大肠杆菌油乳剂灭活苗
牦牛致病性大肠杆菌多价油佐剂灭活苗的初步研制
ｍ／ ３ Ｌ 只 种免疫剂 量分别肌 肉接种兔 ６ ， 只 接种后 ２ １ ｄ
陈 明勇（ ６ 年 ～ ， ， 士 ， １ ６ ）男 博 ９ 副教授 ，主要从事动物传染病学研究 。
维普资讯
中国兽药 杂志
２ ０ ，３ （ ） １／ ０ ２ ６１ ：１ ２ 陈明勇 ，等 ０ １～ 表 １ 免疫效力试验结果
养 琼脂 和 厌 氧肝 肉汤培 养 基 ， ７℃培 养 ４ｈ 观 察 有 ３ ，
１ ． 安 全性检 查 将 制成 的菌 苗分 别肌 肉和皮 下 ．２ ５
接种 兔 ５ ， Ｌ 只 ，观察 有无 反应 。１ 后宰 杀 ， 只 ４ｍ ／ ０ｄ 检查 注 射部 位 变化 。
１３ 培 养 基 ．
无 细 菌生 长 的可 用 于制 苗 。 １ ． 油佐 剂灭 活 苗的制备 在 细菌计 数 的基础 上按 ．３ ４
一
定 比例 将两 种 灭 活细 菌悬 液 充 分混 匀 ，并 按要 求
加人 一 定 比例 的吐温 一 ０作 为水 相 ；以油 佐 剂为 油 ８ 相 ，按 一定 比例 将水 相 加人 油相 中 ，使 每 ｌ ｍＬ菌 苗 中含 菌数 在 １ Ｃ Ｕ左 右 ， ０。 Ｆ 充分 乳化 成 油包 水 剂 ， 无
牦牛 大肠 杆 菌 病是 由某些 血 清 型致 病性 大 肠杆
１ ． 细 菌灭 活检验 ．２ ４
取 灭 活４ ～ ２ｈ ８ ７ 的细 菌悬 液接
菌 菌 株 所 引起 的一 类 败 血 性 感 染 和 腹 泻 性 传 染 病 ，
常 给牦 牛 生 产 带来 严 重 危 害 …。致 病 性 大 肠 杆 菌 易
效果 。 １ ． 免 疫剂 量测 定 ．５ ５ 选 用 ０５ｍＬ 只 、１ ／ 、２ ． ／ 只 ｍＬ
蛋鸭要怎么养有什么技术含量？
蛋鸭要怎么养有什么技术含量？近年来，我国蛋鸭饲养业得到迅猛发展，养鸭规模不断扩大，从传统的一家一户饲养，逐渐过渡到养鸭专业村、养鸭生产合作社和龙头企业加养鸭户或者大型的养鸭企业集团。
那么蛋鸭要怎么养有什么技术含量？1科学饲养管理1.1小鸭的饲养管理选择恰当的育雏期，一般在4月底5月初育成"早春鸭"最好，也可在6月间养"晚春鸭"，或在8月间养"秋鸭"。
1.1.1适时开食小鸭出壳后的第2天，有1/3的小鸭表现觅食状态，这时可喂食。
多用雏鸭全价配合饲料直接饲喂，也可用小米焖成硬饭，加10%的葡萄糖水，再加10%的青菜拌饭。
1.1.2注意放水先开水、后开食是养鸭的特点。
喂食前先用鸭篮放水，晴天13℃～15℃，可直接在冷水中放水，约5分钟左右;如遇雨天或天气寒冷时，可在室内木盆内放水。
1～2周龄内，每天放水在喂食后的15分钟左右进行。
1.1.3及时补喂动物性饲料小鸭饲养到第3天后，自配料者应按10%～20%的比例投喂动物性饲料（如螺、虾、蚯蚓、小鱼等，或用5%的鱼粉拌料投喂），以促进小鸭的生长发育。
1.1.4补喂青料从第3天起，自配料者在饲料中加入10%～20%切碎的青饲料，或投入水面让其自由采食，如青菜叶子、水草、浮萍等。
1.2青年鸭的管理适当加强运动，促进骨骼和肌肉发育，以防止过肥。
每天要定时赶鸭在舍内做转圈运动，每次5～10分钟，每天2～4次。
饲养人员要多与鸭群接触，以增强鸭子的胆量，从而防止惊群。
1.3开产前后产蛋鸭的饲养蛋鸭大都在150日龄开产，200日龄达到产蛋高峰。
这个时期饲养管理的目标是尽快把产蛋率推向高峰。
从营养方面应根据产蛋率上升的趋势不断提高饲料质量，增加日粮的营养浓度和适当增加饲喂餐数，增加采食量，以满足鸭产蛋的营养需要。
日平均光照不能少于14小时，光照应从短到长逐渐增加，直至每昼夜达到16小时。
本阶段饲养管理是否恰当，应从以下三个方面观察：一看蛋重的增加趋势，若增重势头快，说明养得好;二看产蛋率上升的趋势，最迟到200日龄时，产蛋率应达到90%左右;三看体重变化，体重若维持在开产时的体重，说明饲养管理得当。
蛋鸡大肠杆菌病和支原体病混感的诊治
蛋鸡大肠杆菌病和支原体病混感的诊治摘要从蛋鸡大肠杆菌病和支原体病混合感染的临床症状、剖检变化、细菌分离、培养鉴定以及细菌药敏试验等方面,对大肠杆菌病和支原体病混感作出了科学、系统、详细的阐述。
并提出了疫苗接种是预防该病发生的重要举措,重申了药敏试验在治疗大肠杆菌病等细菌性疾病时的重要性。
关键词蛋鸡;大肠杆菌病;支原体病;临床症状;实验室诊断;治疗措施蛋鸡的大肠杆菌病和支原体病是2种临床上常见和多发的疾病,一年四季均可发生,各个日龄段的鸡都可感染,在临床多以混合感染的形式出现,所以使治疗的难度增加。
虽然死亡率很低,但是严重影响鸡只的生长发育和生产性能,并使饲料消耗增大,使养殖成本增加。
近年来,随着规模化养鸡业的迅速发展以及鸡只和鸡蛋、鸡肉等产品的不断流通,使大肠杆菌病和支原体病的发病率逐年上升,使养殖户浪费了大量的人力、物力和财力,且很难根除和净化这2种疾病。
蛋鸡的大肠杆菌病和支原体病的发生不仅给养殖户造成了重大的经济损失,还严重制约了蛋鸡养殖业的健康发展。
1临床症状病鸡精神沉郁,采食量减少,产蛋率下降。
咳嗽,甩鼻,呼吸有啰音,并且夜间的声音大于白天。
眼睑单侧肿胀,个别病鸡眼结膜发炎,流泪,混有气泡样分泌物。
有一部分病鸡腹泻,排黄白色稀粪。
2剖检变化气管内有粘液性分泌物,气管环状出血,气囊混浊、增厚,内有大量黄色干酪物;肝脏包膜上有1层灰白色渗出物形成薄膜,心包膜附有大量纤维素样白色渗出物;肠内充满气体,肠壁变薄,肠黏膜脱落、出血,盲肠扁桃体出血,个别鸡有卵黄性腹膜炎。
3实验室检测3.1支原体检测在清洁的玻璃板上滴2滴支原体染色抗原,用针刺破翅下静脉,吸1滴新鲜血液滴入抗原中,轻轻搅拌,充分混合,将玻璃板左右摇动,2min后玻璃板上出现蓝紫色凝块,因而判定支原体全血凝集反应为阳性。
无菌自气管和鼻窦处用棉试子采取黏液,制成混旋液,加入适量青霉素、链霉素后,接种于支原体液体培养基中,37℃恒温培养5d后,培养基由红色变为黄色,并有轻度浑浊。
仔猪黄痢的流行特点 仔猪黄痢的临床症状、诊断和防治 - 养猪技术
仔猪黄痢的流行特点仔猪黄痢的临床症状、诊断和防治-养猪技术仔猪黄痢多发病于封闭式的规模养猪场,并在出生1周龄的新生猪多发,其中以1~3日龄的仔猪发病率和死亡率最高,一个猪场一旦感染该病常会连窝经消化道传染至其他猪群。
饲养管理、饲养卫生条件、气温骤变,防疫意识淡薄等外在条件极易导致该病的暴发。
下面一起来具体了解一下：仔猪黄痢的流行特点仔猪黄痢的临床症状、诊断和防治。
1、流行特点该病在全世界范围内都能够流行，且通常没有明显的季节性，主要在多雨潮湿的季节容易发生，主要是新生至5日龄阶段容易感染，其中1～3日龄最容易发病，大于7日龄基本不会出现发病，而育肥猪、肥猪、成年公母猪不会感染该病。
在产仔季节，有时会出现多窝仔猪一起发病的现象，发病率能够高达100%，尤其是初产母猪所产的后代仔猪最容易感染发病，具有很高的死亡率。
2、临床症状仔猪通常在出生大约24 h出现发病，开始时1窝仔猪中有1～3头患病。
新生仔猪发病后，最急性型通常没有表现任何明显的临床症状，经过数小时就突然发生死亡。
急性型，病猪表现出精神沉郁，体质衰弱，部分仔猪甚至在感染后会具有几小时的潜伏期。
接着会排出白色或者黄色水样粪便，其中混杂小气泡或者乳状凝块，且散发腥臭味；肛门失禁，出现明显的脱水现象，机体快速消瘦，主要是由于严重脱水而流失过多的电解质，导致其在短时时间内发生死亡。
另外，仔猪还会具有腹部皮肤变紫、双眼凹陷的症状。
此外，该病能够从一窝患病仔猪快速蔓延至另一窝仔猪。
3、实验室诊断细菌分离培养。
在患病仔猪的小肠前部用无菌接种环取适量内容物分别在普通琼脂平板和血琼脂平板上接种，放在37℃温箱中进行24 h培养，通过观察，挑取不透明的圆形菌落再次接种于普通琼脂平板上进行两次分离纯化。
结果发现，普通琼脂平板上长出不透明的白色圆形菌落，直径为2～3 mm，边缘整齐，表面闪光，略微突起；血琼脂平板上的菌落形成β-溶血环。
涂片、镜检。
挑取培养基上的单个菌落进行涂片，接着通过革兰氏染色放在显微镜下观察，能够看到接近球杆状的红色细菌，菌体两端钝圆，初步判断是大肠杆菌。
大肠杆菌多价灭活苗免疫雏鸡抗体消长规律
抗 大 肠 杆 菌 抗 体 的 凝 集 价 ， 免 后 采 集 的 血 清 加 测 二 不 同血 清型 大 肠杆 菌抗 体 的凝 集 价 。
１ ６ 攻 毒 试 验 在 一 免 后 第 ７ １ 、 ８ ４ 、 ６ ８ ． 、 ４ ２ 、 ２ ５ 、 ４天
和 １ ０天 ， 组 随 机 选 取 ６羽 试 验 鸡 进 行 攻 毒 ， 毒 ２ 每 攻 菌 株 为 ３种 制 苗 用 菌 株 的 培 养 混 合 物 ， 量 为 每 羽 剂 鸡 颈 部 皮 下 接种 １ ０亿 个 菌 。 攻 毒 后 观 察 时 间 为 １ ４ 天， １ 第 ４天 全 部 剖 检 观 察 有 无 病 变 ， 肉 眼 可 见 病 有 变 但 未 死 亡 的 鸡 为 发 病 鸡 ， 肉 眼 可 见 病 变 又 无 临 无 床 症 状 的鸡 算 正常 ， 计 死 亡 率 和发 病 率 。 统
康 鸡 群 ， 海蓝 商 品 代雏 鸡 ， 为 随机 分 成 ３组 ， 组 ６ 每 ０ 羽 ， 别用 于 接种 大 肠 杆 菌多 价 油乳 剂灭 活 苗 、 胶 分 蜂
灭 活苗 和 铝胶 灭 活苗 。 １ ４ 血 清 标 准 抗 “ 血 清 ， 自 中 国 兽 医 药 品 监 ． ｏ” 购 察 所 。 性 血 清 ， 大 肠 杆 菌 多 价 灭 活 苗 高 免 健 康 成 阳 经 年 鸡 制 得 。 阴 性 血 清 ， 经 大 肠 杆 菌 免 疫 ， 患 大 肠 未 未
２ 结 果
抗 体 变 化 规 律 和 免 疫保 护效 果 ， 免 疫 预 防 该 病 提 为
供 理 论依 据。 １ 材 料 与 方 法
１ １ 菌 株 为 本实 验 室 分离 鉴 定 ， 明为 致病 性 大 ． 证
肠 杆 菌 ， 清 型 分 别 为 ｏ ｏ 和 ｏ 血 、 。 １ ２ 大 肠 杆 菌 多 价 灭 活 苗 研 制 大 肠 杆 菌 油 乳 剂 ． 灭 活 苗 、 胶 灭 活 苗 和 铝 胶 灭 活 苗 的 研 制 参 照 《 医 蜂 兽 生 物制 品学 》 供 的方 法进 行 。 提 １ ３ 试 验 鸡 购 自 多 年 来 未 发 生 大 肠 杆 菌 病 的 健 ．
猪用疫苗的注意事项
常用八种猪疫苗的保管疫苗的注意事项：1、弱毒苗禁止与菌苗同时注射，稀释时发现失空禁用。
发现苗瓶破损、没有标签或标签不清楚、苗中混有杂质、已过失效期、未在规定条件下保存的，均不能使用。
2、被注射猪只必须健康，如体质瘦弱、有病、体温升高、食欲不振等均不应注射。
3、注苗前后各一周严禁使用抗生素、抗菌素类药物。
4、免疫使用的各种工具，用前必须消毒。
随着猪的体形大小选择针头型号。
5、每注射一头猪必须更换一次消毒的针头，严禁打“飞针”。
6、注苗时间，根据本场制定的免疫程序，对猪群进行疫苗接种。
最好是进食后2小时或进食前。
注意不要造成妊娠母猪流产或死胎。
出现应激反应时用肾上腺素等药物治疗。
7、注射部位先用5%碘酒消毒、75%酒精脱碘，再进行注射。
按疫苗要求选择注射部位。
如有瘟疫发生时，由兽医师严格指导，安全区、威胁区、发病区依次注苗后并观察。
8、稀释后或开封的疫苗，根据疫苗的种类，在规定的时间内用完。
严禁冻结或保存再用。
9、在寒冷季节注苗时，疫苗放置室温下2小时，再稀释或开封进行接种。
10、按疫苗的说明保存疫苗，冷冻或冷藏。
一般干粉苗冷冻保存，水剂或油剂苗冷藏保存。
11、用完后的疫苗包装或空瓶，用5%火碱水消毒处理或高温焚烧按环保要求标准处理。
12、接种过程中须做好记录，注明接种猪的品种、大小、性别、数量、接种时间、疫苗名称、生产厂家、批号、失效期、注射计量和操作人员等。
一、猪瘟兔化弱毒冻干疫苗及猪瘟兔化弱毒细胞培养冻干疫苗1.预防的疫病及对象：猪瘟，适用于各种年龄、品种、性别的猪只。
2.保存方法：按批号、生产日期，在-15℃保存以下，不超过18个月，在0-8℃保存，不超过3个月，一般禁止零上温度保存。
3.使用方法：这两种疫苗皆为淡红色、海绵壮疏松物。
按瓶标签说明的头份加无菌生理盐水稀释，各种大小猪只均肌肉或皮下注射1-4头份，注射后4天产生免疫抗体;根据免疫抗体水平，可以加大疫苗的接种剂量，尤其是细胞培养冻干苗。
番鸭的三周病疫苗的流程及注意事项
番鸭的三周病疫苗的流程及注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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蛋鸭不同阶段疫苗注射介绍
蛋鸭不同阶段疫苗注射介绍鸭子是常见的家禽，很多地区都有饲养。
规模养鸭都会注射疫苗，特别是蛋鸭养殖。
那么蛋鸭常用的疫苗有哪些?什么阶段注射?下面一起来了解学习下。
蛋鸭不同阶段疫苗注射1日龄：预防鸭病毒性肝炎，应用鸭病毒性肝炎活疫苗。
使用方法：口服(滴口、鼻、眼，注射效果不好)。
6日龄：预防鸭传染性浆膜炎，使用鸭传染性浆膜炎灭活苗0.5毫升。
使用方法：肌肉注射。
7-10日龄：预防鸭瘟，鸭瘟苗注射。
15日龄：预防鸭传染性浆膜炎，使用鸭传染性浆膜炎灭活苗0.5毫升。
使用方法：肌肉注射。
90日龄：预防大肠杆菌病，应用大肠杆菌灭活苗1毫升。
使用方法：肌肉注射。
100日龄：预防鸭瘟，应用鸭瘟活疫苗1头份。
使用方法：肌肉注射。
110日龄：预防禽霍乱，应用禽霍乱蜂胶活疫苗1头份。
使用方法：肌肉注射。
120日龄：预防禽大肠杆菌病和禽霍乱，应用大肠杆菌灭活苗1毫升，同时用禽霍乱油乳剂灭活苗1毫升。
使用方法：肌肉注射。
蛋鸭疫苗接种注意事项1、选择疫苗时，要先了解目前各种鸭病疫苗的种类，同时结合近年来本地区、本场疫病流行情况，制订科学合理的免疫程序，按已定的免疫程序选择疫苗。
2、冻干弱毒疫苗(活苗)应低温冻结(-10℃左右)保存。
油乳剂灭活苗(死苗)应置于4～8℃保存，不能冻结。
3、冻干弱毒苗使用时，要用灭菌生理盐水或冷开水稀释，切记不要往疫苗中加入抗生素。
更不能将抗生素粉剂及针剂加入油乳剂苗中，否则容易引起脱乳。
4、注射器及针头等用具应先洗干净，再煮沸消毒或用高压锅灭菌。
否则，容易引起鸭只注射部位感染细菌，轻者发炎，重者死亡。
5、注射的时候掐起皮肤，针头向鸭背方向插入皮下。
切忌在颈侧注射，因为容易刺破颈部血管而出现皮下血肿，压迫颈部神经或刺伤颈部肌肉影响颈的活动。
也切忌作腿部肌内注射，因为此法会影响鸭走路，或由于疼痛引起跛行。
6、在进行免疫接种时，应先接种健康鸭只，然后接种体质较差的鸭或者是被认为不健康的鸭。
抓鸭时动作要轻，放下时动作要慢，避免产生过大的应激。
畜禽自家疫苗的制备与应用
综述文摘畜禽自家疫苗的制备与应用陆有飞1,2,高永锐1,2,吴远松2(1.广西大学动物科技学院,南宁530005;2.广西生物制品厂,南宁530001)中图分类号:S852.4 文献标识码:B 文章编号:1002-5235(2008)01-0058-03 近十年来,随着我国畜禽养殖业集约化发展,疾病混合感染和各种免疫抑制性疾病引起的综合症导致疫情的发生呈现复杂化的趋势,这种情况在短时间内难以疫苗预防控制,药物治疗往往又得不到理想的效果,因此对畜禽养殖业造成了很大经济损失。
在临床上,多数兽医工作者都肯定自家疫苗的制备与应用,在一定程度上可以达到控制疫情的目的。
本文就这方面做一综述。
1 自家疫苗的定义自家疫苗简称自家苗,又称现地疫苗,是采用畜禽病料组织(内脏器官)经加工或分离到的毒株经体外增殖,灭活后加入适宜佐剂制成,仅供发病养殖场(病料来源场)健康动物作预防使用。
自家疫苗适用于混合感染、多血清群、多血清型、多变异病原引起的疾病及发病机理和病原免疫原性尚不清楚的疾病等。
2 自家疫苗的制备方法2.1 组织灭活疫苗制备选择经过临床诊断和实验室诊断的典型病例,然后无菌采集濒死畜禽内脏器官(根据不同疾病采取肝、肾、肺、脾、淋巴结等),剪碎,加适量PBS液于高速捣碎机中匀浆,加PBS液稀释成混悬液,冻融3次,离心(取上清液)或过滤后,加入灭活剂灭活24～48h,期间振荡数次,灭活检验(包括无菌检验和病毒的细胞感染检查)合格后加入佐剂混匀分装,经安全试验和效力试验合格即得。
2.2 分离株灭活疫苗制备选择适宜培养基或实验动物→细菌(病毒)分离与鉴定→制苗株的筛选→细菌(病毒)的增殖培养和灭活(必要时浓缩)→灭活检验(包括无菌检验、病毒的细胞感染检查等)→加佐剂混匀分装,经安全试验和效力试验合格即得。
3 自家疫苗的应用实例3 大肠杆菌病与巴氏杆菌病目前国内外有批准的商品疫苗(活疫苗和灭活疫苗)应用,由于大肠杆菌与巴氏杆菌都是多血清型和多变异病原菌,所以疫苗保护力在不同疫苗株间差异大,对于不同地域的变异株则效果更加不理想,因此自家苗的使用更多见[1～2]。
鸡的大肠杆菌
鸡大肠杆菌病因及防治措施摘要: 鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌的某些血清型引起的一类疾病的总称。
近年来随着集约化养鸡的迅速发展，该病的流行日趋严重，使患病的鸡群生长发育受阻，饲料转化率下降、死淘率及屠宰废弃率增加，种鸡及产蛋鸡的蛋品质量下降和孵化率降低，以及治疗费用的增加等等，给养鸡户造成了极大的经济损失，引起了广大养鸡者的高度重视。
本文从病原、流行特点、临床症状、病理变化、防治措施等方面对鸡大肠杆菌病阐述，以供实践指导。
关键词：鸡大肠杆菌；病因；预防措施前言鸡大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌感染而引起的鸡的一种常见病和多发病。
由于大肠杆菌在鸡场里普遍存在，当鸡群饲养密度大，气候突变，疾病干扰，应激因素存在时，往往造成本病暴发，故又称条件性疾病。
随着集约化养鸡业的发展，大肠杆菌病的发病率和亡率也随之增加，严重影响了家禽生产性能的发挥，给养禽业造成了一定的经济损失。
1病原学根据抗原结构不同，已知大肠杆菌有菌体抗原170种，表面抗原近103种，鞭毛抗原60种，因而构成了许多血清型。
最近菌毛抗原被用于血清学鉴定，最常见的血清型K88，K99，分别命名为F4和F5型。
在引起人畜肠道疾病的血清型中，有肠致病性大肠杆菌、肠毒素性大肠杆菌和肠侵袭性大肠杆菌等之分，多数肠毒素性大肠杆菌都带有菌毛抗原。
在170种“0”型抗原血清型中约1/2左右对禽有致病性，但最多的是O1、O2、O78、O35四个血清型。
大肠杆菌能分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、甘油、鼠李糖、山梨醇和阿拉伯糖，产酸和产气。
多数菌株能发酵乳糖，有部分菌株发酵蔗糖。
产生靛基质。
不分解糊精、淀粉、肌醇和尿素。
2.流行特点2.1易感动物各种龄期的鸡，以4周以上的较为敏感，1周龄内的雏鸡则有一定的抵抗力。
其他家禽（如火鸡、鸭、鹅、鸽）和实验动物（如家兔、小白鼠、豚鼠等）无论自然感染还是人工感染，对该病均有很强的抵抗力。
2.2传播途径和传染源该病主要由病鸡呼吸道和消化道排泄物传播。
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制作大肠杆菌油乳剂灭活苗200ml实验设计
实验所需仪器及材料；
高压锅，无菌操作台，显微镜，电炉，天枰，滤纸，漏斗，烧杯，两个烧瓶，量筒，十毫升试管烧杯，电子天平，恒温培养箱，玻璃棒，铁架台，接种环，酒精灯，培养皿，ph试纸，牛肉膏，无离子水，蛋白胨，琼脂粉，白油，氯化钠，离心机，刻度吸管。
节省时间的基本制造程序；
1 ）肉汤培养基的制作方法；天枰量出蛋白胨1.5g，牛肉膏0.75g，磷酸氢二钾0.15g，氯化钠0.75g，无离子水150ml，放入烧杯，放入电炉微火加热至沸腾，加热过程用玻璃棒不停搅拌，溶化好后测量肉汤ph值并矫正到7.4至7.6.（一般情况下溶化好后偏酸需加少量氢氧化钠溶液矫正）。
然后过滤100ml加5到烧瓶内，剩余装入两个试管作细菌活化和增菌用。
2）麦糠凯培养基制作程序；天枰量出15g琼脂，放入烧瓶加入300ml无离子水，在电炉上玻璃棒搅拌微火加热至煮沸。
矫正ph7.4至7.6。
3）用棉塞堵住放有肉汤培养液和麦糠凯培养液的烧瓶和试管，连同培养皿，小试管包好放入高压锅高压灭菌，（高压锅加热后，当温度到达105摄氏度后放气到100摄氏度以下共放三次，每次时间间隔约为五分钟，三次放气后加热到121.3摄氏度维持15至20分钟，当温度超过121.3摄氏度时断电，降温。
）取出高压锅内的物品放入无菌操作台。
4）等到麦糠凯培养液温度降至55摄氏度是倾倒平板，150ml倾倒十个培养皿，培养皿定型后，取出一个固体培养基接种大肠杆菌，取一个放有肉汤培养液的试管进行大肠杆菌接种，放入恒温培养箱37摄氏度培养18至24小时，剩余国体培养基和液体培养基一起放入4摄氏度冰箱保存。
5）观察细菌菌落，去除液体培养基内菌株进行接种到另一个试管内继续活化增菌。
培养18至24小时。
6）对菌液进行庆祝平板法细菌技术计数（9个平板,十个试管）。
7）菌液培养；对烧瓶内的培养液接种菌液百分之一到百分之二（培养液占容器二分之一到三分之二），液体静置培养法培养18至24小时。
8）细菌计数（9个平板,十个试管）。
9）细菌灭活；约用0.4ml甲醛溶液(占百分之零点四)在37摄氏度下处理24至48小时灭活，然后用2g硫代硫酸钠（占百分之二）放入10ml无离子水稀释后的溶液放入灭活菌液终止灭活。
10)制作佐剂（佐剂与灭活菌液比例为一比一）；白油0.8乘以105得84 乳化剂0.2乘以105得21。
11）浓缩；用离心机对菌液进行离心沉降法取上清液105ml。
12)佐剂与菌液混合得210ml大肠杆菌油乳剂灭活苗。
13)取10ml做安全检验和效力检验。
14）常温避光保存。