脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的优化_王冬梅
尖孢镰刀菌产碱性低温脂肪酶发酵条件的优化
尖孢镰刀菌产碱性低温脂肪酶发酵条件的优化张建国;王蕾【摘要】The effect of single factor on the flask incubation of Fusarium oxysporium NC03 was investigat- ed. The optimum medium for the yield of lipase was that containing peptone 5 g/L, NaH2 PO4 3g/L, olive oil 250 mL/L, emulsifier Tween 80 25mL/L. The strain was cultured under the condition of 30 ℃ for 84 h. The enzyme activity under the optimal condition was 3.0 times of that under the condition before optimized, and reached to 11.32 U/mL%通过实验对尖孢镰刀菌NC03摇床发酵产脂肪酶的培养基组成和培养条件进行了优化,得出最佳产酶培养基组成配方为：蛋白胨5 g/L,酵母膏6 g/L,NaH2PO43 g/L;橄榄油250 mL/L,吐温80 25 mL/L。
最优发酵条件为250 mL的摇瓶装液量50 mL,培养温度30℃,发酵时间84 h。
经过优化后发酵液脂肪酶酶活力最高可达到11.32 U/mL,较优化前提高了3.0倍。
【期刊名称】《长治学院学报》【年(卷),期】2012(029)005【总页数】7页(P1-7)【关键词】脂肪酶;培养基;发酵;优化【作者】张建国;王蕾【作者单位】长治学院生物科学与技术系,山西长治046000;江南大学生物工程学院,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】Q55脂肪酶（Lipase，EC3.1.1.3）又称三酰基甘油酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、植物种子及微生物中。
产低温脂肪酶菌株鉴定、发酵条件优化及酶学性质分析
刘思远，申东晨，刘峥，等. 产低温脂肪酶菌株鉴定、发酵条件优化及酶学性质分析[J]. 食品工业科技，2023，44（20）：116−125. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022120159LIU Siyuan, SHEN Dongchen, LIU Zheng, et al. Identification of A Cold-active Lipase Producing Strain, Optimization of Fermentation Conditions and Analysis of Enzymatic Properties[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(20): 116−125. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022120159· 生物工程 ·产低温脂肪酶菌株鉴定、发酵条件优化及酶学性质分析刘思远，申东晨，刘 峥，鲁丽颖，徐 恒，董爱荣*（东北林业大学 林学院，黑龙江哈尔滨 150040）摘 要：为筛选高产低温脂肪酶的菌株，并对产酶条件进行优化，同时为脂肪酶的工业化开发提供生产资料。
从黑龙江省漠河县土壤样品中筛选出一株产低温脂肪酶菌株，通过形态学鉴定、生理生化实验及分子生物学鉴定，确定该菌株为普城沙雷氏菌（Serratia plymuthica ）。
通过单因素实验，探究温度、pH 、装液量、接种量、碳源、氮源、金属离子、诱导剂等不同因素对菌株产酶的影响，通过Plackett-Burman 实验，爬坡试验及响应曲面设计，优化橄榄油、蛋白胨、装液量等因素的添加量。
结果表明：该菌株最优产酶条件为20 ℃、pH7.5、装液量42 mL 、接种量0.5%、20 g/L 麦芽糖、14 g/L 蛋白胨、0.5 g/L 的MgSO 4·7H 2O 及46 mL/L 橄榄油。
脂肪酶产酶菌的筛选及酶活性的测定
脂肪酶产酶菌的筛选及酶活性的测定谢妤【摘要】目的:从土壤中分离出脂肪酶产酶菌并测定最佳产酶条件及所产脂肪酶的活性.方法:经富集、初筛及复筛将脂肪酶产酶菌筛选出来,然后用滴定法测定酶活性.结果:成功从土壤中分离出了一株脂肪酶产酶菌,并通过滴定法测出了所产酶在不同温度和pH条件下的活性.结论:该菌所产的脂肪酶在30℃、pH 6.8左右的环境中,酶的活性最强.【期刊名称】《宜春学院学报》【年(卷),期】2011(033)004【总页数】2页(P128-129)【关键词】脂肪酶;活性测定;pH;温度【作者】谢妤【作者单位】宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春,336000【正文语种】中文【中图分类】Q939.9脂肪酶 (Lipase，EC.3.1.1.3)，是一类催化合成和分解长链脂肪酸酯的酶类，是在生物催化和生物技术应用领域中最重要的一类酶，主要应用于乳制品、洗涤剂、脂肪加工、皮革、纺织品、化妆品以及造纸工业［1，2］。
除此之外，脂肪酶的一些新的用途也取得了成功，如将脂肪酶用于生物多聚体和生物柴油的合成，将脂肪酶用于对映异构体药物、农产化学品及气味化合物的生产等，脂肪酶的化学专一性、区域专一性及对映体专一性引起了科学家和工业界的极大兴趣［3］。
脂肪酶的活力在水－脂界面被激活，当底物以单一形式存在时，酶活力很低;当底物形成乳化液超过溶解度上限时，酶活力显著增加，这即所谓界面激活的现象［4］。
不过也有少数例外。
脂肪酶在自然界中广泛存在，动植物、真菌、细菌都能产生脂肪酶，但微生物脂肪酶往往比动植物来源的脂肪酶更有用。
这主要是由于微生物催化功能的极大的多样性、微生物易于基因操作、微生物能利用廉价培养基快速生长以及不像动植物生长存在季节性波动等。
因此微生物是脂肪酶的理想来源［5］。
1.2.1 脂肪酶产生菌的富集培养取样品1g加入50ml无菌蒸馏水中充分振荡后静置5分钟，取上层液体1ml接种于富集培养基中，30℃培养72小时，每24小时转接一次新鲜培养基。
产碱性脂肪酶菌株的筛选和培养
2003 年10月 The Chinese Journal of Process Engineering Oct. 2003 产碱性脂肪酶菌株的筛选和培养 洪 骏， 夏黎明(浙江大学材料与化工学院化学工程与生物工程系, 浙江杭州 310027)摘要：以Rodamine B平板筛选法获得了一株高活力碱性脂肪酶产生菌Pseudomonas sp. ZJU−02.摇瓶产酶实验表明，适宜产酶培养基为(%)：玉米浆3，植物油1, K2HPO4 0.1, KCl 0.05, MgSO4 0.05,Tween80 0.05；最佳培养条件为温度26o C、初始pH 6.5. 脂肪酶活力可高达86 IU/ml. 该酶在70o C以下、pH 7.0~10.5范围内稳定；酶反应的适宜温度为40o C，适宜pH为9.5. 该酶制剂在洗涤剂和制革工业中有良好的应用前景.关键词：碱性脂肪酶；菌种筛选；酶学特性中图分类号：TQ925文献标识码： A 文章编号： 1009−606X(2003)05−0428−05１ 前 言 脂肪酶(EC3.1.1.3)是类脂化合物分解、合成和酯交换的催化剂，广泛应用于食品、轻纺、皮革、香料、化妆品、洗涤剂、有机合成、医药等领域[1,2]. 自20世纪80年代以来，由于洗涤剂、皮革工业的迫切要求，碱性脂肪酶的研究引起了国内外学者的广泛兴趣. 假单胞杆菌产碱性脂肪酶国内外虽已有研究，但酶活力均不高[3−5]. 本工作从实验室保藏菌种中筛选到一株产碱性脂肪酶能力较强的假单胞杆菌ZJU−02，并进一步对其产酶条件和酶学性质进行了研究.２ 材料和方法 ２．１ 菌种 Pseudomonas sp. ZJU−02, Pseudomonas aeruginosa, Alcaligenes sp., Pichia stipitis,Candida shehatae, Pichia fabianii, Bacillus sp., 均为本实验室保藏菌种.２．２ 培养基 细菌培养基(g/L)：蛋白胨5.0，酵母汁5.0，葡萄糖1.0, K2HPO4 1.0，琼脂15.0.真菌培养基(g/L)：PDA培养基(马铃薯200，葡萄糖20，琼脂15).种子培养基(g/L)：谷氨酸钠5.0，KH2PO4 1.0, KCl 0.1，葡萄糖10.0.产酶培养基(g/L)：玉米浆30.0，尿素6.0，K2HPO4 1.0，KCl 0.5，MgSO4 0.5，植物油10.0. ２．３ Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ平板筛选法［６］ 在培养基中加入3%的植物油，灭菌后冷却至60o C，加入0.2%过滤灭菌的Rhodamine B溶液，制成平板. 用无菌牙签将菌种分别转移到Rhodamine B筛选平板上，于30o C条件下恒温培养72 h. 然后在350 nm紫外光下观察，依据培养平板上形成的荧光圈大小进行菌种筛选.２．４ 摇瓶产酶实验 将筛选到的菌种由培养斜面接种到50 ml (250 ml三角瓶)种子培养基中，于28o C及200 r/min 条件下培养48 h，制成液体菌种. 然后按2%的接种量将液体菌种加入到50 ml(250 ml三角瓶)产酶培养基中，在26o C及200 r/min下进行产酶实验，定时取样测定发酵液中脂肪酶的活力.收稿日期：2003−02−24，修回日期：2003−05−07作者简介：洪骏(1978−)，女，浙江省杭州市人，硕士研究生，从事生物工程研究；夏黎明，通讯联系人.２．５ 碱性脂肪酶活力测定［７］ 橄榄油与4%聚乙烯醇溶液以1:5混合，高速匀浆，成为乳白色均匀稳定的乳化液. 以橄榄油乳化液为底物，在pH 9.5及40o C 下反应30 min ，用滴定法测定产生的脂肪酸，以分解底物(橄榄油)释放出1 µmol/min 游离脂肪酸所需酶量定义为1个碱性脂肪酶活力国际单位(IU), 以IU/ml 表示.３ 结果与讨论 ３．１ 菌种筛选 菌种筛选结果发现(表1)，7个实验菌株中有5个在菌落周围出现橙黄色荧光圈，但只有ZJU −02产生的荧光圈大而清晰，直径达21 mm. 由于脂肪酶可降解平板上的油脂产生脂肪酸，而脂肪酸能与Rhodamine B 的阳离子发生作用，形成橙黄色的荧光物质，故产生脂肪酶的菌株周围会出现荧光圈，且这种荧光圈越大，脂肪酶活力越高[8,9]. 实验结果表明，ZJU −02分泌脂肪酶的能力较强，有进一步研究开发的价值. 因此，对ZJU −02进行了产酶条件的优化和酶学性质的研究.表１ Ｒｏｄａｍｉｎｅ Ｂ平板筛选结果 表２ 碳源对脂肪酶产生的影响 Table 1 Results of Rhodamine B plate screen method Table 2 Effects of carbon sources on lipase production３．２ 产酶条件的优化 3.2.1 碳源对脂肪酶产生的影响选用葡萄糖、植物油、动物油、淀粉、蔗糖等单一或复合碳源进行产酶实验. 从表2可以看出，油脂作为碳源有利于产酶，酶活力高达54 IU/ml. 油脂除作为碳源外，显然还对脂肪酶的形成具有诱导作用，但油的种类对产酶影响不大. 3.2.2 氮源对脂肪酶产生的影响以1%的植物油为碳源，分别选用玉米浆、豆饼粉、蛋白胨、酵母汁等单一或复合氮源进行产酶实验，实验结果如表3所示. 可以看出，3%的玉米浆或3%蛋白胨加1%酵母汁的复合氮源产酶效果相当，酶活力高达55 IU/ml. 利用廉价的玉米浆作为氮源，在大规模工业生产中具有重要意义.表３ 氮源对脂肪酶产生的影响 Table 3 Effects of nitrogen sources on lipase productionNitrogen sourceLipase activity (IU/ml)2%35 3%55 Cornsteep liquor 4% 35 1%32 2%32 3% 30 Soybean powder 4%25 Connsteep liquor 3%＋soybean powder 1% 53 Cornsteep liquor 3%＋soybean powder 2% 30 Tryptone 2%＋yeast extract 1% 40 Tryptone 3%＋yeast extract 1%55Carbon sourceLipase activity (IU/ml)1% Glucose30 1% Vegetable oil 55 1% Animal oil53 0.7% Vegetable oil +0.3% animal oil 50 0.3% Vegetable oil +0.7% animal oil 40 1% Glucose +Vegetable oil 25 1% Glucose +1% animal oil 29 1% Starch 19 1% Fructose17Fluorescent holes dia. (mm)Strain48 h 72 hPseudomonas sp ZJU-02 15 21 Pseudomonas aeruginosa 3 7 Alcaligenes sp . 15 16 Pichia stipitis 4 5 Pichia fabianii − − Bacillus sp.− − Candida shehatae10103.2.3 培养温度对产酶的影响图1显示了不同温度下进行的产酶实验结果，可以看出，26o C 是ZJU −02的适宜产酶温度. 3.2.4 初始pH 对产酶的影响在26o C 及不同培养液初始pH 值条件下进行产酶实验，定期取样测定发酵液中的脂肪酶活力.图2为不同条件下获得的最高酶活力比较，其中初始pH 值为6.5时，酶活力最高. 3.2.5 培养时间对产酶的影响图3是ZJU −02在26o C ，pH 6.5, 200 r/min 条件下摇瓶中的典型产酶进程. 图中显示, 发酵72 h 时酶活力最大，达86 IU/ml. 这一结果已达到同类文献[3]报道的先进水平，显示了良好的开发前景.3.2.6 表面活性剂对产酶的影响由于表面活性剂能改变细胞膜的通透性并改善氧在气液界面的传递速度，因此在培养基中添加某些表面活性剂能提高酶的产量. 本实验考察了4种表面活性剂及其不同浓度对产酶的影响. 以不加表面活性剂的发酵液酶活力为100%，相对酶活力为加表面活性剂与不加表面活性剂的酶活比.实验中观察到菌体生长情况无明显变化. 从表4可以看出Tween 80对产酶有一定的促进作用，使酶产量提高了27%.表４ 表面活性剂对产酶的影响 Table 4 Effect of surfactants on lipase productionSurfactantsTween 80 Triton-10SDS Polyenthyl gll stearyl ether Concentration (%) 0 0.05 0.1 0.15 0.05 0.1 0.15 0.01 0.03 0.05 0.01 0.03 0.05 Relative lipase activity (%)100120127120211827734843738063３．３ 酶学性质 3.3.1 酶反应最适pH以橄榄油为底物，测定不同pH 值条件下的脂肪酶活力，以测得的最高酶活力为100%，结果(图4)表明，酶作用的最适pH 为9.5，pH 8.5∼10.5范围内酶活力保持80%以上，可见该脂肪酶是碱性的.3.3.2 酶反应最适温度在pH 9.5的环境中，将酶液置于不同温度下反应30 min ，结果表明(图5)，该酶最适反应温度为40o C ，30~60o C 范围内酶活力保持在80%以上.图1 温度对产酶的影响 图2 初始PH 对产酶的影响 图3 产酶的时间进程Fig.1 Effects of culture temperature Fig.2 Effect of initial pH of media Fig.3 Time course of lipaseon lipase production on lipase production production2426283032102030405060L i p a s e a c t i v i t y (I U /m l )Temperature (oC)56789102030405060L i p a s e a c t i v i t y (I U /m l )pH2030405060708090100100L i p a s e a c t i v i t y (I U /m l )Time (h)3.3.3 酶的pH 稳定性将酶溶液分别置于不同的pH 环境中，40o C 保温60 min ，然后按常规测定剩余酶活力. 以pH 9.5及40o C 条件下的酶活力为100%，图6的结果表明，在pH 7.0~10.5范围内，酶活力可保持在起始值的70%以上. 可见，该酶在加酶洗衣粉及洗涤剂工业中有良好的应用价值.3.3.4 酶的热稳定性将酶液在pH 9.5条件下，分别于不同温度下保温60 min 后，按常规测定剩余酶活力，以40o C 下酶液的酶活力为100%. 从图7可见，该酶在70o C 以下较稳定，高于70o C 时，酶活力迅速下降.４ 结 论 (1) 采用Rodamine B 平板筛选法得到一株产碱性脂肪酶的优良菌株ZJU −02.(2) ZJU −02在摇瓶条件下能利用廉价的玉米浆作为氮源；油脂可作为脂肪酶形成的碳源和诱导物；Tween 80 对产酶有一定的促进作用.(3) 摇瓶的适宜产酶条件为26o C ，初始pH 6.5.(4) ZJU −02所产的脂肪酶最佳反应条件为40o C, pH 9.5；该酶在70o C 以下、pH 7.0∼10.5范围内稳定，因此在加酶洗衣粉、洗涤剂和制革工业中有良好的应用前景.图4 pH 对酶活力的影响 图5 温度对酶活力的影响Fig.4 Effect of pH on lipase activity Fig.5 Effect of temperature on lipase activity图6 碱性脂肪酶的pH 稳定性 图7 碱性脂肪酶的热稳定性 Fig.6 Effect of pH on lipase stability Fig.7 Thermal stability of the lipase34567891011121320406080100R e l a t i v e l i p a s e a c t i v i t y (%)pH2030405060708030405060708090100110R e l a t i v e l i p a s e a c t i v i t y (%)Temperature (oC)567891011122030405060708090100R e l a t i v e l i p a s e a c t i v i t y (%)pH2030405060708020406080100R e l a t i v e l i p a s e a c t i v i t y (%)Temperature (oC)参考文献：[1] 彭立凤，赵汝淇，谭天伟. 微生物脂肪酶的应用[J]. 食品与发酵工业, 2000, 26(3): 68−79.[2] Barton M, Hamam J J P, Fichter K C, et al. Enzymic Resolution of (R,S)-2-(4-hydroxyphenoxy) Propionic Acid [J]. Enzymeand Microbiol. Technol., 1990, 12: 577−583.[3] 宋庆训，林金萍，戎一平，等. 脂肪酶产生菌Candida rugosa产酶条件研究[J]. 生物工程学报, 2001, 17(1): 101−104.[4] Pooja Rathi, Saxena R K, Rani Gupta. A Novel Alkaline Lipase from Burkholdderia Cepacia for Detergent Formulation [J].Process Biochem., 2001, 37: 187−192[5] Gerardo Corzo, Sergio Revah. Production and Characteristics of the Lipase from Yarrowia Lipolytica 681 [J]. BioresourceTechnol., 1999, 70: 173−180.[6] Ching T H. pH Dependence and Thermostability of Lipase with Culture from the ARS Culture Collection [J]. J. Ind. Microbiol.,1994, 13: 242−248.[7] 李建武，余端元，袁明秀. 生物化学实验原理和方法 [M]. 北京：北京大学出版社. 311.[8] Hou C T, Johson T. Screening of Lipase Activities with Cultures from ARS Culture Collection [J]. Am. Oil Chem. Soc., 1992,69: 1088−1097.[9] Kouker G, Jaeger K E. Specific and Sensitive Plate Assay for Bacterial Lipases [J]. Appl. Envir. Microbiol., 1987, 53: 211−213.Screening and Culture of Alkaline Lipase-produced Strain Pseudomonas sp. ZJU-02HONG Jun, XIA Li-ming(Dept. Chem. Eng. & Bioeng., Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310027, China)Abstract:A strain Pseudomonas sp. ZJU-02 was screened from 7 strains. The strain had high lipase producing ability proved by the Rodamine B plate method. The results in shake flask cultivation showed that the suitable lipase producing media were: corn steep 3%, vegetable oil 1%, K2HPO4 0.1%, KCl 0.05%, MgSO4 0.05%, Tween 80 0.05%. Under optimal culture conditions (26o C and pH 6.5), the maximal lipase activity could reach 86 IU/ml. This enzyme was stable under 70o C and pH 7~10.5. The optimal conditions for the enzymatic reaction were 40o C and pH 9.5. This enzyme showed a good potential application in detergent and tan industry.Key words: alkali lipase production; strain screen; enzymatic characteristics。
酸碱耐受低温碱性脂肪酶产酶条件优化及其酶学性质
DOI:10.16498/ki.hnnykx.2018.011.001脂肪酶（lipase，EC 3.1.1.3）又称三酰基甘油酰基水解酶（triacylglycerol acylhydrolases），属于α/β折叠酶家族，是一类能够催化天然油脂分解成脂肪酸、甘油和甘油单酯或甘油二酯，并能在有机相中催化转酯、酯化、醇解等多种反应的酯键水解酶。
从其定义可知，有机溶剂耐受性是脂肪酶广泛应用的必备特性[1-2]。
一般来说，脂肪酶在有机相中进行催化反应具有诸多优点：酶的活性更高、稳定性更好、选择性更强，底物的溶解性更好，产物的回收更容易，底物/产物对酶的抑制程度更低，反应平衡更倾向于合成方向等[3]。
因此，脂肪酶在基于有机相催化的应用领域（如食品、精细化工、医药、生物能源等）具有较大潜力[4-5]。
低温碱性脂肪酶在温度10~35℃、pH值8.0~10.5的范围内具有较高的催化活力，较好的有机溶剂耐受性，较差的热稳定性，因此在低温碱性环境的工业领域（如洗涤剂、食品加工、毛纺加工、生物制药、低温环境修复等）应用广泛。
目前，低温碱性脂肪酶最大的应用领域是洗涤剂行业，其主要功能是清除衣物、碗碟、医疗器械上的油污以及疏通因油脂凝固而堵塞的下水管道[6]。
自从第一个有机溶剂耐受脂肪酶被鉴定以来，越来越多的有机溶剂耐受脂肪酶被人们发现，它们主要来源于假单胞菌属（Pseudomonas）和芽孢杆菌属（Bacillus）[7]。
然而，关于沙雷氏菌属（Serratia）脂肪酶具有有机溶剂耐受性的研究报道较少，到目前为止只有少数几个沙雷氏菌属脂肪酶表现出有机溶剂耐受性[8-13]。
笔者以实验室分离并保藏的沙雷氏菌 酸碱耐受低温碱性脂肪酶产酶条件优化及其酶学性质 陈 芳，石红璆，查代明，余甜甜，张炳火，李汉全 （九江学院药学与生命科学学院，江西九江 332000）摘 要：以沙雷氏菌JXJ-7为供试菌株，采用单因素试验确定了其最适发酵培养基配方、最佳胞外产酶条件，并对其粗酶酶学性质进行了研究。
地生弯颈霉C41-3产低温脂肪酶发酵条件优化
地生弯颈霉C41-3产低温脂肪酶发酵条件优化作者：孙蕊苏丹张文浩吕国忠来源：《安徽农业科学》2024年第02期摘要 [目的]优化地生弯颈霉C41-3产低温脂肪酶发酵条件，为扩大低温脂肪酶的应用提供理论依据。
[方法]使用棕榈酸对硝基苯酯（p-NPP）比色法测定脂肪酶的活性。
[结果]最佳发酵培养基为胰蛋白胨40 g/L、α-乳糖20 g/L、MnSO4·H2O 1 g/L、NH4NO3 1 g/L、乳化芥花油20 mL；最佳发酵条件为pH 5、发酵温度15 ℃、培养时间4 d。
优化后，地生弯颈霉C41-3的脂肪酶活性从199.40 U/mL增加至5 700.72 U/mL，脂肪酶活性增加了约27.6倍。
[结论]该新型脂肪酶具有潜在的工业应用价值。
关键词低温脂肪酶；地生弯颈霉C41-3；发酵条件优化中图分类号 Q949.32 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2024）02-0001-04doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.02.001开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Optimization of Fermentation Condition of Cold-activer Lipase Producing by Tolypocladium geodes C41-3SUN Rui，SU Dan，ZHANG Wen-hao et al（College of Life Science and Engineering，Shenyang University，Shenyang，Liaoning 110044）Abstract [Objective]To optimize the fermentation conditions for low-activer lipase production by Tolypocladium geodes C41-3 and provide theoretical basis for expanding the application of low-activer lipase.[Method]The lipase activity was measured by the p-nitrophenyl palmitate （p-NPP）colorimetric method.[Result]Best fermentation medium was tryptone 40 g/L，α-lactose 20 g/L，MnSO4·H2O 1 g/L，NH4NO3 1 g/L，emulsion canola oil 20 mL.Best fermentation condition was pH 5，fermentation temperature of 15 ℃，culture time of 4 days.After optimization，the lipase activity of T.geodes C41-3 could be increased from 199.40 U/mL to 5 700.72 U/mL，and the lipase activity increased by about 28.5 times， [Conclusion]The novel lipase has potential industrial applications value.Key words Cold-active lipase;Tolypocladium geodes C41-3;Optimization of fermentation conditions基金项目国家自然科学基金面上项目（31770025）;辽宁省教育厅青年育苗项目（2020JYT02）;辽宁省自然科学基金指导计划项目（2019-ZD-0549）；大连民族大学生物技术与资源利用教育部重点实验室开放课题（KF2021002）。
生物柴油脂肪酶产生菌的筛选及培养条件研究
心， 取上清液 ， 硫酸铵沉淀法获得粗脂肪酶。脂肪酶活力测定参考橄榄油乳化法ｌ。一个单位脂肪酶的定 ６ 】
义是 ： 每分钟释放 ｌｒ ｌ ｔｎ 脂肪酸所需脂肪酶的数量。 ￣ｏ ４影响脂肪酶 活 力的 因素研 究。分别选取不 同的 ｐ ） Ｈ值 、 橄榄 油浓度、 氮源条件作 为研究 对象 ， 在 ３℃、８ｒ ｉ ０ １ ・ｎ ０ ｍ 的恒温摇床 中振荡培养 ３ 测脂肪酸量确定优化培养条件 。 ｄ ５ 固定化脂肪酶的催化转酯反应。以硅藻土为载体， ） 吸附法制备固定化酶。转酯反应体系 ：ｍ 正己 ６ｌ 烷 ，．２ ｍ ｌ ００ｍ ｏ三油酸甘油酯 ，． ｒ ｏ 甲醇 ， ． 固定化脂肪酶粗酶 。分三次添加 甲醇 ，７ １ ｒ ｉ密 ００ｅ ｌ ６ｔ ｏ ２０ ｇ ３ ℃、８ ／ ｎ ０ｍ
第 ２卷 ｏ
第１ 期
茂名 学院 学报
Ｊ ＵＲ ＡＬ Ｏ Ｏ Ｎ Ｆ ＭＡＯＭ Ｇ Ｕ ＮⅣ Ｅ Ｓ Ｒ ｎＹ
Ｖ １ ２ Ｎ ． ０ ．０ ｏ１
２ １ 年 ２月 ００
Ｆｂ２ｏ ｅ ．０ ９
生 物 柴 油脂 肪 酶 产 生茵 的筛 选及 培 养 条 件 研 究
韩寒冰， 李松佳 ， 沈伟煌， 彭翠苹， 吴小梅
生物柴油具有无毒、 能生物降解 、 不含芳香烃且含硫量很低 、 可以以任意比例与石油柴油混兑的特点。 开发生物柴油不仅有利于减小大量进 口对我国的能源安全造成 的威胁； 还对实现经济可持续发展 ， 推进能 源替代， 减轻环境压力等具有深远的经济与社会效益。酶法制备生物柴油具有化学催化法不可 比拟 的优 越性 ， 是工业化生产的发展方向…。生物柴油是由动植物油脂与醇经酯交换反应而得的脂肪酸单烷基酯， 最典型的生物柴油是脂肪酸甲酯。脂肪酶（ ｐｓ， ． ． ． ． ） “ ａ ＥＣ ３ １ １ ３ 是指分解或合成高级脂肪酸与丙三醇 ｅ 形成甘油三酸酯酯酶 ， 在催化合成生物柴油的研究 中已获得应用【３， ２ 】但生产中酶的成本过高 、 Ｉ 甲醇和甘 油对酶的毒害作用这两大问题还未能得到根本性的解决 ， 使得生物酶法一直不能在工业生产上得到推广 应用。因此 ， 通过筛选或是利用基因工程技术对现有的脂肪酶产生菌进行改造 ， 以获取催化活性更高、 对
产脂肪酶菌株的分离、鉴定及其产酶条件优化
分析 ， 确定该菌株为黑 曲霉 （ ｓ ｒｉｕ ｒ． Ａｐ ｇｌｓ ｅ ｌ ｎ ）对该菌株的产酶条件进行优化 ， 发现该菌株在 以体积分数为 Ｉ 的橄 ％ 榄油为诱导物 ， ｇ Ｌ蔗糖为碳源 ， ／ ５／ ４ ｇ Ｌ蛋 白胨 为有 机氮源 ， ｇＬ（ Ｈ ） ｓ 为无机氮 源 ，Ｈ为 ６ ５的培养基 ０ １ ／ Ｎ ０ ｐ ． 中， ２ ｃ，８ ｒｎ摇床培养 ４ ， 于 ８ ｏ １０ｒａ ／ｉ ８ｈ 可达最 大酶产量（ ７６± ． ）ｍ ｏ ・ ａ ～ ・ 一． ３ ． Ｏ ８ ｍ ｌ ｒｎ ｉ Ｌ 关键词 脂肪酶 ； 黑曲霉 ； 筛选 ； 产酶条件
Ｇ Ｃ Ｇ一 ，８ ５一 Ｆ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ｇ Ｆ Ａ － ） Ｃ Ａ ３ １ Ｒ： Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ｆ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｃ ３ 进行 Ｐ Ｒ扩增 ． Ｃ
１５３ Ｐ Ｒ扩增产物的纯化与测序 扩增的 Ｐ Ｒ产物用 Ｏ ｅａ ．． Ｃ Ｃ ｍ ｇ 生产的凝胶 回收试剂盒纯化 ， 操作均按说 明书进行 ．纯化 产物 交 由上海桑 尼 生物工程 有 限公 司 测序 ． １ ５ ４ 序 列分析及 系统发 育分 析 将得 到 的 １ Ｓｒ Ｎ ．． ８ Ｄ Ａ测 序 结果 提交 到 Ｎ Ｂ 数据 库并 进 行 Ｂ Ａ Ｔ比对 ， ＣＩ ＬＳ 找 到并下 载典 型 的菌株 序列 与实验 菌株 的序列 用 Ｃｕｔ ． ｌｓ ｌ ２ ０软件 进行 同源性 分 析 ， 用 ＭＥ Ａ３ １软件 ａＸ 并 Ｇ ． 构建 系统 发育 树 ． １６ 产酶 条 件优化 ． １６ １ 温 度对 产酶 的影 响 不 同的温度条 件下 ， 曲霉 的生 长状 况有差 别 ， ．． 黑 产脂 肪酶 的能 力也 有差 异 ． 了 为 使其 在较 好 的生长 条件 下能 达到最 佳 的产酶条 件 ， 将筛选 得 到 的菌株 以发酵 产酶 培养基 为基 础 ， 于不 同 特 置 的温 度下 （ ６２ ，０３ ，４℃ ） 养 ， ２ ，８３ ，２ ３ 培 以检测 其最佳 产酶 温度 ． １６ ２ 初 始 ｐ ．． Ｈ对 产酶 的影 响 由于 ｐ Ｈ值对 黑 曲霉本 身 生长 和产 脂肪 酶 能 力 的影 响较 大 ， 使 Ｈ －３菌 为 Ｂ０ 株达 到最佳 的产 酶条 件 ， 特设定 不 同的 ｐ Ｈ梯 度 （ ． 、． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、 ． 、０ ０ 以得 到该 菌株 ６０６ ５ ７０ ７ ５ ８０ ８ ５ ９０ ９ ５ １． ） 产酶 的最佳 ｐ Ｈ值 ． ’ １６ ３ 不 同诱导物对产酶的影响 研究表明不同的诱导物对菌株产脂肪酶 的能力有很大的影响 ， ．． 因此 ， 设 定不同的诱导物验其对菌株产酶能力 的影响． １６４ 不 同碳源对产酶的影响 ．． 黑曲霉可以利用不同的碳源生长产酶 ， 但是碳源不同， 会有不 同的产酶能
产脂肪酶菌株C7828-5的筛选、鉴定以及产酶条件的优化
产脂肪酶菌株C7828-5的筛选、鉴定以及产酶条件的优化麻琼丽;张家明
【期刊名称】《工业微生物》
【年(卷),期】2010(0)6
【摘要】以花生油为唯一碳源,从海口市各地被油脂污染土样中分离筛选出1株中温碱性脂肪酶菌株C7828-5.形态学、生理生化特征和分子生物学鉴定结果表明,该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌所产脂肪酶的最适温度为37 ℃,最适pH为8.0.优化了菌株的产酶条件,最适产酶培养基(g/L)为:蔗糖5、牛肉膏20、(NH4)2SO4 1、MgSO4·7H2O 0.5、CaCl2 0.5,聚乙烯醇花生油乳化液120 mL,发酵72 h,获得高达8.08 U/mL的脂肪酶表达量.
【总页数】6页(P39-44)
【作者】麻琼丽;张家明
【作者单位】中国热带农业科学院,热带生物技术研究所,海南,海口,571101;海南大学,农学院,海南,海口,571101;中国热带农业科学院,热带生物技术研究所,海南,海口,571101;海南大学,农学院,海南,海口,571101
【正文语种】中文
【中图分类】Q93
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生物催化法水解制备N-BOC-L-α-氨基丁酸
生物催化法水解制备N-BOC-L-α-氨基丁酸王宇光;叶秋娟;吴冬梅;魏春【摘要】利用实验室筛选得到的高立体选择性脂肪酶产生菌株溜曲霉(A spergillus tamarii WYC3)不对称水解拆分N-BOC-DL-α-氨基丁酸甲酯得到N-BOC-L-α-氨基丁酸,对其反应条件进行研究,确定其最优反应条件为:0.1 mol/L pH 7.2的磷酸钾缓冲液,反应温度30℃,底物浓度52.24 mmol/L,0.1 g菌粉,V(底物)∶V(丙酮)=1∶8,200 r/min恒温水浴反应6h,可获得产物N-BOC-L-α-氨基丁酸,此时e.e.s值达到99.95％,对映体选择率E值为20.11,产率为36.21％.【期刊名称】《发酵科技通讯》【年(卷),期】2016(045)003【总页数】4页(P129-132)【关键词】N-BOC-DL-α-氨基丁酸甲酯;N-BOC-α-氨基丁酸;Aspergillus tamarii WYC3;水解反应;工艺优化【作者】王宇光;叶秋娟;吴冬梅;魏春【作者单位】浙江工业大学生物工程学院,浙江杭州310014;浙江工业大学生物工程学院,浙江杭州310014;浙江工业大学生物工程学院,浙江杭州310014;浙江工业大学生物工程学院,浙江杭州310014【正文语种】中文【中图分类】TQ033N-BOC-DL-α-氨基丁酸酯是一种重要的生化试剂，用于合成多肽或模拟肽和保护氨基酸单体。
N-BOC-DL-α-氨基丁酸酯可以通过化学水解获得L-α-氨基丁酸。
L-α-氨基丁酸不仅可以参与人体内信息传递，对代谢具有积极的影响，还是重要的医药与化工原料的中间体。
现今L-α-氨基丁酸在化工与医药业中的作用日趋增大，其需求量也在逐渐增多，以每年15%甚至更高的速率增长［1］。
由于L-α-氨基丁酸属于非天然氨基酸，无法自然获得，因此L-α-氨基丁酸的制备已成为研究热点。
目前，文献报道的制备L-α-氨基丁酸的主要方法包括化学法和生物法。