樱桃不同砧木抗寒性比较

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4种甜樱桃砧木的抗寒生理特性研究

4种甜樱桃砧木的抗寒生理特性研究

4种甜樱桃砧木的抗寒生理特性研究作者:陈秋芳陈冲马碧虎赵大俊程培红来源:《山西果树》2013年第06期摘要:以酸樱桃、大青叶、吉塞拉5号、毛樱桃4 种甜樱桃砧木为试材,测定在不同低温处理条件下各种砧木电导率、可溶性糖及丙二醛(MDA)的变化,评价砧木抗寒性。

结果表明,毛樱桃在低温胁迫条件下电导率、MDA含量均显著低于其他3种砧木,可溶性糖含量在-40~-35 ℃区间仍呈上升趋势。

3种抗寒指标的测定结果均表明,毛樱桃具有较强的抗寒性,吉塞拉5号次之,大青叶最弱。

关键词:甜樱桃;砧木;抗寒性甜樱桃是蔷薇科李属的一个种,是经济效益较高的树种之一[1]。

随着果农对甜樱桃果品价值认可度的提高,甜樱桃在果树生产中得到广泛推广。

前人对甜樱桃丰产、优质栽培技术已有较为详尽的研究报道,而对于樱桃砧木的抗寒生理研究报道得较少。

研究甜樱桃不同砧木的抗寒性对扩大甜樱桃种植区域意义重大。

本试验对山西省农业科学院果树研究所甜樱桃品种园的4种甜樱桃砧木(酸樱桃、大青叶、吉塞拉5号、毛樱桃)越冬期的抗寒生理生化特性进行了比较研究,通过对不同砧木枝条电导率、可溶性糖和丙二醛含量在不同低温胁迫条件下的测定,分析各不同砧木之间的抗寒性差异,为进一步筛选甜樱桃抗寒砧木提供理论依据。

1 材料与方法试验在山西省农科院果树研究所(地处山西省太谷县)进行,试材酸樱桃、大青叶、吉塞拉5号和毛樱桃,均采自本所樱桃品种园5年生砧木树上。

树势中庸,管理水平一般。

2013年1月14日在树体进入深休眠时剪取各砧木植株外围1年生直径大约0.3 cm左右枝条。

采回先用自来水冲洗干净,再用去离子水冲洗,滤纸吸干,剪成3~4 cm 长的小段,装入保鲜袋中,在0 ℃条件下保存备用。

将试材放入人工气候箱中逐渐降温至-20 ℃、-25 ℃、-30 ℃、-35 ℃、-40 ℃(5 ℃/h),分别处理8 h,低温处理完成后,取出试材在4 ℃冰箱中恢复2 h,室温下恢复1 h,以保存在0 ℃条件下的试材为对照。

3个甜樱桃半矮化砧木品种抗寒性研究

3个甜樱桃半矮化砧木品种抗寒性研究
2 8℃ 时 , 兰 丁 2号 电 解 质 渗 透 率升 高至 6 8 . 4 8 %, 吉 塞 拉 6号 和 马 哈 利 C D R一 1的 电 解 质渗 透率 分 别 为∞ 5 5 . 4 7 %和 ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ 加 m O
3 7 . 1 3 %, 当温 度 降 至一 3 6℃时 , 兰 丁 2号 电解 质渗 透 率升 高
况。 为 促 进甜 樱桃 产 业 的发 展 , 现 对 引 进 的 3个 甜 樱桃 半 矮
化砧 木 品种 的抗 寒性 进 行了 测定 。 现将 结果 总 结如 下 。
1 材 料 与 方 法 1 . 1 试 验 材 料

的 电 解 质渗 透 率分 别 为 3 4 . 9 7 %和 3 2 . 2 2 %, 当温 度 降 低 至
至9 0 . 2 2 %, 吉塞 拉 6号和 马哈 利 C D R一 1的电解 质渗 透 率分 别为 6 1 . 3 3 %和 6 1 . 1 3 %。 由此 表 明 , 兰丁 2号 、 吉 塞拉 6号 和 马 哈利 C D R 一 1间 的抗寒 性有 较大 的差 别 。
供 试 甜 樱 桃 半 矮 化砧 木 共 3个 , 分 别 为 吉 塞 拉 6号圄, 从 山东 农业大 学群 星果 品科技示 范 园引入 ; 马 哈利 C D R 一 1 『 3 】 ,
口, 置 于 水浴 锅 中煮 2 0r ai n , 取 出 后 晾 至 室温 , 再 测终 电 导 值( S 2 ) , 4次 重复 , 计 算 电解 质渗 透 率 。 计算 公 式如 下 :



的枝 条 , 将 其 剪成 长短 一 致 的小 段 , 分 组标 明后 用塑 料 袋包
住 置于 冰箱 冷 藏室 储存 。

大樱桃砧木品种有哪些,如何选择适宜的砧木?

大樱桃砧木品种有哪些,如何选择适宜的砧木?

大樱桃砧木品种有哪些,如何选择适宜的砧木?目前我国大樱桃生产中所用的砧木大致可分为两类,即原产于我国的本地砧木及由国外引进的外来砧木。

前者像我国樱桃(小樱桃、草樱桃)、毛樱桃、大青叶、东北的山樱、中华矮樱桃等,后者像考特、马哈利、吉塞拉系列等。

砧木的种类不同,其性状状各不相同,对于栽培品种的影响是不一样的。

砧木嫁接栽培品种后,适应性、丰产性、早产性、抗逆性都有很大差异,适宜的砧木品种其亲和力好,繁殖容易,对土地条件,气候特点等有较强的适应性,对根瘤病有高度抗性,而且能提高樱桃产量和品质,促进早结果、早丰产。

生产中应对当地条件,栽培方式合理选择砧木,以提高生产效益,下面小编对部分常见樱桃砧木性状简单的整理下,以便各位朋友友购苗时有自己的观点,谨防上当受骗!大樱桃砧木品种1、中国樱桃(小樱桃,草樱桃)草樱桃是中国樱桃的一个品种,为灌木或者乔木,树势强,树姿开张,树干灰色,光滑,新梢浅黄绿色,节间短,叶阔卵圆形质地薄,表面粗糙,复锯齿。

草樱桃除播种法外繁殖,亦可用扦插,压条等法繁殖,草樱桃砧木耐瘠薄,干旱,对根瘤病有较高抗性,对土壤的适应性也强,与大樱桃的嫁接亲和力较强,但根系浅,不耐涝耐寒性较差。

2、毛樱桃毛樱桃耐寒,抗旱,耐瘠薄,该砧木与大樱桃接和亲和力差,是大樱桃抗寒性较强的砧木之一!3、大青叶乔化砧木大青叶是山东烟台地区从当地中国樱桃中选育出来的一个砧木品种,该砧木是当前优势突出的大叶中国樱桃优良品系。

此砧木可用于育苗,也可压条繁殖,高抗根癌病,经济寿命长。

用大青叶做砧木的成龄大樱桃树,其花束状结果枝连续结果能力强。

盛果期长,丰产、稳产,嫁接亲和力强,无小脚现象,又极强的抗寒能力,在当地已经多年使用。

山东烟台是我国最早栽培大樱桃的地区,当地为沿海海洋性气候,多为丘陵山地沙性土壤,大青叶在当地表现适宜,成为当地普遍使用的砧木品种。

但随着我国大樱桃栽培区域的向西部扩展,大青叶这种砧木苗也被引出烟台地区,其脱离原生地后适应性差的缺点随即表现出来。

露地大樱桃高效建园的澄城经验(一)砧木与品种

露地大樱桃高效建园的澄城经验(一)砧木与品种

2020.04⑦孔®乞栽培技术【编者的话】陕西澄城是全国大樱桃优生区,大樱桃生产黄金地带,现有大樱桃近7万亩,年产量3.6万t,产值超过7亿元,基本形成集技术开发、苗木组培、基地培育、包装销售、冷藏加工于一体的产业发展体系。

从本期开始,我们采用三期连载方式,从品种选择、苗木栽植、整形修剪等方面为读者全面展示露地大樱桃高效建园的澄城经验。

露地大樱桃高效建园的澄城经验(一)砧木与品种张新武1砧木我国樱桃砧木主要有马哈利系、考特、吉塞拉系、兰丁系、京春系、大青叶、ZY-1等,陕西澄城产区目前应用的主要是吉塞拉系、马哈利系、ZY-1三类,京春2号刚开始引进试验。

以上砧木从树体大小上可分为乔化砧、半矮化砧、矮化砧三类。

1.1乔化砧马哈利、兰丁1号、兰丁2号、兰丁3号、大青叶、考特等。

1)马哈利。

又名圆叶樱桃,原产于欧洲中部,是欧美各国广泛采用的大樱桃砧木。

小乔木或灌木,株高4m左右,主干矮,树冠开张。

与大多数大樱桃品种嫁接亲合力强,接口愈合良好,苗木生长健壮。

作砧木的大樱桃树幼树期长势旺,树冠成形快,嫁接苗进入结果期稍晚(红灯以其作砧木在定植4~5年后进入结果期)o结果后树势逐渐缓和,长势中庸,半开张。

抗逆性较强,抗旱、耐瘠薄、耐盐碱,耐寒力强。

根系发达,适应性强。

不耐涝,在黏重土壤中生长不良,适宜干旱山地或沙质土以及轻壤土栽培。

马哈利根系分布较浅,进入盛果期后,粗根张新武,陕西省澄城县果业管理局,邮编715200。

收稿日期:2020-03-16多,细根明显减少,因此必须控制产量,负载量大的树势很快衰弱,严重时可致死树。

根易诱引駢嬉,定植前应做好土壤处理,一旦发生须灌根防治。

2)兰丁1号。

1999年北京农林科学院林果所通过远缘杂交选育。

根系分布较深,侧生性粗根发达,其上着生较多须根,3倍体,根系发达,固地性好。

嫁接亲合性好,大小脚不明显。

综合适应性强,具有一定的抗根癌能力。

嫁接树生长势较强,形成树冠快,4~5年进入结果期,持续结果能力强,果实品质优。

嫁接大樱桃常用的五种砧木

嫁接大樱桃常用的五种砧木

嫁接大樱桃常用的五种砧木
1、樱桃植株主要有两种:自根樱桃和嫁接樱桃。

嫁接樱桃是指以无病虫害的
樱桃树上部分生长良好的枝条为扦插枝,接到一种适合于生长的砧木上,通过愈
合而形成一个整体的新植株。

嫁接樱桃可以提高樱桃的产量和质量,增加樱桃品种的选择,适应性强,可适用于不同的土壤和气候条件。

2、嫁接樱桃的砧木主要有:樱桃杏、胡桃、山楂、樱桃板栗和扁桃。

这五种
砧木都具有一定的耐寒性和抗病虫害能力,同时能够与樱桃扦插枝愈合成活。

其中,樱桃杏是最常用的砧木之一,它具有生长势强、抗病虫害能力强、适应性广等优点。

胡桃和山楂也是常用的砧木,它们能够提高樱桃的抗病虫害能力和耐寒性,同时也能够增加樱桃的产量和品质。

樱桃板栗和扁桃虽然不如前三种常用,但也是一些地区的选择,它们具有适应性强、生长势旺等特点。

3、不同的砧木对樱桃的生长和发展有着不同的影响。

在选择砧木时,需要根
据当地的气候、土壤和病虫害情况等因素进行综合考虑。

同时,还要考虑樱桃的
品种和使用目的,选择合适的砧木可以提高樱桃的产量和品质,降低病虫害发生的风险,从而增加收益。

中国樱桃樱桃砧木特点

中国樱桃樱桃砧木特点

2023-11-08•概述•生物学特性•砧木选择目录•栽培技术•应用前景01概述定义中国樱桃是一种分布广泛的果树,具有适应性强、生长快、结果早的特点,是优良的砧木选择。

重要性中国樱桃作为砧木,对于提高接穗品种的适应性和产量具有重要作用,同时还能提高接穗品种的品质和抗逆性。

定义与重要性分布中国樱桃主要分布于亚洲、欧洲和北美洲等地区,其中亚洲地区的分布最为广泛。

品种中国樱桃的品种很多,其中较为常见的有莱阳矮樱桃、太谷樱桃、短把大鹰嘴等。

分布与品种02生物学特性中国樱桃砧木具有较快的生长速度,能够快速地适应环境和繁殖。

生长速度对环境的适应性耐寒性中国樱桃砧木具有较强的适应性,能够在不同的土壤和气候条件下生长。

中国樱桃砧木具有较强的耐寒性,能够在较低的温度下生存。

03生长特性0201中国樱桃砧木一般会在春季开花,具体时间因品种和气候条件而异。

开花时间中国樱桃砧木的花期相对较短,一般只有几天到一周左右。

花期长度中国樱桃砧木的开花频率较高,每年都会多次开花。

开花频率开花特性中国樱桃砧木一般会在春季结果,具体时间因品种和气候条件而异。

结果特性结果时间中国樱桃砧木的结果期相对较短,一般只有几周到一个月左右。

结果期长度中国樱桃砧木的结果量较大,能够产生较多的果实。

结果量03砧木选择中国樱桃的砧木能够适应多种类型的土壤,包括沙土、壤土和黏土,从而在不同的土壤条件下都能正常生长。

适应土壤中国樱桃的砧木对气候的适应性较强,能在多种气候条件下保持稳定的生长和产量。

适应气候适应性强抗逆性强抗病性强中国樱桃的砧木具有较强的抗病能力,能够抵抗一些常见的病害,从而减少病害对植株生长和产量的影响。

抗寒性强中国樱桃的砧木具有较强的抗寒能力,能够在较低的温度下保持正常的生理活动,从而适应不同的气候条件。

中国樱桃的砧木具有较高的产量,通过合理的栽培和管理措施,能够实现较高的果实产量。

稳产中国樱桃的砧木能够保持稳定的产量,即使在不利的环境条件下也能保持一定的产量水平。

不同樱桃品种及砧木抗寒性评价

不同樱桃品种及砧木抗寒性评价

不同樱桃品种及砧木抗寒性评价作者:赵慧尹砾田长平孙庆田来源:《山东农业科学》2019年第07期摘要:本试验以7个甜樱桃品种和7个樱桃砧木为材料,通过测定露天冬季低温条件下不同树体一年生枝条的SOD、POD、CAT活性和相对电导率、MDA含量,并利用隶属函数法对樱桃抗寒性进行综合评价。

结果表明:参试甜樱桃品种的抗寒能力依次为:独立日>福晨>俄罗斯8号>保加利亚4号>美早>黑珍珠>福星。

参试樱桃砧木抗寒能力依次为:毛樱桃>东北山樱>烟樱 4号>兰丁2号>SZ-1>烟樱2号>烟樱1号。

关键词:樱桃;品种;砧木;抗寒性;隶属函数法;综合评价中图分类号:S662.5文献标识号:A文章编号:1001-4942(2019)07-0037-04樱桃(Prunus avium L.)素有“北方春果第一枝”的美誉,是落叶果树中露地栽培成熟期最早的果树之一,近年来随着鲜果市场上甜樱桃售价升高,各地樱桃栽培面积也日益扩大[1]。

由于樱桃喜温、不耐寒,容易发生冻害,因此栽培中对樱桃抗寒品种和抗寒砧木的选择至关重要。

目前关于苹果[2]、梨[3]、杏[4]、葡萄[5]、柑橘[6]、桃[7]抗寒性研究报道较多,有关樱桃树体抗寒性的研究多采用电导法和恢复生长法以及检测相关生理指标来进行,该类方法测定的抗寒性生理指标较多且所表映的抗寒性强弱比较复杂[8]。

目前,科研工作者对植物寒害产生的机制进行了大量研究。

张春山等[9]明确冻害会直接作用于质膜,破坏质膜结构,进而造成质膜通透性增大导致细胞内离子外渗,通过测定细胞电解质渗出率即可反映细胞受冻害程度。

李合生[10]认为MDA是具有细胞毒性的物质,对质膜有毒害作用,主要破坏细胞膜系统,在植株遭遇逆境伤害时含量增加,是反映细胞质膜损伤的重要指标。

马正君等[11]通过对不同葡萄品种抗氧化酶活性的比较,对品种的抗寒能力进行评价,并得出抗寒性强的品种酶活性相对高于抗寒性弱的品种,抗寒性强的品种保护酶活性随处理温度的降低下降较小。

樱桃树的砧木介绍及嫁接方法,真好!

樱桃树的砧木介绍及嫁接方法,真好!

樱桃树的砧⽊介绍及嫁接⽅法,真好!⼀、背景介绍樱桃于春末夏初即可上市,是长江流域和淮北地区果实成熟最早的⼀种果树。

果实⽣长期短,从开花⾄采收仅需40~60天,⽥间管理⼯作较轻,⽣产成本较低。

果实⾊泽艳丽,味美可⼝,富含铁质,除鲜⾷外,可供甜⾷点缀或⾼级宴会⽤,还可加⼯成糖⽔罐头、蜜饯、果脯、果汁等制品。

特别是其中的甜樱桃,果⼤,⾁厚,硬度⼤,尤适于加⼯,国内外市场需求量⼤,售价⾼,⽽⽬前国内栽植⾯积⼩,在淮北地区有较⾼的开发价值。

俗话说“樱桃好吃树难栽,不⽤苦⼯花不开”。

⼆、嫁接时间:⼤樱桃⼀年中适宜的嫁接时间:⼀是春季嫁接(3⽉下旬前后),时间半⽉左右。

可采⽤板⽚梭形芽接和劈接法;⼆是⽉中、下旬嫁接。

⼀般采⽤板⽚条状芽接法,或T字形芽接法,此期的芽接苗当年可出圃;三是秋季嫁接,从8⽉下旬到9⽉份。

⼀般采⽤板⽚条状芽接法。

各个时期采⽤的嫁接⽅法,以及影响组织形成的条件,温度、湿度和光照等是主要的外界因素。

当温度过⾼(超过28摄⽒度)或过低(低于15摄⽒度)时,愈伤组织不能形成,嫁接成活率低,如烟台市芝罘区调查,9⽉中旬前后嫁接苗,凡未成活的,多数接⾯愈合不好,产⽣流胶,⼟壤湿度过⼤,接⼝会产⽣流胶,影响成活。

凡在嫁接期进⾏浇⽔的,成活率低,⼀般嫁接期⼟壤含⽔量保持在16%左右为适宜。

所以,嫁接期⼀定不要浇⽔。

为了防⽌⼟壤⼲旱,可在嫁接前1周浇1次透⽔,嫁接后半⽉内不浇⽔。

实践证明,受炎热⾼温、强光直射的嫁接苗难以成活。

所以嫁接部位⼀定要避开光照直射⽅位,在背光⾯嫁接较好。

三、砧⽊介绍1、草樱桃树。

草樱桃树为⼩乔⽊,适应性强,根蘖萌发⼒强,最主要的⼀点就是嫁接亲和⼒好。

枝条能产⽣⽓⽣根,易扦插繁殖。

嫁接苗⽣长健壮,丰产,不过也有缺点,那就是易倒伏,不抗旱。

在⽤草樱桃作为甜樱桃砧⽊时,嫁接部位要低,可以增加其抗旱能⼒和减少倒伏。

2、⼭樱桃。

属⼤乔⽊,苗⽣长块,当年即可嫁接,嫁接成活率极⾼,达到了九成。

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樱桃不同砧木抗寒性比较05级生科2班周有文指导教师:呼丽萍摘要:为了掌握樱桃不同砧木抗寒性的差异,采用人工低温胁迫法,在-16℃的条件下对6种樱桃砧木1 年生休眠枝条胁迫12h,测定其相对电导率等8项生理指标。

结果显示6个测试砧木的相对电导率为47.45%~81.85%,可溶性糖含量为2.297mg/g~8.451mg/g,游离脯氨酸含量为 2.387μg/g~4.847μg/g,丙二醛的含量为15.621μg/g~29.938μg/g,超氧化物歧化酶酶活为12.677U/g~171.478U/g,过氧化氢酶酶活为 4.987mgH2O2/g~12.693mgH2O2/g,过氧化物酶的酶活为0.127△O.D./mg/min ~0.586△O.D./mg/min,经方差分析表明:6种砧木的8项测定指标差异均达极显著水平,以马扎德(Mazzard)抗寒性最好,北京砧木、莱阳矮樱桃、毛樱桃次之,四川砧木和考特(colt)较差。

关键词:樱桃;砧木;生理指标;抗寒性Comparison on the Cold Resistance of Different Cherry RootstocksZhou Youwen(School of Life Science and Chemistry, TianShui Normol Unversity, Tianshui, Gansu ,741001) Abstract:The use of artificial methods of indoor low-temperature stress, six kinds of 1-year-old dormant shoots of cherry rootstocks were treated under the low temperature -16 ℃for 12h, and determinated its relative conductivity of eight indicators, etc. The relative conductivity was 81.85%~47.45%, soluble sugar content was 2.297mg/g~8.451mg/g, free proline content was 2.387μg/g~4.847μg/g, malondialdehyde content was 15.621μg/g~29.938μg/g, superoxide dismutase (SOD) activity was 12.677U/g~171.478U/g, catalase (CAT) activity was 4.987mgH2O2/g~12.693mgH2O2/g, peroxidase (POD) activity was 0.127△O.D./mg/min~0.586△O.D./mg/min, indicators above reach significant levels by the analysis of variance. The results showed that: amongst the six kinds of stock, Mazzard has the best cold tolerance ability, followed by Beijing rootstock, Laiyang dwarf cherries, Prunus tomentosa, and Sichuan and Court rootstock (colt)were the worst.Key words: cherry rootstocks; physiological indicators; cold resistance抗寒性是植物对低温寒冷环境长期适应中通过本身的遗传变异和自然选择获得的一种抗寒能力。

果树对零下低温主要来自两个方面的适应性变化,一是细胞膜体系稳定性的提高,二是脱水能力加强和避免细胞内结冰。

多年来,前人从不同侧面对果树抗寒性进行了深入研究,取得了很大进展[1]。

宋洪伟等[2]对114个苹果品种资源的抗寒性进行了研究,发现田间枝条的自然冻害主要不是发生在极端低温出现的1月份,而是在气温回升的2月份以后,各品种随休眠的解除和气温的逐渐升高,抗寒性逐渐降低。

刘威生等[3]发现36个李品种的抗寒性表现出丰富的多样性,且多数李品种对低温的适应能力较强,起源地的生态条件与品种的抗寒性密切相关。

同样,杏品种资源[4]、葡萄野生种质资源[5]等树种的抗寒性也有人研究。

因此,对果树种质资源抗寒性的研究可以为优良品种的区域化栽培和抗寒育种提供理论依据。

果树的抗寒性是指果树作物对寒害的抵御能力,是果树的重要生物学特性[6]。

这一性状不仅影响果树的区划和分布,同时对于人们指导农业生产,合理的引种、育种及栽培管理,减少自然灾害造成的损失等方面具有重要意义。

目前,甜樱桃的栽培也面临这样的问题。

甜樱桃又称大樱桃,富含糖和铁质,色泽艳丽,风味优美是北方落叶果树中成熟最早的树种,近年来随着栽培效益的提高,其栽培面积日益扩大。

由于樱桃喜温,不耐寒[7],容易发生冻害,因此选育适宜的抗寒砧木显得尤为重要。

为此,本文对6种大樱桃砧木的抗寒性进行比较及对抗寒性生理指标进行筛选。

1材料与方法1.1试验材料试验材料取自天水师范学院植物园的6种砧木,分别为莱阳矮樱桃、马扎德、考特(colt)、北京砧木、毛樱桃、四川砧木。

1.2试验处理与方法试验共设6个处理,即每品种为一个处理,重复3次。

方法:于砧木萌芽前(3月上旬)将6种砧木的枝条分成相等的4份,其中一份置室外(10℃)为对照.,其余3份作为重复。

将枝条剪成40cm左右的长度,枝条末端进行蜡封。

处理温度从4℃~ -16℃,降温速度为4℃/h,达到后-16℃维持12h,然后逐步升温,升温速度亦为4℃/h,至4℃时进行测定各项生理指标。

1.3测定的指标与方法1.3.1质膜透性测定称取5 g冷冻处理后直径为0.5 cm的一段枝条,放入锥形瓶中,加入50mL 蒸馏水,25℃下浸泡12 h,中间不断摇动。

12 h 后摇匀,用DDS-307A型电导仪测定电导。

然后封口,在沸水中煮30 min,冷却到室温( 25℃)后摇匀,再测终电导。

相对电导率(%) =(初电导-蒸馏水电导率)/(终电导-蒸馏水电导率)×100%[8]。

1.3.2超氧物歧化酶(SOD)活性测定(1)酶液提取:每处理取粗度较一致的枝段,剪碎混匀,称1g,分别加入10 mL 磷酸缓冲液,冰浴研磨后,转入离心管,10000 r/min,离心15 min,上清液即为酶液。

(2) SOD活性的测定:以SOD抑制剂NBT(氮蓝四唑)在光下还原程度来确定SOD 的活性大小。

活性单位以抑制NBT光化还原的50%为 1 个酶活性单位表示。

对照是以缓冲液代替酶液。

SOD活性计算公式:SOD活性=(A CK-A E)*V*2/(A CK*W*V t)式中:SOD总活性以每克鲜重酶单位表示;比活力单位以酶单位/mg蛋白表示;A CK—照光对照管的光吸收值;A E—样品管的光吸收值;V—样液总体积(cm3);V t—测定时样品用量(cm3);W-样重(g)。

1.3.3过氧化氢酶(CAT)活性的测定取剪碎的样品2.5g加入磷酸缓冲液(pH7.8)少量,研磨成匀浆,转移到50ml 容量瓶中,将研钵冲洗干净,冲洗液转至容量瓶中,并用同一缓冲液定容,4000×g 离心10min,上清液为酶粗提液。

取50ml三角瓶4个(两个测定,两个对照),测定加入酶液2.5ml,对照为煮死酶液2.5ml;再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2,同时计算时间,于30℃恒温水浴中反应10min,立即加入10%H2SO4 2.5ml。

然后用0.1mol/L KMnO4滴定,至出现粉红色(30 min内不消失)为终点。

酶活性用每克鲜重样品在10min内分解H2O2毫克数表示。

酶活性(mgH2O2/gFW)=(对照KMnO4滴定ml数- 酶反应后KMnO4滴定ml数)*酶提取液总量(ML)*1.7/[反应所用酶液量(ml)*样重(g)[9]。

1.3.4过氧化物酶(POD)活性测定及同工酶分析1.3.4.1过氧化物酶(POD)活性测定将样品剪碎,称取1g,加入酶提取液(0.1M pH8.5Tris-HCl缓冲液)5ml和少量石英砂,在研钵中磨碎,然后再次加入5ml酶提取液稀释。

转入离心管在10000r/min 的速度下离心15min,上清液贮于冰箱中待用。

测定前,将酶液稀释400倍。

吸1ml酶液,加入2ml联苯胺醋酸-醋酸钠缓冲剂,在28~32℃水浴中保温5分钟。

测定时,加入1ml 0.1M过氧化氢,立即摇匀,并转入比色皿中,用分光光度计在波长580nm下测定光密度的变化。

从加入过氧化氢起计时,每15s读数一次。

取第15~45s之间的光密度变化,计算样品中过氧化物酶活性[9]。

其计算公式:E=O.D.(45-15)*2*总稀释倍数/样品质量(mg),E单位为△O.D./mg F.W./Min。

1.3.4.2过氧化物酶同工酶分析用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术分离POD同工酶[9]。

按7%的分离胶进行配制,先用刻度吸管准确地吸取30%Acr-0.8%Bis4.5ml和1MTris-HCl(pH8.8)15ml,再加入1%过硫酸铵溶液0.5ml和TEMED 20μl,摇匀后,将凝胶加入凝胶板模具内,上面加一水层,在25~30℃的地方进行聚胶,约1h。

浓缩胶按3%进行配制,吸去分离胶上层的水层,用刻度吸管准确吸取30%Acr-0.8%Bis 1.0ml和1M Tris-HCl(pH6.8)1.0ml,再加入重蒸水7.7ml加入1%过硫酸铵溶液0.5ml和TEMED 20μl,立即灌注隔层胶(凝胶板需要迅速加入蓖子),其中加一水层,约1h可聚合好。

样品制备:每克鲜样加3.0ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液(pH=7.0),研磨,用纱布粗过滤,滤液离心:4000r/min,(0±2)℃,取上清液作供试酶液。

用10伏/厘米预电泳三分钟后,用微量进样器吸取样品液分别每管加入50微升。

染色:将脱下的凝胶,用去离子水冲洗凝胶板后,放入长方型白瓷盘中染色。

将配好的染色液倒入白瓷盘内凝胶板上,37℃保温30min,酶带呈紫红色。

取出漂洗后,7%醋酸中保存、照相。

参照全妙华[10]介绍的方法计算相对迁移率Rf 值,迁移率(Rf)=酶带迁移距离/溴酚蓝迁移距离。

并应用Vaughan[11]的方法计算酶谱距离(酶谱相似性系数),即酶谱距离=两分类群不相同酶带数/两分类群酶带总数,最后计算相似率。

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