微生物检验实验室基本要求知识点
微生物检验主要知识点总结
微生物检验主要知识点总结一、微生物检验的概念微生物检验是指利用现代生物学技术手段检验和鉴定食品、饮用水、药品、环境等物品中微生物的种类和数量的一种实验室检验方法。
微生物检验的主要目的是为了评估物品中微生物的数量及种类是否达到卫生标准，以保障人们的健康和安全。
二、微生物检验的重要性1. 保障公共卫生：微生物检验可以及时发现食品、饮用水、药品等物品中存在的微生物污染，有针对性地采取相应的措施，从而保障公共卫生。
2. 保障产品质量：微生物检验可以帮助企业检测产品是否受到微生物污染，保障产品的质量和安全。
3. 疾病预防：微生物检验可以检测出病原微生物，为疾病的预防和控制提供科学依据。
三、微生物检验的主要流程1. 采样：根据不同的检验对象，选择合适的采样方法和设备进行样品采集。
2. 样品处理：将采集的样品进行处理，以提取出微生物进行检测。
3. 细菌培养：将样品中的微生物分离培养，以获取单一的微生物种类。
4. 微生物鉴定：通过形态学、生理生化特性、分子生物学等方法对微生物进行鉴定。
5. 微生物计数：对样品中的微生物进行计数或定量。
6. 结果分析：根据检验结果，评估样品是否符合相关的卫生标准。
四、微生物检验中的常用方法1. 培养法：将样品涂在含有营养物质的培养基上，利用条件恰当的培养环境，使样品中的微生物进行生长。
2. 影像法：通过显微镜观察培养好的微生物，观察其形态特征，进行鉴定。
3. 生化鉴定法：根据微生物的代谢过程，通过一系列的生化反应，鉴别微生物属种。
4. 分子生物学方法：利用PCR、DNA测序等技术，对微生物进行鉴定。
五、微生物检验中的常见问题1. 选择合适的检验方法：不同的微生物污染可能需要不同的检测方法，需根据具体情况选择合适的方法。
2. 样品的处理和保存：样品的处理和保存条件对检验结果有着重要的影响，需要严格按照标准操作。
3. 检验结果的分析和判断：检验结果可能存在假阳性、假阴性等情况，需要结合其他信息进行分析和判断。
食品微生物实验室的基本要求与管理
➢ 在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用时 间应≥30min，室内湿度＜20℃或＞40℃、 相对湿度＞60%时，应适当延长照射时间。
➢ 用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受 到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射 剂量。
➢ 人员在关闭紫外灯后至少30min方可入内操 作。
➢ 按照ISO18953的规定，评价紫外线的消毒与 杀菌效果。
实验室废弃物的处理
➢ 对于培养物及其污染的物品(如培养基、测 试条、生物鉴定管、血清学鉴定用玻片、 用过的移液器吸头、细菌培养皿、注射器 等)，应使用适当浓度的自配或商业液体消 毒剂对其处理一定时间，或121℃高压灭菌 至少30min，或其他有效处理措施。将处 理物倒入特殊标志的垃圾袋内，直接送到 指定地点。
二级生物安全防护水平(BSL－2）
二级生物安全防护水平是指实验室的操 作、安全设备、和设施适用于操作我国 的第三类（少量二类）危害的致病微生 物。
二级生物安全防护水平适合于从未知病 原的人身上取血、体液和组织的检测和 研究（可能含有高致病微生物）。
BSL－2：实验室设施(二级屏障)
BSL-2实验室
≥5
≤3,500 0
≤350,000 ≤2,000
≤3,500,000 ≤20,000
≤10000000
≤61800
含菌浓度
沉降菌 (Φcm碟 0.5h）
浮游菌 (个／m3)
≤1
≤5
≤3
≤100
≤10
≤500
BSL-2实验室的主要技术指标
级别 洁净 度级 别
一级 _
最小换 气次数 (次/h)
可开窗
生物安全标识
生物安全柜
注意乳胶手套的使用
风淋室
食品微生物实验室的基本要求
培养基与试剂的消毒与灭菌
培养基通常应采用高压温热灭菌法，121℃灭 菌15min，特殊培养基按使用者的特殊要求进 行灭菌(如含糖培养基，115 ℃灭菌20min)。
部分培养基(如嗜盐琼脂培养基、胆硫乳培养 基等)，只能煮沸灭菌。
对热敏感的培养基或添加物质，应采用膜过 滤的方法过滤除菌。 即用型培养基不需灭菌，应参见相关国际标 准或供应商使用说明书，直接使用。
杆 菌
++ ++
病 毒
+
次 氯 酸 盐 乙 醇 甲 醛 戊 二 醛 碘 载 体
+
++ +
++ +
++ +
+
C
+
+
+
++ + ++ + ++ +
++ + ++ + ++ + ++ +
++ + ++ + ++ + ++ +
++ + ++ + ++ + ++ +
++ +a ++ +b ++ +
+ + +
V + +
在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用时 间应≥30min，室内湿度＜20℃或＞40℃、 相对湿度＞60%时，应适当延长照射时间。 用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受 到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射 剂量。
微生物实验室安全及操作规定
微生物实验室安全及操作规定微生物实验室是进行微生物研究和实验的场所，涉及到许多可能对人体健康和环境造成潜在危害的生物体。
为了确保实验室的安全和有序进行，制定一套严格的安全及操作规定非常重要。
以下是微生物实验室的安全及操作规定：1.人员要求：1.1所有进入实验室的人员必须接受相关的安全培训，并经过实验室主管的指导。
1.2每位进入实验室的人员都必须佩戴适当的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩和护目镜。
1.3禁止将个人物品进入实验室，如食品、饮料等。
1.4禁止在实验室内吸烟、喝水和进食。
2.实验室设施要求：2.1实验室必须保持干净、整洁，没有杂物和危险品堆放。
2.2所有实验室设施和仪器必须与电源、水源和气源保持正常连接。
2.3实验室必须配备足够数量的紫外灯，以确保空气和工作台的消毒。
3.实验操作要求：3.1所有实验操作必须在实验室主管或经验丰富的实验人员的监督下进行。
3.2对于具有较强毒性或传染性的微生物，必须在生物安全柜下进行操作。
3.3实验操作过程中必须佩戴个人防护装备，并遵守操作规程，包括正确使用试剂和设备。
3.4每次实验操作结束后，必须彻底清洁工作台和设备，并将所有使用过的材料和废弃物以规定的方式处理。
4.废物处理要求：4.1所有实验室生成的废物必须按照相关法规和规定进行分类、存储和处理。
4.2对于有害废物，必须妥善包装，并交由专业的废物处理公司处理。
4.3废液和废液媒介物必须通过化学处理或高温消毒的方式进行消毒，然后排入指定的排水系统。
5.灭火和紧急应急预案：5.1实验室必须配备适当的消防设备，包括灭火器、消防栓等，以应对可能发生的火灾情况。
5.2实验室必须制定并实施紧急应急预案，包括火灾、泄漏、中毒等事故的处理方法，所有实验人员必须了解并熟悉这些应急预案。
6.定期检查和维护：6.1实验室主管必须定期对实验室设施和仪器进行检查和维护，确保其正常运行和安全使用。
6.2实验室主管必须定期检查和更新所有安全设备和个人防护装备，确保其可靠性和完整性。
食品厂微生物实验室基本要求
食品厂微生物实验室基本要求一.选址：1.实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道；2.实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离；3.实验室应选择在方便扦样与检验，距离车间较近的工作场所。
二.结构和布局：根据生产实际需要，一般工厂应设置细菌与理化检验兼有的综合实验室，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室。
1.办公室2.理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并）①理化分析室（兼作感观检验室）②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器）3．细菌实验室：①细菌检验操作室；②无菌室；③培养基制作室；④洗涤消毒室；一般布局要求如下：1.办公室：办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。
2.细菌检验操作室（常规操作）细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。
对实验台的要求：a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m；b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。
c.实验台两侧安装小盆与水龙头；d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座；e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜。
3.无菌室：无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境，无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。
为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局：a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内；b.与操作室用两道缓冲间隔开；c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏；d.无菌室内设有实验台中央（实验台与边台皆可），紫外灯距实验台面要小于1.5m；e.无菌室与操作室之间设有双层窗构成小通道。
4.培养基制作室：培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品柜。
食品中微生物的检验—微生物检验实验室基本要求(食品微生物控制技术课件)
7、载玻片和盖玻片的清洗
用过的载玻片和盖玻片如有香柏 油，要先擦去香柏油或在二甲苯内 摇晃几次，使油垢溶解； 再在肥皂水中煮沸5-10min，用软 布或脱脂棉擦拭，立即用自来水冲 洗； 然后在稀洗液中浸泡0.5-2h，自来 水冲洗； 最后用蒸馏水换洗几次，晾干后 浸于95%乙醇中保存备用。
低倍物镜:指1×~6×， NA值为0.04~0.15。
高倍物镜:指25×~63×， NA值为0.35~0.95。
中倍物镜:指6×~25×， NA值为0.15~0.40。
油浸物镜:指90×~100×， NA值为1.25~1.40。
1、光学显微镜的结构
（2）显微镜的光学系统
目镜பைடு நூலகம்作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像
8、滴瓶
（1）普通滴瓶 滴瓶的规格大小不等，分 为棕色和无色两种。用来 盛放各种染色剂、试剂和 生理盐水等。棕色瓶主要 盛放需要避光保存的试剂 ，如碘液等。
8、滴瓶 （2）双层滴瓶
由内外两个玻璃瓶组成，内层 为小的上粗下细的圆柱瓶，用 于盛放香柏油，供油镜头观察 微生物时使用，外层为锥形瓶 ，用于盛放二甲苯，供擦净油 镜头时使用。
1、光学显微镜的结构
（2）显微镜的光学系统
反光镜：在镜座上装有反光镜，可以将投射在它上面
a
的自然光反射到聚光器透镜的中央，照明标本。新式 显微镜镜座上装有光源，并有电流调节螺旋，可通过
调节电流大小调节光照强度。
聚光器：聚光器在载物台下面，由聚光透镜、虹彩光圈
b
和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的
食品微生物检测实验室要求
食品微生物检测实验室要求第一篇：食品微生物检测实验室要求自来水水池至少有两个，工作台，药品试剂柜，超净工作台（无菌室），灭菌锅，培养箱，冰箱，干燥箱，电子天平，显微镜，平皿，试管，三角瓶等玻璃器皿。
这些都是必备基本设备，只要能摆放的下就可以。
一、微生物实验室设计微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。
这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。
二、微生物实验室基本要求（一）准备室准备室用于配制培养基和样品处理等。
室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。
（二）洗涤室洗涤室用于洗刷器皿等。
由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。
因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。
室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。
（三）灭菌室灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。
（四）无菌室无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。
在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。
在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。
1.无菌室的设置无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。
其基本要求有以下几（1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。
房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。
最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。
（2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。
（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。
食品卫生微生物检验实验室操作要求
食品卫生微生物检验实验室操作要求食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。
一、无菌操作要求二、无菌间使用要求三、消毒灭菌要求四、有毒有菌污物处理要求五、培养基制备要求六、样品采集及处理要求七、样品检验、记录和报告的要求一、无菌操作要求1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。
3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、无菌间使用要求1. 无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。
2. 无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。
3. 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。
食品厂微生物实验室基本要求
食品厂微生物实验室基本要求一.选址：1.实验室应选择在清洁安静的场所，远离生活区，锅炉房与交通要道；2.实验室应选择在光线充足，通风良好的场所，要与生产加工车间有一定距离；3.实验室应选择在方便扦样与检验，距离车间较近的工作场所。
二.结构和布局：根据生产实际需要，一般工厂应设置细菌与理化检验兼有的综合实验室，主要包括以下三大部分：细菌实验室、理化实验室、办公室。
1.办公室2.理化分析实验室：（或者和细菌检验操作室合并）①理化分析室（兼作感观检验室）②仪器室（兼放细菌室显微镜等少量仪器）3．细菌实验室：①细菌检验操作室；②无菌室；③培养基制作室；④洗涤消毒室；一般布局要求如下：1.办公室：办公室是化验人员进行原始记录等各项工作的场所，是与非化验室人员交往较多的场所，因此，应设在整体综合化验室的最外层，只需有桌、椅等简单设施即可。
2.细菌检验操作室（常规操作）细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台。
对实验台的要求：a.实验台面积一般不小于2.4×1.3m；b.实验台位置应在实验室中心位置，要有充足光线；也可以做边台。
c.实验台两侧安装小盆与水龙头；d.实验台中间设置试剂架，架上装有日光灯与插座；e.实验台材料要以耐热、耐酸碱为宜。
3.无菌室：无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境，无菌室是处理样品和接种培养的主要工作间，应与细菌检验操作室紧密相连。
为满足无菌室无菌要求，无菌间应满足以下布局：a.入口避开走廊，设在细菌检验操作室内；b.与操作室用两道缓冲间隔开；c.无菌室与缓冲间均装有紫外灯，要求每3平米安装30ｗ紫外灯一盏；d.无菌室内设有实验台中央（实验台与边台皆可），紫外灯距实验台面要小于1.5m；e.无菌室与操作室之间设有双层窗构成小通道。
4.培养基制作室：培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所，其主要设备应为边台与药品柜。
临床微生物检验知识点
临床微生物检验知识点临床微生物检验是通过对临床样本进行微生物学检验，利用各种实验方法和技术手段，对病原微生物进行鉴定、分离、培养和药敏试验，从而帮助医生进行准确诊断和合理治疗的一项重要检测技术。
以下是一些临床微生物检验的知识点。
1.微生物的鉴定：通过观察病原微生物的形态特征、生理生化指标、生物学特征等，进行鉴定。
常用的方法包括显微镜观察、革兰染色、培养特性观察等。
2.微生物的分离：将样本中的微生物分离出来，使其能够单独生长并进行后续的检验和鉴定。
常用的方法包括涂布法、稀释涂布法、过滤法等。
3.微生物的培养：将分离后的微生物进行培养，使其能够增殖形成纯种，并提供足够的数量用于进一步检验。
常用的培养基包括富养基、选择性富养基、增菌富养基等。
4.微生物的药敏试验：通过对分离的病原微生物进行不同抗菌药物的敏感性试验，确定该微生物对抗菌药物的敏感性和抗药性。
常用的方法有纸片法、扩散法、微量稀释法等。
5.微生物的快速检测方法：为了达到更快速、准确的临床微生物检测结果，目前发展了许多快速检测方法，如PCR技术、基因测序技术、质谱技术等。
6.微生物的标本采集和保存：正确的标本采集对于临床微生物检验结果的准确性和可靠性至关重要。
常见的标本有血液、尿液、痰液、脑脊液、伤口分泌物等。
标本采集后应存放在适当的条件下，以避免微生物的生长和变质。
7.常见病原微生物的检验：临床微生物检验主要涉及到常见的病原微生物，如细菌、真菌、病毒和寄生虫等。
对于每种病原微生物的检验方法和操作要点有所不同。
8.质量控制：临床微生物检验对质量控制要求较高，包括内、外质控。
内质控主要通过引入质控菌株进行培养和药敏试验等操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
外质控则是通过参加各种质量评估项目来衡量实验室的检测质量。
在临床微生物检验过程中，需要严格遵守相关的操作规范和质量控制要求，以确保检验结果的准确性和可靠性。
临床医生在接到微生物检测结果后，应结合临床病情和患者的病史等信息，合理解读检验结果，并进行科学的诊断和治疗。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
病毒是一类体积微小、结构简单、具有严格的寄生于活细胞的微小生物，它们具有下列几种基本特征：1、病毒的基本结构是由核酸（基因组）与蛋白质组成，由DNA或RNA组成核心，外有一蛋白外壳（核壳），有些病毒在核壳外面另有一层脂蛋白组成的包膜包围着。
2、病毒只在活细胞中增殖，因为病毒缺乏完整细胞器等必要装置，所以必须依赖宿主细胞提供高分子合成装置和能量。
3、病毒非常微小，无细胞结构，绝大多数不能用光学显微镜检查，而必须用电子显微镜才能察见。
核酸化学：DNA是脱氧核糖核酸的英文缩写。
RNA与DNA差别在核糖2' 位带有一个羟基。
DNA ①DNA起储存遗传信息作用，并以核苷酸排列顺序形式储存遗传信息。
②由4种核苷酸组成DNA分子，由碱基互补维持DNA双螺旋结构。
③在动植物、细菌、真菌中都含有DNA，但在病毒中（非细胞型微生物）不一定含DNA。
④DNA为长丝状分子互相纠缠，其溶液十分粘稠。
⑤它对紫外线有最强的吸收，通常用260nm波长测DNA溶液浓度，它在近中性环境中带负电核，DNA变性后OD值会升高。
⑥因DNA不溶于乙醇，常用二倍量沉淀DNA⑦在变性温度时，它的粘性突然降低。
⑧淬火是为了保持DNA单链状态。
DNA变性后溶液慢慢冷却，DNA会自动恢复双螺旋结构。
说法错误的：（1）DNA和RNA的化学结构碱基G与C通过2对氢键配对构成DNA分子说法错误的。
（2）与DNA分子相比，RNA分子难水解的看法也不对。
（3）许多质粒可在宿主之间进行转移的说法是不对的。
形状：（1）TRNA二级结构呈三草形。
（2）在细胞内RNA分子中rRNA占比例最大。
（3）DNA二级结构中呈左手双螺旋的是Z构象。
DNA结构、性质：在真菌中网崎片段一般为100～200核苷酸。
噬菌体核酸最常见的是双链线状DNA。
反式作用因子具有的DNA识别或DNA结合域，主要有螺旋/ 转折/ 螺旋（T/H/T ）, 锌指结构，碱性- 亮氨酸拉链（bZIP），碱性- 螺旋/ 环/ 螺旋（bH/L/H ）。
真核生物中的瑞粒酶是由RNA和蛋白质构成的。
一般真核生物染色体上有5种主要的组蛋白，其中亲和力最强的两种是H3 H4 。
DNA的复制和修复：（1）细胞每分裂一次，染色体DNA就合成一次，新DNA是按原DNA分子合成。
（2）DNA分子拆（ca）开成两条链，依每一条单链合成一条新单链，成为半保留复制。
（3）在合成DNA时限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。
（4）DNA多聚酶只能结合在一长段DNA单链的一小段局部双链结构上，才能顺利开始DNA合成。
（5）在DNA合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3，末端的羟基上。
（6）在合成发生错误时，DNA多聚酶会切除错误核苷酸，在那个位置上重新加一个正确核苷酸。
（7）在人工合成DNA时，只加一种或两种三磷酸单核苷酸，那么合成就会停止在缺失的核苷酸位置上。
在大肠菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶是DNA聚合酶Ⅰ。
DNA三个终止密码子分别是UAA、UAG、UGA。
在大肠菌中DNA复制最主要的DNA聚合酶是DNA聚合酶Ⅲ。
该酶的核心聚合酶中，具有3，- 5 ，外切酶活性的亚基是￡在体内染色DNA复制时必须有RNA引物。
在哺（bu）乳动物细胞中负责合成线粒体DNA是DNA聚合酶r 。
RNA酶Tl 可特异地作用于嘌呤核苷酸3，端磷酸并切割与相邻核苷酸相连的磷酸二酯键。
体内DNA复制与体外PCR不同的是引发酶参与。
与体内DNA复制不相关酶是反转录酶。
在细胞内DNA合成正常进行是RecA蛋白，而RecA蛋白不具有蛋白酶活性。
在大肠菌DNA聚合酶Ⅰklenow 片段没有5‘- 3 ‘外切酶活性。
DNA修复过程中尿嘧啶糖基酶系统不包括Sl 核酸酶。
在逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具备的。
在逆转录酶的最终产物双链DNA的长度较正链RNA稍长。
转录：在生物体内，RNA合成过程称为转录。
它（RNA）是按照储存在DNA上遗传信息合成。
合成RNA时DNA双链也要解旋，解旋部位称启动子。
去掉RNA分子5，末端的磷酸，不起合成酶功能的作用。
在刺激点突变，改变某些基因功能与DNA向RNA 转移无直接关系（？）（1）大肠菌的RNA聚合酶由5 幼饔谩￡（2 ￡（3）RNA聚合酶Ⅰ主要是转录rRNA（构成核糖体骨架的是rRNA）。
Prt-mRNA内含子的5，- 末端一般是G U。
（4）RNA聚合酶Ⅱ主要是转录hnRNA。
在真核基因启动子近侧序列元件中，对转录起点定位起关键作用的是TATA盒。
（5）放线菌素D能抑制DNA转录。
编码核糖体RNA的基因是一种中度重复序列的DNA序列。
翻译：在合成各种不同RNA中：（1）tRNA具有搬运氨基酸功能。
构成核糖体骨架的是rRNA。
mRNA直接决定蛋白质的结构。
（2）合成蛋白质需4种核苷酸，排列组成遗传信息，然后转换成20种氨基酸，组成遗传信息称为翻译。
（3）3个核苷酸排列顺序代表一种氨基酸密码，表示蛋白质合成开始的密码有一种。
（4）在细菌里，依靠rRNA和mRN之A 间一段互补序列能发现蛋白质合成开始的位置。
（5）在核糖体上，有两个位置上暴露出mRN（A 直接决定蛋白质的结构）分子相邻的两个密码子，当蛋白质合成进行到没有携带任何一种氨基酸tRNA（具有搬运功能）与其对应，这说明合成蛋白质结束，并已开始同一种蛋白质分子的合成。
（6）合成蛋白质后，决定其空间结构的是蛋白质的氨基酸排列顺序确定后，就能自动折叠卷曲成一定的空间形状。
（7）在原核生物核糖体是由16 SrRNA、23 SrRNA、5 SrRNA 组成，在真核生物核糖体的五种主要的组蛋白中，H1在进化中最不保守。
基因表达调空：（1）氯霉素可与核糖体50S亚基结合并抑制蛋白质合成。
（2）在基因5，上游基因内或其3，下游序列中存在，能提高同一条DNA链上靶基因转录速率的遗传控制元件是增强子。
（3）乳糖操纵（zong）子中结构基因是LacA、LacY、LacZ。
遗传重组：转座子的功能有（1）促进染色体重排（2）促进基因重复（3）促进基因扩增（4）造成缺失突变在大肠遗传重组中，同源重组需RecA蛋白质。
一、核酸提取、纯化、浓缩1. 用煮沸法从表达内切酶A的大肠菌小量制备质粒时不能省略酚- 氯仿抽提。
2. 用煮沸法制备质粒所用溶菌酶液是用TrisCL 配制的。
3. 用乙醇沉淀溶于SDS中RNA时，要避免用乙酸钾。
4. 小量制备DNA时不被限制酶切开，应用酚- 氯仿抽提。
5. 用异丙醇沉淀核酸与用乙醇相比，最明显优点是可减少溶液体积。
1、质粒DNA提取：在用碱裂解法少量提取质粒DNA时，在缓冲液（Ⅰ液）中不含SDS。
多数质粒在自然状态下是环状链DNA。
质粒DNA纯化方法有：①离子交换分析；②聚乙二醇分级沉淀；③二凝胶过滤层析；④氯化铯（se）- 溴化乙锭梯度平衡离心。
质粒具备有复制起点、抗生素抗性基因、有多种限制酶的单一切点、有较高的拷贝数。
2、NA凝胶电泳：要使大于2Kb的DNA片段在凝胶电泳中分辨率达最大，其电压不应超过5V/cm。
在电泳中不同构象DNA泳动率通常是：超螺旋＞线性＞切口环状。
二、PCR扩增技术：PCR反应中变性、延伸温度通常是：95℃、72℃。
引物的Tm值估算每个A或T加2℃。
在PCR反应中每一种dNTP的浓度通常是200umol/L ，在PCR反应中经n次循环后理论上，DNA链的扩增数目是2n倍。
在PCR反应中引物只与靶序列的相应部分结合的说法是错误的。
再此（PCR扩增技术）反应中矿物油不是必需的，用于扩增未知序列的PCR是反向PCR。
不对称PCR法专用于制备单链DNA的扩增。
在PCR反应DNA碱基错配率较高，原因是TaqDNA聚合酶缺乏3' - 5 ，外切酶活性。
PCR反应中的引物是DNA。
反应体系中Taq酶过多及引物过多都可引起非靶序列扩增。
三、寡核苷酸探针合成、放射标记、杂交标记合成寡核苷酸时dNTP的浓度不应低于1umol/L 。
探针是一段带标记的单链DNA，双链DNA，cDNA，单链RNA。
杂交液的成分与杂交温度间的关系正确的是甲酰胺42℃，水68℃。
标记探针的最有效简单方法是体外转录法。
标记双链DNA的3，端时，常用T4噬菌体DNA聚合酶，而不是大肠菌DNA聚合酶Ⅰklenow片段，主要是因为3'- 5 ，外切酶活性高。
Western blotting 所用探针一般是Ab。
Southen blotting 一般是用于DNA分子的杂交技术。
在核酸分子杂交技术基础之上又发展了一系列检测DNA和RNA的技术，如Southen blotting 、Western blotting 、Dot blotting 和菌落杂交。
大肠菌的DNA聚合酶Ⅰ用在切口平移法标记DNA。
在20℃～25℃下探针与靶序列退火速率最大，比解链温度低情况下进行杂交。
将外源性质粒导入细菌中称为转化。
外源性重组质粒与感受态细菌混在一起，一般在42℃作短暂的热刺激。
cDNA基因克隆以mRN为A 模板。
四、基因克隆载体：柯(ke) 斯质粒载体具有噬菌体特性，能通过溶菌周期，形成子代噬菌体颗粒的说法是不对的。
五、DNA序列测定：与Sanger双脱氧链终止DNA测序法相比，Maxam-Gilbert 法所测序列为原DNA分子，这是其特点。
六、克隆子DNA定点诱变：Mu噬菌体DNA转座成分不含末端反向重复序列。
改变蛋白质密码序列的个别密码子最好采用寡核苷酸介导诱变。
七、研究DNA与蛋白质的方法：（1）凝胶阻滞试验（2）DhAsel足迹试验（3）甲基化干扰试验（4）体内足迹试验都是研究DNA与蛋白质作用的方法。
病毒是一类体积微小、结构简单、具有严格的寄生于活细胞的微小生物，它们具有下列几种基本特征：1、病毒的基本结构是由核酸（基因组）与蛋白质组成，由DNA或RNA组成核心，外有一蛋白外壳（核壳），有些病毒在核壳外面另有一层脂蛋白组成的包膜包围着。
2、病毒只在活细胞中增殖，因为病毒缺乏完整细胞器等必要装置，所以必须依赖宿主细胞提供高分子合成装置和能量。
3、病毒非常微小，无细胞结构，绝大多数不能用光学显微镜检查，而必须用电子显微镜才能察见。
核酸化学：DNA是脱氧核糖核酸的英文缩写。
RNA与DNA差别在核糖2' 位带有一个羟基。
DNA ①DNA起储存遗传信息作用，并以核苷酸排列顺序形式储存遗传信息。
②由4种核苷酸组成DNA分子，由碱基互补维持DNA双螺旋结构。
③在动植物、细菌、真菌中都含有DNA，但在病毒中（非细胞型微生物）不一定含DNA。
④DNA为长丝状分子互相纠缠，其溶液十分粘稠。
⑤它对紫外线有最强的吸收，通常用260nm波长测DNA溶液浓度，它在近中性环境中带负电核，DNA变性后OD值会升高。