大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型的建立与评估_成玲俐
基金项目:广东省自然科学基金(06021338);广东省科技计划项目(2007B031508003);佛山科技局(200808109)*通讯作者,Wushuhua168@yahoo.com文章编号:1007-4287(2010)08-1163-03
大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型的建立与评估
成玲俐1,吴素华2*,李志梁1,唐2,张瑞1(1.南海盐步医院,广东佛山528247;2.中山大学附属第一医院;3南方医科大学珠江医院)摘要:目的改进和完善大鼠急性心肌缺血再灌注损伤动物模型的制备及评估。方法健康SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组),仅穿线,不结扎LAD;缺血组(Ischemia组),单纯结扎LAD30min;缺血再灌注组(IR组),结扎LAD30min,再灌注120min。每组20只。并从造模成功率、心电图、外周血中LDH、CKMB的含量测定、心肌病理组织学检查等方面对改进后的模型进行评估。结果改进后的造模成功率达到90%以上,血液动力学、心电图、外周血中LDH、CKMB的含量测定、心肌病理组织学检查等方式均证实改良后的动物模型成功。结论改进后的方法能大大降低手术难度,提高模型成功率和动物成活率,准确地复制心肌缺血再灌注损伤的实验模型,简化实验操作步骤。关键词:大鼠;心肌缺血再灌注;动物实验模型中图分类号:R5414文献标识码:AImprovingandEvaluatingtheMethodofEstablishingRatModelsofAcuteMyocardialEschemiaReperfusionCHENGLingli,WUSuhua,LIZhiliang,etal.(DepartmentofCardiovascular,YanbuHospitalofNanhaiDistrict,Foshan528247,China)Abstract:ObjectiveToimproveandevaluatethemethodofestablishingratmodelsofacutemyocardialischemiareperfusion,whichhadhighrateofsuccessandsurvive.Methods60SpragueDawleyratsweredividedintothreegroupsatrandom:controlgroup,Shamgroupandimprovedmyocardialischemia/reperfusiongroup.Thesuccessfulrateandtheeffectivenessofeachgroupwereobserved.Thehemodynamics,eletrocardiogram,EvansblueandTTCstaining,myocardialenzymespectrumandhistologyresultswereusedforevaluatingthemodifiedmodel.ResultsThesuccessfulrateofthreegroupswere90%,100%and100%,respectively.Thehemodynamics,eletrocardiogram,EvansblueandTTCstaining,myocardialenzymespectrumandhistologyalltestifiedthatthemodelsofmodifiedmethodwereresultsweresuccessful.ConclusionThemethodofestablishratmodelsofacutemyocardialischemiareperfusionissimpleandconvenient,withhighsuccessfulrateandsurvivalrate.Keywords:Rats;Myocardialischemiareperfusion;Experimentalanimalmodels(ChinJLabDiagn,2010,14:1163)在动物体内阻断左冠状动脉前降支(LAD)造成急性心肌缺血,并在预定时间内恢复血供予以再灌注,是模拟人类缺血性心脏病恢复血供治疗必需的实验方法。由于大鼠在进化关系上比较接近人类,且其冠状动脉侧支循环少、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、稳定性好,且大鼠制作模型费用低廉,从而成为制作心肌缺血再灌注损伤模型的首选,结扎大鼠LAD形成心肌梗死是目前国内外公认的模型制备方法。但以往模型制备过程中存在诸多不便,如:手术时反复多次将心脏牵拉到胸腔外,造成动物死亡率增加,加大了实验成本,又加大了动物的创伤;阻断冠状动脉造成缺血后实现再通时,结扎线不易剪断,常导致左心耳破裂,引起心脏撕脱伤,造成大出血;文献报道冠状动脉的定位部位不一,会造成模型缺血损伤部位及损伤程度不一致等。参照不同研究人员采用的模型制备方法[1],结合本实验室条件对该模型制作进行了改进,以提高模型制备成功率。现报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物与分组清洁级SD大鼠,体重220-260g,雄性,合格证号:SCXK(粤)2008-0020。由广州中医药大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组),仅穿线,不结扎LAD;缺血组(Ischemia组),单纯结扎LAD30min;缺血再灌注组(IR组),结扎LAD30min,再灌注120min。每组20只。1.1.2主要仪器和器械动物呼吸机ALCV8(上海奥尔科特生物科技有限公司),澳大利亚产Powerlab16导生理记录仪,无创缝合针(上海医菱医疗器械有限公司);黑色医用缝合线、lOml一次性无菌注射器、各种手术器械,如止血钳、小无齿弯钳、小镊、小眼科剪等。1163中国实验诊断学2010年8月第14卷第8期1.1.3主要药品乙醚、注射用青霉素钠、硫酸庆大霉素注射液、无菌生理盐水注射液。1.2实验方法1.2.1术前准备及实验大鼠人选标准大鼠行腹腔注射20%的乌拉坦(0.6ml/100g)麻醉后,仰卧位固定于手术台上,行右颈总动脉导管到颈总动脉和左心室与压力换能器相连,经放大器测量股动脉血压和左心室内压。标准 导程导联与放大器相连,记录心电图,用心电R波计算心率。连接心电图,肢体导联监测心电,记录标 导联心电图各1min,有异常者剔除。1.2.2胸部手术插气管接人工呼吸机,胸部去毛,碘伏消毒。沿着锁骨中线纵行切开皮肤约2cm,在第三或第四肋间用止血钳逐层游离皮下组织、肌肉,打开胸腔,以扩胸器扩大胸腔,可清晰看到心脏搏动的暗影,剪开心包,在动脉圆锥与左心耳之间,左心耳下缘约3mm处结扎挂线左冠状动脉前降支实行心肌缺血,然后迅速将心脏送回胸腔,医用缝合线的两端留置体外备用。用长嘴止血钳将胸部皮肤和肌肉以及心脏挂线夹紧,防止气胸发生,观察心电图变化。T波高耸或者倒置为心肌缺血标志。如心电图改变不明显,则稍松开止血钳,拉紧一端线头,则明显看到心电图改变。再灌注时,松开止血钳,放松挂线,形成再灌注模型。造模结束时,按层次依次缝合肌肉、皮肤,切口处注射少许青霉素注射液,再次碘伏消毒,预防感染。1.2.3心肌缺血和再灌注模型制备成功的标志造模后,心电图表现为ST段抬高和(或)T波高耸或者倒置呈弓背向上单向曲线为心肌缺血标志;再灌注损伤模型成功标志为再灌注后,抬高的ST段下降50%以上或高耸的T波下降(后期可作病理学检查证实)。1.3观察指标1.3.1模型制备情况观察各组的造模成功率。1.3.2心电图改变通过观察心电图ST位移值和NST(计算位移高于0.1mv的数量)的改变可反映心肌缺血程度。1.3.3外周血中LDH、CKMB的含量测定缺血4h,腹腔静脉取血2ml,离心,取血清,以全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)、CKMB的含量。1.3.4心肌病理组织学检查另取结扎以下0.5mm处心肌组织小片置4%多聚甲醛保存超过48h。每个组织块均酒精梯度脱水,石蜡包埋,切片厚约4m,进行苏木素一伊红(HaematoxylinEosin,HE)染色。光镜下观察心肌组织病理学变化。1.4统计学处理应用SPSS13.0统计软件。统计每组数据,以x!s表示。成组资料比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。2结果2.1模型制备情况假手术组(Sham组),缺血组(Ischemia组),缺血再灌注组(IR组)三组,每组20只大鼠,造模成功数分别为19只,20只,18只,成功率分别为95%、100%、90%。各组间模型鼠造模成功率的比较无统计学差异(P>0.05)。2.2对缺血大鼠心电图的影响IR组ST位移值和NST均明显小于缺血组(与假手术组比较P<0.05或P<0.01)(表1,2),再灌注后倒置的T波变成正向抬高,有的大鼠可合并出现各种缺血性心律失常的心电图表现。上述心电图表现符合大鼠心肌缺血及再灌注损伤模型的心电图变化,说明此改进造模方法是成功的。表1各处理组大鼠心电图ST段(mV)、ST位移植的影响(n=20,x!s)检测指标组别缺血前缺血再灌注(min)306090120ST位移值(MV)假手术组0.08!0.060.07!0.060.07!0.090.08!0.080.08!0.08缺血组0.03!0.010.25!0.12**0.29!0.14**0.28!0.14**0.28!0.13**IR组0.06!0.080.17!0.08*0.20!0.09*0.20!0.08*0.21!0.08**ST位移值(%)假手术组0!00.02!0.010.03!0.020.03!0.020.03!0.02缺血组0!00.22!0.130.27!0.14#0.26!0.14#0.26!0.13#IR组0!00.14!0.040.14!0.070.15!0.050.15!0.02与缺血前比较,*为P<0.05,**为P<0.01;IR与假手术组比较,#为P<0.01;与缺血组比较,为P<0.05,为P<0.012.3再灌注对缺血大鼠血清酶(LDH,CKMB)水平的影响再灌注后可降低心肌缺血大鼠血清LDH和CKMB水平,其中指标CKMB变化最为显著,与缺血组比较(1109!245U/LVs1513!335U/L)差异具有统计学意义(P<0.05)。1164ChinJLabDiagn,August,2010,Vol14,No.82.4心肌病理组织学检查假手术组:心肌细胞排列整齐、无变性、间质无水肿、出血。缺血组:心肌细胞排列紊乱、局部变性、间质水肿、出血明显可见,心肌肌浆呈嗜伊红染色,横纹模糊不清或消失,肌纤维及肌丝明显紊乱,间质有炎性细胞浸润。IR组:水肿、变性较缺血组减轻,心肌纤维素紊乱,局部呈波纹状改变,部分肌纤维溶解液化,心肌间质可出现少量红细胞(图1)。
运动性心肌缺血损伤模型大鼠的制备
运动性心肌缺血损伤模型大鼠的制备
彭峰林;黄丽丽;郭艳菊
【期刊名称】《中国组织工程研究》
【年(卷),期】2016(020)040
【摘 要】背景：运动性心肌缺血动物模型的建立没有统一的标准，导致研究结果的不可比性，影响了运动医学特别是运动心血管领域研究的推进，所以建立统一的运动性心肌缺血动物模型势在必行。 目的：探索建立跑台运动性心肌缺血损伤大鼠模型的方法。 方法：96只SD雌性大鼠被随机分为安静对照组、异丙肾上腺素药物模型组和10个运动组(中强度力竭运动1，3次组、中强度力竭运动1，2，3周组、高强度力竭运动1，3次组、高强度力竭运动1，2，3周组)，取各组心肌组织进行苏木精-伊红染色病理分析，检测血清心肌酶指标和肌钙蛋白I水平， RT-PCR检测bcl-2和bax基因表达。 结果与结论：①心肌苏木精-伊红染色检测结果：随着运动时间的延长损伤程度越来越严重，且高强度运动组比中强度运动组损伤程度更严重；②血清心肌酶指标和肌钙蛋白I水平：中强度力竭运动自1周开始，血清谷草转氨酶与乳酸脱氢酶活性出现显著性升高(P<0.05或P<0.01)，高强度力竭性运动训练3次开始，谷草转氨酶与乳酸脱氢酶活性显著性升高(P<0.05或P<0.01)。各组肌钙蛋白I含量的变化趋势与谷草转氨酶、乳酸脱氢酶活性变化基本相同，但中强度力竭运动需2周肌钙蛋白I含量才比安静对照组显著升高；③细胞凋亡调控基因表达：各运动组bcl-2/bax比值均显著性低于安静对照组(P<0.05或P<0.01)，高强度1次组(P<0.01)和3次组(P<0.05)明显高于异丙肾上腺素药物模型组，中强度各组均高于异丙肾上腺素药物模型组(P<0.05或P<0.01)；④结果表明，中强度跑台力竭运动3周开始、高强度跑台力竭运动2周开始的运动模型都可作为运动性心肌缺血损伤模型，病理分析、心肌血清酶谱、肌钙蛋白I可作为建立运动性心肌缺血损伤模型的评估指标，细胞凋亡调控基因只可作为参考指标。%BACKGROUND:No uniform standard
大鼠心肌缺血再灌注实验技巧的经验总结
大鼠心肌缺血再灌注实验技巧的经验总结
黄婷;李绍旦;杨明会;刘毅
【摘 要】大鼠心肌缺血再灌注造模是一个极其精细的实验过程,在动物实验中,初学者难免会遇到阻碍,笔者有幸进行了整个实验的操作,现就本类实验的经验及遇到的一些挫折进行分享.%The establishment of rat model of myocardial ischemia
and reperfusion is a very sophisticated experi?mental process. During
animal experiments, beginners always meet with troubles inevitably. The
authors of this paper have conducted a great deal of this type of
experiments for years, and intend to share some experience and lessons
with col?leagues.
【期刊名称】《中国比较医学杂志》
【年(卷),期】2017(027)009
【总页数】3页(P80-82)
【关键词】大鼠;实验经验;心肌缺血再灌注
【作 者】黄婷;李绍旦;杨明会;刘毅
【作者单位】北京中医药大学,北京 100029;中国人民解放军总医院,北京 100853;中国人民解放军总医院,北京 100853;中国人民解放军总医院,北京 100853;中国人民解放军总医院,北京 100853
【正文语种】中 文
【中图分类】R-33 《中国心血管病报告2016》指出，心血管病占居民疾病死亡构成的40%以上，为我国居民的首位死因。心血管病发病因素日益增多，已成为重大的公共卫生问题，防治心血管病刻不容缓[1]。有统计表明，在现在的医学研究中，动物实验占有重要的地位。心血管疾病的防治研究中，大鼠缺血再灌注的模型较常见，笔者有幸进行了此类实验，并在其造模过程中有着长时间的摸索。现将自己对大鼠缺血再灌注实验技巧的认识简单介绍。
大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进与评判
２０１８年６月第２６卷 第３期中国实验动物学报ＡＣＴＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＵＭＡＮＩＭＡＬＩＳＳＣＩＥＮＴＩＡＳＩＮＩＣＡＪｕｎｅ２０１８Ｖｏｌ．２６ Ｎｏ．３
［基金项目］国家自然科学基金项目资助（Ｎｏ．８１６６０７３０）。ＦｕｎｄｅｄｂｙＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（Ｎｏ．８１６６０７３０）．［作者简介］张卫强（１９９１—），在读硕士，研究方向：中医药防治内科疾病（急诊方向）的研究。Ｅ⁃ｍａｉｌ：２８６３５４６４５４＠ｑｑ．ｃｏｍ［通信作者］张志明（１９６４—），主任医师、博士生导师，研究方向：中医药防治内科疾病（急诊方向）。Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｚｈｉｍｉｎｇｙｓ＠１６３．ｃｏｍ
研究报告
大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进与评判
张卫强１，王涛１，张志明２∗，雍文兴２，刘永琦１，李娟２，梁艳１
（１．甘肃中医药大学，兰州 ７３００００；２．甘肃中医药大学附属医院，兰州 ７３００００）
【摘要】 目的 改进大鼠急性心肌缺血再灌注损伤（ＭＩ／ＲＩ）模型的制备方法，并进行综合评判，为后续开展ＭＩ／ＲＩ研究奠定良好的模型基础。方法 将３６只清洁级Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为３组：正常组（Ｎｏｒｍａｌ组），不干预左
冠状动脉前降支（ＬＡＤ）；假手术组（Ｓｈａｍ组），仅穿线，不结扎ＬＡＤ；缺血再灌注组（ＭＩ／ＲＩ组），结扎ＬＡＤ３０ｍｉｎ，再灌注１２０ｍｉｎ。大鼠于麻醉后连续记录心电图，气管切开行呼吸机辅助通气，开胸对大鼠ＬＡＤ分别进行干预后从心电图、心肌酶含量测定、心梗面积及心肌病理组织学检查等方面对改进后的模型进行综合评判。结果 ＭＩ／ＲＩ组心电图有明显ＳＴ－Ｔ动态变化；ＭＩ／ＲＩ组肌酸激酶同工酶（ＣＫ⁃ＭＢ）水平于２ｈ后显著升高；与Ｓｈａｍ组比较，ＭＩ／ＲＩ组梗死面积明显增大；ＭＩ／ＲＩ组心肌细胞变性坏死明显，炎性细胞广泛浸润。结论 改进后的造模方法不但降低了手术难度，而且成功建立了大鼠ＭＩ／ＲＩ模型，为后续开展ＭＩ／ＲＩ研究奠定了良好的模型基础。【关键词】 大鼠；心肌缺血再灌注损伤；动物模型【中图分类号】Ｑ９５⁃３３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００５⁃４８４７（２０１８）０３⁃０３１１⁃０６Ｄｏｉ：１０３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－４８４７２０１８０３００７
Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中的运态表达的开题报告
Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中的运态表达的开题报告
背景：
心肌缺血再灌注（I/R）损伤是一种常见的心血管疾病，其发生机制包括细胞氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等。Toll样受体（TLRs）是一类重要的受体分子，在I/R损伤过程中参与免疫炎症反应的调节。其中，TLR2和TLR4是最广泛研究的TLRs。
目的：
本研究旨在探究TLR2和TLR4在大鼠心肌I/R损伤模型中的运态表达，以期为预防和治疗I/R损伤提供新的理论依据和治疗靶点。
方法：
1.动物试验：选取雄性Wistar大鼠，随机分成4组（正常对照组、缺血组、再灌注1h组、再灌注3h组），采用左前降支（LAD）结扎再灌注模型建立心肌I/R损伤模型；
2.RT-PCR：提取心肌组织RNA，采用RT-PCR技术检测TLR2和TLR4 mRNA的表达量，并计算相对表达量；
3.Western blot：提取心肌组织蛋白，采用Western blot技术检测TLR2和TLR4蛋白的表达量，并计算相对表达量。
预期结果：
TLR2和TLR4的表达量在冠状动脉结扎和再灌注后均显著上调，且在再灌注3h组表达量较再灌注1h组更高，提示TLR2和TLR4在心肌I/R损伤的发生和发展中扮演重要的角色。
意义： 该研究有助于深入了解心肌I/R损伤的发生和发展机制，为寻找新的治疗策略和预防措施提供理论基础和依据。同时，该研究可以为研发TLR2和TLR4作为治疗I/R损伤的靶点提供支持。
心肌缺血再灌注损伤模型的实验动物种属选择和建模方法比较
2023年第04期畜牧兽医科技信息心肌缺血/再灌注损伤渊myocardialischemiareperfusioninjury,MIRI冤是指心肌组织在短暂缺血后恢复血流而导致组织进一步损伤的现象袁是当前世界人类健康和生活质量的重大威胁袁也是心血管疾病研究领域的热点遥MIRI动物模型可选择的动物种属较多袁制备方法也有差异袁并且细微的实验条件变化往往影响试验的可重复性遥本文将比较和归纳各种MIRI动物模型的特点袁为研究者在开展MIRI的相关研究选择动物模型时提供参考依据遥1动物选择大鼠作为最常见的实验动物之一袁其遗传背景清楚尧繁殖能力强尧生长快速袁易于购买且价格低廉遥大鼠的冠状动脉左旋降支变异较小袁用于MIRI模型制备时具有较好的重复性遥上述优点使得大鼠成为制备MIRI模型的理想实验动物袁也是目前国内外在开展MIRI的整体实验时使用最多的动物品种遥此外袁相比其他种属实验动物袁大鼠因其在科学研究中使用频率高袁相应的检测试剂等也更齐全袁为开展研究指标的检测提供更多便利遥小鼠作为另一种最常见的实验动物袁具有与大鼠相似的特点袁并且价格较大鼠更加低廉遥但是小鼠由于个体较小袁在用于MIRI研究时袁对实验操作技术要求更高以保证造模结果的一致性曰同时受到体型过小的限制袁可以采集和用于检测的样品量较少袁限制了检测指标的种类遥与其他种属不同袁兔具有2个独立的胸腔气室遥在不损伤胸腔隔膜的前提下袁兔可以依靠右侧肺部维持自主呼吸袁因此在制备MIRI模型时无需以呼吸机维持肺部通气袁可以减少因气管插管和维持肺部通气造成的肺损伤袁提高动物术后存活率和增大模型的可重复性遥兔具有发达的耳部血管袁方便术后静脉给药干预和术后不同时间点采集和检测血液指标遥犬体积大小适中袁性情温顺袁是心血管外科最常用的实验动物遥犬血管丰富袁方便研究过程中血液指标采集袁是药物代谢研究的良好实验动物遥犬心脏冠脉粗大袁除了可以采用常规的线扎法外袁也可以采用球囊封堵法阻断冠脉血流袁可精准控制冠脉的开放袁减少手术造模对动物心脏和肺部的损伤遥此外袁较大的心脏也更利于进行体外MIRI的研究遥小型猪的体型与实验犬相似袁线扎法尧球心肌缺血再灌注损伤模型的实验动物种属选择和建模方法比较杨嘉俊袁吴贤生绎渊广东省医学实验动物中心袁广东佛山528248冤DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2023.04.016摘要院心肌缺血再灌注损伤渊MIRI冤是冠心病治疗中的难点和热点遥MIRI动物模型是研究人员开展MIRI机制和防治策略研究时的重要载体遥MIRI模型包括离体模型和在体模型袁涉及多个种属的动物和多种造模方法袁并且心肌缺血时间的设定在不同的研究中也存在较大差异遥选择合适的动物模型和造模条件对实验结果有种重要影响袁本文将从模型建立的角度袁比较多种常见的MIRI模型及造模方法袁为MIRI研究中动物模型的选择提供依据遥关键词院心肌缺血再灌注损伤曰动物模型曰实验选择
白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤时炎性反应的影响
白藜芦醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤时炎性反应的影响
胡东;王晓丽;徐桂萍
【摘 要】目的 探讨白藜芦醇预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响,以及其对炎性反应的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠24只,体质量200～220 g,4～5月龄,采用随机数字表法分为3组(n=8):假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(MI/R组)和心肌缺血再灌注+白藜芦醇组(MI/R+Res组).采用结扎冠状动脉左前降支30 min,恢复灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.MI/R+Res组于心肌缺血再灌注损伤模型建立前7 d腹腔注射白藜芦醇15
mg/kg,1次/d,连续7 d.Sham组与MI/R组腹腔注射等容量二甲基亚砜(DMSO)与磷酸盐缓冲液(PBS)的混合液.B超测量左心室的射血分数(LVEF)以及左室短轴缩短率(FS),于再灌注末处死大鼠,经腹主动脉取血测心肌损伤标志物乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的浓度,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清的肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1),并取心肌组织,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测TNF-α,IL-6以及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的含量,光镜下观察心肌组织的病理学结果.结果 与Sham组比较,MI/R组与MI/R+Res组的LDH和CK-MB浓度,血清TNF-α,IL-6和ICAM-1含量均明显增高,LVEF和FS明显降低,TNF-α,IL-6和MMP-9的mRNA表达增加(均P<0.05);与MI/R组比较,MI/R+Res组的LDH和CK-MB浓度,血清TNF-α,IL-6和ICAM-1含量均明显降低,LVEF和FS明显升高,TNF-α,IL-6以及MMP-9的mRNA表达减少(均P<0.05).结论 白藜芦醇预处理可以减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤时的炎性反应.
心肌缺血-再灌注损伤大鼠心电图变化机制的研究
心肌缺血-再灌注损伤大鼠心电图变化机制的研究
王彦;赵英男;邹丽琳;许莹平;王冬梅;赵赫男
【摘 要】[目的]探讨大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中,氧自由基及心肌细胞凋亡与缺血再灌注性心律失常的关系.[方法]建立大鼠心肌缺血-再灌注模型,对比缺血期与再灌注期的心律失常发生率及平均持续时间、ST段改变、心肌丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、心肌细胞凋亡情况.[结果]缺血期房室传导阻滞、室性早搏及室速的发生率分别为7.5%、15%及10%;再灌注后分别为30%、67.5%及32.5%,与缺血期相比,再灌注后上述指标均明显增高.室速的平均发作时间由缺血期的(40±14)s上升到(495±103)s(P<0.01);再灌注后室颤平均持续时间为(198±22)s.再灌注后心肌MDA含量高于缺血组(P<0.01),且有逐渐递增趋势;心肌SOD活力较缺血组降低(P<0.01),再灌注120 min后下降趋缓.再灌注组心肌细胞凋亡明显高于缺血组(P<0.05).缺血再灌注损伤过程中,心律失常发生率与SOD活力变化呈负相关,与MDA值变化及心肌细胞凋亡变化均呈正相关.[结论]氧自由基及心肌细胞凋亡很可能是造成心肌缺血再灌注后心律失常的重要因素.
【期刊名称】《大连医科大学学报》
【年(卷),期】2010(032)002
【总页数】6页(P160-165)
【关键词】心肌缺血再灌注;心肌凋亡;心电图;氧自由基;再灌注性心律失常
【作 者】王彦;赵英男;邹丽琳;许莹平;王冬梅;赵赫男 【作者单位】大连医科大学附属第二医院,实验中心,辽宁,大连,116027;黑龙江省疾病预防控制中心,黑龙江,哈尔滨,150023;大连医科大学,临床医学2005级7年制,辽宁大连116044;大连医科大学,临床医学2005级7年制,辽宁大连116044;大连医科大学,机能学实验室,辽宁,大连,116044;大连医科大学,病理生理学教研室,辽宁,大连,116044
大鼠缺血再灌注损伤相关
缺血再灌注损伤模型的建立及药物处理对损伤保护机制探讨
讨论时间：2011年11月30日星期三
讨论地点：逸夫楼417
讨论人员：09基础医学专业
小组成员：90905113 刘亮（主讲）
90905106 于震维
90905107 何博
90905115 王小杰
90905116 朱枫
讨论内容：如下
讨论形式：PPT展示，同学提问
1. 背景：
1) introduction：
良好的血液循环是组织细胞获得充足的氧和营养物质并排出代谢产物的基本保证，任何原因造成的组织血液灌流量减少均可使细胞发生缺血性损伤。因此，尽早恢复缺血器官的血液再灌注是减少器官缺血性损伤的根本措施，近年来广泛开展的药物溶栓、经皮腔内冠脉成形术、冠脉搭桥术等治疗手段的目的均在于恢复对缺血器官的再灌注。人们发现，当心肌较长时间缺血后再灌注非但没有减轻缺血损伤，反而扩大了缺血性损伤的范围，或者使缺血组织器官由可逆性损伤转化为不可逆性损伤，出现明显的功能障碍。这种缺血器官在恢复血液灌注后缺血性损伤的进一步加重的现象，称为缺血—再灌注损伤（ischemia-reperfusion
injury）。
2) Influence factors of ischemia-reperfusion injury:
a) Duration
of ischemia:阻断狗冠脉左旋支15-20min后再灌注，室颤率高达25%~50%。一般15min~40min效果较好。
b) Conditions of reperfusion fluid:钙反常、氧反常、PH反常
c) Functional state of organs before ischemia:再灌注前组织器官的能量储备及血液循环侧支代偿情况。严重的心肌肥厚、广泛性冠脉病变等，因心肌ATP严重贮备不足或Ca2+的转运障碍，较易发生ischemia-reperfusion injury。
大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型
大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型 缺血再灌注损伤(IRI)是器官移植、休克、动脉搭桥术后等普遍存在的问题。肾脏是发生IRI极为常见的器官之一，尤其肾移植，不可避免的要经历一定程度的IRI,肾脏缺血再灌损伤是急性肾衰的常见原因。对麻醉动物的肾动脉进行阻断和再通后，可引起肾脏缺血再灌注损伤。在缺血再灌注过程中，钙超载、线粒体能量合成障碍、氧自由基的增多等因素导致肾小管内皮细胞脱落，肾脏组织结构的破坏进而使肾脏功能发生障碍。 1.实验动物 SPF级SD大鼠，雄性，体重为220g~250g。 2 实验分组： 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3. 模型周期 24h、72h 4.建模方法 1 选取250g左右大鼠，术前禁食12h，自由饮水。 2 15％水合氯醛(350mg／kg)腹腔注射麻醉,大鼠背部去毛，消毒备皮。 3 在背部脊椎旁1cm、肋骨下缘1cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏, 小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。 4 缺血60min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。 5 分两层缝合开口,待大鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 6 对照组不做缺血处理，其他操作相同。 7 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。麻醉大鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。 5.模型的评价 1 血清生化指标检测： 取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。 2 肾系数检测
摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。 肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g） 3 病理组织学检测： 4％多聚甲醛溶液固定48h。常规组织脱水、透明、浸蜡 、包埋。石蜡切片进行HE染色和PAS染色。 对照组大鼠肾小球、 肾小管及肾间质结构基本正常。在模型组，随着再灌注时间的延长呈现不同程度的肾脏病理改变，可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀，出现水样或空泡变性，刷状缘消失，部分肾小管上皮细胞凝固性坏死、脱落，腔内可见管型，并可见间质水肿，间质内灶性炎症细胞浸润，肾小球病变不明显。每张切片×200 倍镜下取外髓质部 10 个视野，按 0 = 正常，1 = 轻微损伤(受损肾小管< 5%) ，2= 轻度损伤(受损肾小管 5 %～25 %) ，3 = 中度损伤(受损肾小管 25 %～75 %) ，4 = 重度损伤(受损肾小管> 75 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数 4 细胞因子的检测 ELISA 法检测血清 TNF-α、IL-6 含量, 模型组大鼠血清 TNF- α 和 IL- 6 含量在各时间点均显著高于对照组，其中24h为最显著。 6.注意事项 6.1 分离肾脏时不要损伤肾脏及其他器官 6.2 缺血要一次成功否则会造成缺血预处理而减轻损伤 6.3 缺血和应可见肾脏先变白一段时间后变暗发紫
大鼠心肌缺血再灌注模型建立方法的改进
第１７卷第１１期２００８年１１月
Ｖ０１．１７Ｎｏ．１１Ｎｏｖ．２００８武警医学院学报
ＡｃｔａＡｃａｄｅｍｉａｅＭｅｄｉｃｉｎａｅＱ》五·９４１·
大鼠心肌缺血再灌注模型建立方法的改进
张新宁１，吕琪１，张永亮２，唐存贵１，李灵芝１
（武警医学院：１．药物化学教研室；２．科研部；天津３００１６２）论著
摘要：【目的】改进大鼠心肌缺血再灌注动物模型制作方法。【方法】雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠麻醉开胸后，
用３１０医用单丝线穿过冠状动脉，在结扎线下垫聚乙烯管，结扎缝线缺血３０ｒａｉｎ，剪断缝线再灌注１２０ｒａｉｎ。可省
却呼吸机。【结果】２４只ＳＤ大鼠，行单纯冠状动脉结扎术模型组大鼠存活率为１０／１２，再灌注后模型组存活率为
９／１２。假手术组存活率为１２／１２。经过氯化三苯基四氮唑（１，Ｉ℃）染色，梗死心肌和正常心肌组织分界清晰。Ｎａｇａｒ
Ｏｌｓｅｎ心肌组织特殊染色，光镜下对照组心肌组织染成黄色，俪ｆ模型组心肌组织可见大片红染的阳性反应区。【结
论】采用本方法制作大鼠心肌缺血，再灌注损伤模型成功率较高，且操作简单、创伤小。
关键词：大鼠；心肌缺血／再灌注；动物模型
【文章编号】１００８—５０４１（２００８）１ｌ一０９４１—０３【中图分类号】Ｒ３６４【文献标识码】Ａ
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