鸡白痢国家诊断标准要点
禽疫病的检疫-鸡白痢

禽疫病的检疫-鸡白痢
目录 Contents
1 临诊检疫 2 实验室检疫 3 检疫后的处理
禽疫病的检疫-鸡白痢
鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的一种细菌性传 染病。主要侵害雏鸡,以白痢为特征。
世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类疫病,我 国将其列为二类动物疫病。
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禽疫病的检疫-鸡白痢
有时堵塞肛门,排便困难。有的表现呼吸34困难,关节肿大,跛行。
②成年鸡 隐性感染,有时可见精神萎靡,鸡冠萎缩,产蛋率下降,蛋品质 下降。
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体弱,不食,被毛逆立 肛门周羽毛被污染,有时堵塞肛门不能排便
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关节炎
鸡冠萎缩、乌紫
产蛋率下降蛋品质下降
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禽疫病的检疫-鸡白痢
1.临诊检疫
(3)病理变化 ①雏鸡 肝脏肿大、充血或条纹状出血,胆囊肿大,含有大量胆汁。肺充血
或出血。卵黄吸收不良,呈油脂样或干酪样。肝、肺、心脏、肠及肌胃上有黄色 坏死点或灰白色结节。盲肠部膨大,形成栓子。肾脏色泽暗红色或苍白,肾小管 和输尿管扩张,充满尿酸盐。
② 成年鸡 卵泡变形、变色、变性,卵黄性腹膜炎及腹水,腹腔器官粘连。 (4)组织学变化
1.临诊检疫
(1)流行特点 不同品种、年龄的鸡均易感,2周龄以内的雏鸡发病率和死亡率较高。 一年四季均可发生,以冬春育雏季节多发。病死率40%~70%。
(2)临床症状 ①雏鸡 最急性者无明显症状突然死亡。病程稍长者,怕冷,扎堆,翅膀下
垂,精神萎靡,食欲减退。下痢,排出白色糊状粪便,常粘在泄殖腔周围羽毛上,
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2.实验室检疫
鸡白痢的识别

鸡白痢的识别雏鸡:到一周令的雏鸡能死于许多疾病的一种,这些疾病在临床上都出现非常相似的症状,但死后剖检却几乎不显现各自疾病可分辩的特征。
受鸡白痢侵害的雏鸡羽毛蓬乱、嗜睡、在肛门处有糊状物,并偶尔喘息。
有助于识别此病的方法是记载日死亡率。
当卵传播此病严重时,第一天就能出现死亡;当传播发生在育雏器中时,死亡开始于第五天,并一直增加到第12天,然后在第三周末下降。
这种类型不同于由于饥、渴造成的死亡,它们在第4——6天突出。
脐炎的死亡不断地发生,一直到第10天,然后才减少。
染病的雏鸡的死后剖检显示出特征性的脓肿,大多数在心脏但也有的在肺、肝和脾,盲肠可能发炎,类似球虫病。
由于特征性脓肿并不经常出现,所以重要的是至少要检查六个雏鸡。
必须至少给兽医实验室提供六个雏鸡做细菌生物学检查,才能获得此病的资料。
成年鸡:成年鸡或者象雏鸡一样地感染,或很少表现临床症状。
菌体经常定位在卵巢,而导致产生畸型的和色变淡的卵黄,在腹腔内能看到未吸收的卵和腹膜炎。
成鸡偶然地以白痢的败血症型突然死亡。
剖检变化与雏鸡相似,只是肝脏经常呈现明显的浅黄绿色。
通过检测血液中的鸡白痢沙门氏杆菌引起的抗体能够识别成年鸡是否感染。
全世界较普遍应用的试验是血清学凝集试验。
这个试验为快速全血凝集试验,并且在鸡场上已广泛应用。
所采用的抗原是由致死的鸡白痢沙门氏杆菌的有色悬浮液制成的,这些只能由兽医或由兽医雇用授权的试验员使用。
当血液和抗原混合时,组成抗原的被杀死的细菌聚集成块,说明血液中含有抗鸡白痢沙门氏杆菌的抗体。
出现血液凝集的鸡叫做“反应阳性鸡”或鸡白痢的带菌鸡。
检测带菌鸡的实验室方法有两种。
一种是血清凝集试验,它除了用血清替代全血以外,原理与全血凝集试验相似。
如果在死亡鸡的组织中有鸡白痢沙门氏杆菌,那么这第二种方法就是病原分离。
提醒鸡场,《家畜疾病规范》要求将鸡白痢的所有可疑情况的报告交给兽医检验员。
鸡白痢病的诊断及治疗

23鸡白痢的病原为沙门氏菌,发病时的主要特征为患鸡出现白色浆糊状下痢,并发败血症等。
在鸡场养殖中,该病可侵染不同日龄的鸡只,但主要侵染2~3周龄左右的雏鸡。
在雏鸡群中该病的发病率与致死率极高,随着鸡群日龄的增长及机体抵抗能力的增会发生卵巢萎缩、卵泡无光以及卵内油脂样内容物填充。
4 诊断要点对于3周龄以内的病死鸡雏可通过病理剖检诊断。
剖检后发现其内部脏器与肠道处出现结节或者坏死点,肝脏肿大,表面呈条纹状病变,脾肿大。
成年鸡染病,则可通过观察其卵巢是否发生萎缩、卵黄是否呈灰黑色或青色状等进行判断。
5 综合防治5.1 预防措施①做好鸡群日常养殖管理,定期清扫养殖圈舍,做好杀虫灭鼠工作,保证饲料安全、饮水安全、通风良好、环境优良;②做好养殖环境控制,保持良好通风与换气,控好温、湿,减少不良刺激;③使用药物防治,应用庆大霉素、大观霉素以及土霉素等药物来预防本病的发生和扩散;④添加微生态制剂预防鸡白痢,如强力益生素、促菌生等;⑤做好免疫接种工作。
5.2 治疗措施鸡白痢病的防治关键在于清除病原与淘汰带菌鸡,实现种鸡群的净化。
对此,种鸡场应当定期组织开展鸡白痢病的检疫工作,一经发现病鸡,则要及时将其淘汰出群。
种蛋孵化以前,要先用甲醛气体进行熏蒸消毒,育雏室、鸡舍等场所及其用具要经常性的清洗消毒。
孵化器投入使用之前,也要对其先进行清洗消毒。
3周龄以内的雏鸡群要使用药物防治手段,在其出壳后的5日内,在饮水中添加庆大霉素,用量为每千克饮水添加10万IU 的庆大霉素;6~10日龄的雏鸡,可将大蒜捣碎以后按照4%~8%的比例进行拌料伺服;从破壳后的第11日开始,停止用药3d,若无发现疫病情况,则可通过在饲料中添加土霉素或者在饮水中添加链霉素进行预防。
具体用量为每千克饲料添加2g 的土霉素,连续7d,或是饮水中添加0.1%的链霉素,连用10d,用于防治该病。
对于病重鸡雏的治疗,要使用卡那霉素,按每只鸡1mL 的用量,鸡白痢病的诊断及治疗刘勇刚,赵玉山,姜禹(平度市畜牧兽医局 山东青岛 266700)摘要:鸡白痢病是一种由沙门氏菌感染所引起的传染病,多发生于2~3周龄的雏鸡。
鸡白痢的识别与防治

绝,紧靠热源,怕冷,缩头闭眼,绒毛松乱,拥挤,继而排
出白色黏性带泡沫状稀粪。稀粪常粘住肛门周围的绒
毛,变干后堵塞肛门,病雏排粪时发出凄历的尖叫声。
成年鸡一般不表现症状,但产蛋率和受精率降低;少数
病鸡精神不振、腹泻或产蛋停止。
诊断 根据发病日龄、症状可初步诊断该病。对
发病,可用氟哌酸、环丙沙星等饮水给药。对重病雏
鸡可用卡那霉素治疗,每只鸡每天用药 1 毫升,分 2 次
胸部注射,连用 2~3 天。病死鸡要焚烧或深埋,被病鸡
粪 便 污 染 的 垫 草 也 要 集 中 烧 毁 ,各 种 饲 喂 工 具 要 用
2%的火碱溶液进行消毒,被污染的地面要铲除表土
并消毒。●
于千桂 山东省枣庄市山亭区新城黄河路 277200
适时 试 验 证 明 ,鸡 在 产 蛋 后 8~10 小 时 内 暂
不 需 要 钙ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ,只 有 夜 间 形 成 蛋 壳 时 才 需 要 大 量 的 钙
质 ,且 鸡 体 对 钙 的 存 留 能 力 有 限 ,因 此 ,以 在 每 天
12:00—18:00 给 鸡 补 充 高 钙 饲 料 最 佳 。 为 了 提 高
又不会动用骨髓中的钙源。因为鸡对钙的吸收能
力受磷的影响,所以只有钙、磷比例保持平衡时,才
进小肠对钙的吸收及骨髓的正常钙化。●
裴 凤 张士罡 江苏省滨海市东坎畜牧局
224500
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持舍内空气清新。
适时调整饲料配方 要根据产蛋率的变化来调整饲
料配方,以满足蛋鸡生产需要。
合理饮水 蛋鸡的饮水量与气温高低、饲料种类有
意抓好这一时期的管理工作。
保持舍内适宜环境 首先是温度,蛋鸡产蛋适温为
鸡 白痢

鸡白痢主要症状和病变:雏鸡表现不吃饲料,怕冷,身体蜷缩,翅膀下垂,精神沉郁或昏睡,排白色粘稠或淡黄、淡绿色稀便,肛门有时被硬结的粪块封闭,呼吸困难。
成年鸡无临床症状,少数感染严重的病鸡表现精神萎靡,排黄绿色或蛋清样稀便,主要病变可见肝脏、脾脏肿大、脆弱,有坏死点,肾脏暗红充血或苍白贫血,常出现腹膜炎变化。
产蛋鸡可见卵巢萎缩,卵子变性,病鸡产蛋停止。
防治:①从种鸡入手,对种鸡场进行鸡白痢综合防治及种鸡逐只检疫净化;②可药物治疗,最好先作药敏试验,一般用氯霉素、氟哌酸效果较好。
主要症状:病雏精神萎顿,缩头,翅下垂,拉白色浆糊状稀粪,肛门常被粪便粘住,排粪时发出“吱、吱”叫声。
成鸡多为隐性带菌,只有严重时见有贫血和下痢,母鸡产蛋量明显减少。
病变特征1.雏鸡:病死鸡脱水,眼睛下陷,脚趾干枯肝肿大、充血,较大雏鸡的肝脏可见许多黄白色小坏死点(图13-3)。
卵黄吸收不良,呈黄绿色液化,或未吸收的卵黄干枯呈棕黄色奶酪样。
有灰褐色肝样变肺炎,肺内有黄白色大小不等到的坏死灶(白痢结节)。
盲肠膨大,肠内有奶酪样凝结物。
病程较长时,在心肌、肌胃、肠管等到部位可见隆起的白色白痢结节(图13-4)。
2.育成鸡:肝脏显著肿大,质脆易碎,被膜下散在或密布出血点或灰白色坏死灶.心脏可见肿瘤样黄白色白痢结节,严重时可见心脏变形.白痢结节也可见于肌胃和肠管.脾脏肿大,质脆易碎 3.成年鸡:无症状感染鸡剖检时入肉眼可见病变,病鸡一般表现卵巢炎,可见卵泡萎缩、变形、变色,呈三角形、梨形、不规则形,呈黄绿色、灰色、黄灰色、灰黑色等异常色彩,有的卵泡内容物呈水样、油状或干酪样(图13—5)。
由于卵巢的变化与输卵管炎的影响,常形成卵黄性腹膜炎,输卵管阻塞,输卵管膨大。
内有凝卵样物。
病公鸡辜丸发炎,睾丸萎缩变硬、变小。
实验室诊断取肝脏坏死灶与白痢结节进行病理组织学检查:局部组织坏死崩解、淋巴细胞、浆细胞、异嗜细胞、成纤维细胞浸润增生。
将病、死鸡的心、肝、脾、肺、卵巢等器定局定局官采集的病料,接种于普通琼脂培养基进行细菌学诊断。
一例蛋鸡白痢的诊断与防治

一例蛋鸡白痢的诊断与防治作者:买成祥来源:《家禽科学》2024年第03期鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌感染引起的一种多发性传染病,患鸡主要症状表现为排出灰白色粥样或糊状粪便,张嘴呼吸,少部分鸡伴有关节肿大、跛行等症状。
与成年鸡相比,雏鸡对鸡白痢易感性更高,死亡率也更高。
该病没有明显的季节性,一年四季都可以发生。
病鸡与带菌鸡是主要的传染源,携带病原的种鸡经蛋垂直传播,也可水平传播。
被污染的垫料、饲料、饮水以及用具等是主要的传播媒介,可经消化道传播。
养殖场卫生状况不佳、鸡舍阴暗潮湿、饲养密度过大、没有做好疫苗接种、饲料质量差等均可促进本病的发生。
本病的发病率和死亡率较高,若治疗不及时,易造成严重的经济损失。
1 发病情况和政县一养鸡户,现养殖海兰褐蛋雏鸡1 200羽。
2023年4月29日开始发病,部分雏鸡表现精神沉郁、低头缩颈,后续发病鸡越来越多,雏鸡群整体生长不良。
一些早期发病的雏鸡开始出现了腹泻、张口呼吸情况,经常离群索居,呆立不动,对外界反应迟钝,活动意愿下降;个别早期发病雏鸡出现了死亡情况。
养殖户最初选用多西环素(休药期28日)拌料治疗,用药量为100 mg/kg[1],用药3 d后雏鸡的症状没有明显好转,且有更多的雏鸡出现相似病症,早期发病的雏鸡死亡数量不断在增加。
笔者收到求诊后赶往养殖场,发现该养殖场鸡舍阴暗潮湿、饲养密度较大,粪便堆积;统计发病雏鸡一共175只,死亡雏鸡45只,交谈中还得知该养殖场自鸡苗进场后仅进行了1次卫生打扫与消毒,卫生状况很差。
2 临床症状在发病早期,病鸡精神沉郁,羽毛杂乱,失去光泽。
伴随病程进展,病鸡出现腹泻症状,排出的粪便呈糊状,颜色为白色或者灰白色。
粪便带有一定黏性,伴随排便次数增加,病鸡的肛门以及附近的羽毛糊满了粪便,严重时还会糊住病鸡的肛门,导致病鸡排便困难,经常尖叫[2]。
病鸡活动意愿下降,对外界的反应迟钝,闭目昏睡,在温度较低的情况下,病鸡会成群挤在保温灯下。
鸡白痢的诊断与治疗方法

2020年第03期鸡白痢是一种由沙门氏菌感染而引起的传染病,以2~3周的雏鸡较为多发。
该病的传染率极高,极易引起雏鸡死亡。
随着日龄增长抵抗力增强,此病则多引发生殖系统病变,成为隐性与慢性感染。
如果母鸡患病后产蛋,蛋中会携带大量沙门氏菌,对鸡蛋的孵化率有着直接影响,导致雏鸡难以成活,甚至会引起鸡场发生大范围的白痢传染。
1流行特点鸡白痢是卵性传染病的一种,一年四季都可感染,冬春季为高发期。
此病的传染不受鸡禽品种与性别的限制,传播性很强,雏鸡的感染率较高,雌鸡比雄鸡更易感。
病鸡及隐性感染鸡是此病的主要传染源。
如果鸡场的饲养密度过大,鸡舍未及时通风,或鸡舍内温度不适宜都会引发大范围的鸡白痢。
雏鸡感染后死亡率极高,雌鸡感染后会导致产蛋率下降,甚至会对鸡蛋的孵化率产生直接影响。
2临床症状一周龄内的雏鸡极易感染鸡白痢,在感染后的21d内会出现死亡。
患病雏鸡表现精神不振,无法抬头,羽毛蓬松、体温升高明显、贪睡、不爱进食以及腹泻等病状。
雏鸡粪便呈灰白色,有时会粘附在肛门处。
病情加剧后,雏鸡的排便会受到影响,出现关节红肿甚至难以正常行走。
育成鸡与成年鸡多呈隐性感染,有时也会出现半隐性传染,雌鸡感染后产蛋率会受到严重影响。
病鸡的鸡冠比正常鸡要小,且光泽度差,只在产蛋时才会短期恢复光泽。
成年鸡若出现腹泻,则表明其病情加重。
3病理变化剖检发病雏鸡可见其双眼严重凹陷,腿部关节严重缺水,内部脏器红肿或出现多个大小不同的坏死点。
病雏鸡的卵黄吸收不良,卵黄内出现黄色稀水样物质。
病重的雏鸡心包明显增厚,有坏死现象。
剖检发病育成鸡可见,其肝脏极为脆弱,多出现红肿,轻轻碰触,肝脏表面就会破裂,并且病鸡的肝脏上有明显的血块。
心脏可见肿瘤样黄白色白痢结节,心包的颜色发黄,并且出现一定程度的坏死。
如育成鸡的病情加剧,其心脏还会出现明显变化,坏死范围也将进一步扩大。
在剖检发病成年鸡时可见,其卵巢中的成熟卵子数明显减少,卵子颜色也与正常鸡完全不同,多呈黄色与灰色,形状也发生改变,呈三角形等不规则状。
鸡白痢病的诊断及防治

2017年第2期(总第195期)在养鸡生产过程中,鸡白痢病不仅使养禽业招致很大的经济损失,而且是阻碍养禽业发展的重要疾病之一,鸡白痢病对鸡的生长,健康造成不同程度的威胁。
鸡白痢病是由鸡白痢沙门氏菌所引起的鸡和火鸡等禽类的传染病。
1病例我镇一肉鸡养殖户于2014年3月21日购入肉雏鸡1500只。
自购入后3小时始鸡群开始出现零星死亡,平均每天死亡10-20只,用20%环丙沙星按1:600饮水治疗未见明显效果,至15日龄时发病死亡约198只,病死率约13%。
病雏开始表现精神沉郁,低头缩颈,羽毛杂乱,食欲下降,挤堆,有少量拉白黏性稀便,病鸡排粪困难,发出叽叽叫声很快死亡。
3-10日龄死亡较多,随着病程的延长死亡较少。
病雏生长缓慢,有的鸡只出现关节肿胀,跛行,饮水采食困难。
2诊断2.1剖检雏鸡:3日龄内死亡的病鸡肺充血或血性肺炎,或有少数针头大小的灰白坏死点。
3日龄以上死雏的肺有较多针头大小的灰白坏死点。
病程稍长的雏鸡肺有灰黄色的坏死灶或结节。
肝有肿大、充血或有条纹状出血,或可见白色坏死点。
胆囊肿大、脾肿大、肾充血或贫血,尿管中有时因充满尿酸而扩张。
几乎所有病死雏肺脏均有上述病变。
如有上述一致肺部病变,可作为重要诊断依据。
成年鸡:最常见的病变部位在生殖器官,母鸡卵子形状不规则,色墨绿,卵膜变厚,呈囊状,内含油脂或豆渣样物质。
变异的卵子有的仍附着在卵巢上,有的脱落于腹腔内并被脂肪组织包围。
2.2鉴别诊断曲霉菌病亦是初生雏的常见病,雏鸡感染曲霉菌后的发病日龄、死亡规律、症状及病变均似鸡白痢病。
两病的病变特征在肺部,曲霉菌的肺结节明显突出肺表面柔软而有弹性,内容物呈干酪样。
感染鸡白痢沙门氏菌后不表现肉眼能辨认的病变。
成年带菌鸡常可见局部病变,特别是心包膜及卵巢变性,但此种变化与感染大肠杆菌、葡萄球菌及其他沙门氏杆菌的鸡的病变有时难以区别。
因此,鸡白痢的确诊仍须做细菌分离及鉴定。
3治疗措施3.1药物治疗应用磺胺类与土霉素等某些抗生素治疗本病均有效,但不能消除带菌者,治疗后仍不能做种禽。
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NY/T 536—2002 前言 鸡伤寒和鸡白痢(fowl typhoid and pullorum disease)是由鸡白痢沙门氏菌(salmonella pullorum)和鸡伤寒沙门氏菌(salmonella gallinarum)引起的各种日龄鸡和火鸡的传染病,以急性败血性经过或以慢性隐性感染为特征。本病呈世界性分布,所有养鸡的国家和地区都有发生。雏鸡发生本病时,发病率和死亡率均较高,严重影响雏鸡成活率;青年鸡发病后,死亡率可达10%~20%,病程可达20天~30天,鸡只生长发育受阻;成年鸡感染本病多为慢性或隐性经过,不表现明显的症状,但可长期带菌,成为本病的主要传染源,产蛋鸡可经蛋垂直传播,因此种鸡感染后可造成更大范围的传播,集约化养鸡场一旦发生本病会造成巨大的经济损失。
世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英),Office Intentional des Epizootic(法),OIE]将鸡伤寒和鸡白痢列为B类疾病,并规定了诊断标准和相应生物制品(多价抗原)的制造、标定和使用的国际标准,指定了专业实验室向全世界提供鸡白痢阳性血清标准型(S)和变异型(V)国际标准品。我国农业部也将其列为二类疫病。
本标准中的病原分离和鉴定及全血平板凝集试验是参照OIE《诊断试验和疫苗标准手册》(2000版)(Manual of Standards for Diagnostic Tests And Vaccines,2000)等相关标准性文件制定的。
本标准中的附录A为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国兽医药品监察所。 本标准起草人:夏业才、张学琴、康凯、姚文生。 1范围 本标准规定了鸡伤寒和鸡白痢病原分离和鉴定及全血平板凝集试验技术。 本标准所规定的病原分离鉴定适用于各种日龄鸡的鸡伤寒和鸡白痢的诊断;全血平板凝集试验适用于成年鸡的鸡伤寒和鸡白痢的诊断,可用于诊断、流行病学调查和无本病健康鸡群监测。 2病原分离和鉴定 2.1材料准备 2.1.1培养基 鉴别培养基:SS琼脂、麦康凯琼脂。 增菌培养基:亚晒酸盐煌绿增菌培养基、四硫磺酸钠煌绿增菌培养基、三糖铁琼脂和赖氨酸铁培养基。
以上各培养基配制方法见附录A。 2.1.2沙门氏菌属诊断血清 A-F多价O血清、O9因子血清、O12因子血清、H-a因子血清、H-d因子血清、H-g.m因子血清和H-g.p因子血清。
2.2采集病料 可采集被检鸡的肝、脾、卵巢、输卵管等脏器,无菌取每种组织适量,研碎后进行培养。 2.3分离培养 将研碎的病料分别接种亚晒酸盐煌绿增菌培养基(见第A.3章)或四硫磺酸钠煌绿增菌培养基(见第A.4章)和SS琼脂(见第A.l章)平皿或麦康凯琼脂(见第A.2章)平皿,37℃培养24h~48h,在麦康凯或SS琼脂平皿上若出现细小无色透明、圆形的光滑菌落,判为可疑菌落。若在鉴别培养基上无可疑菌落出现时,应从增菌培养基中取菌液在鉴别培养基上划线分离,37℃培养24h~48h,若有可疑菌落出现,则进一步做鉴定。
2.4病原鉴定 2.4.1生化试验和运动性检查:将可疑菌落穿刺接种三糖铁琼脂(见第A.5章)斜面和赖氨酸铁琼脂(见第A.6章)斜面,并在斜面上划线,同时接种半固体培养基,37℃培养24h后观察,若无运动性,并且在三糖铁琼脂培养基或在赖氨酸铁琼脂培养基上出现阳性反应时,则进一步作血清学鉴定。
2.4.2血清学鉴定:对初步判为沙门氏菌的培养物作血清型鉴定,取可疑培养物接种三糖铁琼脂斜面,37℃培养18h~24h,先用A-F多价O血清与培养物作平板凝集反应,若呈阳性反应,再分别用O9、O12、H-a、H-d、H-g.m和H-g.p单价因子血清作平板凝集反应,如果培养物与O9、O12因子血清呈阳性反应,而与H-a、H-d、H-g.m和H-g.p因子血清呈阴性反应时,则鉴定为鸡白痢沙门氏菌或鸡沙门氏菌。
2.4.3用接种环取两环因子血清于洁净玻璃板上,然后用接种环取少量被检菌苔与血清混匀,轻轻摇动玻板,于l min内呈明显凝集反应者为阳性,不出现凝集反应者为阴性,试验时设生理盐水作对照应无凝集反应出现。
3全血平板凝集试验 3.1材料准备 3.1.1鸡伤寒和鸡白痢多价染色平板抗原、强阳性血清(500IU/mL)、弱阳性血清(10IU/mL)、阴性血清。
3.1.2玻璃板、吸管、金属丝环(内径7.5mm~8.0mm)、反应盒、酒精灯、针头、消毒盘和酒精棉等。
3.2操作 在20℃~25℃环境条件下,用定量滴管或吸管吸取抗原,垂直滴于玻璃板上1滴(相当于0.05mL),然后用针头刺破鸡的翅静脉或冠尖取血0.05mL(相当于内径7.5mm~8.omm金属丝环的两满环血液),与抗原充分混合均匀,并使其散开至直径为2cm,不断摇动玻璃板,计时判定结果,同时设强阳性血清、弱阳性血清、阴性血清对照。
3.3结果判定 3.3.1凝集反应判定标准如下: a)100%凝集(#):紫色凝集块大而明显,混合液稍浑浊; b)75%凝集(+++):紫色凝集块较明显,但混合液有轻度浑浊; c)50%凝集(++):出现明显的紫色凝集颗粒,但混合液较为浑浊; d)25%凝集(+):仅出现少量的细小颗粒,而混合液浑浊; e)0%调集(-):无凝集颗粒出现,混合液浑浊。 3.3.2在2min内,抗原与强阳性血清应呈100%凝集(#),弱阳性血清应呈50%凝集(++),阴性血清不凝集(-),判试验有效。 3.3.3在2min内,被检全血与抗原出现50%(++)以上凝集者为阳性,不发生凝集则为阴性,介于两者之间为可疑反应,将可疑鸡隔离饲养1个月后,再作检疫,若仍为可疑反应,按阳性反应判定。
附录A (规范性附录) 培养基的制备 A.1 SS琼脂 A.1.1成分 牛肉浸粉 5g 蛋白胨 5g 胆盐 2.5g 蛋白胨 10g 乳糖 10g 硫代硫酸钠 8.5g 柠檬酸钠 8.5g 柠檬酸铁 1.0g 中性红(1%) 2.0mL 煌绿(0.01%) 3.3mL 琼脂粉 13g 蒸镏水 1000mL A.1.2制法 A.1.2.1将上述材料(除中性红和煌绿溶液外)混合,加热溶解。 A.1.2.2待琼脂完全溶化后,以氢氧化钠溶液调整pH至7.1~7.2。 A.1.2.3将中性红和煌绿溶液加入,混合均匀后,分装于容器中。 A.1.2.4以103.7kPa灭菌20min~30min。 A.1.3用途 供鉴定沙门氏菌用。 A.2麦康凯琼脂 A.2.1成分 蛋白胨 20g 乳糖 10g 氯化钠 5g 胆盐 5g 中性红水溶液(1%) 0.5mL 琼脂粉 13g 蒸镏水 1000mL A.2.2制法 A.2.2.1除中性红溶液外,其他成分混合,加热溶解。 A.2.2.2待琼脂完全溶化后,以氢氧化钠(NaOH)溶液调整pH至7.4。 A.2.2.3加入中性红水溶液,混合均匀后,分装于容器中。 A.2.2.4以103.7kPa灭菌20 min~30min。 A.2.3用途 供分离培养沙门氏菌、大肠杆菌等肠道菌用。 A.3亚砸酸盐煌绿增菌培养基(SB培养基) A.3.1成分 酵母浸出粉 5g 蛋白胨 10g 甘露醇 5g 牛磺胆酸钠 1.0g 磷酸氢二钾(K2HPO4) 2.65g 磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.02g 亚硒酸氢钠 4g 新鲜0.1%煌绿水溶液 5mL 蒸馏水 1000mL A.3.2制法 A.3.2.1除亚硝酸氢钠和煌绿溶液外,其他成分混合于800mL蒸馏水中,加热煮沸溶解,冷至60℃以下,待用。
A.3.2.2将亚硒酸氢钠加入,再加20mL蒸馏水加热煮沸溶解,冷至60℃以下,待用。 A.3.2.3将煌绿溶液加入,调整pH至6.9~7.1。 A.3.3用途 为沙门氏菌选择性增菌培养基。 A.4四硫磺酸钠煌绿增菌培养基(TTB培养基) A.4.1成分 蛋白胨或多价蛋白胨 5g 胆盐 1.0g 碳酸钙 10g 硫代硫酸钠 30g 0.1%煌绿溶液 10mL 碘溶液 20mL 蒸馏水 1000mL A.4.2制法 A.4.2.1除碘溶液和煌绿溶液外,其他成分混合与水中,加热溶解,分装于中号试管或玻瓶,试管每支10mL,玻瓶每瓶100mL。在分装时不断振摇,使碳酸钙均匀地分装于试管或玻瓶。经112 kPa 15min高压灭菌,备用。
A.4.2.2临用时,每10 mL或100mL上述混合溶液中,加入碘溶液0.2mL或2mL和0.1%煌绿溶液0.1mL或1mL(碘溶液由碘片6g、碘化钾5g,加20mL灭菌的蒸馏水配制而成)。
A.4.3用途 供沙门氏菌增菌培养用。 A.5三糖铁培养基 A.5.1成分 牛肉浸粉 5g 酵母浸粉 3g 酵母浸出粉 2.5g 氯化钠 5g 蛋白胨 7.5g 蛋白胨 7.5g 琼脂粉 15g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1.0g 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 1.8g 1%酚红 0.2mL 蒸馏水 1000mL A.5.2制法 A.5.21除糖类和酚红外,其他成分混合于水中,加热溶解。 A.5.2.2调整pH至7.4~7.6,再加糖类及指示剂,混匀。 A.5.2.3分装于试管中。 A.5.2.4以103.7kPa灭菌20min~30min,趁热取出,制成斜面,斜面及底层应各占二分之一为宜。
A.5.3用途 供鉴别肠道菌用。 A.6赖氨酸铁琼脂 A.6.1成分 蛋白胨 5g 酵母浸粉 3g 柠檬酸铵铁 0.5g