脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的优化_王冬梅

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· ３５ ℃ 、接种量３％，Ｘ２的脂肪酶酶活达４２ＵｍＬ．关键词：脂肪酶生产菌；筛选；产酶条件；优化）中图分类号：Ｑ９３６文献标识码：Ａ文章编号：１００１－９８８ Ⅹ（２０１３０３－００８７－０５
，是一类特殊的酯ＬｉａｅｓＥＣ３．１．１．３）脂肪酶（ｐ键水解酶，不仅能催化油脂水解产生甘油和脂肪酸，还能催化有机相中的酯合成和酯交换反应，生产许多重要原料，在油脂加工、有机合成、乳品工业、造纸、新型生物能源等诸多领域有着广泛的应
１１１２２，Ｌ，ＧＡＯ，ＹＡＮＷＡＮＧＤｏｎｅｉＵＯＸｉａｏｆａｎＮＧＹａｎＪｉａｎＨｏｎｅｉ－ｍ－－－ｍｇｇ，ＣＨＥｇ
（，Ｎ，Ｌ，Ｃ；１．ＥｘｅｒｉｍｅｎｔａｌＣｅｎｔｅｒｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓａｎｚｈｏｕ７３００３０，Ｇａｎｓｕｈｉｎａｐｙ，Ｎ，Ｌ，Ｃ）２．ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｉｎｅｅｒｉｎＣｏｌｌｅｅｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓａｎｚｈｏｕ７３００３０，Ｇａｎｓｕｈｉｎａｇｇｇｙ
百度文库－１
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｏｆｌｉａｓｅｓｔｒａｉｎａｎｄｏｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｒｏｄｕｃｉｎ－ｐｇｐｐｇｔｈｅｌｉａｓｅｒｏｄｕｃｔｉｏｎｐｐ
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西北师范大学学报（自然科学版））ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｙ（
第４９卷Ｖｏｌ．４９
计约６５个属的微生物能产脂肪酶，但产酶量高的菌株却不多．不断筛选具有高活力的脂肪酶生产菌株可扩展脂肪酶的应用研究，产脂肪酶微生物的筛
收稿日期：２０１２－１０－２４；修改稿收到日期：２０１２－１１－２６
）；西北民族大学校级开放项目（）基金项目：中央高校基本业务费专项资金项目（ＺＹＺ２０１１１０３６４，６６，女，甘肃兰州人，副教授，硕士．主要研究方向为免疫学与环境微生物学．作者简介：王冬梅（１９６９—）：Ｅ－ｍａｉｌｗｄｍ＠ｘｂｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
－１ · ，重复富集１次后，将其接入培养５ｄ１５０ｒｍｉｎ
组ＤＮＡ．采用引物１６ＳｒＤＮＡ－Ｆ（５ＧＴＴ－ＡＧＡ）和１ＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ３６ＳｒＤＮＡ－Ｒ（５－－）扩增筛ＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ３－选菌株的１６ＳｒＤＮＡ片段．ＰＣＲ反应条件为９５ ℃，；６５ｍｉｎ；９４ ℃ ，１ｍｉｎ０ ℃ ，１ｍｉｎ；７２ ℃，；；１ｍｉｎ共３０个循环７２ ℃延伸１０ｍｉｎ．ＰＣＲ产物送大连宝生物工程有限公司测序．将测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ上的相关１６ＳｒＤＮＡ序列进行同源性比，对分析采用ＢｉｏｅｄｉｔＭＥＧＡ３．１软件进行系统发育分析．１．６产酶条件参数的优化１．６．１单因素试验以产酶培养基为基础，改变培养基中碳源种类（葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、液体石蜡、玉米粉）以确定最适碳源．再以最适碳源为碳源，改变氮源种类（蛋白胨、酵母粉、（ＮＨ４）ＳＯ２４、氯化铵、硝酸铵、尿素、乙酸铵）
· ：酵母膏２ｇ，大豆油５ｇ，富集培养基（Ｌ－１）ｇ，Ｍ，（ＫＯＳＯ７Ｈ２Ｏ０．１ｇＮＨ４）ＳＯｇ２ＨＰ４１ｇ４· ２４，，１ｇＮａＣ１０．５ｇ７．０．Ｈｐ ·Ｌ－１）：（，驯化培养基（ＮＨ４）ＳＯ．０ｇｇ２４２，，，ＫＯ．０ｇＫＨ２ＰＯ．０ｇＮａＯ．０ｇ２ＨＰ４１４１２ＨＰ４１， · ，Ｈ７．０．大豆油ＮａＣｌ０．５ｇＭＳＯ７Ｈ２Ｏ０．５ｇｐｇ４ · · 由５．０ｇＬ－１依次增加至２０．０ｇＬ－１． · ：酵母粉０，选择性平板培养基（Ｌ－１）．５ｇｇ（，，，ＮＨ４）ＳＯ．５ｇＫＯ．３ｇＮａＣｌ０．５ｇ２４０２ＨＰ４０ · ，琼脂２，ｐＭＳＯ７Ｈ２Ｏ０．２ｇ０．０ｇＨ７．０．将上ｇ４述溶液灭菌冷却至６０ ℃ 左右加入均质后的２％的，三丁酸甘油酯溶液（Ｖ三丁酸甘油酯∶ Ｖ２％聚乙烯醇＝１ ∶ ３）用紫外灯照射灭菌３０ｍｉｎ以上备用． · ：蛋白胨１，酵母膏种子培养基（Ｌ－１）０．０ｇｇ，Ｎ５ｇａＣｌ５．０ｇ．－１：大豆油５，产酶培养基（．０ｇｇ· Ｌ）（， · ，ＮＨ４）ＳＯ．０ｇＭＳＯ７Ｈ２Ｏ３．０ｇＫＯｇ２４２４２ＨＰ４，胆汁１１．０ｇ．０ｇ．其余试剂均为国产分析纯．１．３脂肪酶生产菌的筛选取试样１ｍＬ加入９９ｍＬ富集培养基中，３０ ℃、
－１ ·ｍ，ｆ１０．０ｇ·Ｌ－１，ｐｅｔｏｎｅ５．０ｇ·Ｌ－１，ｔｈｅｉｎｉｔｉａｌＨ７．０，ｔｈｅａｉｔａｔｉｏｎ１５０ｒｉｎｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｐｇ－１，， · ｔｅｍｅｒａｔｕｒｅ３５ ℃ ａｎｄｓｅｅｄｖｏｌｕｍｅ３％．Ｉｎｔｈｉｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｔｈｅｌｉａｓｅａｃｔｉｖｉｔｒｅａｃｈ４２ＵｍＬ．ｐｐｙ：；；；Ｋｅｗｏｒｄｓｌｉａｓｅｒｏｄｕｃｉｎｓｔｒａｉｎｓｃｒｅｅｎｉｎｌｉａｓｅｒｏｄｕｃｉｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｐ－ｐｇｇｐ－ｐｇｐｙ
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脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的优化
王冬梅１，雒晓芳１，程燕１，高健２，闫红梅２
（１．西北民族大学实验中心，甘肃兰州７３００３０；）２．西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州７３００３０摘要：从学校餐厅下水道废水中筛选获得７株脂肪酶生产菌，其中菌株Ｘ２产酶活性最高，根据其生理生化特性和
］１３－用潜力［．脂肪酶在微生物界的分布很广，据估
选和产酶条件的优化已成为研究的热点．本实验对餐厅废水进行富集驯化培养，以期筛选得到高效脂肪酶生产菌株，并优化其产酶条件，为后续的研究奠定了基础．
１材料和方法
１．１试样样品采自西北民族大学餐厅下水道废水．１．２培养基及试剂
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｉｎｏｓａ）１６ＳｒＤＮＡ序列系统发育分析，将其鉴定为铜绿假单胞菌（．通过正交试验优化菌株Ｘ２的产ｇ－１－１－１ · 、 · 、、 · 、酶条件，最适产酶条件为大豆油１蛋白胨初始摇床转速培养温度Ｈ０．０ｇＬ５．０ｇＬ７．０１５０ｒｍｉｎｐ
自然科学版）９卷２０１３年第３期第４西北师范大学学报（）ｏｌ．４９２０１３Ｎｏ．３ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＶｙ（
：７ｌＡｂｓｔｒａｃｔｉａｓｅｒｏｄｕｃｉｎｓｔｒａｉｎｓａｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｓｅｗａｅｗａｔｅｒｏｆｓｃｈｏｏｌｒｅｓｔａｕｒａｎｔ．Ｔｈｅｈｉｈ－ｐｐｇｇｇ，ｌｉａｓｅｓｔｒａｉｎＸ２ｉｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｉｎｏｓａａｃｃｏｒｄｉｎｔｏｉｔｓｍｏｒｈｏｌｏｉｃａｌｆｅａｔｕｒｅｓｒｏｄｕｃｉｎ－ｐｐｇｐｇｇｇａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄ１６ＳｒＤＮＡｓｅｕｅｎｃｅｓ．Ｔｈｅｏｔｉｍａｌｌｉａｓｅｈｓｉｏｌｏｉｃａｌｒｏｄｕｃｉｎ－ｐｑｐｐｐｙｇｇ：ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｓｔｒａｉｎＸ２ａｒｅｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｄｂｏｒｔｈｏｏｎａｌｅｘｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓｂｅａｎｏｉｌｇｙｇｐ