蛋白质一轮复习

蛋白质一轮复习
蛋白质一轮复习

生命活动的主要承担者——蛋白质

第1课时

【教学目标】1.蛋白质的组成元素

2.氨基酸的结构通式和结构特点,并会判断是不是构成蛋白质的氨基酸

3. 脱水缩合反应式,氨基、羧基、肽键的写法

4.蛋白质结构多样性的原因

5.蛋白质的相关计算

【教学重点】1. 脱水缩合反应式,氨基、羧基、肽键的写法

2.蛋白质的相关计算

【教学难点】1.蛋白质的相关计算

【课前准备】1.制作教学案,并让学生完成自主探究部分

2.制作PPT

[教学过程]

导入直接导入:上节课我们复习了细胞中的元素和化合物,那么细胞中含量最多的化合物是什么呢?它的结构和功能又是怎么样的呢?

下面请一位同学回答学案中自主探究的部分内容。

【自主探究】(阅读教材P20—P23,然后思考并尝试回答以下问题)1.含量:占细胞干重的以上。

2.元素组成:主要由等元素组成。

3.基本组成单位:是。

(1)种类:约有种。

(2)分类:①:人体细胞不能合成,必须从外界直接获取

②:人体细胞能够合成的,12种。

(3)结构通式:。

(4)氨基酸分子的特点:。探究示例1下列关于氨基酸的叙述正确的是()

①②

③④ H2N—CH2—CH2—COOH

A.上述化合物中能构成生物体蛋白质的氨基酸的一共有3种

B.每个氨基酸分子都只含C、H、O、N四种元素

C.氨基酸只由氨基和羧基组成

D.人体合成蛋白质必需的氨基酸称为必需氨基酸。

针对学生情况,进行点评、知识点的再现:如何判断是否为构成蛋白质的氨基酸。

过渡:那么氨基酸如何构成蛋白质呢?

蛋白质的合成过程:

1.蛋白质的合成(参考教材P21图2—4)

[特别提醒]①肽键的正确写法是。

②脱去的水分子中,H既来自,O来自。[拓展]该过程在遗传学上称为,直接模板是,搬运氨基酸的工具是。

通过动画讲解氨基酸脱水缩合的过程后,用即时检测诊断学习效果。

[即时检测]下列为某一多肽化合物的分子结构式,请回答有关问题:

(1)上述结构中,代表氨基的结构式为_________;代表羧基的结构式为_________;代表肽键的结构式为____________。

(2)上述化合物是由__________ 种氨基酸组成。

(3)该化合物是由______个氨基酸脱水缩合形成的,该化合物称为________,水分子中的氧来自于__________,氢来自于___________。

基于氨基酸脱水缩合的过程,有许多计算的类型,下面我们一起探讨解题的方法。

蛋白质的相关的计算

1.肽键数和失去水分子数的计算

(链肽)

①.肽键数=

(环肽)

[挑战自我]由m个氨基酸构成的一个蛋白质分子,含n条肽链,其中z条是环状多肽,该蛋白质分子含有的肽键数为()

A.m-z+n

B.m-n-z

C.m-n+z

D.m+z+n

②肽键数=失去水分子数(也等于蛋白质水解需要的水分子数目)

2. 蛋白质的相对分子质量=

提醒:如果通过图示或其他形式告知有二硫键形成时,要考虑脱去氢。

例:胰岛素是动物体的一种激素,右图为结晶牛胰岛素的模式图。其α链有21个氨基酸,β链有30个氨基酸。

请回答:这51个氨基酸形成胰岛素后,其相对分子质量

比原来减少了 888 。

3.蛋白质中游离氨基或羧基的计算

游离的氨基数(或羧基数)至少=肽链数(链肽)

总数=肽链数+R基团中氨基(或羧基数)

4.蛋白质中含有N、O原子的计算(原理:化学反应过程中原子守恒)

例:某蛋白质由m条肽链、n个氨基酸组成。该蛋白质至少有氧原子的个数是

A. n-m

B. n-2m

C. n+m

D. n+2m

总结规律:O原子数=肽键数+ 2*肽链数+R基团中O原子数

推理: N原子数=肽键数+ 肽链数+R基团中N原子数

5.氨基酸的排列与多肽的种类计算

例1:假若有A、B、C三种氨基酸,由这三种氨基酸组成多肽的情况可分如下两种情形分析:

(1)若每种氨基酸数目无限的情况下,可形成三肽化合物的种类是。

(2)若每种氨基酸只有一个的情况下,可形成三肽化合物的种类是。探究点四蛋白质的结构多样性的原因

蛋白质分子结构多样性可以从以下四个层次加以理解

(1)氨基酸的种类不同,构成的肽链不同。

—□—□—□—□—□—□—

—○—○—○—○—○—○—

(2)氨基酸的数目不同,构成的肽链不同。

—□—□—□—□—□—□—

—□—□—□—□—

(3)氨基酸的排列顺序不同,构成的肽链不同。

—□—○—○—□—○—

—○—□—○—□—○—

(4) 蛋白质的空间结构不同,构成的蛋白质不同。

[特别提醒]两个蛋白质分子结构不同,则这两个蛋白质不是同种蛋白质。但并不是以上这四点同时具备才能确定两个蛋白质分子结构不同,而是只要具备以上其中的一点,这两个蛋白质的分子结构就不同。

【作业】

1.下列关于氨基酸和蛋白质的叙述,错误的是( )

A.甲硫氨酸的R基是—CH2—CH2—S—CH3,则它的分子式是C5H11O2NS

B.酪氨酸几乎不溶于水,而精氨酸易溶于水,这种差异是由R基的不同引起的

C.n个氨基酸共有m个氨基,则这些氨基酸缩合成的一个多肽中的氨基数必为m-n D.甜味肽的分子式为C13H16O5N2,则甜味肽一定是一种二肽

2.下图为某蛋白质的肽链结构示意图(其中数字为氨基酸序号),图2为部分肽链放大图,请据图判断下列叙述中正确的是( )

A.该蛋白质中含有1条肽链124个肽键

B.图2中含有的R基是①②④⑥⑧

C.从图2可推知该肽链至少含有2个游离的羧基

D.该蛋白质合成的场所是在细胞质中核糖体上

3.练习册专题一:6、15

4.(选做)有一条多肽链由12个氨基酸组成,分子式为CxHyNzOwS(z>12,w>13),这条多肽链经过水解后的产物中有5种氨基酸:半胱氨酸(C3H7NO2S)、丙氨酸(C3H6NO2)、天门冬氨酸(C4H7N04)、赖氨酸(C6H14N202)、苯丙氨酸(C9H11NO2)。水解产物中天门冬氨酸的数目是()

A.y+12个 B.z+12个 C.w+13个 D.(w -13)/2个

豆芽中蛋白质含量的测定

豆芽中蛋白质含量的测定 ——考马斯亮蓝G-250染色法 生科2012级3班童雪晨2012506068 一、前言 蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中,起着十分重要的作用。生物的结构和性状都与蛋白质有关。蛋白质还参与基因表达的调节,以及细胞中氧化还原、电子传递、神经传递乃至学习和记忆等多种生命活动过程。在细胞和生物体内各种生物化学反应中起催化作用的酶主要也是蛋白质。许多重要的激素,如胰岛素和胸腺激素等也都是蛋白质。因此,测定蛋白质含量具有重要意义。 二、材料与方法 1、材料 绿豆芽、黄豆芽 2、方法 1) 采用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量,按下表(一)所示取7支试管,依次加入各溶液,反应后立即摇匀,置室温下放置5分钟,然后测各管的OD值,以OD值为纵坐标,浓度值为横坐标绘制标准曲线。 2) 称取绿豆芽、黄豆芽下胚轴各1g,放入研钵中,加少量石英砂和2ml水,研成匀浆,转入离心管,再用水分三次冲洗研钵(每次4ml),均转入同一离心管。等重后3500r/min,离心15min,取上清液转入25ml容量瓶,用水定容(样品提取液)。

3)取0.5ml 样品提取液于试管中,加入考马斯亮蓝G-250染色液5ml ,充分混匀,放置5分钟,测OD 值,记录结果,查曲线,得蛋白质浓度(μg/ml )。 三、结果分析 表(一)制作标准曲线加样表 表(二)标准曲线 编号 1 2 3 4 5 6 黄豆芽 绿豆芽 标准蛋白(ml ) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.5 0.5 水(ml ) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 浓度(mg/ml) O.0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 X X 染色液(ml ) 5 5 5 5 5 5 5 5 OD 值 0.000 0.066 0.297 0.562 0.825 0.967 0.265 0.187

第三章 蛋白质

3.氨基酸和蛋白质 罗勃特 P.威尔逊 3.1 简介 蛋白质约占鱼类干重的65-75%。鱼类不断利用氨基酸形成新的蛋白质或者替代已有的蛋白质。如果日粮中蛋白质含量过多,只有一部分将被用于形成新的蛋白质,其余的将被转变成能量。 最初的氨基酸实验日粮是根据鸡全卵蛋白、大鳞大麻哈鱼卵蛋白和大鳞大麻哈鱼卵黄蛋白来表示的。根据鸡全卵蛋白氨基酸组成配置的氨基酸实验日粮被用来测定大鳞大麻哈鱼氨基酸定性需求。 3.2 蛋白质需求 3.2.1 总需求 3.2.1.1 有鳍鱼 像其它动物一样,鱼类没有真实的蛋白质需求量,但是需要必需氨基酸和非必要或非必需氨基酸之间很好的平衡。测定的几种鱼类幼鱼的蛋白质需求量总结在表格3.1中。由于没有充分考虑下面这些因素:(a)日粮能量含量(b)日粮蛋白质的氨基酸组成(c)日粮蛋白质的消化,所以一些需求量值估计过高。 同其它动物一样,鱼类最理想的日粮蛋白质水平受到能蛋比平衡,氨基酸组成,测试蛋白的消化,和非蛋白能量来源的影响。实验日粮中能量过量会限制饲料的消耗,像其它动物一样,鱼类摄食是为满足能量需求。在许多鱼类中许多饲料原料的可代谢能量还没有被测定,研究者运用生理燃料值来表示蛋白质需求和日粮能量水平的关系。 表3.1中的数据表明鱼类的蛋白质需求量比其它脊椎动物更高(两到四倍)。用饲料摄入量(每千克体重每天摄入蛋白质克数)和活体重增加(每千克活体重所获得的蛋白质克数)表示时,鱼类的日粮蛋白质需求量并不与其它脊椎动物不同。 3.2.1.2 甲壳纲动物 研究的许多甲壳纲动物的蛋白质需求量很高,范围为日粮干重的30%到60%(表3.3)。这些测定的数据有些估计过高了。甲壳纲动物营养研究很复杂。一些生物体在消化之前同样弄碎食物粒子,这可能会增强消化使得饲料消耗测定很

麦胚企业标准

Q/WX 山东望乡食品有限公司企业标准 Q/WX0002S-2010 麦胚糊(片) 2010-4-20发布2010-4-20实施山东望乡食品有限公司发布

前言 本标准全文强制。 根据《中华人民共和国食品安全法》、《食品安全企业标准备案办法》制定本标准。 本标准严格按照GB/T1.1《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》的要求进行编写。本标准由山东望乡食品有限公司提出并起草。 本标准主要起草人:张世文、李芳、于慧君。 本标准自发布之日起有效期限3年,到期复审。

麦胚糊(片) 1 范围 本标准规定了麦胚的术语和定义、分类、技术要求、食品添加剂、生产加工过程卫生要求、检验方法、检验规则、标志、包装、运输与贮存。 本标准适用于以小麦胚芽等为主要原料,添加辅料,经加工制成的粉状或片状食品。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB 191 包装储运图示标志 GB 2760 食品添加剂使用卫生标准 GB 20884 食品添加剂麦芽糊精 GB 5009.3 食品中水分的测定 GB 5009.11 食品中总砷及无机砷的测定 GB 5009.12 食品中铅的测定 GB 5009.22 食品中黄曲霉毒素B1的测定 GB 14771 食品中蛋白质的测定方法 GB 5009.6 食品中脂肪的测定 GB 4789.2 食品卫生微生物学检验菌落总数测定 GB 4789.3 食品卫生微生物学检验大肠菌群测定 GB 4789.4 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验 GB 4789.5 食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 GB 4789.10 食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB 4789.15 食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数 GB 10221 感官检验术语 GB 9683 复合食品包装袋卫生标准 GB 9688 食品包装用聚丙乙烯成型品卫生标准 SB 10145 小麦胚芽(胚片/胚粉) GB 10463 玉米粉 DB13/T 1067 燕麦片 GB 23781 黑芝麻糊 GB 19640 麦片类卫生标准 GB 7718 预包装食品标签通则

饲粮蛋白质水平和棉籽粕取代豆粕对肉牛育肥的影响

饲粮蛋白质水平和棉籽粕取代豆粕对肉牛育肥的影响 作者:荆元强;宋恩亮;成海建;刘晓牧;赵红波;刘桂芬;谭秀文;杨维仁;万发春 作者机构:山东农业大学动物科技学院,泰安271018;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100;山东农业大学动物科技学院,泰安271018;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南250100;山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,济南250100 来源:动物营养学报 ISSN:1006-267X 年:2012 卷:024 期:006 页码:1062-1068 页数:7 中图分类:S823 正文语种:chi 关键词:蛋白质水平;棉籽粕;豆粕;肉牛;育肥 摘要:本试验在满足肉牛营养需要的基础上,采用棉籽粕替代饲粮中的豆粕,形成不同蛋白质水平和成本的饲粮,旨在探讨饲粮蛋白质水平和棉籽粕替代豆粕对肉

不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响

毕业论文 (2011届) 题目:不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能 的影响 学院农学院 专业动物科学 年级 2007 级 学生学号 12007241517 学生姓名眭丹 指导教师张巧娥 2011年5月10日

不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响 摘要 本试验选用30头体况、年龄、胎次相近、健康的荷斯坦奶牛,采用完全随机单位组试验设计,随机分为三组, 每组10头。饲喂三种不同蛋白质水平的日粮, (试验I、II、III组CP分别为 16.7%、 18.6%、 20.6%),来研究对奶牛生产性能的影响。试验结果表明:随着日粮蛋白质水平的增加,奶牛的干物质采食量和产奶量增加,乳脂率和乳蛋白率反而降低,且三组间差异显著(P<0.05);乳糖随日粮蛋白水平的增加而升高(P<0.05),对乳中尿素氮无明显影响(P>0.05)。 关键词: 蛋白质水平产奶量乳成分荷斯坦奶牛

Effects of different dietary protein levels on performance of dairy cows in diet Abstract 30 similar body condition, age, parity, healthy Holstein cows were randomly divided into 3 groups of 10 head in this experiment adopting completely random design. 3 different protein levels in diet(CP 16.7%, 18.6%, 20.6% in experiment I, II III group repectively) were fed to study effects on performance of dairy cows.The results were shown that dry matter intake and milk yields were increased, fat contents and protein contents were decreased cows with dietary protein level was increased, which were significant different in the three groups (P<0.05). Lactose increased significantly (P <0.05), urea nitrogen in milk had no effect (P> 0.05) with increasing dietary protein level. Key words:Different protein levels Milk yields Milk composition Holstein cows

人教版新课标 高考生物一轮复习教案---蛋白质

二、考题规律 蛋白质是生命活动的承担者,功能多样。而多样的功能是由其多变的结构决定的,在复习中对于结构的把握是重点和基础。蛋白质结构部分的知识点还往往会与后面遗传部分的转录和翻译结合在一起出题。本讲内容考查广泛,在多种题型中均有渗透。 三、考向预测 对于蛋白质是生命活动的体现者和承担者的理解需要在本讲内容的学习中完成,以便更准确地解答相关的简答题,理解生命活动的物质基础。在题量较小的综合试卷中,对于物质基础的理解考查是命题的趋势,而相关计算的比重会减小。 蛋白质的消化吸收: 胃蛋白酶、胰蛋白酶——多肽——肠肽酶——氨基酸——吸收(主动运输)——血液运输——组织细胞 一、氨基酸的结构:约20种

结构特点:至少含一个氨基(-NH2)和一个羧基(-COOH),且都有一个氨基和一个羧基与中心碳原子相连;氨基酸不同,R基不同。该特点也是判断组成生物体氨基酸的依据。 二、蛋白质的结构和多样性 (基本组成元素:共有元素是C、H、O、N,很多含P、S,有的含微量元素Fe、Cu、Mn、I、Zn等。) 1. 基本单位氨基酸的连接:(常见考点—相对分子质量的变化、元素的去向、肽键数目、脱水数) 氨基酸在核糖体上以脱水缩合的方式通过肽键(-CO-NH-)连接,形成肽,其连接过程如下图: 多个氨基酸分子缩合而成的多肽呈链状结构,叫肽链。 2. 空间结构:一条或几条肽链通过一定的化学键连接,形成复杂的空间结构。 3. 结构特点-多样性: 组成蛋白质的氨基酸种类不同,数目成百上千,排列次序变化多样,肽链的空间结构千差万别,因此,蛋白质分子的结构具有多样性,这就决定了蛋白质分子功能的多样性。 蛋白质结构多样性是生物多样性的直接原因,生物多样性的根本原因是遗传物质的多样性。

小麦胚芽的功效及营养成分

小麦胚芽的功效及营养成分 随着食品加工业的发展,为方便保存,满足口感,提升卖相,我们平时使用的小麦、大米在加工过程中基本去除了含有营养的胚芽,造成多种营养素流失 小麦胚芽营养价值和全面性远远优于燕麦片,是追求健康人士、素食者均衡营养,富硒高纤的高品质谷物食品。含有丰富的植物优质蛋白、天然维生素E、人体必需氨基酸、不饱和脂肪酸及大量的膳食纤维和钙、铁、锌、硒等营养素。 小麦胚芽中含有钙、钾、镁、铁、锌、铬、硒、磷、锰、铜等多种矿物质和微量元素。为人体所必需,品种比较全面,尤其微量元素硒等较其它食物含量高。这些矿物元素对维持人体健康,特别是对促进儿童的生长发育有重要作用。 小麦胚芽含有大量的膳食纤维,具有解除便秘、降低血脂、降低餐后血糖等功效,以及减肥、排毒之功能。 维生素E是一种极其宝贵的营养素,它具有抗氧化作用、抗癌作用、抗不育功能,以及促进肝内和其它器官内泛醌的形成,在呼吸作用和能量代谢中起着重要的作用。 小麦胚芽蛋白是一种完全蛋白。它含有人体必需的8种氨基酸,而一般谷物中短缺的,能有效促进幼儿生长和发育的。 甾醇具有降低人体血清胆固醇,预防心、脑血管疾病的功能。

无糖羊奶粉的功效 无糖羊粉,可以减轻肠道的消化负担,有利于腹泻的恢复。可以避免奶过敏。 1、健胃整肠,改善营养不良。羊奶脂肪球特别细小,是牛奶的1/3, 营养成分吸收快,消化时间短,对胃肠有改善作用。 2、强健体魄,改善骨质疏松症。羊奶中钙含量是牛奶的1.3倍, 对发育中的消化及亲少年骨骼成长有明显帮助,使其长的更高、更强壮;对预防老年人骨质疏松症有显著的作用 3、养颜美容。羊奶中丰富的上表皮细胞生长因子,可养颜,细白 皮肤;对于皮肤粗糙、干燥角质化之预防有极大助益。 4、帮助大脑发育及智力的发展。羊奶中含有大量的B族维生素, 充足的B族维生素,是脑组织正常维持功能的先决条件,如果缺乏将会影响大脑发育及智力的发展 5、增强免疫力,促进发育。维生素A在人体的代谢中有非常重要 的作用,长期缺乏的孩子容易患呼吸道感染,生长发育受影响。 羊奶中富含丰富的维生素A,可增强免疫力,促进发育。 与牛奶粉相比,羊奶粉的优点 1、羊奶在国际营养学界被称为“奶中之王”,营养更丰富,羊奶 中含有200多种营养物质和生物活性因子,其中蛋白质、矿物质及各种维生素的总含量均高于牛奶。 2、羊奶是乳制品中最接近母乳,营养成分最全、最易被人体吸收 的奶品。它的脂肪颗粒体积为牛奶的1/3,且颗粒均匀,更利于人体消化吸收。 3、免疫球蛋白含量很高,并且特别含有EGF(上皮细胞生长因子),可直接提高人体细胞免疫力。另外羊奶可解除大部分牛奶蛋白引起的过敏症,且羊奶性温,不易上火。 4、利于人体吸收,并且长期饮用羊奶不会引起发胖。羊奶中的维生素及微量元素明显高于牛奶,美国、欧洲的部分国家均把羊奶视为营养佳品,欧洲鲜羊奶的售价是牛奶的7倍。专家建议患有过敏症、胃肠疾病、支气管炎症或身体虚弱的人群以及婴儿更适宜饮用。

一轮复习蛋白质

学案3 生命活动的主要承担者—蛋白质导学案(分两节) 【高考考纲】 蛋白质的结构和功能(Ⅱ) 【复习目标】 1 .说出氨基酸的结构特点,以及蛋白质的形成过程 2 .概述蛋白质的结构和功能 3.认同蛋白质是生命活动的主要承担者 【学习过程】 一、基础自主理解记忆(阅读教材,独立完成) (一)氨基酸的种类、结构 1、说出氨基酸的元素组成、种类 2、写出氨基酸的结构通式、结构特点 (二)氨基酸脱水缩合形成多肽 1、氨基酸形成多肽的方式、场所、形成二肽的过程、肽键的结构怎样表示? 2、过程分析: ①脱水缩合产生的H2O中的H和O分别来自什么? ②一条肽链上至少有几个游离的氨基和游离的羧基,位于何处?—R中的—NH2或—COOH参于肽链的形成吗? (三)蛋白质结构和功能 1、蛋白质的结构层次是怎样的? 2、蛋白质的结构有何特点?①直接原因是?②根本原因是? 3、举例说明蛋白质的功能

二、小组合作讨论提高(听听别人的看法,也许会有不一样的收获) (一)在一条肽链中怎样判断该肽链由哪些氨基酸构成?写一条肽链举例说明。 (二)蛋白质的相关计算 .结合上述自己写的肽链,推导有关蛋白质的计算规律(氨基酸个数为n,氨基酸相对分子 思考:a、当由n个氨基酸形成一环状肽,上述规律会发生怎样的变化? b、氨基酸与相应的DNA及RNA片段中碱基数目之间有何关系? 三、总结反思建构升华(知识网络框架构建) 四、基础小试巩固提高 (一)基础小试 1、下面关于生物体内氨基酸的叙述中正确的是() A .氨基酸是蛋白质的组成单位,是由氨基和羧基组成的 B .每个氨基酸分子都含有一个氨基和一个羧基 C .一个氨基酸的氨基和另一个氨基酸的羧基脱水缩合形成多肽 D .氨基酸是酸碱两性化合物,分子中至少含有一个氨基和一个羧基并且都有一个氨基和一个羧基连接在同一个碳原子上 2、下列不属于高等动物体内蛋白质功能的是() A .构成生物膜的主要成分 B .催化细胞内的化学反应 C .作为细胞代谢的主要能源 D .参与构成细胞核中的染色体

不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响

.. . … 毕业论文 (2011届) 题目:不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能 的影响 学院农学院 专业动物科学 年级2007 级 学生学号 学生眭丹 指导教师巧娥

2011年5月10日 不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响 摘要 本试验选用30头体况、年龄、胎次相近、健康的荷斯坦奶牛,采用完全随机单位组试验设计,随机分为三组, 每组10头。饲喂三种不同蛋白质水平的日粮, (试验I、II、III组CP分别为16.7%、18.6%、20.6%),来研究对奶牛生产性能的影响。试验结果表明:随着日粮蛋白质水平的增加,奶牛的干物质采食量和产奶量增加,乳脂率和乳蛋白率反而降低,且三组间差异显著(P<0.05);乳糖随日粮蛋白水平的增加而升高(P<0.05),对乳中尿素氮无明显影响(P>0.05)。 关键词: 蛋白质水平产奶量乳成分荷斯坦奶牛

Effects of different dietary protein levels on performance of dairy cows in diet Abstract 30 similar body condition, age, parity, healthy Holstein cows were randomly divided into 3 groups of 10 head in this experiment adopting pletely random design. 3 different protein levels in diet(CP 16.7%, 18.6%, 20.6% in experiment I, II III group repectively) were fed to study effects on performance of dairy cows.The results were shown that dry matter intake and milk yields were increased, fat contents and protein contents were decreased cows with dietary protein level was increased, which were significant different in the three groups (P<0.05). Lactose increased significantly (P <0.05), urea nitrogen in milk had no effect (P> 0.05) with increasing dietary protein level.

结构变构和蛋白表达水平

结构变构和蛋白表达水平。 尽管多数研究是结构变异和mRNA表达水平的变化,确定这些涉及到的蛋白质水平如何变化是至关重要的。最近在秀丽隐杆线虫,果蝇和不同的哺乳动物物种中的几项研究,已经通过测量的mRNA和蛋白水平之间的相关性解决了这一问题。这些研究报道mRNA 和蛋白水平总体相关性,尤其是在哺乳动物之间的,其中基因组范围不超过40 %的蛋白质丰度可以通过mRNA的丰度进行说明,虽然翻译率比例增大时或影响这些消耗因素都考虑在内。因此,在mRNA拷贝数的变化所造成的变化不一定是在蛋白水平的相应变化的结果,作为蛋白质水平的转录后调控,翻译控制另外调节,蛋白质折叠和稳定性,以及高阶的调节基因和蛋白质之间的相互作用。在这种不完全相关中,研究所负责的QTL定位蛋白丰度(pqtls)发现了许多基因位点,不是由eQTL映射观察到的。尽管mRNA水平和蛋白表达之间的不完全相关,从eQTL研究结果可以方便建立变异细胞系和有机体的表型结构之间的联系。例如,eQTL映射已链接的乙二醛1(GLO1 )的重复到小鼠品系特异性焦虑行为和结构变体相关eQTLs也已成功连结至代谢性状的小鼠,包括体重和胆固醇水平。 连接结构的变异与表型 桥接结构变体和表型之间的水平差距,需要精确的结构变体的信息,并且要负责观察到识别元件的性状。这尤其对于许多功能元件相交结构变体具有挑战性。 确定结构变异断点和等位基因状态 结构变异经常发生在重复富含序列,最近节段性重复在基因组区域。因此,映射断点可以并发降低信号与噪音比的高通量基因组学技术。此外,结构变异可以产生于复杂的变化,涉及众多断点。巨大的染色体改建,称为染色体变异,其中几十到几百的断点被认为构成一个单一的结构,结构变体戏剧性的形成时,构成这样的复杂性的结构是一个极端的例子。虽然在最初观察几种类型的癌症中,证明类似的事件在种属之间已经呈现。划定的结构变体,包括这种复杂的重排的精细尺度结构,是通过促进配对末端DNA排序进展数据分析的。 除了断点精度,等位基因结构变异状态的知识也是至关重要的。据估计,常见11 %以上的基因座的窝藏,遗传结构变体是多等位基因的改变;即,各基因座进行多个独立或并发的DNA重排事件。在最近复制的基因组区域分配的位点的拷贝数的形式与夹层等结构变异的表型贡献具有相当大的问题。尽管如此,少数情况下反复重复的功能意义已经阐明。例如,在AMY1轨迹,该基因编码唾液淀粉酶的2至10已被检测到,这与蛋白质丰度成比例地关联,并显示与食用淀粉人口特异性的关联。最近开发的计算方法为同源基因的特异性复制基因分型,使用短的高通量测序数据读取也应促进在其他区域的基因组拷贝数状态的特定性状的推理。 映射最小的关键区域 在查明所影响的结构的基因组区域变型中,剩余的挑战是确定内部或周围的结构变体是与功能相关的基因。在所造成的罕见的基因疾病的情况下,递归结构的变异,具有相同的表型,表现为患者的基因组重排的映射,但不同的,部分重叠的变异,被用来确定最小的基因组重叠临界区域。最小的临界区域映射的值一般最大化,具有由重叠的和非相同的断点表型患者的可用性。使用这样的原理有助于描绘了可能是致病的基因组区域,对于观

小麦胚芽中生物活性物质功能及研究现状

小麦胚芽中生物活性物质功能及研究现状 摘要:对小麦胚芽中生物活性物质进行了综述,通过查阅大量今年来的文献资料,重点介绍了小麦胚芽中主要营养物质和生物活性物质,并对其生理功能特性进行了阐述,结果是小麦胚芽中含有丰富的麦胚蛋白、麦胚脂类、麦胚维生素及麦胚矿物质等营养物后和丰T (974-XT,黄酮、VE、谷苗醇、二十八烷醇、亚油酸、亚麻酸、磷脂、胆碱、膳食纤维、谷脆菩肤、麦胚凝集素等生物活性物质),结论是小麦胚芽是一种理想的营养保健食品资源。 关键词:小麦胚芽;生物活性物质;研究现状 小麦是世界上最早栽培植物之一,也是世界上种植最广泛粮食作物,全世界约有35%-40%的人口以小麦作为主要粮食作物。据联合国粮农fao/who数据库统计显示,1996-2005年年均世界小麦收获面积为亿万亩,占谷物收获总面积的%,小麦总产量为亿吨,占谷物总产量的%,小麦收获面积和总产量在谷物中均居首位。据FAO统计,2005年中国小麦种植面积为38992万亩,平均亩产280公斤,总产量为9616万吨,约占全国粮食作物面积的%,占全国粮食总产量的%,是仅次于水稻占第二位重要粮食作物。我国的小麦总产量为世界第一位,年总产量约为亿吨,可以开发利用的小麦胚芽潜藏量高达280-420万吨,目前,小麦胚芽年产量可达3-5万吨。小麦胚芽小麦籽粒3%左右,含有丰富的不饱和脂肪酸、酶和色素,如果将其磨入面粉,不仅会影响面粉色泽,不利于面粉长期储存,有报道称,还会影响面粉烘焙品质。小麦胚芽是小麦籽粒的生命源泉,含有几种主要营养素,如麦胚蛋白、麦胚油脂、麦胚维生素、矿物质等,被营养学家誉为“人类天然营养宝库”。 小麦胚芽生物活性物质功能 综上所述,小麦胚芽的营养价值极高富含多种生物活性物质,是一种理想的营养保健食品源。在我国每年可用于开发利用的小麦胚芽蕴藏量高达28-42亿吨,但小麦胚芽的转化利用的研究起步较晚,大部分胚芽被当作麸皮来处理,宝贵的小麦胚芽资源未能得到充分、合理、有效的利用。因此,加速这一资源的研究开发,生产系列麦胚食品,不仅有着较高的经济效益,更重要的是适应了现代人对营养保健食品的需要,对于缓解我国十分紧缺的蛋白和油脂资源,丰富我国营养、保健与疗效食品的种类,提高我国人民的膳食营养与健康水平有着十分重要的意义。 小麦胚是种子的精华,集天然性、植物性、功能性于一身,具有开发利用价值,应用生物技术、现代生化分理技术和食品加工新技术,走综合利用的路子,重点开发功能性成分,前景将是十分广阔的。只要我们重视小麦胚这一宝贵资源的开发,逐步提高小麦胚芽其深加工产品的产量、质量,就会使之造福于人类、造福于社会。 中共十六大以来三农问题成为我国经济工作的重点,确保粮食安全,粮食生产成为重中之重,小麦的生产一直是党和国家领导人高度关注的问题,正因如此我国小麦生产实现连续四年的丰收增产。十七大再度高度关注三农问题和粮食的安全问题。 尽管如此,2007年下半年,国际社会美元快速贬值,国际机构预计农产品供应紧张,全球农产品价格暴涨,国际小麦价格涨幅最为明显,国内小麦价格也是一波未平,一波又起,小麦和面粉出现短期大幅上涨,小麦加工行业也受到巨大冲击,同时国内经济出现结构性通货膨胀。 为防止全面通货膨胀出现,2007年12月7日新一届中央领导带中央经济工作会议指出要实施从紧的货币政策控制宏观总需求,要着力抓好农业生产,增加粮食供应;同时指出大力发展现代产业体系,加快形成以科技进步和创新为基础的新竞争优势;效遏制高耗能、高排放行业过快增长,淘汰落后生产能力;促进生产要素有序流动和引导产业合理布局,提

不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响

不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响 -标准化文件发布号:(9556-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

毕业论文 ( 2011届) 题目:不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性 能的影响 学院农学院 专业动物科学 年级 2007 级 学生学号 学生姓名眭丹 指导教师张巧娥 2011年5月10日

不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响 摘要 本试验选用30头体况、年龄、胎次相近、健康的荷斯坦奶牛,采用完全随机单位组试验设计,随机分为三组, 每组10头。饲喂三种不同蛋白质水平的日粮, (试验I、II、III组CP分别为 %、 %、 %),来研究对奶牛生产性能的影响。试验结果表明:随着日粮蛋白质水平的增加,奶牛的干物质采食量和产奶量增加,乳脂率和乳蛋白率反而降低,且三组间差异显著(P<);乳糖随日粮蛋白水平的增加而升高(P<),对乳中尿素氮无明显影响(P>)。 关键词: 蛋白质水平产奶量乳成分荷斯坦奶牛

Effects of different dietary protein levels on performance of dairy cows in diet Abstract 30 similar body condition, age, parity, healthy Holstein cows were randomly divided into 3 groups of 10 head in this experiment adopting completely random design. 3 different protein levels in diet(CP %, %, % in experiment I, II III group repectively) were fed to study effects on performance of dairy results were shown that dry matter intake and milk yields were increased, fat contents and protein contents were decreased cows with dietary protein level was increased, which were significant different in the three groups (P<. Lactose increased significantly (P <, urea nitrogen in milk had no effect (P> with increasing dietary protein level. Key words: Different protein levels Milk yields Milk composition Holstein cows

高三生物一轮复习1.3蛋白质教学案新人教版

第3讲生命活动的主要承担者——蛋白质 [考纲要求] 蛋白质的结构和功能(Ⅱ)。 一、氨基酸及其种类 [判一判] 1.在生物体中组成蛋白质的氨基酸约有20种 ( √) 2.分子式中只要有氨基和羧基,就可以判断其为构成生物体的氨基酸 ( ×) 3.评价蛋白质食品营养价值主要依据其必需氨基酸的种类和含量 ( √) 4.每种氨基酸分子都含有一个氨基和一个羧基,且都连在同一个碳原子上 ( ×) 5.各种氨基酸都共有的结构是 ( √) 6.各种氨基酸理化性质不同的原因在于R基的不同 ( √) [巧记] (1)8种必需氨基酸:取两(亮、异亮)册(色)书(苏)本(苯丙)携(缬)家(甲)来(赖)。 (2)氨基酸的结构通式:氨基酸中有个碳,伸出四手向外连,下面连着氢原子,上面顶着R 基团,左手拽的是氨基,右手还把羧基牵。 二、蛋白质的结构及其多样性 1.脱水缩合:一个氨基酸分子的羧基和另一个氨基酸分子的氨基相连接,同时脱去一分子水。 2.二肽的形成: 3.多肽:由多个氨基酸分子缩合而成,含有多个肽键的化合物。

4.结构多样性 (1)组成蛋白质的氨基酸的种类、数目、排列顺序不同。 (2)组成蛋白质的多肽链形成的空间结构不同。 [解惑] 多肽化合物的命名是依据含有的氨基酸的总数,即2个氨基酸形成二肽,3个氨基酸形成三肽。 三、蛋白质的功能 [连一连] [辨析] 酶(a)、激素(b)与蛋白质(c)的关系可用右面图示表示

考点一分析氨基酸及其种类 观察下面的氨基酸结构图示,回答问题:

1.写出图中结构名称:a.氨基,c.羧基。 2.通过比较图中两种氨基酸,写出氨基酸的结构通式: 3.不同的氨基酸取决于R基的不同,图中两种氨基酸的R基分别是b、d(用字母代号表示)。易错警示有关氨基酸组成的2点说明 (1)同时含有一个或多个氨基和羧基的有机酸都属于氨基酸,种类较多。 (2)组成蛋白质的氨基酸中至少有一个氨基和一个羧基,并非只有一个氨基和一个羧基,R 基中可能含有氨基和羧基。 1.(2012·海南卷,1)关于生物体内组成蛋白质的氨基酸的叙述,错误的是( ) A.分子量最大的氨基酸是甘氨酸 B.有些氨基酸不能在人体细胞中合成 C.氨基酸分子之间通过脱水缩合形成肽键 D.不同氨基酸之间的差异是由R基引起的 答案 A

蛋白质表达的性质

蛋白质表达的性质 关键词:大肠杆菌,细胞,试剂,标准物质,北京标准物质网 1.所需要的蛋白表达量如果只是需要少量蛋白,比如筛选一系列点突变体的酶活性,酶学检测可以在大肠杆菌粗提物中进行,采用多数通用表达质粒即可,没有必要花很大精力去优化方案来提高表达量。如果实验蛋白需要量大,就有必要尝试不同宿主载体系统和纯化方法,从中找出大批量表达蛋白的可行方案。外源蛋白水平与生理状态下的内源蛋白相仿,有助于蛋白功能或蛋白相互作用研究。 2.表达蛋白的可溶性在抗体制备时不一定要求蛋白可溶,而研究蛋白功能时可溶性蛋白是关键。利用大肠杆菌表达的融合蛋白常常形成包涵体,相对容易进行纯化,不易被降解。若需要的是可溶性蛋白,可以采用降低复性温度,降低表达水平,改变携带蛋白和尝试不同宿主菌株等方法提高蛋白溶解性。 3.表达蛋白的稳定性在大肠杆菌中表达的外源蛋白尤其是真核蛋白常常稳定性不足。将融合蛋白以包涵体形式表达,或者采用缺失已知蛋白酶的大肠杆菌菌株作为宿主,可减少不稳定蛋白质的降解。由于不同菌株内蛋白酶的水平不同,对于某一特定融合蛋白来说,尝试不同菌株有助于提高蛋白稳定性。 4.蛋白质分子量在哺乳动物细胞中,不加标签的外源蛋白和内源蛋白由于分子量相同在免疫印迹上难以区分,表达融合蛋白有助于两者的区分。一般来说小于5kD或者大于100kD的蛋白表达比较困难。蛋白越小,越容易被内源蛋白水解酶所降解,在这种情况下可以采取融合蛋白表达,在每个单体蛋白之间设计蛋白水解或者是化学断裂位点。如果蛋白较小,可以加入GST、Trx、MBP等较大的标签蛋白可能促进蛋白正确折叠:如果蛋白大于60kD则建议用6×His、HA等较小的标签。对于结构研究清楚的大蛋白可以根据实验目的表达截短蛋白(truncated protemin),如果是为抗体制备,一定要保证截取抗原性较强的部分。 5.是否需要活性蛋白如果蛋白表达的目的仅仅是获得一些制备抗体的材料,就没有必要获得活性蛋白。如果目的蛋白表达是用于功能研究,那么保持或者恢复蛋白的活性是非常重要的,纯化难易相对不重要。如果需要表达具有生物学功能的膜蛋白或分泌性蛋白,例如细胞膜表面受体或细胞外的激素和酶,则更需要利用真核细胞表达。当表达蛋白是用于结构研究,最好是以可溶性蛋白的形式。在不同大肠杆菌菌株尝试表达蛋白,减少体内蛋白异常折叠,尽可能减少体外变性从而保持正常蛋白构象。

一轮复习蛋白质教学设计

2、2生命活动的主要承担者——蛋白质 高二生物组吴红雨 一、教学分析 1、教材分析 “生命活动的主要承担者——蛋白质”是高中生物课程标准人教版必修模块1《分子与细胞》第二章“组成细胞的分子”中第二节内容。本节是在学生已经掌握了细胞中化合物的种类和如何检测生物组织中的蛋白质之后,进行进一步的学习。通过对氨基酸形成蛋白质过程的学习,分析蛋白质多样性的直接原因和根本原因,从而体会生物多样性的原因。结合教材及生活实际分析蛋白质的功能,认同蛋白质是生命活动的主要承担者,为本书其他章的学习及高中生物课程其他模块的学习做铺垫。 2、学情分析 学生在高一年级已经学习了蛋白质的相关内容,明确了蛋白质的基本单位是氨基酸,了解了氨基酸形成蛋白质的过程,并能回答出蛋白质多样性的原因及蛋白质的功能。但是部分学生对脱水缩合反应的原理理解不到位,导致相关计算问题在进行解答时出现障碍。虽然能举例说明蛋白质的功能,但因掌握不全面,不能从根本上认同蛋白质是生命活动的主要承担者。针对这种现状,本节课重在构建蛋白质形成过程的知识网络,解决相关问题,提升学生的学习能力,以满足学生自身发展的需要。 3、教学条件 PPT课件 二、教学目标 1、知识与技能: 说明氨基酸的结构特点,以及氨基酸形成蛋白质的过程,概述蛋白质的结构和功能。 2、过程与方法: 通过解决蛋白质的相关计算题,提升学生的解题能力。 3、情感态度价值观: 认同蛋白质是生命活动的主要承担者。 三、教学策略: 采用合作学习教学模式, PPT课件辅助教学。 完成练习册预习填空,学生对蛋白质的相关内容并进行初步独立复习。课上指导学生阅读教材,设计环环相扣的为题,引领学生构建知识网络,使学生形成清晰的知识网络。先独立完成典型例题,然后小组合作,最后个别展示,提升学生的解题能力,突破难点。 四、重点、难点: 1、氨基酸形成蛋白质的过程。 2、蛋白质的相关计算。 五、教学设计思路(一)创设情境: 展示大头娃娃的图片并介绍成因,激发学习兴趣。引导学生思考并回答相应思考题,导入复习。 (二)复习过程 1、蛋白质的结构 (指导学生阅读教材,帮助学生构建知识网络,使学生形成清晰的知识体系。) (1)元素组成:C、H、O、N等,有的含有S、P及微量元素Fe等。 (2)基本单位:氨基酸 (结合教材,学生分析氨基酸的结构特点并进行辨析,提升对知识的理解能力。) (3)脱水缩合反应 (教师播放多媒体课件,帮助学生进一步理解脱水缩合反应。习题训练,提升对知识的应用能力。)(4)空间结构:蛋白质分子 (结合教材,指导学生分析蛋白质分子多样性的直接原因和根本原因,强化对所学知识的综合运用。) 2、蛋白质的功能 ①构成细胞和生物体:肌肉、毛发等②催化作用:绝大多数酶 ③运输功能:血红蛋白、载体蛋白等④信息传递和调节:胰岛素、糖蛋白等 ⑤免疫功能:抗体 (根据教材内容,指导学生总结蛋白质的功能,并进一步举例分析,认同蛋白质是生命活动的主要承者。) 3、蛋白质的相关计算 (引导学生总结蛋白质形成过程中的相关计算规律,实现知识的升华,进而帮助学生解题。) (1)蛋白质中肽键及相对分子质量的计算 a、蛋白质中的肽键数=脱去水分子数=水解消耗的水分子数=氨基酸分子数-链数 b、蛋白质的相对分子质量=氨基酸分子数*氨基酸的平均相对分子质量-失水量(18*脱去的水分子数) c、一条肽链至少含有一个游离的氨基和一个游离的羧基 (2)蛋白质中二硫键形成过程 (3)蛋白质中原子数目计算 氧原子数=各氨基酸中氧原子的总数-脱去的水分子数 氮原子数=肽链数+肽键数+R基上的氮原子数=各氨基酸中氮原子的总数 (学生根据所学内容,独立完成练习册的几道小题,后小组讨论,合作学习,最后个别展示,总结解题方法,提升学生的解题能力,突破难点。) (四)课堂小结:本节课的重点内容是氨基酸形成蛋白质的过程及蛋白质的相关计算。

提取麦胚的意义及工艺控制

2012年第4期 提取麦胚的意义及工艺控制 刘胜强 成润面业食品有限公司河北黄骅061100中图分类号:TS210.9文献标识码:A文章编号:1674-5280(2012)04-0029-01 1麦胚对产品质量的影响 麦胚含有10%的脂肪,其中不饱和脂肪酸占80 %以上,容易氧化酸败变质,不利于面粉的储存,影响其保质期。特别在高温高湿的夏季,如操作管理不当,将造成产品品质下降,影响其使用及食用性能。 1)麦胚对面粉成品的影响 ①对馒头类食品的影响。由于麦胚中脂肪与水和面筋不相溶的特性,阻碍面筋的连接,削弱面筋结合强度,从而降低面筋质量,造成馒头体积偏小,口感差。 ②对面条的影响。没咬劲,成品贮藏时间短,夏季出现异味(哈拉味)等质量问题。 ③对面包的影响。含麦胚的面粉烤制面包,烘焙品质差。 2)麦胚对生产工艺的影响 制粉工艺流程中3B去清粉机的物料灰分含量高,最终的筛下物和筛上物灰分也是较高的,这些物料中含有油性的麦胚,会逐渐糊堵筛孔,影响清粉效果和制粉工艺性能。同样,其他工艺位置如处理不当,也将影响分级筛和粉筛的筛分效果,从而造成整体制粉性能(出粉率)下降。 2麦胚的提取有利于提高产品附加值 据有关资料,麦胚中蛋白质含量远比肉、蛋、乳类蛋白质含量还要高;麦胚中的优质脂肪、多种维生素和矿物质,对人体有益;还可以用作动物的优质高蛋白饲料。麦胚用作食品工业、饲料工业或医药工业的优质原料,可以提升小麦制粉的附加值。3一般采用的麦胚提取方法 1)工艺配置 设置尾磨。麦胚大部分来自1B、2B粗麦心去清粉机的筛下物和底层筛格的筛上物。该物料大都去1S,部分去1MC研磨,为使麦胚较好的展开,建议1S、1MC用挤压性能较好的光辊。其次,3B去清粉机物料的筛下物,也含有少量麦胚,也采用光辊处理,将这类物料筛分分级后合并去1T集中处理,提取麦胚。1T采用光辊、小速差(80~90r/min)、紧轧距、低流量、磨下撞击机采用轻撞或去掉不用,以减小麦胚破损。在心磨系统的前中路,顺序后推的麦心中会有少量被切碎的麦胚,被送入2T,也可以在2T进行提胚。 2)操作管理 ①1B轧距松紧对麦胚的提取至关重要,若1B 过紧,麦胚被首先轧碎而难以分离,适当放稀1B、2B 粗筛筛网,一般为18~22W。②1T轧距的操作,以将麦胚压成片状又不被破碎为宜。1T筛网配备一般为3格18~22W筛网可提取较纯净麦胚。③清粉机第一层最后一段配制16~18W,减少去3BF物料流量,麦胚多去1S处理。④小麦水分调节对提取麦胚有一定影响。入磨麦水分要适当,不宜太干,最好设置喷雾着水工艺,增强麦胚的韧性,使其尽量分离出来。一般较纯净麦胚提取率为0.3%~0.5%。 参考文献 [1]周惠明,陈正行.小麦制粉与综合利用[M].中国轻工业出版社,2001 [2]顾尧臣.现代粮食加工技术[M].中国轻工业出版社,2004 收稿日期:2012-04-09 作者简介:刘胜强,男,制粉专业,从事制粉工艺设计研究及面粉厂技术服务。深度加工及综合利用 现代面粉工业Modern Flour Milling Industry 29

蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB )

蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB ) 标签: western-blot 免疫印迹 蛋白质 蛋白质免疫印迹可应用于:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒 裂解液 PBS SDS上样缓冲液 电泳缓冲液 转移缓冲液 丽春红染液 TBST TBS 洗脱抗体缓冲液 抗体 仪器、耗材 电泳仪移液器脱色摇床显影仪 实验方法原理 Western免疫印迹,是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,探针是抗体,显色用标记的二抗。 经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

实验步骤 一、试剂准备 1. SDS-PAGE试剂:见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。 2. 匀浆缓冲液:1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml;10%SDS 6.0 ml;β-巯基乙醇 0.2 ml;ddH2O 2.8 ml。 3. 转膜缓冲液:甘氨酸 2.9 g;Tris 5.8 g;SDS 0.37 g;甲醇200 ml;加ddH2O定容至1000 ml。 4. 0.01 M PBS(pH7.4):NaCl 8.0 g;KCl 0.2 g;Na2HPO4 1.44 g;KH2PO40.24 g;加ddH2O至1000 ml。 5. 膜染色液:考马斯亮兰 0.2 g;甲醇80 ml;乙酸2 ml;ddH2O118 ml。包被液(5%脱脂奶粉,现配):脱脂奶粉1.0 g 溶于20 ml的0.01 M PBS中。 6. 显色液:DAB 6.0 mg;0.01 M PBS 10.0 ml;硫酸镍胺 0.1 ml;H202 1.0 ul。 二、蛋白样品制备 1. 单层贴壁细胞总蛋白的提取 (1) 倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走)。 (2) 每瓶细胞加3 ml 4℃预冷的PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放轻轻摇动1 min洗涤细胞,然后弃去洗液。重复以上操作两次,共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。 (3)按1ml裂解液加10 ul PMSF(100 mM),摇匀置于冰上。(PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。)

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