Ｂｒｏｗｎ等在分析了ＩＢＶ的ｃＤＮＡ序 列的前提下，进一步肯定ＩＢＶ基因组ＲＮＡ中的前导 序列存在于５ 末端。 １９８８年，Ｓｈｉｚｕｒｏ Ｓｕｔｏｕ等人克隆了编码ＩＢＶ结构 蛋白的ｃＤＮＡ，并对其全序列进行分析，确定了病毒 基因组ＲＮＡ上ｍＲＮＡ Ｅ、ｍＲＮＡ Ｄ、ｍＲＮＡ Ｃ、 ｍＲＮＡ Ｂ、ｍＲＮＡ Ａ中前导序列一侧的 ＣＴＴＡＡＣＡＡ或ＣＴＧＡＡＣＡＡ序列（ＦＳ）。其中 ｍＲＮＡ Ｅ的ＦＳ位于第１４５９至１４６６位；ｍＲＮＡ Ｄ的ＦＳ 位于第４９７６至４９８３位，ｍＲ＿ＮＡ Ｃ的Ｆｓ位于第５５７３至 ５５８０位；ｍＲＮＡ Ｂ的Ｆｓ位于第６６７８至６６８５位， ｍＲＮＡ Ａ的ＦＳ位于第６９７９至６９８６位。 ５ ＩＢＶ ＲＮＡ基因组的转录 ＩＢＶ基因组为单股正链ＲＮＡ。在病毒的感染复 制过程中，病毒首先以＋Ｒ Ｎ＾为模板合成与基因组 ＲＮＡ等长的负链单股ＲＮＡ，随后再以此形成Ａ、Ｂ、 ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ ６种ｍＲＮＡ。这些ｍＲＮＡ均戴帽，都有聚 （Ａ）尾，特异性排列成一套，长度逐渐减小。每一较 小的ＲＮＡ含有所有的３ 端序列，这称为“３ 同末端成 套结构”（３ ＣＯ—ｔｅｒｍｉｎａｌ ｎｅｓｄｅ—ｓｅｔ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ），在５ 一
鸡传染性支气管炎病毒实验室诊断技术研究进展
河南畜牧兽医 ２００２年（第２３卷）第３期
传染性支气管炎病毒实验室
诊断技术研究进展
舒黛廉 王珏： （１郑州牧业工程高等专科学校４５０００８；２河南医科大学）
６５—９ ６ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００４—５０９０｛２００２）０３—０００９—０３
鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ） 毒粒子核酸型试验，生物学特性（如
存在多种血清型，至今全世界至少 血凝性、干扰现象），并结合血清学
已分离出３０个血清型和更多的突变 方法和其它检测ＩＢＶ抗原的方法，
株，而不同血清型甚至不同毒株之 才能得出可靠的结果：
间的交互免疫力差，给该病的防治 ２ 普通血清学诊断技术
带来了极大的困难，使此病成为危 ２．１ 血凝试验（ＨＡ）和血凝抑制试
害世界养禽业的主要疫病之一，如 验（ＨＩ）
何快速、灵敏准确地诊断该病，已变 未经酶处理的ＩＢＶ对动物的红
得极为重要。本文就近年来该病在 细胞无凝集性，１９５９年Ｃｏｒｂｏ和
实验室诊断技术方面的进展综述如 Ｃａａｎｉｇｈｏ．ｎ发现ＩＢＶ用胰酶处理后可
下： 凝集鸡红细胞，这种凝集作用不能
１ 病毒的分离与鉴定 被特异性抗血清所抑制。Ｂｉｎｇｈａｎ用
分离出该病病毒是诊断该病的 Ｉ型磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ１）和神经氨酸酶处
可靠方法之一。气管是分离该病毒 理Ｍ４１株后，也能凝集鸡红细胞，这
的首选采样部位，也可以从肺脏、肾 种凝集作用可被特异性抗血清所抑
脏、泄殖腔、输卵管、茸肠、扁桃体等 制。Ａ１ｅｘａｎｄｅｒ研究了ＩＢＶ血凝素的
部位采样。但布拉塞维尔（１９９１）报 生产、贮存和稳定性，并建克了ＩＢＶ
告从大肠，特别是盲肠、扁桃体组织 的血凝抑制试验方法。１９９４年吴延
或粪便中分离病毒的成功率最高。 功等用我国分离的Ａ型魏氏梭菌的
李康然报道，由于使用新城疫疫苗， 培养液处理７株ＩＢＶ，结果发现除Ｔ
病料常被ＮＤＶ污染，造成分离困难， 株外，都有血凝性，而且这些毒株的
鸡传染性支气管炎病毒的检测方法研究进展
肖 ＵＵＯ．Ｕ
鸡传染性支气管 病毒的检测方法研究进展
亓丽红．艾武
（山东省农科院家禽研究所，济南 ２５００２３）
中图分类号：Ｓ８５２．６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—１０８５（２００６）０８—００４４—０４
鸡传染性支气管炎（Ａｖｉａｎ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ， ＩＢ）是由鸡传染性支气管病毒（ＩＢＶ）引起的一种急性、
高度接触性、传染性病毒性传染病。本病主要侵害鸡 的呼吸道、泌尿生殖道、消化道等，所造成的产品质 量和生产效益的下降通常比死亡还要严重，凶此具
有重要的经济意义。南于ＩＢＶ血清 多，不同ｆｌｆ【清型 缺乏有效的交叉保护，新的变异株不断出现，造成免 疫效果的下降，ＩＢＶ的不断暴发，因而造成巨大的 经济损失。本文就传统的诊断方法和近年发展起来 的快速、敏感、特异的诊断方法进行系统地阐述
１病毒的分离培养 １．１ 病料采集 用棉拭子从发病鸡气管或泄殖腔 分离病毒．并将拭子存放于有抗生素的冷磷酸胰胨
肉糖（ＴＰＢ）中，冷冻保存，也可无菌采集部分气管、 肺、肾、盲肠扁桃体、输卯管等病料分离病毒。 １．２鸡胚接种ＩＢＶ易在鸡胚中生长．鸡胚接种是 最好的分离方法之一，将处理好的病料接种９～１ １
收稿日期：２００６—０６—１９
用处方药的需要。第四，乡镇兽医站要积极推广畜 牧饲养技术、疾病防治技术和药品使用技术，建立 起养殖户用药档案。执业兽医师要严格职守，认真
使用处方药，搞好用药记录以及药品停药期，发现 疫情及时上报 ３．２全面推行兽药经营质量管理规范（ＧＳＰ） 在药 品销售方面。应学习欧盟兽药分销体系 如果是处方 药，生产商或进口商可以将该处方药销售给批发商， 由批发商销售给执业兽医师，执业兽医师可以将该 处方药销售给终端用户．终端用户负责给动物饲喂 或注射。执业兽医师也可以直接给动物饲喂或注射。 如果暴发重大疫情，国家储备的兽药直接南执业兽 医师取得，冉到终端用户。兽药经营必须有２名以上 兽医师人员，采购员、仓库保管、入库验收人员、药品 调剂和销售人员必须是兽医技术员 要制定经营和 Ｈ龄的ＳＰＦ鸡胚，接种后３６—４８ｈ，尿囊液中的病毒
鸡传支气管炎病毒分离及S1基因特性研究
鸡传支气管炎病毒分离及Ｓ １基因特性研究
冯邹达（广东省珠海出入境检验检疫局拱北办事处５１９０００）
摘要：应用常规实验室方法对广东地区疑似传染性支气管炎
病例进行病原分离鉴定，利用分子生物学技术对分离株Ｓ１
基因进行克隆与特性鉴定，并与经典株等相应毒株ｓ１高变
区氨基酸序列进行相似性比较分析。结果显示，６株病毒分
离株均具有明显ＩＢＶ特征，序列分析证实广东地区存在多种
基因型ＩＢ流行毒株，主要以Ｌｘ４血清型为主，与常用疫苗
株Ｈ Ｈ１∞及Ｍ４—９１亲缘关系较远。
关键词：鸡；传染性支气管；病毒；分离；鉴定；分离株；
ＲＴ—ＰＣＲ：同源性分析：广东地区
鸡传染性支气管炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ）是由传染
性支气管病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＩＢＶ）感染鸡引起
一种急性、高度接触性传染病。该病一年四季均可发生，可
感染所有１３龄鸡只，多发于寒冷潮湿冬春季节，雏鸡最为易
感并表现出明显呼吸道、泌尿生殖道症状，死亡率可高达
３０％。近年来，由于环境因素、病毒抗原变异及鸡群不良状
态等不利因素影响，该病在免疫鸡群中爆发现象越来越严
重。给控制、预防本病带来严峻考验。本研究应用常规实验
室方法分离广东地区疑似ＩＢ病原．对Ｓ１基因进行克隆与特
性鉴定，从分子水平解释免疫鸡群发病原因，进一步探讨
ＩＢＶ在地方变异情况，确定该地区致病毒株基因类型，为选
择能保护该地区鸡群最佳疫苗类型提供重要的参考依据。
１材料与方法
１．１材料
１．１．１病料
收集广东省内３个不同区域６个鸡群，疑似患ＩＢ鸡群气
管、支气管、肺、肾等组织样品，样品１、２、３为区域一不
同鸡群样品，样品４、５为区域二不同鸡群样品，样品６为
区域三不同鸡群样品。
１．１．２材料 ９日龄健康鸡胚，１日龄健康仔鸡均购自某集团公司。
１．１．３菌株、质粒和试剂
菌株Ｅ．ｃｏｌｉ ＴＧ１、连接载体ｐＭＤ１８一Ｔ Ｖｅｃｔｏｒ、两步法
鸡传染性支气管炎实验室诊断方法研究进展
动物医学进展。２００８，２９（１）：９５—９９ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
鸡传染性支气管炎实验室诊断方法研究进展
李中华 ，史 惠 ，周 毅 ，杨得胜 ，曹 波 （１．福建省动物疫病预防控制中 已、，福建福州３５０００３；２．连云港出人境检验检疫局．江苏连云港２２２０４２） 摘 要：传染性支气管炎是鸡的一种重大传染病，临床上无典型的病变特征，诊断较为困难。现有的实 验室检测方法有血清学、病原学和分子生物学方法，但该病病原变异复杂，血清型众多，交叉免疫性低，临床 上又多采用活毒进行免疫，以至实验室无法对疫苗毒和野毒进行准确区分。为了更好地控制本病，有必要根 据临床特点对目前各种检测鸡传染性支气管炎的方法及其优缺点进行分析，为临床寻找一种适合的快速准 确的诊断方法、制定合理的免疫程序和发展新型的诊断方法提供参考。 关键词：传染性支气管炎；传染性支气管炎病毒；诊断方法；鸡
中图分类号：￥８５２．６５９．１；￥８５８．３１ 文献标识码：Ａ 传染性支气管炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ）是 由传染性支气管炎病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉ一
［１ ７］
［１８］
［１９］ ［２ｏ］ ［２１］ ［２２］ ［２３］ 文章编号：１００７—５０３８（２００８）０１—００９５—０５ ｒｕｓ，ＩＢＶ）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病， 可造成养鸡业重大经济损失…。自１９３１年该病原 收稿日期：２００７—０９—０３ 作者简介：李中华（１９８０一）．男，湖北枝江人，兽医师。主要从事动物疫病防治工作。 咯谍 谁索 谁 靠 谁 靠舟 崇 索咯 谍谁 崇 崇 谁 斗束 弗靠赤赤书咯夺靠 ，｝靠 稚舡 ，＝－喑 Ｐｈｕｅｋｔｅｓ Ｐ，Ｍａｎｓｅｌｌ Ｐ Ｄ，Ｂｒｏｗｎｉｎｇ Ｇ Ｆ．Ｍｕｈｉｐｌｅｘ ｐｏｌｙｍｅｒ— ａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＆“ｐ＾ ｏｃｏｃｆ“ｓ ａｕｒｅｕｓ ａｎｄ ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｃａｕｓｅｓ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｍａｓｔｉｆｓ［Ｊ］．Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ，２００１，８４：１１４０—１１ ４８． Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ Ｂ Ｅ，Ｏｌｉｖｅｒ Ｓ Ｐ． ｎｌｕ１ｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｓｔｉｆｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ．Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｕｂｅｒｉｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．２００５，８８：３５１０－３５１８． 吴润，郝保青，农向，等．奶牛隐性乳房炎的主要病原菌的 ＰＣＲ鉴定［Ｊ］．中国牛业科学，２００６，３２（２）：１２—１４． 谢志勤，谢芝勋，唐小 ，等．多重ＰＣＲ快速检测奶牛乳房炎 ３种主要病原体［Ｊ］．畜牧与兽医，２００６，３８（７）：４－７． 杨东英，陈宏，张良志，等．牛ＢｏＬＡ—ＤＲＢ３基因的多态性 与乳房炎相关性初探［Ｊ］．中国兽医杂志，２００６，４２（７）：７－９． 顾有方，陈继红，陈会良，等．奶牛隐性乳房炎与被毛中Ｚｎ、 Ｃｕ、Ｍｎ含量的关系［Ｊ］．动物医学进展，２００５，２６（３）：８２—８３． 曹随忠，杨永新，李宏滨，等．蛋白质组学及其在奶牛乳房炎研 究中的应用ｔ－Ｊ］．动物医学进展，２００６，２７（３）：１ ３－１ ６． 张传祥，穆 飞，宋利国．奶牛乳房炎疫苗研究进展［Ｊ］．畜牧 兽医科技信息，２００６，（１）：４１、 Ｓａｍｐｌｅ Ａ Ｋ，Ｃｚｕｐｒｙｎｓｋｉ Ｃ Ｊ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂｏｘｒｉｎｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ— ｇａｍｍａ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎｔｅｒ［ｅｒｏｎ—ａｌｐｈａ，ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ ｂｏｖｉｎｅ ｎｅｕｔｒｏ— ｐｈｉｌ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｖｉｔ ｒｏ［Ｊ］．Ｖｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ａｎｄ Ｉｍｍｕ— ｎｏｐａｔｈｏｌ，１ ９９０，２５（１）：２３—３５． 陈德坤，雷莉辉，朱辉，等．ＴＡＫ免疫增强剂对奶牛乳房炎 的疗效观察ｒＪ］．西北农林科技大学学报：自然科学版，２００３， ３１（４）：７１ ７３． 伊岚，靳亚平，史 薇．奶牛乳房炎ＭＴＴ检测方法的药敏 试验研究［Ｊ］．动物医学进展，２００６，２７（３）：８５—８７，９８． 金 风，王若君，杨英．中药治疗奶牛隐性乳房炎临床试验 ｒ¨．中国兽医杂志，２００５，４１（８）；３３—３４． 张敬礼，置双山，袁逢新．自拟中草药方剂治疗奶牛隐性乳房 炎的试验［Ｊ］．中国畜牧兽医，２００７，３４（６）：６７—６８．
鸡传染性支气管炎疫苗研究进展
第２３卷第２期 ２００７年６月 沧州师范专科学校学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｇｚｈｏｕ Ｔｅａｃｈｅｒｓ’Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｎｏ．２ Ｖｏ１．２３ Ｊｕｎ．２００７ 鸡传染性支气管炎疫苗研究进展 于秀俊，杨静利，张莉 （沧州师专生物系，河北沧州０６１ｏｏ１） 摘要：鸡传染性支气管炎（Ａｖａｉｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ）是危害养鸡业的主要疫病之一。由于ＩＢＶ 血清型众多，不同血清型间没有或仅有部分交叉免疫性，使传统疫苗难以达到满意的效果。随着 ＩＢＶ分子生物学研究、免疫机制探索以及病原变异机制探讨等工作的逐步深入，ＩＢ基因工程疫苗和 ＤＮＡ疫苗研究工作也取得了一系列进展，为新型疫苗的研制奠定了基础。 关键词：ＩＢ；ＩＢＶ；疫苗；Ｓ１基因 中图分类号：Ｑ９３９．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－４７６２（２００７）０２—００４２—０３ 鸡传染性支气管炎（Ａｖｍｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，１１３）是由 传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）引起的鸡的一种急性、高度接触 性传染的病毒性疾病，以气管罗音、咳嗽、打喷嚏为主要特征， 是危害养鸡业的主要疫病之一。ＩＢＶ血清型众多，目前已报道 的血清型有３０余种，不同血清型毒株在毒力、致病性和组织 嗜性上存在着很大差异，相互间没有或仅有部分交叉免疫性， 同时新的血清型不断出现，给ＩＢＶ的预防带来了诸多困难。随 着ＩＢＶ分子生物学研究、免疫机制探索以及病原变异机制探讨 等工作的逐步深入，ｍ疫苗研究工作也取得了一系列进展。本 文综述如下： １ ＩＢ灭活疫苗 Ｇｏｕｇｈ、Ｂｏｘ等１９７７年就报道了用油乳剂灭活茁使ｍ得 到有效控制，但是，这并没能阻止ＩＢＶ变异株引起ｍ的暴发。 随后，Ｆｉｎｎｅｙ等研究表明１１３－＿７．ｆｒ￣能刺激良好的抗体反应； 王红宁、张联盟等１９９４年试制出传染性支气管炎（呼吸型、 肾型）多价油乳剂灭活疫苗“ ；经区域试验证明，该疫苗对鸡 安全无副作用，并能有效地预防肾型ｍ，提高肾型传染性支 气管炎疫区鸡群的成活率和生产效益。 灭活疫苗安全性好，不存在散播病原和毒力返强的问题， 且能激发良好的体液免疫反应。灭活疫苗的不足之处是使用 剂量大，需要配合佐剂，制备比较复杂，因而成本较高。我 国研制的灭活苗有ＩＢＶ灭活苗、ＮＤ一１１３二联灭活苗、ＮＤ— ＥＤＳ一１１３三联灭活苗、ＮＤ一１１３一ＥＤＳ—ＩＢＤ四联灭活苗，还 有ＩＢＶ二联苗（Ｈ 与肾型传支）、ＩＢＶ三联茁（Ｈ 肾型传 支与腺胃型传支）、ＮＤ一１１３二联二价灭活苗（ＮＤ、Ｈ 与肾型 传支）、ＮＤ一１１３Ｙ＿Ａ￣－－＂价灭活苗（ＮＤ、Ｈ 、肾型传支与腺胃 型传支）等。 ２ ＩＢ弱毒疫苗 弱毒疫苗是由抗原性良好的毒株连续通过鸡胚２５代以上 获得的。用于制备弱毒苗的毒株包括Ｍ４１株、荷兰株、 Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃａｔ株、Ａｒｋａｎｓａｓ株、Ｆｌｏｒｉｄａ株、ＪＭＫ株、Ｄ２７４株、 Ｍ１４６株等。一般认为Ｍａｓｓ型ＩＢＶ是世界范围内分布最广泛 的血清型，且Ｍａｓｓ型能对异型毒株也产生较好的免疫力，该 血清型的Ｈ 、Ｈ 和Ｍａ５致弱活毒疫苗株为绝大多数国家所 采用。其次是Ｃｏｎｎ疫苗株。单一的血清型疫苗只能对同型ＩＢＶ 感染产生免疫力，对异型病毒只能提供部分保护或根本不保 护，各地应根据当地流行的血清型选择疫苗。在美国，Ｍ４１ 株、荷兰株及Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃａｔ株已被广泛应用，而ＪＭＫ株、Ｆｌｏｉｒｄａ 株及Ａｒｋａｎｓａｓ株经特许才可区域性应用，荷兰用荷兰株、Ｄ２７４ 和Ｄ１４６６株，澳大利亚用Ｂ和ｃ亚型株，我国常用的为Ｈ１２０ 株和Ｈ５２株 ，Ｈ１２０毒力弱，Ｈ５２毒力较强，两者要配套使 用。Ｈ１２０用于３０日龄以下的雏鸡，Ｈ５２只能用于３０日龄以 上的雏鸡，否则会对肾脏和输卵管形成伤害哪。疫苗株应避免 过多地传代以防其免疫原性降低。 活疫苗常常能有效地刺激机体的免疫系统，激发体液免 疫和细胞两种免疫力；同时使用较为方便，许多可用作群体 免疫（饮水免疫和喷雾免疫），此外这类疫苗的生产成本较 低。然而，活疫苗也有其不足之处：其致弱程度难以掌握； 疫苗的运输、贮存和使用等的条件要求较高；疫苗株有一定 的致病性和传播能力，接种疫苗后引起轻度的呼吸道反应， 并且当鸡群中存在致病性支原体时，会成为慢性呼吸道病暴 发的激发因素。活疫苗使用的另—个问题是：ＩＢＶ在ＲＮＡ转 收稿日期：２００６－０３－２６ 作者简介：于秀俊（１９７Ｏ一），女，河北沧州人，沧州师范专科学校生物系副教授。 ・４２・
鸡传染性支气管炎血清学检测方法研究进展
・ １Ｏ ・ 《上海畜牧兽医通讯》２００６年第３期
鸡传染性支气管炎血清学检测方法研究进展
秦绪岭 （聊城大学农学院动物科学系 山东聊城２５２０５９）
鸡传染性支气管炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，简称ＩＢ）是由 传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）引起鸡的一种急性、高度接触性
呼吸道和泌尿生殖道疾病。从１９３１年Ｓｃｈａｌｋ等首先在美国
报道鸡传染性支气管炎以来，研究工作者就对其进行了长期 不懈的研究，并在病毒的分离、鉴定、检测和诊断方面取得了
相当大的成就。我国于１９７２年由邝荣禄首次报道在广东省
有传染性支气管炎存在，随后国内绝大部分省份都有本病发 生的报道。特别是近年来，随着生化技术、生物技术的发展， 人们对本病不断有新的发现和认识，国内外建立了很多鸡传
染性支气管炎检测诊断方法，如琼脂扩散试验、对流免疫电 球试验、血凝抑制试验、血清中和试验、酶联免疫吸附试验、
荧光抗体技术等，现把这些方法的研究进展综述如下。
１琼脂扩散试验（ＡＧＰ）
琼脂扩散试验操作快速、简便、特异性强，自１９６６年 Ｗｏｅｒｎｌｅ…将其标准化以．来，广泛应用于ＩＢＶ的抗体检测。
鸡群阳性率上升，表示有ＩＢＶ感染发生。
在进行免疫琼脂扩散试验之前，首先进行其抗原的制 备。抗原制备的方法有许多，有直接将感染鸡胚的尿囊膜或
尿囊液作为ＡＧＰ抗原，即将感染的尿囊膜制成乳剂作为抗 原，或者将乳剂滤液冻干，这样不仅保留了ＩＢＶ的完整性，而
且还可以提高ＡＧＰ诊断法的特异性。但多数情况下都是采 用吸附法、透析法、沉淀法进行浓缩纯化后作为抗原。也有
人以感染鸡的气管渗出物作为抗原与已知的抗血清进行
ＡＧＰ反应，能够检测出渗出物中含有的病毒。常用鸡胚致死 毒Ｂｅａｕｄｔｌｌｅ株制备琼扩抗原【２］。封文海【３１等用感染ＩＢＶ的
鸡胚尿囊液和绒毛尿囊膜制备琼扩抗原，发现以感染１ＢＶ后
２０～３０ ｈ的绒毛尿囊膜和感染ＩＢＶ后４８～６０ ｈ的尿囊液效 果最佳。
鸡传染性支气管炎研究进展
叠黜’ 丽而葡 丽丽 总之，我国地方猪种仅有少量的氟烷基因存在，而国外 猪种均有不同程度的氟烷基因存在。有关我国地方猪种与国 外猪种在氟烷基因型上的明显差异值得深入研究，以进一步 揭示其在遗传学上的意义。 ４对策 氟烷基因具有提高瘦肉量的遗传优势，但会增加ＰＳＥ 肉和猪的突然死亡率，而且还会降低母猪的繁殖性能。理 想的方法是把父母系中氟烷基因全部清除。建议各种猪 场及时对种猪群和后备猪进行氟烷基因型检测，在种畜 群中彻底清除有害基因，提高种畜的质量。目前，国际养 猪业已把消除氟烷基因作为一个长期战略目标，越来越 多的报道表明，氟烷基因对肉质的影响是加性而不是隐 性的，且Ｎｎ不及ＮＮ。最近人们研究认为可能有一个主导 产瘦肉的基因和氟烷基因连锁。自从ｌ９９１年来，采用 ＰＣＲ－ＲＦＬＰ的分析测定方法对氟烷基因进行检测为消除 氟烷基因提供了一种方法。采用该方法可以ｌ００％将各种 基因型分开，从而根据不同的育种目标进行选育。 Ｃ０ＳＴＷ０ＬＤ公司大约经过ｌ５００次ＤＮＡ检测，最后消除了 所有的氟烷基因。在一个瘦肉率很高的合成系中氟烷基 因从９０％减少到０，方法是首先通过氟烷检测，然后对邻 近标记基因（ＰＨＩ、Ｐ０２、６一ＰＧＤ）的血液基因型检测。最后 通过ＤＮＡ检测。由于消除氟烷基因而减少的瘦肉量小于 ０．５％，这是由于选择其他对瘦肉量有微小作用基因带来 结果，纯系肉色改善４０％。 我国地方猪种携带氟烷基因很少。但是，自８０年代以 来，从国外大量引进瘦肉型猪种，很有可能将携带此有害隐 性基因的纯合体和杂合体引入国内，流传扩散。要做到以下 几点： ４．１从国外进口种猪时，除进行常见的传染病检验，要把猪 应激综合症列为猪的首检遗传病，严格氟烷检验。引入后要 进行２－３世代的连续检验，以防氟烷基因扩散。 ４．２有组织地对饲养外来品种的大型集约化猪场进行氟烷 基因普查。 ４－３在组织猪育种或杂交生产时，要慎重选择外来品种。研 究表明，不同品种猪的ＰＳＳ易感性不同。比系兰德瑞斯发生率 较高（５３％－８５％），皮特兰最高（３５％－１００％），属强应激敏感 系。汉普夏和大多数兰德瑞斯品系居中，杜洛克、大白猪属强 抗应激系。 主要参考文献 １．方美英等：不同猪种中氟烷基因频率调查分析，《浙江农业学 报》，ｌ９９９，ｌ１，（３）：１４５～１４７ ２．李来记：猪ＭＨＳ基因分子遗传学基础与应用研究，（博士论 文），北京：中国农业大学。ｌ９９６ ３．陈蕴颖，步宏，李幼平等：中国内江猪的氟烷基因型，《华西医 科大学学报》，ｌ９９ｌ９。３０（２）：ｌ１７ ４．步宏：中国近交系猪的氟烷基因型研究，《中国修复重建科杂 志》，２０００，１５（５）：３ｌ１～３１４ ５．谈永松：我国新品种猪的培育方面：《上海畜牧兽医通讯》， ２００２，ｌ ， ６．杜立新等：猪ＲＹＲ１基因的检测及其对生产性能的遗传效应， 《畜牧兽医学报》，２００１，３２（６）：４８１～４８６ ７．徐小波等：氟烷阴性母猪的测交及其后代经济性状比较．《江 苏农业学报》，ｌ９９８，ｌ 一１２一 鸡传染性支气管炎（ＩＢ）是鸡的一种急性、高度接触性传 染病，以咳嗽、喷嚏、气管 音、产蛋量下降、肾病变、腺胃肿 大、出血为主要特征。 本病最早于１９３１年（Ｓｈａｃｋ和Ｈａｗｎ）报道于美国，１９３６年 Ｂｅａｃｈ和Ｓｃｈａｌｉｎ确定了该病的病毒病因学。１９５６年Ｊｕｎｇｈｅｒｒ等报 道了１９５１年分离的Ｃｏｎｎｃｔｉｃｃｕｔ株和１９４１年分离的Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔ￣ 株。摩洛哥（１９８６）、美国（１９９０）等国又分离出了一种以致肠道 病变为主要特征的嗜肠型ＩＢ。１９９１年在英国报道了由一株传 染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）新的血清型所引起的疾病，Ｃｏｕｇｈ等 称之为７９３Ｂ，Ｐａｒｓｏｎｓ等称之为４／９１。以后这两株证明属于同一 血清型。以后该病相继在法国、意大利、荷兰、泰国等国发生。 我国邝荣禄教授在１９７２年作出传支诊断，１９８３年确诊了肾传 支在我国的存在，１９９２年开始了对传支病毒分子生物学的研 究。１９９５年以来，我国江苏、山东、山西、安徽等省一些鸡场发 生了以消瘦、拉稀、腺胃肿大为特征的腺胃型ＩＢ。荣骏弓等分 离到Ｄ９１７毒株Ｈｕ９８株，另外，１９９６年杜元钊等从产蛋鸡中发 现了一株ＩＢＶ变异株，主要靶器官是卵巢、输卵管，而不是气管 和肾脏，主要引起产蛋鸡产蛋下降日。 １病原 ＩＢＶ属于冠状病毒科、冠状病毒属，有囊膜，为单股负链 ＲＮＡ病毒，呈螺旋对称，具有多形性，直径８０～ｌ２０ｎｍ，病毒主 要存在于病鸡的呼吸道渗出物、肾、肝、脾、血液、腔上囊等， 病毒能在１０－１１日龄鸡胚中生长，头几代鸡胚病变不明显。也 不致死鸡胚，到第ｌ０代时，鸡胚病变明显化，主要表现鸡胚生 长阻滞、胚卷曲、羊膜水肿、增厚、紧贴胚体、卵黄囊缩小、尿 囊液增多、肾尿酸盐沉着等。ＩＢＶ血清型比较复杂，现世界上 已分离出１００多个株，已有３０余种血清型，我国邝荣禄、荣骏 弓、李康然等也分离出许多病毒株。ＩＢＶ有４个病理型，Ｉ型： 不引起呼吸道症状，但引起喉和气管的组织学病变；Ⅱ型：引 起明显的呼吸道症状及上呼吸道组织学病变；Ⅲ型：引起明 显呼吸道以及上呼吸道和支气管组织学病变；Ⅳ型：引起所 有上呼吸道症状与病变以及间质性肾炎。 ＩＢＶ大多毒株５６℃经１５ｍｉｎ被灭活，有的耐热，用５６℃水浴 处理ｌｈ，毒力虽下降，但仍具感染力，病毒对酒精、乙醚、氯 仿、胆盐和其它脂溶剂敏感，对胰酶稳定，在每毫升含胰蛋白 酶４ｍｇ，５７℃ｌｈ不影响病毒感染力，反复冻融能严重损失ＩＢＶ 的毒力；病毒耐酸碱，能抵抗１％ＨＣｌ（ＰＨ２）、１％ＮａＯＨ（ＰＨｌ２） ｌｈ，可以与不耐受ＰＨ２的ＮＤＶ、ＩＬＴＶ￣ｆｌ以区别，病毒在ＰＨ７．８左 右最稳定；病毒对一般的消毒药敏感，如ｌ％来苏儿、０．０１％高 锰酸钾、７０％酒精、ｌ％福尔马林数分钟内可将其杀死。ＩＢＶ不 凝集鸡的红细胞，但ＩＢＶ经胰酶、卵磷脂酶Ｃ、家兔Ａ型魏氏梭 菌处理后仍具血凝活性；用Ｃ型魏氏梭菌处理比用胰酶好，因 用不同胰酶处理同一毒株有一定差异。 ２流行病学 ＩＢ自然感染仅发生于鸡，各年龄的鸡均易感，发病率可高 达８０％，死亡率达２５％以上，日龄偏大的和成年鸡，发病率、死 亡率低，一般为０．５％－２％；以肾病变为主的，多见于２～８周龄， 发病率１０％－６０％，死亡率１０％，．－４０％；腺胃型ＩＢ多发于２０～９ｏ日 龄的幼鸡，发病率３０％－５０％，死亡率达３０％，致死率达７５％；本 收稿日期：２００２－０５—１３ ＬＩＶＥＳＴＯＣＫ Ａｆ Ｉ￣ＵＺＴＲＹＩＮＤＵＳＴＲＹＮＯ．７．２００２ 病主要通过呼吸道感染，也可因污
鸡腺胃型传染性支气管炎的实验病理学研究
・１６・ 兽医临床 广东畜牧堕医科才支 ２００９年（第３４卷）第２期
鸡腺胃型传染性支气管炎的实验病理学研究
魏昆鹏，郭万华，白丽瑶，陈立功 ，郝延刚 （河北农业大学动物科技学院，河北保定０７１００１）
摘要：用疑似鸡腺胃型传染性支气管炎病鸡的腺胃组织匀浆，经除菌处理，人工接种健康雏鸡，出 现典型症状，继而死亡。对人工感染病例进行了系统的病理学观察。人工感染病例和自然病例的病理变 化基本相同，其主要眼观病理变化为腺胃显著肿大、出血；主要组织学变化为腺胃粘膜充血、出血、炎 性水肿和浅层坏死。从自然病例和人工发病病例腺胃中均可分离到传染性支气管炎病毒。 关键词：鸡；传染性支气管炎；腺胃型；人工复制；病理变化 中图分类号：￥８５６．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５—８５６７（２００９）０２一Ｏ０１６一Ｏ３
荷兰学者Ｋｏｕｗｅｎｈｏｖｅｎ等 各以病死鸡高度消
瘦、腺胃显著肿大、腺胃乳头糜烂为病变特征的传染 病称为传染性腺胃炎（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｐｒｏｖｅｎｔｒｉ—
ｃｕｌｉｔｉＳ，ＩＰ），１９９４年以来，我国江苏圈、浙江圈、山 东凹、河．１ｌｓ￣、北京等省（市）不断有鸡传染性腺胃炎
的流行，发病鸡已逾数百万，给养禽业造成了严重威 胁。我国多数学者认为该病主要是由鸡传染性支气
管炎病毒（Ｉｆｅｃｔｉｏｕｓ ＢｒｏｎｃｈｉｔｉＳ Ｖｉｒｕｓ，ＩＢＶ）引 起的一种急性、高度接触性传染病。近年来，笔者在 流行病学调查和细菌学检验的基础上，排除了该病
为细菌性传染病的可能性。本试验从河北某地采集 疑似腺胃型传染性支气管炎病鸡的病料，接种健康
雏鸡，进行了鸡腺胃型传染性支气管炎的实验病理 学研究，以为该病的综合防制提供理论基础。
１材料与方法
１。１病料及处理疑似腺胃型传染性支气管炎的 ３５日龄病鸡于２００６年４月采自河北某蛋鸡场。无 菌操作，解剖２０只病鸡，取严重肿大的腺胃，按１：５
比例加入灭菌双抗（青、链霉素各３ ０００ ＩＵ／ｍＬ）盐 水，研磨成匀浆，４℃３ ０００ ｒｐｍ离心３０ ｍｉｎ，取上
鸡腺胃型传染性支气管炎的研究进展
甘肃畜牧兽医 ２００２年２（总１６３）期
鲁 莲 § ｌｌｌ｝黪蓉；
ｉ● ｇ 曲 §０ｓ０ 鸡腺胃型传染性支气管炎的研究进展
扬家华
（青海省畜牧兽医科学院，青海西宁８１０００３） 中国图书分类号：ｓ ８５８．３１文献标识码：Ａ文章编号：ｌ０Ｏ６—７９９ｘ（２００２）０２—００３４—＿ｏ３ 鸡传染性支气管炎（ＩＢ）是由传染性支气 管炎病毒（ＩＢｖ）引起的急性、高度接触性传 染病。该病毒在复制过程中槛易发生变异， 从而导致ＩＢＶ血清型众多，新的变异株不断 出现。病毒对组织器官亲嗜性也在发生变 化．导致不同病变型的出现。目前除呼吸型、 肾型、肠型外，１９９５年以来我国在江苏、山 东、山西、安徽等地发现以生长阻滞、消瘦、腹 泻，剖检表现为腺胃肿胀、乳头出血和溃疡， 胸腺、法氏囊萎缩为特征的腺胃病变型鸡传 染性支气管炎。并呈现流行趋势．给养鸡业 造成重大经济损失。 １病原学 王永坤（１９９６）、王玉东（１９９７）等先后从 发病鸡腺胃中分离到了冠状病毒。该病毒形 态为有囊膜的、多形态、略呈球形或梨形，直 径为８０～１６０ｎｍ。囊膜表面覆有长１２～ ２５ｌ＇ｌｍ的突起．整个病毒星皇冠状。鸡胚盲 传５－－６代时出现严重胚体卷缩。该病毒 ＴＯＣＬ￣，ｏ．的平均值为１０。 以上．最高可达 １０ 。理化特性与呼吸型传支和肾型传 支相似，对热、酸、碱和胰蛋白酶均有一定的 耐受力，二价镁离子能明显提高其耐热性；对 脂溶剂敏感，符合ＩＢＶ具有囊膜这一特征 朱国强等从江苏省发病地区鸡腺胃中分 离的 毒株具有典型的冠状病毒状态，大 小为６０～ｌ８０ｎｒｎ．并成功地研制出抗 毒 株膜蛋白的单克隆抗体。 提纯样品经 ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验证明 ５株单抗ＤＥ７和Ｍ｝１株单抗６Ｄｔ－ｌｓ均能识 别 株蛋白多肽，说明 ５株病毒多肽结构 与ＩＢＶ非常相似，间接ＥＬＩＳＡ和血凝抑制 试验结果证实了 毒株与多株ＩＢＶ标准株 和分离株的多抗血清和单抗发生交叉反应。 同时Ｈ９５毒株的多抗血清和单抗也能识别多 株ＩＢＶ毒株．结果表明分离的四株流行株与 传染性支气管炎病毒（ｍＹ）有密切的血清学 关系。 王碧林等以腺胃病变型鸡传染性支气管 炎病毒分离株Ｈ９５提取的ｔＬＮＡ为模板，按 ＩＢＶＢｅａｕｄｅｔｔｅ株ｓ 基因两侧对应序列．设 计一对２７ｂ口引物、引物间跨幅为１ ７ｋｂ。用 反转录一聚合酶链反应（ＲＴ—Ｐ（ ）获得与 预期大小一致的核酸片段，ＲＴ—Ｐｃｆ 产物凝 胶电泳后．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹，经ＩＢＶＭ４１型Ｓｌ 探针检测呈阳性，表明获得的分离株 Ｓｌ 基因与ＩＢＶＭ４１的ＳＩ基因有同源性，从棱 酸水平说明以腺胃病变为特征的分离毒Ｈ９５ 为传染性支气管炎新出现的变异株。 荣骏弓等用病鸡腺胃组织（Ｄ９７１）接种 ＳＰＦ鸡胚，传至１３代，具有规律性死亡和典 型胚胎病变特征．Ｅｕ 为１０ ‘ ／０．２ｍＬ。 用 ｝７１毒株接种ＳＰＦ鸡．能引起与自然病 例相似的病理变化。并分离到病毒。 ｝７１毒 株经卵磷脂酶Ｃ处理后能凝集鸡红细胞，并 能特异的被１