酵母细胞的固定化
葡萄糖
将固定好的酶颗粒装到一个反
应柱特内，点柱：子反底应端柱装连上分续布着 许多小使孔用的半筛年板，。酶大颗大粒无法 通过筛降板低上生的产小成孔，本而。反应溶
液却可以自由出入。
反应柱 固定化酶
分布着小 孔的筛板
果糖
（4）优点： ①酶既能与反应物接触，又能与产物分离， ②固定在载体上的酶还可以被反复利用。
2.配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液：
0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水→200mL烧杯→充分溶解备用。
防止自来水中各种离子影响实验结果
CaCl2溶液的作用：使胶体聚沉，形成结构稳定的凝胶珠。
注意：
① CaCl2溶液浓度过大，凝胶珠硬度大，易开裂； ② 浓度过小，不易形成凝胶珠。
让凝胶珠形成稳定的结构 〖操作提示〗 1.速度一定要恒定且缓慢，以便形
成均匀的圆形或椭圆形的凝胶珠。 2.距离液面15—30cm。 过近：凝胶珠会带尾巴； 过高：CaCl2溶液溅出。
课题：探究海藻酸钠溶液浓度高低对凝胶珠质量的影响
海藻酸钠的量
1.0克
0.7克
0.4克
凝胶珠形状 凝胶珠颜色
大部分呈圆 不呈圆形 形或椭球形 或椭球形 浅黄色 浅黄色
固定对象
酶
适宜固定法
化学结合法 物理吸附法
特点
酶分子很小， 容易从包埋材料 中漏出。
细胞 包埋法
细胞体积大， 难以被吸附或结合。
固定化细胞技术
（主要用包埋法)
一系列酶
葡萄糖 酵母菌 酒精+二氧化碳 （1）含义：将细胞固定在一定空间内的技术。
（2）优点： 成本更低、操作更容易、对酶活性的影响 （3）缺点： 更小、可以催化一系列的反应、容易回收。
固定化细胞技术 4.如果反应物是大分子物质，又应该选择哪种方法？
固定化酶技术 大分子物质难以自由通过细胞膜，因此固定 化细胞技术一般作用于小分子物质。
下图表示科研人员利用固定化葡萄糖异构酶来生产高果糖
C 浆的过程,相关叙述正确的是(
)
A. 固定葡萄糖异构酶时,采用方法2比 方法3对酶的活性影响要小 B. 在生产过程中,需严格控制好pH、 温度、溶解氧等环境因素 C. 在生产过程中,通过控制阀调节果 糖流出的速率以保证反应充分进行 D. 由于固定化葡萄糖异构酶活性不会 降低,此反应柱可持续用于生产
知识回顾：
洗衣粉中添加________，可以更有效地清除顽渍。
常用的酶制剂有_________________四类。
1.酶制剂的优点：
如何解决
催化效率高、低能耗、低污染等。大规这模些地问应用题于？食品、
化工等各个领域
2.酶制剂的缺点
（1）对强__酸___、__强__碱__、___高__温_ 和 有机溶剂 等条件非常敏感， 易失活。 （2）酶很难回收，不能被_再__次__利__用__,提高了生产成本。 （3）反应后酶会混在产物中，可能影响产品的质量
优点：催化效率高，低耗能、低污染，大规模地应用于
酶
食品、化工、轻纺、医药等领域。
实际问题：1、对环境条件敏感，容易失活； 2、难回收，不能再次利用，提高了成本； 3、反应后混合在产物中，影响产品质量。
设想： 将酶固定在不溶于水的载体上。
固定 化酶
优点：酶既能与反应物接触，又容易与产物分离， 同时，固定在载体上的酶可以再用。
【思考】除了固定酵母细胞，还能固定其他 细胞吗？
固 定 化 小 球 藻
固定化植物细胞
及时巩固：
1、生产高果糖浆需要_葡__萄__ 糖___异___构__酶，该酶的固定不适合用
__包___埋____法，
原因：____酶___分__子___太__小___，___容__易___从__包___埋___材__料___中__漏___出_____________ 而固定酵母菌，则不宜采用物___理__吸___附___和__化__学结合 法， 原因： _细___胞__的___体___积__大___，__难___以___被__吸___附__或___结___合______________
优点
催化效率高，耗 能低、低污染
①既能与反应物接触， 又能与产物分离②可以 反复利用
成本低，操作容易
1.从操作角度来考虑，你认为固定化酶技术与固定 化细胞技术哪一种方法更容易？哪一种方法对酶活 性的影响更小？
固定化细胞 固定化细胞
2.固定化细胞固定的是一种酶还是一系列酶？ 是一系列酶
3.如果想将微生物的发酵过程变成连续的酶反应， 应该选择哪种方法？
直接使用酶
固定化酶
固定化细胞
酶的种类 一种或几种
一种
一系列酶
制作方法
物理吸附法、化学结合 物理吸附法、包埋法、
法、包埋法
化学结合法、
是否①对环境条件非常 敏感，易失活②难 回收，成本高，影 响产品质量
不利于催化一系列的 酶促反应
反应物不宜与酶接近， 尤其是大分子物质，反 应效率下降
固定化酶的应用实例 阅读P49-50，并思考： 1、什么是高果糖浆？使用它有何好处？ 2、生产高果糖浆需要什么酶？其作用是 什么？这种酶有何特点？ 3、了解高果糖浆生产过程。
一、固定化酶的应用实例 （1）含义：
将酶固定在一定空间内的技术，如固定在不溶于 水的载体上。 （2）实例：利用固定化酶技术生产“高果糖浆”。
2.将150ml质量分数为10％的葡萄糖溶液转移200ml
的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于25°C下 发酵24h。 既作为发酵底物，也作为营养物质。
【思考】当观察到哪些现象时，可说明实验获 得成功？
发酵瓶中产生了很多气泡，并可闻到酒味。 说明包埋的酵母菌已将葡萄糖发酵，产生 酒精和二氧化碳。
2. 方法： ①化学结合法 ②物理吸附法 ③包埋法
① 化学结合法
将酶（或细胞）相互结合，或将其结 合到载体上。
②物理吸附法 将酶（或细胞）吸附在载体表面上
③包埋法
将酶（或细胞）包埋在细微 网格里
常用包埋载体有：
明胶、琼脂糖、海
藻酸钠、醋酸纤维
素和聚丙烯酰胺等。
明胶
聚丙烯酰胺
【比较】酶和细胞的固定方法和特点
3. 配制海藻酸钠溶液 （实验成败关键）
0.7g海藻酸钠＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯小火间断 加热，并不断搅拌，使之溶化（调制糊状）→蒸馏水定 容到10mL。防止海藻酸钠发生焦糊并溢出烧杯
溶液浓度过高，将很难形成 圆形或椭圆形凝胶珠；
浓度过低，凝胶珠包埋的酵母 细胞数量较少，凝胶珠颜色过 浅，呈白色。
（5）缺点： 一种酶只能催化一种化学反应，而在实际生产中， 很多产物的形成是通过一系列的酶促反应才能得到。
（6）解决方案：固定化细胞技术
阅读P50，并思考： 1.固定化技术的方法有哪些？ 2.酶和细胞固定化的选择方法及原因？ 3.固定化细胞常用的载体？
二、固定化技术
1. 固定化酶或固定化细胞： 指利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间 内的技术。
2、制备固定化酵母细胞的过程中错误的是
（ ）B
A、取干酵母，加入蒸馏水，使其活化 B、配制海藻酸钠时，加热用大火，直到海藻酸 钠溶化为 止 C、将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入 已活化的酵母细胞 D、将凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30min左右
3、下列叙述不正确的是（ C ）
A、从操作角度来考虑，固定化细胞比固定化酶 容易 B、固定化细胞比固定化酶对酶的活性影响更小 C、固定化细胞固定的是一种酶 D、将微生物的发酵过程变成连续的酶反应应选 择固定化细胞技术
三、实验操作
—— 酵母细胞的固定化 （一）制备固定化酵母细胞
（二）用固定化酵母细胞发酵
（一）制备固定化酵母细胞
（一）制备固定化酵在生母缺物细水重胞状新恢态复下正，常让的处生于活休状眠态状态的微 1.酵母细胞的活化
加蒸馏水搅拌
〖操作提示〗 干酵母
活化酵母
酵母细胞活化时体积会变大，因此活化前应该选择体 积足够大的容器，以避免酵母细胞的活化液溢出容器外。
圆形或 椭球形
色浅， 呈白色
滴加高度对凝胶珠质量有影响吗？ 滴加速度呢？
此结果的可能原因
1.海藻酸钠浓度过高 2.注射器滴加速度过快 3.注射器距离CaCl2溶 液液面太近
评价凝胶珠的质量是否合格 一、观察凝聚珠的颜色和形状 ①颜色过浅，说明海藻酸钠浓度偏低，固定的细胞少 ②不是圆形或椭圆形，说明海藻酸钠浓度偏高，失败
① 固定后的细胞与反应物不容易接近，可能导致反应 效果下降，
② 由于大分子物质难以自由通过细胞膜，因此固定化 细胞的应用也受到限制。
酶的种类： 一种 固定化酶 所需条件： 适宜的温度，PH值
酶的种类： 多种（一系列） 固定化细胞 所需条件：适宜的温度，PH值，营养物质
包埋法固定细胞，即将微生物细胞均匀包埋在不溶于 水的多孔性载体中。
实际问题：一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实 践中，很多产物的形成都是通过一系列的酶 促反应才能得到。
又设想：酶由细胞合成的，能否将合成酶的细胞直接固定。
固定化 优点：成本低；操作更容易
细胞
不足：大分子难通过细胞膜
加热时要用小火，或者间断加热，并搅拌，反复几次， 直到海藻酸钠溶化为止
4.海藻酸钠溶液与酵母细胞混合
将海藻酸钠溶液冷却至室温→加 入已活化酵母细胞→充分搅拌→ 转移至注射器中。
防止高温杀死酵 母菌细胞
5.固定化酵母细胞
以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的 CaCl2 溶液中，液滴在CaCl2 溶液中形成凝胶珠，凝胶 珠在 CaCl2 溶液中浸泡30分钟。
二、挤压法：如果凝胶珠不容易破裂，没 有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。 三、摔打法：如果凝胶珠很容易弹起，也 能表明制备的凝胶珠是成功的。
生物：4.3《酵母细胞的固定化》课件1(新人教版选修1)
［探讨］ ⒈有位同学打算用丝绸做实验材料，探讨含 有蛋白酶的洗衣粉的洗涤效果，你认为他 这样做合适吗？为什么？洗羊毛衫呢？
2、为什么洗涤前先将衣物浸于加有适量洗衣 粉的水内数小时？如何缩短衣物的浸泡时间？ 是为了使洗衣粉中的蛋白酶充分的分解衣物 中的蛋白质污渍；用温水浸泡衣物，因为酶 的催化作用需要适宜的温度。
⑴A同学的实验方案存在问题吗？若有问题， 请说明存在的问题。
有问题。未说明控制相同的适宜温度
⑵你同意B同学观点吗？请说明理由
不同意。B同学忽略了实验中变量的控制问题。
⑶影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素有哪些？
水温、水量、水质、洗衣粉的用量、衣物的质 料、大小及浸泡时间和洗涤时间等。
⑷你认为应该控制的单一变量是： 普通洗衣粉和加酶洗衣粉 的区别，其他条件（ 如洗衣粉用量、水温、水质、水量、布料的 大小和颜色、洗涤方式、洗涤时间等）完全 相同。 ⒉阅读“[资料二]考虑实际生活中的具体 情况”，探究温度对加酶洗衣粉效果的影 响：
水温的控制
10℃、20℃、30℃、40℃、 50℃ 、60℃、70℃
⒊探究不同种类的加酶洗衣粉洗涤效果的比较
加酶洗衣粉的种类是变量，其他因素 在实验中，
在实验中保持不变；水温应保持不变。在实
施活动时，通常应采用当地的常温，如果是
冬季水温过低，就应采用 水浴加热的方法，
使温度达到25 ℃～35 ℃。
3、为什么不能在60℃以上的水中使用此洗衣粉？ 使用加酶洗衣粉时，必须注意洗涤用水的温度， 温度过高会使酶变性失活。在低温下也会失效；
4.为什么用后须彻底清洗双手？ 人体皮肤细胞有蛋白质，如不彻底清洗双 手，就会使手的皮肤受到腐蚀。而使人患 过敏性皮炎、湿疹等，因此，应避免与这 类洗衣粉长时间地接触。 此外：加酶洗衣粉也不宜长期存放，存放时间 过长会导致酶活力损失
微生物实验报告周围环境中微生物的观察及固定化酵母细胞发酵啤酒实验与酸奶的制作
微生物实验报告●实验名称周围环境中微生物的观察及固定化酵母细胞发酵啤酒实验与酸奶的制作●实验原理固定化技术是将生物酶或细胞固定在一定的基质上，从而提供酶或细胞的利用效率；固定化研究开始于50年代，现在已经广泛应用在近代工业微生物技术上；固定化技术生产啤酒，固定化细胞能重复使用；发酵后菌体与发酵液易于分离；后处理工艺简单、,成本低、可连续发酵、过程自动化。
传统发酵法酵母细胞发酵一次即弃去菌体。
包埋法是固定化技术的一种：将微生物细胞均匀的包埋在水不溶性载体的紧密结构中，细胞不易漏出；制定固定化细胞时，细胞和载体不起任何反应，细胞处于最佳生理状态；固定化细胞有载体为屏障：可避免外界不利因素的影响。
●实验材料和试剂Ⅰ土样10g培养基:牛肉膏蛋白胨培养基10个取液器:1000ul 200ul各一支培养箱0.9% 无菌生理盐水250ml三角瓶中装99ml生理盐水，每瓶加约20粒玻璃珠250ml三角瓶中99ml生理盐水，作100倍稀释用平皿，涂棒无菌200ul, 1000ul吸头记号笔，酒精灯Ⅱ啤酒酵母袋装巴氏消毒的牛奶啤酒菌种：啤酒酵母酸奶菌种：市售酵母发酵培养基：100ml麦芽汁(8%~10%)/250ml三角瓶2.5%海藻酸钠溶液5ml，灭菌1.5% CaCl2 50ml，灭菌0.9% 无菌生理盐水，50ml无菌滴管无菌玻璃棒无菌封口膜封好的100ml三角瓶实验步骤Ⅰ微生物观察1.制作平板：融化固体培养基，倒平板，每组10个，采用叠皿法制作平板。
2.采土样：选择肥沃土壤，去表层土，挖5~20cm深度的土壤数10g，装入烧杯，带回实验室。
3.制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。
用1ml的无菌吸头从中吸取1ml土壤悬液，注入事先分装有99ml无菌水的试管中，吹吸3次，振荡均匀（10-4）。
4.涂布：用一支的无菌吸头，吸取10-4浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用灭过菌的无菌玻璃涂棒涂匀。
用固定化酵母细胞改进“pH对酶的活性影响”实验
制备 ｐ Ｈ分别为 ５ ７ ９的固定 化酵母 细胞 是本 改进 、、
下沉后再上浮所需时间来衡量不 同 ｐ Ｈ对酵母菌液 中过
液 ４０ Ｌ 等分 至 ３只 ２０ Ｌ烧杯 中 ， ５ｍ ， ０ｍ 待用 。 ３ １３ 配制 海 藻酸钠溶 液 称取 ２ １ 海 藻钠 酸钠 ， ．． ．ｇ 放入 １０ Ｌ烧杯 中 ， ０ｍ 加入 ３ ｍ ０ Ｌ蒸 馏水 ， 小火 加 热 ， 边 加热边搅拌 ， 至海藻酸钠呈均匀糊状 ， 冷却至室温。 ３ １４ 海藻酸钠 与酵母 茵混合 将冷却 好 的海 藻酸 ． ． 钠溶液与已活化的酵母混合 ， 并充分搅拌均 匀 ， 混合物
杯 中， 滴加时要调整好注射器高度 ， 以形成 的凝 胶珠 圆 滑 ， 小尾” 无“ 出现为宜。制成 的凝胶 珠 由于 ｐ Ｈ不 同 ，
颜色分别为红色、 白色和蓝色 。 ３ ２ 过 氧化 氢 溶液 的制 作 ． 将新 购的 ３ 的过 氧化 ％ 氢溶液用蒸馏 水 配制 成 １ 的体 积 分数 ， 取 ８０ Ｌ ％ 量 ０ｍ 置于 １０ ｍ ０ ０ Ｌ大烧杯 中 ， 待用 。
活化 ， 待用 。 ３ １２ 制备 Ｃ Ｃ２ ．． ａ １ 溶液 配制 ０ ０ ｍ ｌＬ的 Ｃ Ｃ２ ．５ ｏ ／ ａ １ 溶
影响酶的活性因素有很多 ， 主要包括 ｐ 温度和酶 Ｈ．
抑制剂 ， 以及金属 离子 等。在 苏教 版教 材高 中《 物》 生
（ 必修 １ 第四章第一节“ Ｔ ） Ａ Ｐ和酶” 课题研究 ” ， 的“ 中 设 计 了 “ Ｈ对 酶的活．影 响” ｐ Ｉ 生 实验 ， 其技 术路线为通过观 察 和记录 ｐ Ｈ分别为 ５７９的过氧化氢溶液 中的滤纸片 、、
３ 方法与步骤
酵母菌的分离纯化
酵母菌的分离纯化、固定化和酒精发酵第一部分酵母菌的分离纯化一、实验目的应用酵母菌的生理生化和生态学的特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。
二、实验原理酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。
多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4。
5—6.0。
酵母菌生长迅速，容易分离培养。
在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。
因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化.三、器材和用品1、甘蔗、苹果皮、葡萄皮、果园土、菜园土等。
2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基:马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁),葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。
分装三角瓶;试管斜面1支/组3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上,不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为5。
5左右，再分装试管9ml2支/组.4、无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、美兰染液、显微镜、接种环等.四、实验方法1、接种：取果皮（不需冲洗)或土壤5克，加入到100ml无菌水中,充分搅拌后，用无菌吸管取1ml接入到9ml乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28—30℃培养箱中培养24h，可见培养液变浑浊.2、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1m l，注入另1管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中,在28-30℃培养箱中培养24h.3、镜检：用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液,混合均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原,故菌体不着色。
4、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml 加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
5、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。
酵母细胞固定化实验的改进和拓展探究
同的探究 。在 实 验 过 程 中 ， 学 生 真正 体 验 科 学 使 探究 过程 ， 掌握 科 学 的探 究 方法 ， 高科学 探究 能 提
力。
（ ） 高 了学生 的综合 实践技 能 ４提 组培 实验 其实 是许 多学科 知 识 的融合 。例如
实验 过程 中的改进 方法 、 失败 原 因进行 了归 纳 、 总 结和 优化 ， 在此 基 础 上 由易 到难 开 展 了一 系列 并 的实 验拓 展探 究 。 １ 实验过 程 的注意 事项 和 改进方 法 （） １ 药品称 量 时的 注意 事项
的实 验流 程 清 晰 ， 于 学 生重 复 实 验 。在 实 际教 便 学 中我们 发现 ： 一些 小组 学生 生 搬硬套 操 作步 骤 ，
摘 要 针 对 酵 母 细 胞 固定 化 实验 中存在 的 问题 ， 出 了有 针 对 性 的 改进 建 议 ， 在 此基 础 上 开 展 了 一 系列 的 实验 拓 展 探 提 并
究。
关 键 词 细 胞 固定 化 实验 改 进
拓 展探 究
酵母 细 胞 固 定 化 实 验 是 人 教 版 高 中 生 物 选 修 １ 生 物技 术 实 践 》 的实 验 课 题 ， 材 中安 排 《 中 教
本实验需要 多次称量药 品 ， 因此要求学 生在称
量 药 品时应 在天平两侧 托盘上各放 置一 张称量纸 ，
称 量不 同药 品时要更换 称量纸 ， 防止 不 同药 品使用 同一托盘而 相互混杂 ， 响实验效果 。这一 细节可 影
《 学仪 器 与实验 》 ２ 教 第 ７卷 ２ １ ０ １年 第 ７期
【推荐下载】高二下册生物酵母细胞的固定化知识点总结
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高二下册生物酵母细胞的固定化知识点总结
对人类来说，生物太重要了，人们的生活处处离不开生物。
为大家推荐了高二下册生物酵母细胞的固定化知识点，请大家仔细阅读，希望你喜欢。
1.(酵母细胞的固定化)基础知识
⑴.(有哪些?固定化酶应用的实例?
①.用于高果糖浆的生产;
小资料：高果糖浆是指果糖含量为42%左右的糖浆;
可以作为蔗糖的替代品;
对人类健康有益，不会引起肥胖、糖尿病心血管疾病。
②.怎样生产高果糖浆?
A.原料：葡萄糖;
B.酶：葡萄糖异构酶(稳定性好，能持续发挥作用。
);
C.方法：使用固定化技术，将酶固定在颗粒状载体上;
1。
固定化细胞技术综述
固定化细胞技术综述及其应用张弘扬1401024103 高娟丽1401024122天津农学院农学与资源环境生物技术（1）班摘要固定化细胞是将动植物或微生物细胞固定于合适的不溶性载体上的一种技术，它既可以提高生产效率和生产能力、延长生产周期，又易于细胞的分离和回收。
在生物、医药、环境保护、食品工业等方面得到了广泛应用。
本文主要介绍了固定化细胞技术的方法，载体的选择与应用，综述了固定化细胞技术在工业、环境中的应用，并对其发展前景进行展望。
关键词细胞固定化固定化方法细胞固定载体生物反应器酒精发酵环境治理固定化技术包括固定化酶技术与固定化细胞技术。
固定化细胞技术起步较晚，在20世70年代后才从固定化酶技术发展而来，它是指通过物理或化学的方法将分散、游离的微生物细胞固定在某一限定空间区域内，以提高微生物细胞的浓度，使其保持较高的生物活性并反复利用的方法。
相对于固定化酶技术，该方法不需把酶从细胞中提取出来，且无需纯化，酶活力损失小。
目前，固定化细胞技术的应用范围涵盖生物学、生化工程、有机化学、合成化学、高分子化学、食品与发酵工业、环境净化、能源生产等多个领域，已经成为生物技术中十分活跃的跨学科研究领域。
本文主要对该技术及其应用进行了简单介绍，并对其发展前景进行展望。
一、生物细胞固定化技术1、细胞固定化的原理及方法固定化技术是使生物催化剂更广泛、更有效应用的一种重要手段，任何一种限制生物催化剂自由流动的技术都可以用于制备固定化生物催化剂。
由于细胞的种类多种多样，大小和特性各不相同，故此细胞固定化的方法有很多种。
Karel 等人将其归纳为表面吸附、多介质包埋、隔离和自凝集4大类；王建龙把目前常用的固定化方法分为吸附法、包埋法、胶联法和截留法；杨文英等介绍了吸附法、包埋法、共价结合法、胶联法、多孔物质包络法、超过滤法、多种固定化方法联用等7种常用方法；成庆利等按有无外加载体将细胞固定化方法分为有载体固定化法和无载体固定化法2种；张磊等按照固定化载体与方式的不同将其分为吸附法、包埋法、共价结合法和胶联法。
酵母细胞的固定化
1、举例说明固定化酶和固 定化细胞的应用。
2、初步学会制备固定化酵 母细胞。
一、基础知识： （一）固定化酶的应用实例
阅读教P49，并思考：
1、生产高果糖浆的方法是什么？ 2、生产高果糖浆需要什么酶？其作 用是什么？这种酶有何特点？ 3、了解高果糖浆生产过程。 4、这种方法的优点是什么？
1、生产高果糖浆的方法是？
〖思考6〗发酵过程中锥形瓶为什么要 密封？ 酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。
〖思考7〗锥形瓶中的气泡和酒精是怎 样形成的？
酵母菌进行无氧呼吸产生的。 〖思考8〗在利用固定化酶或固定化细 胞进行生产的过程中，需要无菌操作 吗？ 需要。
这一阶段成功与否呢？怎 样评价？
观察发酵的葡萄糖溶液； 利用固定的酵母细胞发酵产生 酒精，可以看到产生了很多气 泡，同时会闻到酒味。 还有其他方法吗？
（2）配制CaCl2溶液： 0.83gCaCl2＋150mL蒸 馏水 →200mL烧杯→溶解备 用。
（3）配制海藻酸钠溶液:（注意浓度）
0.7g海藻酸＋10mL水→50mL烧杯→ 酒精灯微火（或间断）加热，并不断 搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到 10mL。 〖思考3〗微火加热并不断搅拌的 目的是什么？ 防止海藻酸钠焦糊。
固定 成本低，操作更容易 固定后的细胞与反应物不容易接近， 化细 可能导致反应效果下降。 胞
课堂小结：
• 基础知识 固定化酶的应用技术 固定化细胞技术
.实验操作
制备固定化酵母细胞 用固定化酵母细胞发酵
练习：
1、下列说法不正确的是（ D ） A、葡萄糖与固定化葡萄糖异构酶接触， 转化成的是果糖 B、从固定化酶反应柱下端流出的是果 糖 C、高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、 糖尿病、龋齿和心血管病 D、酶溶解于葡萄糖溶液，可以从糖浆 中回收
响应面法在酵母细胞固定化条件优化中的应用_邵伟
２００７ 年第 ６ 期 （ 总第 １５６ 期 ）・ ＬＩＱＵＯＲ－ ＭＡＫＩＮＧ ＳＣＩＥＮＣＥ ＆ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ２００７ Ｎｏ．６（Ｔｏｌ．１５６）
６１
响应面法在酵母细胞固定化条件优化中的应用
邵
摘 要：
伟 ， 乐超银
宜昌
（ 三峡大学化学与生命科学学院 ， 湖北
４４３００１）
以啤酒酵母为材料 ， 通过单因素试验初步确定氯化钙浓度、 海藻酸钠浓度和固定化温
Ｃａ２＋ 浓度为 ２．０ ｍｏｌ／Ｌ， 在该浓度下固定化酵母颗粒的强
度好 ， 发酵力强。
２．４ 酵母细胞固定化条件的优化 ２．４．１ 试验因素水平编码与试验结果 综合单因素试验结果 ， 根据 Ｂｏｘ－ Ｂｅｎｈｎｋｅｎ 的中心
组合试验设计原则 ［６］， 分别对影响酵母细胞固定化和发 酵的 ３ 个因素 ： 氯化钙浓度 （ Ｘ１） 、 海藻酸 钠 浓 度 （ Ｘ２） 和
养基 ， ２８ ℃ 培养 ２４ ｈ， 并 按 ３ ％ 的 量 接 入 摇 瓶 ， ２８ ℃ 、
２００ ｒ／ｍｉｎ 培养 ２４ ｈ 后 ， 取适量培养液以 ５０００ ｒ／ｍｉｎ 离
心 １０ ｍｉｎ ， 得 酵 母 泥 ， 用 无 菌 生 理 盐 水 按 １ ∶ １ （ ｖ／ｖ） 洗 涤 菌体 ３ 次 ， 离心后称取一定质量的湿菌体 ， 将菌体细胞 加入 ２ ％～６ ％ （ ｗ／ｖ） 的海藻酸钠溶液中 ， 充分混匀。用 注射器将海藻酸钠菌悬液滴入 ３０ ℃ 盛有 ＣａＣｌ２ 溶液的 三角瓶。 完成后 ， 将其转移至 ２０～２２ ℃水浴中 ， 放置 １ ｈ 后 ， 倾去溶液 ， 加入 １００ ｍＬ 无菌超纯水冲洗 ２ 次 ， 并重 新加入 ０．６ ％ＣａＣｌ２ 溶液 ５０ ｍＬ， ４ ℃平衡过夜。
壳聚糖分子量对酵母细胞固定化培养的影响
Hale Waihona Puke 摘 要 ： 以海 藻 酸 钠一 聚 糖 微 胶 囊 （ Ｃ微 胶 囊 ） 为研 究 对 象 ， 以 酵 母 细 胞 Ｓ ｃｒｖｓ ｅＢ ７ １为 细 胞 模 型 ，分 壳 Ａ ．ｅｅｉ ａ Ｙ４ ４ ｉ
别 考 察 了相 同成 膜 反 应 时 间 和 相 同 成 膜 厚 度 两 种 情 况 下 ，壳 聚 糖 分 子 量 对 微 囊 膜 膨 胀 行 为 、微 囊 内 细胞 增 殖 情
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