LC-MS 联用技术-2-1与2-2
LC-MS基础资料
〔3〕母离子扫描
母离子分析可用来鉴定和确认类型的化合物， 尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂 过程中会生成共同的子离子，这种扫描功能在 药物代谢争论中特殊重要。
(4)中性丧失扫描
中性丧失扫描分析可用来鉴定和确认类型的化 合物，例如新生儿遗传疾病筛查中某些检测工 程。也可以帮助进展未知物构造推断，例如有 中性丧失18Da的意味着-H2O，28-CO，30HCOH，32-CH3OH，44-CO2等等。
Ionic
IonSpray
电喷雾电离源
APCI
大气压化学电离源
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
LC_MS接口的作用
将淋洗剂及样品气化 分别除去大量的淋洗剂分子适应MS的高真空 样品分子的电离
常用的离子源:
279.1591 m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子 m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+,
391.2843 m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+,
413.2668
分子量测定失败的缘由
子离子分析〔 MS/MS 〕 子离子，用于构造推断(得到化合物的二级谱图即碎
片离子)和选择离子对作多种反响监测〔MRM〕。
子离子谱图与锥体电压断裂谱图〔源内CID〕可能特殊 相像，所不同的是子离子质谱图只有一种质量通过MS1， 因此也全部碎片离子都是由我们所选定的母离子所产生 的，所以我们更信任由MS/MS产生的谱图的纯度。
液相色谱／质谱联用技术
液相色谱／质谱联用技术李立军色谱是快速灵敏分离有机物的有效手段，各种检测器中，除了应用最广泛的 FID（GC）和UV（LC）外，质谱（MS）尽管价格较昂贵，但是其选择性、灵敏度、分子量及结构信息等优势，已被公认为高级的通用型检测器，把它与各种分离手段联用，将定性、定量结果有机地结合在一起，一直是人们所研究的目标。
GC／MS在我国已有 20多年的应用历史，随着台式小型仪器迅速增长，在色谱研究中已经成为重要的手段，气相色谱质谱技术成熟运用至今，人们越来越不满足仅仅分析那些具有挥发性和低分子量的化合物，面对日益增加的大分子量（特别是蛋白，多肽等）和不挥发化合物的分析任务，迫切需要用液相色谱／质谱联用解决实际间题。
与气相色谱相比，液相色谱的分离能力有着不可比拟的优势，液相色谱／质谱联用技术为人们认识和改造自然提供了强有力的工具。
HPLC可以直接分离难挥发、大分子、强极性及热稳定性差的化合物，LC ／MS联机曾长期为分析界所期待，由于LC流动相与MS传统电离源的高真空难以相容，还要在温和的条件下使样品带上电荷而样品本身不分解，大量的样品不得不采取脱机方式 MS 鉴定，或制成衍生物用 GC／MS分析。
经过努力相继出现了多种液相色谱／质谱联用接口，实现了液相色谱／质谱的联用。
特别是大气压电离质谱（APIMS）的实现为 LC／MS的兼容创造了机会，商品化的小型 LC／MS作为成熟的常规分析仪器在九十年代已经在生物医药实验室发挥着重要的作用。
一．液相色谱／质谱联用适用范围液相色谱／质谱联用的基本流程为：混合的样品经高效液相色谱柱分离后成为多个单一组分，依次通过液相色谱／质谱接口进入质谱仪的离子源，离子化后的样品经过质量分析器分析后由检测系统记录，后经数据系统采集处理，得到带有结构信息的质谱图。
图1 液相色谱／质谱联用的基本流程首先看看气相色谱／质谱联用的特点：·要求样品气化后进入质谱仪·用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比·用毛细管色谱柱分离化合物，分高效率高·操作条件稳定、使用方法成熟·适宜分析小分子、易挥发、热稳定的化合物液相色谱／质谱联用主要可解决如下几方面的问题：①不挥发性化合物分析测定；②极性化合物的分析测定；③热不稳定化合物的分析测定；④大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等）的分析测定；附图清楚地表明了各种接口技术的适用范围。
LC-MS液质联用资料系列2
ELECTROSPRAY
Factors to consider
• Ionic strength • Surface tension of the solvent • Volatility of the solvent • Character of the analyte ions in solution: solvated, ion paired,
1.0x107 Intensity
8.0x106
6.0x106
4.0x106
2.0x106
0.0 100.00
200.00
300.00
400.00 500.00 m/z
600.00
700.00
800.00
7x106 6x106 5x106
292.04
4x106 Intensity
3x106
2x106
O CH3
O H3C
N O
O
Increasing the flow rate increases droplet size which decreases the yield of gas-phase ions from the charged droplets. - Use shorter columns of same phase and proportionally decrease flow rate.
577.06 600
721.16 652.27 696.09
700
937.44
891.09 941.49
813.47 831.58
976m.0/6z
800
900
1000
0 99.94 117.53 100
193.08 200
液相色谱-质谱联用(LC-MS)
液相色谱-质谱联用(LC-MS)LCMS分别的含义是：L液相C色谱M质谱S分离（友情赠送：G是气相^_^）LC-MS/MS就是液相色谱质谱/质谱联用MS/MS是质谱-质谱联用（通常我们称为串联质谱，二维质谱法，序贯质谱等）LC-MS/MS与LC-MS比较，M（质谱）分离的步骤是串联的，不是单一的。
色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。
色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。
此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。
然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。
色谱法也由此而得名。
现在的色谱法早已不局限于色素的分离，其方法也早已得到了极大的发展，但其分离的原理仍然是一样的。
我们仍然叫它色谱分析。
一、色谱分离基本原理：由以上方法可知，在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。
色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。
使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。
当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。
与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
二、色谱分类方法：色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。
从两相的状态分类：相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。
联用技术——精选推荐
LC-MS联用在药物分析中的应用摘要：液质联用技术是20世纪70年代发展起来的一门综合性分析技术，LC的高分离效能与MS的高灵敏度、高选择性使之成为药物研究中强有力的工具。
该技术具有高分离能力、高灵敏度、应用范围广和极强的专属性等特点。
液相色谱-质谱在接口技术方面取得了很大进展，且随着该技术的不断完善使液质联用技术在药物分析占据越来越重要的地位。
作为一种具有应用前景的检测方法，HPLC - MS联用技术在药学领域中已得到广泛应用。
本文主要介绍近年来该技术的研究进展以及高效液相-质谱联用技术在药物分析中的最新应用进展。
关键词：液相色谱-质谱联用技术药物分析应用Application of LC-MS Methode for Pharmaceutical AnalysisAbstract：Liquid chromatography-mass spectrometry is regarded as an important technology in drug research. It is characterized by its high separating efficiency, good sensitivity and strong specificity. HPLC - MS has made great progress in interface technology and this technique is being constantly completed. The coalition of HPLC and MS will play more and more important role in Pharmaceutical analysis. As a very promising detection method, HPLC-MS technology has been widely used in the pharmaceutical field. This paper mainly recommend the recent research progress of LC - MS technology and its application in pharmaceutical analysis.Keywords：LC /MS; Pharmaceutical analysis; Application液质联用( LC - MS)又叫液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。
液相色谱-质谱联用仪原理
液相色谱-质谱联用仪原理液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）是一种结合了液相色谱（LC）和质谱（MS）的分析技术，用于分离、识别和定量分析复杂样品中的化合物。
它的原理如下：1.液相色谱（LC）：LC是一种基于溶液中化合物的分配行为进行分离的技术。
样品通过液相色谱柱，在流动相（溶剂）的作用下，不同的化合物会以不同的速率通过柱子。
这样，样品中的化合物就可以被分离出来。
2.质谱（MS）：质谱是一种分析技术，通过测量化合物的质荷比（m/z）和相对丰度来确定化合物的分子结构和组成。
在质谱中，化合物首先被电离形成离子，然后通过一系列的质量分析器进行分离和检测。
3.LC-MS联用原理：LC-MS联用仪将液相色谱和质谱相连接，使得从液相色谱柱出来的化合物可以直接进入质谱进行分析。
联用仪的关键部分是接口，它将液相色谱柱的流出物引入质谱。
接口通常采用喷雾电离技术，将液相中的化合物通过气雾化形成气相离子，并将其引入质谱。
常见的接口类型包括电喷雾离子源（ESI）和大气压化学电离（APCI）等。
4.分析过程：样品首先通过液相色谱柱进行分离，不同的化合物进入质谱前的接口。
接口中的喷雾电离源将液相中的化合物转化为气相离子，并将其引入质谱。
在质谱中，离子会根据其质荷比通过一系列的分析器进行分离和检测，最终生成质谱图谱。
质谱图谱提供了化合物的质荷比和相对丰度信息，可以用于确定化合物的结构和组成。
液相色谱-质谱联用仪的原理使得它能够在分离的同时对样品进行快速、高效的分析。
它在生物医药、环境监测、食品安全等领域具有广泛的应用，可以帮助科学家们解决复杂样品中的化学分析难题。
液相色谱-质谱联用（LC-MS）使用指南及注意事项
液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项⾼洁⽣物站A308 仪器型号: 岛津LCMS-20201.开机1.1 开机前准备确认氮⽓畅通，液氮罐GAS出⼝压⼒表指针在0.7~0.8MPa之间。
压⼒不够时，将其对⾯的增压阀拧⼤，使压⼒达到要求，若压⼒还不够，说明需要更换液氮。
确认流动相溶剂瓶内液体够⽤（流动相A-娃哈哈⼩瓶装纯净⽔，B为⼄腈，分别加千分之零点三五的HPLC级三氟⼄酸），液⾯要没过吸滤头。
打开UV检测器箱门，将三通与质谱分流接头连接。
1.2 开机过程开机顺序为1 2 3 4 5 6，关机顺序为6 5 4 3 2 1。
1.3 打开电脑之后打开分析程序。
将MS配置到程序中。
⽅法如下：Main→System Configuration→LCMS→上⽅蓝箭头→OK听到“滴”⼀声后，页⾯显⽰液相与质谱绿⾊ready状态，说明LC与MS均与程序连接良好。
2.1样品准备浓度：0.1 mg/ml 左右溶剂：流动相（⼄腈⽔甲醇），若以上均不溶，⽤少量DMSO溶解再稀释到以上溶剂中过滤膜！！样品瓶要确保⽆尘2.2仪器准备打开之前设定好的Method File→Download（⽬的是将仪器参数从程序配置到仪器） ?如果刚刚开机的话，各个部件还未预热，需要把各个部件打开。
打开顺序为：1234567（7打开后8和9⾃动打开）1）如果⽅法中的分⼦量扫描范围不是你需要的，重新设置：在下图中，Scan（+）Scan（-）分别为正负离⼦扫描设置。
扫描速度=扫描范围/ 扫描周期，扫描速度在1000u/second 左右⽐较好，所以改变扫描范围之后，要相应地改变扫描周期，使扫描速度在1000左右。
扫描范围为m/z 50-2000，⼀般设置100以上起始，因为溶剂中100以下⼩分⼦杂质较多，终⽌分⼦量⼀般为⽬标分⼦量的⼆倍稍⾼。
2）LC洗脱程序设置，设置⽅法与HPLC相似。
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
第一章 LC-MS技术简 介
• ESI
离子源与液相色谱的流速
• APCI
1 μL/min - 1mL/min
200 μL/min - 2mL/min
最佳使用流速: 200 μL/min
最佳使用流速: 500 μL/min
一般来说, 高流速需要高的 毛细管温度和鞘气、辅助气 流量。
液相色谱-简介 • 我们的仪器 • 测试准备阶段的注意事项 • 结果的解读
第一章 液相色谱-质谱联用技术
• 质谱基本原理
简介
质谱分析法是通过对被测样品离子质荷比的测定来进
行分析的一种分析方法。
电离装置把样品电离为离子
质量分析器把不同质荷比的离子分开
大气
液质联用仪的离子源
第一章 LC-MS技术简 介
• 离子源的作用
去溶剂
液相色谱与质谱的接口
离子化
真空过渡
去除干扰
• 大气压电离源（Atmosphere pressure ionization，API）
电喷雾电离源（Electrospray ionization，ESI）
大气压化学电离源（Atmosphere pressure chemicel ionization，APCI）
液质联用仪的离子源
第一章 LC-MS技术简 介
正离子模式：ESI(+)或APCI(+)
适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨 或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。
负离子模式：ESI(-)或APCI(-)
适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较 多的强负电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模 式。
液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术应用研究
液相色谱一质谱联用（Ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇ－ 液 器 、泵 、进 样 器 等部 分 组 成 。ＭＳ又 称 质谱 中 ，电喷 雾 接 １３的应 用 极 为 广 泛 ，其 主要 由
ｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｏｎｎｅｔｒｙ，简称ＬＣ—ＭＳ）技 术 计 ，由离 子 源 、质 量分 析 器 和 离 子 检 测 器 等 大 气 压 离 子 化 室 和 离 子 聚 焦 透 镜 组 件 构
的 应 用成 果 ，以期 为此 技术 在 生产 和 科研 中 源要 求 样 品 汽 化 是 不 相 适 应 的 。为 了实 现 质谱／质谱（ＵＰＬＣ— ＭＣ／ＭＣ）法 ，研 究表 明
进 一 步发 挥 其独 特 的优 势而 提供 理 论 参考 。 联 用 ，一 般是 选 用 合 适 的 “接 口”以 协 调 液 该 法 检 测 外 源 性 激 素 的 灵敏 度 高 ，检 出 限
２．１应 用于食 品领域
统地 阐述 了液相 色谱 一质谱 联用 （ＬＣ—ＭＳ）技
液 相 色 谱 的分 析 对 象 主要 是 难 挥 发 和
张 爱 芝 等 …针 对 食 品 动 物 禁 用 的 兽 药
术 及其 在食 品 、医药 、饲 料 、化学 化 工等 领 域 热 不 稳 定 物 质 ，这 与 质谱 仪 中 常 用 的 离 子 中外 源 性 激 素 ，建 立 了超 高 效 液 相 色 谱 一
谱 仪 （Ｍｓ）等部 分组 成 （见 图１）。ＬＣ系 统 由储 快原 子 轰 击（ＦＡＢ）、电喷 雾 接 口（ＥＳＩ）等 。其 宽 ，检 验 结 果 准 确 可 靠 ，应 用 性 强 。周 莉 莉
和 成熟 起来 的 一 种较 完 美的 、与 传 统分 离 分 为 静 态 仪 器和 动 态 仪 器 。简 言之 ，此技 术 是 品 溶 液 。通 常 要 对 Ｌｃ—ＭＳ进 行 定期 校 准 以
液质联用(LCMS)原理简析
液质联用（LCMS）原理简析1.质谱法质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。
质谱的样品一般要汽化，再离子化。
不纯的样品要用色谱和质谱联用仪，是通过色谱进样。
即色谱分离，质谱是色谱的检测器。
离子在电场和磁场的综合作用下，按照其质量数m和电荷数Z的比值(m/z，质荷比)大小依次排列成谱被记录下来，以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。
2.质谱仪质谱仪由以下几部分组成数据及供电系统┏━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓进样系统离子源质量分析器检测接收器┗━━━━━╋━━━━━━┛真空系统质谱仪一般由进样系统、离子源、分析器、检测器组成。
还包括真空系统、电气系统和数据处理系统等辅助设备。
（1）离子源：使样品产生离子的装置叫离子源。
液质的离子源有ESI，APCI，APPI，统称大气压电离(API)源，实验室常用液质的离子源为ESI源。
电喷雾（ESI）的特点通常小分子得到[M+H]+ ]+,[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子，生物大分子产生多电荷离子。
电喷雾电离是最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定的极性化合物；其易形成多电荷离子的特性可分析蛋白质和DNA等生物大分子；通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）得到化合物的部分结构。
（2）质量分析器： 由它将离子源产生的离子按m/z分开。
离子通过分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的M/Z离子聚焦在一起,组成质谱。
质量分析器有：磁场和电场、四极杆、离子阱、飞行时间质谱、傅立叶变换离子回旋共振等。
实验室目前液质的质量分析器类型：三重四极杆（QqQ）：离子源→第一分析器→碰撞室→第二分析器→接收器MS1 MS2Q1 q2 Q3QqQ仪器可以方便的改变离子的动能，因此扫描速度快，体积小，常作为台式进入常规实验室，缺点是质量范围及分辨率有限，不能进行高分辨测定，只能做到单位质量分辨。