Hemin对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑保护作用的研究
●噙国
Ｈｅｍｉｎ对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑保护作用的研究
黄海波殷小成 杨彩云 易 璐
（南华大学第一附属医院，湖南衡阳４２１００１）
【摘要】目的观察氯化高铁血红素（Ｉｑｅｍｉ￣）对缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）新生大鼠脑组织中脑红蛋白
（Ｎ ）表达的影响，探讨Ｈｅｍｉｎ的脑保护作用及机制。方法 将７ ｄ龄新生ｓＤ大鼠９０只随机分为假手术组、
ＨＩＢＤ组、ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组共３组。采用结扎左颈总动脉、低氧诱导（８％氧气，３２℃）２ ｈ方法建立ＨＩＢＤ模型。
ＨＩＢＤ建模后２ ｈ，ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组腹腔注射Ｈｅｍｉｎ（５０ ｍｇ／ｋｇ），假手术组与ＨＩＢＤ组腹腔注射生理盐水。２４ ｈ
后处死取脑，分别行脑梗死体积百分比测定、荧光定量（ＲＴ—ＰＣＩ￣）检测Ｎ ｍＲ＿ＮＡ表达、免疫组化分析Ｎｇｂ
表达。结果ＨＩＢＤ组和ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组脑梗死体积百分比、Ｎｇｂ ｍＲＮＡ和Ｎｇｂ表达均较假手术组显著上升
（ ０．０１）；与ＨＩＢＤ组比较，ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组ＮｇｂｍＲＮＡ和Ｎｇｂ表达均增加，而脑梗死体积百分比明显减少，
差异均具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论Ｈｅｍｉｎ可减轻新生鼠的缺氧缺血性脑损伤，其机制可能是通过上调
Ｎｇｂ的表达发挥作用。 【关键词】大鼠 缺氧缺血性脑损伤 氯化高铁血红素 脑红蛋白
Ｓｔｕｄｙ Ｏｉｌ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆＨｅｍｉｎ ｏｎ ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔｓ Ｈｕａｎｇ Ｈａｉｂｏ，Ｙｉｎ Ｘｉａｏｃｈｅｎｇ，Ｙａｎｇ Ｃａｉｙｕｎ，ｅｔ ｏ１．Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｎａｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓ ，Ｈｅｎｇｙａｎｇ，
Ｈｕｎａｎ ４２ｌｏ０ｌ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｈｅｍｉｎ ｏｎ ｎｅｕｒｏｇｌｏｂｉｎ（Ｎｓｂ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｎｅｏｎａｔｅ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ
ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｅｈｅｍｉｅ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ，ａｎｄ ｔＯ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｅｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｈｅｒｏｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｎｆｆｔｅｔｙ
ｎｅｏｎａｔｅ ＳＤ ｒａｔｓ ｏｆ ７一ｄａｙ—０１ｄ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ ｒａｎｄｏｍｌｙ，ｉｎｃｌｏｕｄｉｎｇ ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ ｇｒｏｕｐ（ＨＩＢＤ ｇｒｏｕｐ），ＨＩＢＤ ｐｌｕｓ Ｈｅｍｉｎ ｇｒｏｕｐ（ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ ｇｒｏｕｐ）．Ｌｉｇａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｌｅｆｔ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ａｎｄ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｅｉｂｌｅ（８％ｏｘｙｇｅｎ，３２℃）２ ｈ ｆｏｒ ｔｈｅ ＨＩＢＤ ｍｏｄｅ１．Ａｆｔｅｒ ２ ｈｏｕｒｓ ｏｆ ＨＩＢＤ ｍｏｄｅｌ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ，ｔｈｅ ｒａｔｓ ｏｆ ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｗｉｌｔｓ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｅｄ Ｈｅｍｉｎ（５０ ｍｇ／ｋｇ）；ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＨＩＢＤ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ
ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ．Ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｋｉｌｌｅｄ ａｔ ２４ｈ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｂｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｆａｒｃｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｖｏｌｕｍｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，Ｎｓｂ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎｄ Ｎｓｂ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｉｎｆａｒｃｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｖｏｌｕｍｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ，ｔＩｌｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｎｇｂ ｍＲＮＡ ａｎｄ Ｎｇｂ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ （尸ｌ＜０．Ｏ１）；Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＨＩＢＤ ｇｒｏｕｐ，Ｎｇｂ ｍＲＮＡ ａｎｄ Ｎｓｂ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｉｎｆａｒｃｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｖｏｌｕｍｅ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ Ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ（ ＜０．０５）。Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｈｅｍｉｎ ｈａｓ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｅｃｔｓ ｏｎ ｎｅｏｎａｔｅ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ
ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｅｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｅｕｒｏｇｌｏｂｉｎ． 【Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ】Ｒａｔ Ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ Ｈｅｍｉｎ Ｎｅｕｒｏｇｌｏｂｉｎ
新生儿缺氧缺血性脑病（ｈｙｐｏｘｉｃ—ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ。 ＨＩＥ）是由于围生期窒息所致的缺氧缺血性脑损伤，是引起新生
儿死亡及儿童伤残的重要原因之一Ｉｔ】。其发病机制十分复杂，迄
今为止尚无较好的防治措施。脑红蛋白（ｎｅｕｒｏｇｌｏｂｉｎ，Ｎｇｂ）是一
种在功能上类似于肌红蛋白的携氧球蛋白，可特异性地为脑供
氧，可能参与了脑对缺氧的保护性反应圆。既往研究多为建立新 生鼠缺氧缺血性脑损伤（ｈｙｐｏｘｉｃ—ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ，ＨＩＢＤ）
模型前采用氯化高铁血红素（Ｈｅｍｉｎ）预处理方法观察其脑保护 作用，而对于ＨＩＢＤ建模后Ｈｅｒｏｉｎ能否上调Ｎｇｂ的报道不多。
本研究拟通过ＨＩＢＤ新生鼠建模后２ ｈ腹腔注射Ｈｅｒｏｉｎ，观察
基金项目：衡阳市科技局基础研究计划项目（２０１１ ３９）
‘通讯作者：殷小成 作者简介：黄海波，女，硕士，主治医师。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｃｖｉｎｌ０８＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ 脑组织中Ｎｇｂ的变化，探讨Ｈｅｒｏｉｎ的脑保护作用及可能机制， 为ＨＩＥ的临床防治提供实验依据。
１材料和方法 １．１材料和试剂７ ｄ龄ｓＤ大鼠，体重ｌ２～１５ ｇ，雌雄不
分，由南华大学动物实验中心提供，连同母鼠分笼饲养于标准
动物房。Ｎｓｂ引物由北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司合
成，Ｎ异ｂ抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，标准混合气
体（８％氧气＋９２％氮气）由衡阳市特种气体厂提供。 １．２实验方法
１．２．１动物分组及模型制备将７ ｄ龄ＳＤ大鼠９０只随
机分为假手术组、ＨＩＢＤ组、ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组共３组。ＨＩＢＤ模型
参照文献唧制作方法：乙醚麻醉后结扎并剪断左颈总动脉，并于
２ ｈ后置于３２℃常压低氧舱内，充以８％氧气＋９２％氮气的混合
气体，１．５Ｌ／ｍｉｎ吸入２ ｈ制成ＨＩＢＤ模型。ＨＩＢＤ模型以复氧１ ｈ 基层医学论坛２０１３年５月第１７卷第１３期 １
６３３ 一腧窗
后固定向结扎血管侧旋转来判断ＨＩＢＤ模型是否复制成功。假
手术组只游离左颈总动脉而不结扎，不进行缺氧处理。
ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组于ＨＩＢＤ造模后２ ｈ腹腔注射Ｈｅｍｉｎ（５０ ｍｇ／ｋｇ），
ＨＩＢＤ组和假手术组在同一时间腹腔注射等量生理盐水。造模
或术后２４ ｈ各组随机抽取１０只断头取脑用于行脑梗死体积
百分比测定，再随机抽取１Ｏ只断头取脑做免疫组化检测，每组
剩余ｌ０只断头取脑后用于提取核糖核酸（ＲＮＡ）行荧光定量
（ＲＴ—ＰＣＲ）检测。 １．２．２脑梗死体积百分比测定脑组织放于一２０℃冰箱
冻至适当硬度后，每只脑组织以２ ｍｍ间隔行连续冠状位切片 共３片，放入２％２，３，５，一氧化三苯基四氮唑（ｒＩｆＩ’ｃ）染色，然
后置于４％多聚甲醛缓冲液中固定２４ ｈ后，每只脑组织随机抽
取１张切片用于观察，正常脑组织着深红色，梗死脑组织呈苍
白色。应用ＩＰＰ图像处理软件，计算各层面脑梗死面积及层面
总面积，按公式【（各片正反面梗死面积之和／２）×片厚】，【（各片
正反面总面积之和／２）Ｘ片厚１ Ｘ １００％计算梗死体积占所取脑
组织体积的百分比。
１．２．３ Ｎｇｂ ｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ检测按照Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司生
产的试剂盒说明，提取脑组织总ＲＮＡ。Ｎｇｂ引物序列为：上游引物
５＇－ＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＣＴＣＴＧＧＡＡＣＡ一３ 。 下 游 引 物
５＇－ＧＣＡＧＣＡＴＣＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＡ一３ ，产物长度１７６ ｂｐ。ＧＡＰＤＨ 作内参引物序列：上游引５＇－ＡＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＴＧＧ一３ ，
下游引物５＇－ｃｒＩ’ＣＡＧＴＧ ｒＡＧｃｃＣＡＧＧＡ１ＩＧｃ一３ ，产物长度
５２８ ｂｐ。采用凝胶成像系统分析结果，相对表达量＝目的基
因表达量，内参表达量。
１．２．４脑组织Ｎｇｂ蛋白表达相对含量的检测断头取脑
后脑组织立即置入４％多聚甲醛固定２４ ｈ以上并行浸蜡包埋，
每只脑组织以１ ｍｍ间隔行连续冠状位切片共４片，切片后每
只脑组织随机抽取１张用于检测Ｎｓｂ。采用免疫组化ＳＡＢ法，
ＤＡＢ显色，苏木素轻度复染细胞核，用ＰＢＳ液替换一抗作阴性
对照。以平均阳性染色面积百分比法半定量分析Ｎｇｂ蛋白表
达的部位与强弱。
１．３统计学方法计量资料以均数±标准差（ ±ｓ）表示，
采用方差分析，Ｐ＜０．０５为差异有显著性。
２结果 ２．１ 各组脑梗死体积百分比比较假手术组脑组织中
未出现明显梗死灶，ＨＩＢＤ组、ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组均出现了明显
的缺血梗死灶，差异具有显著性（Ｐ＜Ｏ．０１）；与ＨＩＢＤ组比较，
ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组脑梗死体积百分比显著下降（Ｐ＜０．０５）。见表１。
表１ 各组大鼠脑梗死体积百分比比较
注：ＨＩＢＤ组与假手术组比较，ｑ＝７．４８，Ｐ＜０．０１；ＨＩＢＤ＋Ｈｅｎｉｎ
组与假手术组比较，ｑ＝５．６７，Ｐ＜Ｏ．０１；ＨＩＢＤ＋Ｈｅｎｉｎ组与ＨＩＢＤ组 比较，ｑ＝２．９８，Ｐ＜Ｏ．０５；
２．２各组脑组织Ｎｇｂ ｍＲＮＡ水平比较与假手术组比较，
ＨＩＢＤ组、ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组Ｎｇｂ ｍＲＮＡ表达显著上升（尸ｌ＜０．０１），其
中ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组ＮｇｂｍＲＮＡ表达量最多。见表２、图１、图２。 表２各组大鼠脑组织Ｎｇｂ ｍＲＮＡ水平比较
注：ＨＩＢＤ组与假手术组比较，ｑ＝９．２４，Ｐ＜Ｏ．０１；ＨＩＢＤ＋Ｈｅｎｉｎ
组与假手术组比较，ｑ＝７．１９。Ｐ＜Ｏ．Ｏ１；ＨＩＢＤ＋Ｈｅｎｉｎ组与ＨＩＢＤ组
比较ｑ＝３．６７．Ｐ＜Ｏ．０５；
稆ｇ ０ ∞０ 瑚 一
Ｍ础甘 手术组ＩｔｌＢＤ组ＩｔＩＥＤ￣Ｉ＇Ｉ￣ｍｍ墟
图１各组脑组织ＮｇｂｍＲＮＡ水平
一
假手术组ＨＩＢＤ组ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组 图２假手术组、ＨＩＢＤ组及ＨＩＢＤ＋Ｈｅｍｉｎ组Ｎｇｂ的
缺氧缺血性脑损伤新生鼠MMP-9 mRNA和紧密连接蛋白ZO-1 mRNA的表达
574第16卷4期
2010年12月天津医科大学学报
JOURNALOFTIANJINMEDICALUNIVERSITYV01．16．No．4
Dec．2010
缺氧缺血性脑损伤新生鼠MMP
一9mRNA
和
紧密连接蛋白ZO
一1mRNA
的表达
原静，孙晔殉，初桂兰
(天津医科大学总医院儿科，天津300052)
[摘要】日的：研究基质金属蛋白酶一9(MMP-9)mRNA及紧密连接(TJ)蛋白ZO一1mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤
(H|BD)中的作用和意义。方法-36只7日龄新生SD大鼠按照完全随机化方法分为对照组、ttlBD3、6、24、48、72h
组，每组6只。观察HIBD后结扎侧大脑半球的大体形态变化，同时采用Real-time
Q—PCR方法测定脑皮层组织
MMP-9mRNA和ZO—l
mRNA表达。结摹：(1)对照组大鼠MMP-9mRNA表达水平极低(与HIBD组比较P<0．05)，在
HIBD3h组其表达开始增高，24h达高峰，72h仍维持较高的水平。(2)对照组大鼠ZO一1mRNA表达水平较高(与
HIBD组比较P
3h组其表达开始降低，24h降至最低，72h仍维持较低水平。(3)缺血缺氧后MMP-9
mRNA的表达与ZO—lmRNA的表达在时间上呈负相关(r=-0．659，P<0．05o(4)新生大鼠HIBD后24--48h结扎侧大
脑半球脑水肿明显。结论：新生鼠脑缺氧缺血后MMP-9表达升高，TJ蛋白ZO一1表达减少，提示它们可能参与了
HIBD的发病过程。
[关键词】缺氧缺血，脑；新生大鼠；MMP-9；ZO—l
[中图分类号]R722．1[文献标识码】A[文章编号]1006—8147(2010)04-0574-04
ExpressionofMMP-9
rnRNAandZO-1mRNAinbraintissue
of
hypoxic-ischemicneonatalrats
YUANJing，SUNYe-xun，CHUGui-lan
鼠神经生长因子对新生儿缺氧缺血性脑病的安全性及疗效
２０１５年第１９卷第１３期 实用临床医药杂志 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ・１９３・ 鼠神经生长因子对新生儿缺氧缺血性 脑病的安全性及疗效 刘向红，郎玉洁 （山东省济南市儿童医院新生儿科，山东济南，２５００２２） 关键词：鼠神经生长因子；新生儿；缺氧缺血性脑病；安全性；疗效 中图分类号：Ｒ ７２２．１文献标志码：Ａ文章编号：１６７２—２３５３（２０１５）１３—１９３—０２ ＤＯＩ：１０．７６１９４ｅｍｐ．２０１５１３０７４ 新生儿缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）是由于新生儿 围产期缺氧窒息所导致的大脑缺氧缺血而引起脑 损伤，严重者可导致脑组织部分萎缩及坏死。临 床主要表现为意识障碍、惊厥发生，并伴有不同程 度的肌张力降低、反射异常。有关数据＿１ ｊ显 示，中国新生儿缺氧缺血性脑病的发生率约占全 部新生儿疾病的１６％以上，且呈逐年增高趋势。 鼠神经生长因子是从小鼠下颌腺体内提取的鼠神 经生长因子，其主要作用是修复坏死神经元、营养 周围神经，改善患儿肌张力、惊厥状态以及意识障 碍等神经系统疾病。为了更好地了解鼠神经生长 因子对新生儿缺氧缺血性脑病的治疗效果以及安 全性，作者通过对既往文献的研究分析，配合临床 实践，对本院８０例新生儿缺氧缺血性脑病患儿进 行了实验研究，现报告如下。 １资料与方法 １．１一般资料 选取２０１２年７月一２０１４年５月本院新生儿 科收治并确诊为缺氧缺血Ｉ生脑病的新生儿８０例， 采用随机数字表平均分为２组。实验组４０例，其 中男２１例，女１９例，平均胎龄（３８．１±１．２）周；对 照组４０例，其中男２２例，女１ ８例，平均胎龄 （３８．４±０．９）周。纳入标准：参照《新生儿脑病诊 断依据》（参照国内诊断标准）Ｌ３］，患儿监护人同 意参与本次研究，并签署知情同意书；本次研究由 当地伦理小组全程监督。排除标准：参照《新生儿 医疗注意事项指南｝ｃ４ Ｊ，排除肝、肺严重器质病 变；患原发性心脏病；患儿监护人不同意参与本次 研究；未签署知情同意书。 １．２ 方法 ２组患儿入院后，给予氧疗、平衡水电解质酸 碱平衡，对照组采用常规治疗，包括抗惊厥药 物［（苯巴比妥钠，负荷量２０ ｍｇ／ｋｇ，维持量 ５ ｍｇ／ｋｇ・ｄ）］、控制颅内压升高药物（静脉推注 ２０％甘露醇试剂每次２～３ ｍＬ／ｋｇ，１次／６～８ ｈ， 应用２～３ ｄ）；实验组４０例在常规治疗的基础上 肌肉注射鼠神经生长因子，２０ ，／支，以３ ｍＬ生 理盐水溶解，隔日１支，１０支为１个疗程。 １．３观察指标 ２组患儿临床症状恢复时间，包括肌张力、惊 厥、意识及反射的恢复时间；２组患儿行为神经评 估得分，包括治疗第７、１４及２８天的行为神经评 估得分（总分为４０分，分值越高说明患ＪＬＮ损害 程度越低）；２组患儿智力、心理发育评估得分，包 括治疗后４个月以及６个月的神经、心理发育评 估得分（采用Ｂａｙｌｅｒ婴儿发育量表对心理运动发 育指数与智力发育指数进行判定，指数越高说明 脑损伤恢复程度越好）。 ２ 结 果 ２．１ ２组患儿临床症状恢复时间比较 治疗后，实验组各项临床症状恢复时间均短 于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），见表１。 表１ ２组患儿临床症状恢复时间情况ｄ 与对照组比较，＊Ｐ＜Ｏ．０５。
三七总皂苷对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的保护作用
三七总皂苷对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的保护作用
程晶;杨维群
【摘 要】目的:探讨三七总皂苷对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的脑保护作用及其机制.方法:随机将48只新生SD大鼠分成正常组、缺氧缺血性脑损伤模型组和三七总皂苷治疗组,各组大鼠分别行10d的生理盐水和三七总皂苷腹腔注射,比色法检测大鼠脑匀浆中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量.结果:与模型组比较,三七总皂苷能显著升高大鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛含量,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:脑组织抗氧化应激能力增强可能是三七总皂苷发挥对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑保护作用的机制.
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2016(013)003
【总页数】1页(P124)
【关键词】三七总皂苷;缺氧缺血性脑损伤;氧化应激;超氧化物歧化酶;丙二醛
【作 者】程晶;杨维群
【作者单位】泉州医学高等专科学校 泉州 362011;泉州医学高等专科学校 泉州
362011
【正文语种】中 文
【中图分类】R277.7
Key word:Panaxnotoginsengsaponins Hypoxic-ischemic brain damage Rat
Oxidative stress Superoxidedismutase Malondialdehyde 新生儿缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是早期新生儿最常见的中枢神经系统疾病，可以影响中枢神经系统的发育，导致永久性的神经功能障碍[1]。三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。本研究旨在通过观察三七总皂苷对新生大鼠脑组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的影响，探讨三七总皂苷对HIBD的保护机制。
1.1 实验动物与材料：7d龄Sprague-Dawley（SD）新生大鼠48只，雌雄不拘，体质量17～20g，福建医科大学动物实验中心提供。实验室温度18℃～20℃，湿度50%～60%，保持实验动物正常昼夜节律，自由饮水和摄食。三七总皂苷，云南玉溪万方天然药物有限公司提供。超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量检测试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供。
虾青素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型的神经保护作用
虾青素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型的神经保护作用
林良烽
【期刊名称】《中国组织工程研究》
【年(卷),期】2015(000)040
【摘 要】背景：研究发现虾青素有良好的神经保护作用，但是对于其在新生儿缺氧缺血性损伤中的治疗作用，目前尚无相关报道。目的：构建缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型，观察虾青素对其产生的神经保护作用及作用的途径。方法：从98只7 d龄的SD乳鼠中随机取30只作为假手术组，其余大鼠结扎左颈总动脉2 h后，置于体积分数92%的特种标准气体、8%的氧气缺氧舱2 h建立缺血缺氧性脑损伤模型。假手术组仅分离颈总动脉，不予缺血缺氧处理。将造模成功的大鼠随机分为脑缺血缺氧组和虾青素治疗组，各30只。虾青素治疗组大鼠在脑缺血缺氧模型建成后立即通过腹腔注射80 mg/kg虾青素。结果与结论：与假手术组相比，脑缺血缺氧组大鼠缺血损伤区顶叶皮质中p-Akt、p-GSK3β、cleaved-caspase3蛋白的表达水平显著增加，Bcl-2蛋白的表达水平显著减少(P <0.05)；与脑缺血缺氧组相比，虾青素治疗可以显著减少凋亡相关蛋白cleaved-caspase3蛋白的表达水平(P <0.05)，显著上调Bcl-2蛋白的表达水平(P <0.05)，明显减少凋亡细胞的数量(P <0.05)。提示虾青素可以显著改善新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的预后及作用途径与上调Akt/GSK3β信号通路相关。%BACKGROUND:Several studies have
demonstrated that astaxanthin has a good neuroprotective effect; however,
the treatment effects of astaxanthin on newborns with hypoxic-ischemic
brain damage have not been reported. OBJECTIVE: To build newborn rat
缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马突触体素的表达及当归调控作用
缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马突触体素的表达及当归调控作用
吴林;田龙;苟兰英;冯佳越;余鸿
【期刊名称】《四川解剖学杂志》
【年(卷),期】2010(018)003
【摘 要】目的 探讨脑缺氧缺血对新生大鼠海马齿状回突触体素表达的影响及当归注射对其表达的调控作用.方法 取7日龄健康SD新生大鼠33只,随机分为对照组、缺氧组和当归组各11只.缺氧组和当归组新生大鼠在无菌环境下结扎左侧颈总动脉,术后护理2 h后置于三气培养箱持续缺氧2 h,制作新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,对照组仅行假手术,不结扎左侧颈总动脉、不缺氧.术后第8 d开始,缺氧组和对照组大鼠经腹腔注射生理盐水(8 ml/kg),连续7 d;当归组用等量当归注射液(250
g/L)代替生理盐水.于生后第22 d取大鼠脑组织,常规石蜡包埋、经海马切片,行突触体素(SY)免疫组化染色,图像分析海马齿状回SY阳性细胞的积分光密度(IOD)值.结果 缺氧组大鼠海马齿状回SY阳性细胞的IOD值较对照组降低,而当归组SY阳性细胞的IOD值较缺氧组增高.结论 脑缺氧缺血可降低新生大鼠海马齿状回SY的表达,而当归注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠可能具有保护作用.
【总页数】3页(P5-7)
【作 者】吴林;田龙;苟兰英;冯佳越;余鸿
【作者单位】泸州医学院,泸州,646000;泸州医学院,泸州,646000;泸州医学院,泸州,646000;泸州医学院,泸州,646000;泸州医学院组胚教研室,泸州,646000 【正文语种】中 文
【中图分类】R722.12
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1.MMP-2在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马中的表达及意义 [J], 殷杰;陈蓉;肖东凡
2.整合素连接激酶在新生鼠缺氧缺血性脑损伤中的表达及作用 [J], 潘玲丽;屈艺;罗黎力;赵静;李姣;唐军;伍金林;李熙鸿;母得志
3.缺氧缺血性脑损伤新生大鼠胶质细胞源性神经营养因子表达及调控机制探讨 [J],
右美托咪定对缺氧缺血新生大鼠脑损伤的保护作用
研究报告
Research
Report
右美托咪定对缺氧缺血新生大鼠脑损伤的保护作用
郑思敏王倩茹牛晓丽_
西安交通大学第二附属医院，西安,710061
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通信作者,niu_131****************
摘要为了揭示右美托咪定后处理对缺氧缺血(
HI)新生大鼠脑损伤的保护作用，本研究将80只7日龄
SD大鼠随机分为4组(
n=20),分别为
Sham组、
HI组、
HI+
Dex组和
Hl+
Dex+
Yoh组。
HI+
Dex组大鼠在脑缺氧缺
血1
h后腹膜内注射10|
jLg/
kg右美托咪定;
Hl+
Dex+
Yoh组大鼠腹膜内注射10(
xg/
kg右美托咪定和5
mg/kg
育亨宾。脑缺氧缺血24
h后，处死一部分大鼠并收集脑组织,用于后续指标检测；另一部大鼠继续用药6
d，
间隔2周后，即30日龄时，进行神经功能缺损评分的评估及水迷宫实验。大鼠治疗2周后的神经功能缺损评
分显示,
HI+
Dex组的神经功能缺损评分显著低于
H1组。在
Morris水迷宫实验中，定位航行实验和空间探索
实验显示,
HI+
Dex组的逃避潜伏期显著低于
HI组，而穿越平台次数显著高于
HI组。海马的
TUNEL染色显
示，
HI+
Dex组的
TUNEL阳性细胞率显著低于
HI组。
RT-
PCR和免疫组织化学染色显示，
HI+
Dex组大鼠海
马组织
AQP4、
MMP9和
ApoJ的表达水平显著低于
H丨组
。Western
blotting结果显不，
HI+
Dex组大鼠海马组织
PI3
K、
AKT和
GSK-3(3的磷酸化水平显著高于
H1组；此外，
HI+
Dex组大鼠皮质组织中
TNF-
ct和
I.
L-
ip含量
显著低于
HI组。本研究表明右美托咪定后处理可通过激活
a2
AR对脑缺氧缺血新生大鼠提供脑保护作用。
关键词右美托咪定，脑缺氧缺血，细胞凋亡,脑损伤
Protective Effect of Dexmedetomidine on Brain Injury in Neonatal Rats with
谷红注射液对新生大鼠脑缺氧缺血损伤的保护作用研究
中国中医急症2019年8月第28卷第8期JETCM.Aug.2019，Vol.28，No.8
·研究报告·
谷红注射液对新生大鼠脑缺氧缺血损伤的
保护作用研究∗
袁丹1常能彬2梁玉兰1李茂1
（1.四川省泸州市人民医院，四川泸州646000；2.西南医科大学，四川泸州646000）
中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1004-745X（2019）08-1374-04doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2019.08.015
【摘要】目的探讨谷红注射液对缺氧缺血新生大鼠脑损伤的保护作用及分子机制。方法126只健康7日龄SD新生大鼠随机分为假手术组，模型组，谷红注射液组低、中、高剂量组、ERK抑制剂LY3214996组（ERK组）、ERK+谷红组。通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气体建立缺氧缺血新生大鼠模型。给药后，对各组大
鼠进行神经功能缺损评分，观察脑组织病理学改变，检测脑含水量、脑组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSP-Px）含量及p-ERK、Nrf2和HO-1蛋白表达。结果与假手术组比较，模型组新生大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量、MDA含量均显著升高（P<0.05），SOD和GSP-Px活力、p-ERK、Nrf2和HO-1蛋白表达均显著降低（P<0.05）。与模型组比，谷红中剂量组、谷红高剂量组和ERK+谷红组新生
大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量、MDA含量均显著降低，SOD和GSP-Px活力、p-ERK、Nrf2和HO-1蛋白表达均显著升高（P<0.05）。与ERK组比较，ERK+谷红组新生大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量、MDA含量均显著降低，SOD和GSP-Px活力、p-ERK、Nrf2和HO-1蛋白表达均显著升高（P<0.05）。结论谷红注射液可能通过激活ERK/Nrf2/HO-1信号通路保护新生大鼠脑缺氧缺血损伤。【关键词】脑缺氧脑缺血ERK/Nrf2/HO-1通路脑保护谷红注射液大鼠
高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞和髓鞘的保护作用
高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞和髓鞘的保护作用
余小河;杨于嘉;王霞;王庆红;谢珉;祁伯祥;刘沉涛;王晓莉;贾延劼;钟乐
【期刊名称】《中国当代儿科杂志》
【年(卷),期】2006(8)1
【摘 要】目的以前的研究已经证实高压氧(HBO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)有保护作用,但其确切机制尚不清楚。该研究从HBO对内源性神经干细胞(NSCs)和髓鞘的影响来探讨HBO保护作用的机制。方法7日龄SpragueDawley新生大鼠随机分为4组:正常对照组、HIBD组、高压空气治疗组(HBA)和高压氧治疗组(HBO)。HBA组和HBO组于缺氧缺血后1h内分别行HBA和HBO处理,每日1次连续7d。BrdU免疫组化检测在体内源性神经干细胞(NSCs)。Westernblot测定nestin的表达。髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫组化检测髓鞘损伤。结果HIBD后3周,HIBD组缺血侧的室管膜下(SVZ)区和海马齿状回(DG)BrdU阳性细胞数目明显少于正常对照组(均P<0.01),HBO组SVZ区BrdU阳性细胞增多不明显,但DG区BrdU阳性细胞明显增多,与HIBD组比较差异有显著性意义(P<0.05)。HIBD组nestin表达较正常对照组下降,HBO组表达增加,HBA组增加不明显。HIBD后1周,HIBD组MBP免疫组化损伤评分增加,HBO组与HBA组损伤评分均有减轻,HBO组与HIBD组比较差异有显著性(P<0.01),但与HBA组比较差异无显著性(P>0.05)。结论HBO可减少新生大鼠HIBD后内源性NSCs的死亡和减轻髓鞘损伤,这可能是HBO的保护作用机制之一。
【总页数】5页(P33-37) 【关键词】缺氧缺血性脑损伤;高压氧;髓鞘;新生大鼠;内源性神经干细胞;保护作用
【作 者】余小河;杨于嘉;王霞;王庆红;谢珉;祁伯祥;刘沉涛;王晓莉;贾延劼;钟乐
【作者单位】中南大学湘雅医院儿科
人骨髓间充质干细胞脑内移植对大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用
人骨髓间充质干细胞脑内移植对大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用
樊建玲;来晓瑜;黄黎;王艳;曹军丽;黄河
【期刊名称】《第二军医大学学报》
【年(卷),期】2008(29)9
【摘 要】目的:观察人骨髓间充质干细胞(hMSCs)移植对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠脑功能影响及其在脑组织中的迁移、分化过程,探讨hMSCs移植对缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为后续研究奠定基础。方法:大鼠随机分为hMSCs移植组(n=18)、移植对照组(n=18)、模型组(n=6)和假手术组(n=6)。前3组均建立幼年Wistar大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,3d后hMSCs移植组缓慢注射约5×105个hMSCs至大鼠的左背侧海马,移植对照组注射等体积的磷酸盐缓冲液,假手术组和模型组未移植。其中hMSCs移植组和移植对照组又随机分为5组,分别于移植后0d、3d、1周、2周(均n=3)和4周(n=6)处死。模型组与假手术组均于造模后31d(即移植后4周)处死。大鼠处死前均行交替电刺激Y迷宫行为学实验,处死后取脑组织行H-E染色观察病理变化;hMSCs移植组和移植对照组大鼠同时还行免疫组化染色检测hMSCs在脑内的分布。结果:免疫组化结果显示hMSCs移植后1周主要沿脑室系统迁移,部分沿胼胝体向对侧迁移,移植后4周细胞沿脑室向周围实质迁移,广泛分布于脑组织。Y迷宫实验显示hMSCs移植组总错误次数(TE)明显少于移植对照组(5.00±2.82 vs12.67±3.72),差异有统计学意义(P<0.05),提示hMSCs移植组大鼠空间记忆能力显著优于移植对照组。H-E染色结果显示hMSCs移植组大鼠脑组织损伤较移植对照组及模型组轻。结论:hMSCs脑内移植后可在大鼠中枢神经系统内存活并迁移,且hMSCs移植能在一定程度上促进损伤脑组织和脑功能的恢复,值得进一步研究。
【总页数】6页(P1009-1014)
【关键词】人骨髓间充质干细胞;细胞移植;缺氧缺血;脑
黄芩苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的实验研究
黄芩苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的实验研究
薛磊; 沈冰冰; 王丽娜; 姜振锋; 关莉
【期刊名称】《《解放军医药杂志》》
【年(卷),期】2019(031)010
【总页数】4页(P6-9)
【关键词】缺氧缺血;脑; 大鼠; 黄芩苷; 水通道蛋白质1; 水通道蛋白质4
【作 者】薛磊; 沈冰冰; 王丽娜; 姜振锋; 关莉
【作者单位】150001 哈尔滨 哈尔滨医科大学附属第一医院新生儿科
【正文语种】中 文
【中图分类】R-322; R743
黄芩苷是中药黄芩的主要有效成分，其具有较强的解热镇痛、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、改善微循环作用，常用于各种脑疾病的治疗[1-2]。脑缺血再灌注后，黄芩苷能够起到改善神经功能、减轻脑水肿、抑制神经细胞凋亡的作用[1,3]。缺血性脑损伤会引起炎症因子释放增加，炎细胞激活，白细胞浸润，正常血管通透性改变，血管扩张后引起脑组织水肿，脑血流进一步减少形成恶性循环，加重神经元损伤，是影响神经功能的一个重要原因[4]。
新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxia ischemia brain-damage, HIBD) 严重威胁了新生儿的生命，其病因是由于围产期窒息导致新生儿脑血流减少或暂停引起的神经系统发育障碍[5]。水通道蛋白(aquaporins, AQPs)属于家族性膜通道蛋白，参与调节各种中枢神经系统信号通路，在脑水肿形成过程中发挥重要作用[6]。本实验通过建立新生鼠HIBD模型，探讨了黄芩苷对大鼠脑组织变化的影响及其对AQP-1、AQP-4表达的调控作用，旨在明确黄芩苷治疗新生儿HIBD的相关机制，为临床治疗提供理论基础。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验试剂 黄芩苷(北京索莱宝生物公司，含有量≥98%，批号：20161107))，AQP-1、AQP-4抗体、GAPDH均购自江苏凯基生物技术股份有限公司，BCA蛋白测定试剂盒、PVDF膜均购自上海碧云天公司。