病理切片染色方法
病理学特殊染色技术：Gomori醛品红染色法（弹性纤维、肥大细胞）
病理学特殊染色技术：Gomori醛品红染色法（弹性纤维、肥
大细胞）
Gomori醛品红染色法
（弹性纤维、肥大细胞）
试剂：
①醛品红液：酸性品红0.5克，70%酒精99毫升，三聚乙醛（副醛）1毫升
将酸性品红溶于70%酒精，加入鹴2和三聚乙醛，充分溶解，室温放24 48小时自然成熟，溶液呈紫色，4摄氏度冰箱保存2~3朋
②橘黄G液：橘黄G 0.5克，磷钨酸2克，95%酒精100毫升
③Lugol碘液：碘化钾2克溶于蒸馏水20毫升，再加碘1克，完全溶解后，加蒸馏水80毫升
方法：
⑴石蜡切片常规脱蜡至水
⑵碘液5~10分钟，水洗2~3分钟
⑶5%硫代硫酸钠水溶液5分钟，流水冲洗3~5分钟
⑷70%酒精稍洗
⑸醛品红液5~10分钟
⑹70%酒精洗至弹性纤维清晰，水洗2~3分钟
⑺橘黄G液10~20秒，水洗2~3分钟
⑻各级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片
结果：
弹性纤维深紫色；
黏液紫色；
肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、脑垂体腺细胞同时着色；
背景黄色。
皮肤组织病理切片技术
一、V — G法（胶元纤维染色法） 结缔组织含有三种纤维，即胶原纤维、网 状纤维、弹力纤维。胶原纤维在结缔组织中 含量最多，起支持作用，具有一定的韧性和 坚固性，抗拉力强的特点。胶原纤维染色在 病理诊断上主要用于和肌纤维的鉴别。常用 的胶原纤维染色方法为V—G法。 结果： 细胞核蓝黑色或黑色，胶原纤维红色，肌 纤维、细胞浆、红血球呈黄色。
配法：(PH 7.0~7.2)
甲醛 NaH2PO4· 2H2O 或 无水 Na2HPO4· 12H2O 或 无水 蒸馏水 100ml 5.2g 4.0g 16.4g 6.5g 900ml
三、脱水
组织脱水，就是把组织内的水分彻底 除掉，故亦称无水法。无论任何组织都 含有不同程度的水分。一般组织经过固
皮肤组织病理切片技术
一、取材
1、手术取材。 适用于：（ 1 ）面部、关节部，易出血部位 等；（2）较大、较深的皮疹；（3）结节 和囊肿性皮疹；（ 4 ）切除治疗和检查， 主要用于小的肿瘤。 2、钻孔取材。（角膜钻孔器）
适用于一般的皮疹取材。
二、固定
固定的作用和目的：
1、可以防止组织溶解及腐败。
2 、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶 等各种成分沉淀保存下来，保持它原有
透明
切片 染色
切 片 质 量 标 准（100分）
切片完整 没有刀痕 厚薄均匀 附贴适量 平坦无褶 10分 5分 10分（一层细胞） 5分 10分
树胶适量 染色鲜艳 对比清晰 透明度好 片内无污染 无“人工”现象 玻片整洁 标签端正
5分 10分 10分 10分 10分 5分 5分 5分
常 规 染 色
固定的注意事项：
1、组织块必须小而薄。 2、固定液对组织有收缩及硬化作用，亦有 使组织膨胀的作用。
染色步骤
HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。
㈠染色程序1．石蜡切片HE染色（常规HE染色）（1）二甲苯Ⅰ 5～10min（2）二甲苯Ⅱ 5～10min（3）无水乙醇Ⅰ 1～3min（4）无水乙醇Ⅱ 1～3min（5）95%乙醇Ⅰ 1～3min（6）95%乙醇Ⅱ 1～3min（7）80%乙醇 1min（8）蒸馏水 1min（9）苏木素液染色 5～10min（10）流水洗去苏木素液 1min（11）1%盐酸-乙醇 1～3s（12）稍水洗 1～2s（13）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（14）流水冲洗 1～2min（15）蒸馏水洗 1～2min（16）0.5%伊红液染色 1～3min（17）蒸馏水稍洗 1～2s（18）80%乙醇 1～2s（19）95%乙醇Ⅰ 2～3min（20）95%乙醇Ⅱ 2～3min（21）无水乙醇Ⅰ &, nbsp; 3～5min（22）无水乙醇Ⅱ 3～5min（23）石炭酸-二甲苯 3～5min（24）二甲苯Ⅰ 3～5min（25）二甲苯Ⅱ 3～5min（26）二甲苯Ⅲ 3～5min（27）中性树胶封固注：①（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
②（23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。
2．冰冻切片HE染色（1）冰冻切片固定 10～30s（2）稍水洗 1～2s（3）苏木素液染色（60℃） 30～60s（4）流水洗去苏木素液 5～10s（5）1%盐酸-乙醇 &n, bsp; &nbs, p; &nb, sp; 1～3s（6）稍水洗 1～2min（7）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（8）流水冲洗 15～30s（9）0.5%伊红液染色 1～2min（10）蒸馏水稍洗 1～2min（11）80%乙醇 1～2min（12）95%乙醇 1～2min（13）无水乙醇Ⅰ 1～2min（14）无水乙醇Ⅱ 1～2min（15）石炭酸-二甲苯 2～3min（16）二甲苯Ⅰ 2～3min（17）二甲苯Ⅱ 2～3min（18）中性树胶封固注：①（7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。
病理组织切片制作技术
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
医院病理科病理切片操作规范
医院病理科病理切片操作规范病理切片是病理科诊断疾病的重要步骤之一，因此，对于病理切片操作应该遵循以下规范：2.标本固定：对于切片需要的组织标本，需要及时进行固定以防止组织脱落和变形。
通常使用10%的中性缓冲福尔马林进行固定，固定时间应根据样本大小和类型进行调整，以确保组织固定充分。
3.标本处理：接受标本后，需要进行适当的标本处理。
对于组织标本，应进行组织去水、蜡浸渍等处理，确保标本组织的切片质量。
对于细胞标本，应进行细胞离解和离心等处理。
4.病理切片制作：对于组织标本，制作病理切片通常采用甩片法或旋片法。
在制作切片之前，需要使用切片机对刀片进行清洗和消毒，并根据需要调整切片机的切片厚度。
确保制作的病理切片的厚度均匀一致。
5.切片染色：病理切片制作完成后，需要进行染色。
常用的染色方法包括苏木精-伊红染色、血液学染色、免疫组化染色等。
染色时，需要严格按照染色试剂的使用说明进行操作，确保染色的质量和结果的准确性。
6.切片质量控制：在病理切片操作过程中，需要进行质量控制以确保切片的质量。
包括检查切片的厚度、颜色、染色效果等。
对于染色不好或有问题的切片，需要重新制作。
7.切片保存和归档：制作完的病理切片需要进行保存和归档。
切片应放置在干燥、阴凉而通风良好的地方，避免切片暴露在阳光下，防止切片变形和褪色。
8.切片质量评估：对于制作的病理切片进行质量评估，包括切片的清晰度、染色的均匀性、细胞结构的完整性等。
评估结果可以作为诊断和治疗的参考。
总结：病理切片操作规范是病理科工作中非常重要的一环，合理规范的操作可以保证病理切片的质量，提高疾病的诊断准确性。
因此，医院病理科应该建立标本接受和登记制度，对标本进行适当处理，制作和染色病理切片，对切片进行评估和保存。
同时，医院病理科还应定期进行切片质量控制，提高切片的质量。
类器官病理切片方法
类器官病理切片方法
类器官病理切片的制作主要包括以下步骤：
1. 取材和固定：病理组织取材愈新鲜愈好，以保证原有的形态学结构。
根据制片材料和目的不同，制作病理外检、科研切片其组织块可以薄取制作教学切片厚取。
固定分为小块组织固定法、注射灌注固定法、蒸汽固定法。
2. 脱水透明：经过固定和冲洗后，组织中含有较多水分，可用石蜡切片、火棉胶切片，必须将组织块内的水分置换出来。
3. 浸蜡、包埋：在切片放蜡块时，应注意组织包埋的方向，组织的层次，纤维、肌肉等的走向应与切片刀平行，较难切的部分应放在上面，如皮肤的表皮，肿块的包膜，胃肠道的浆膜等，这样可以减少组织的断裂现象。
4. 切片、贴片：通常采用微米级的切片机将组织切成极薄的片。
5. 染色：常用的染色方法是苏木素-伊红染色法，这种对任何固定液固定的组织和应用包埋法的切片均可使用。
6. 封片：将染色后的切片用封固剂封固，以保持切片的完整性。
以上信息仅供参考，如需获取更多详细信息，建议咨询专业医生或查阅相关医学文献。
病理技术考试题及答案
病理技术考试题及答案一、选择题（每题2分，共10题）1. 病理切片中最常用的染色方法是：A. 苏木精-伊红染色B. 银染C. 免疫组化染色D. 脂肪染色答案：A2. 组织固定液中常用的固定剂是：A. 甲醛B. 酒精C. 丙酮D. 碘液答案：A3. 在病理学中，下列哪一项不是肿瘤的分级依据：A. 细胞异型性B. 核分裂象的数量C. 肿瘤的大小D. 肿瘤的侵袭性答案：C4. 以下哪种染色方法用于显示细胞核的DNA：A. 苏木精染色B. 免疫组化染色C. Feulgen反应D. 免疫荧光染色答案：C5. 病理切片中，下列哪项不是组织切片的类型：A. 冷冻切片B. 石蜡切片C. 塑料切片D. 组织培养切片答案：D6. 病理学中，下列哪项不是炎症的基本特征：A. 红肿B. 热C. 疼痛D. 肿瘤形成答案：D7. 病理学中，下列哪种细胞不是炎症细胞：A. 巨噬细胞B. 淋巴细胞C. 浆细胞D. 神经细胞答案：D8. 在病理学中，下列哪种染色方法用于显示肌肉纤维：A. 苏木精-伊红染色B. Gomori三色染色C. 免疫组化染色D. 脂肪染色答案：B9. 病理学中，下列哪项不是坏死的类型：A. 凝固性坏死B. 液化性坏死C. 干酪性坏死D. 纤维化答案：D10. 在病理学中，下列哪种染色方法用于显示胶原纤维：A. 苏木精-伊红染色B. 银染C. 马松染色D. 免疫组化染色答案：C二、填空题（每空1分，共5题）1. 病理切片的厚度一般为_____μm。
答案：4-62. 组织固定液的渗透压应与_____相近。
答案：细胞外液3. 免疫组化染色中，常用的二抗是_____。
答案：生物素标记的二抗4. 病理学中，炎症反应的最终目的是_____。
答案：清除病原体和损伤组织5. 病理学中，肿瘤的侵袭性主要取决于_____。
答案：肿瘤细胞的侵袭能力三、简答题（每题5分，共2题）1. 简述病理学中肿瘤的分级和分期的意义。
答案：肿瘤的分级是根据肿瘤细胞的异型性和核分裂象的数量来评估肿瘤的恶性程度，而分期则是根据肿瘤的大小、深度、淋巴结转移和远处转移来评估肿瘤的进展程度。
病理科优化制片及染色流程
病理科优化石蜡切片1、切片前首先装好切片刀，把刀牢牢固定，否则，切片中就会发生许多人为现象。
（最常见的人为现象是波纹，厚薄不均等）。
2、蜡块装到切片机的蜡块夹上，夹持要平稳牢固。
调整好蜡块的方位，不能偏斜，刀刃与蜡块的上、下缘平行。
切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度（清除角），一般为3〜8度，以免刀刃面将组织刮坏。
3、修蜡块时要循序渐进，力争修出最大面，又要防止小组织被修坏、修光。
4、切片时连续转动手轮，用力要平稳、均匀。
常规切片厚3〜5口。
5、切下的蜡片相连成带状。
待蜡带切至一定长度时，右手用镊子夹住蜡片末端，左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端与切片刀拨离。
6、将蜡片较光滑的一面朝下置于温水中（通常捞片水温在42C左右），并用镊子帮助展开，去除皱纹后，选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片，附贴到载玻片上。
7、附贴时，务使蜡片与玻片之间无气泡。
玻片一端应留有1/3 的位置贴号码标签用。
将蜡片附贴在另外2/3 的中心位置。
8、切片放入62C烤箱中约30〜60分钟烤片，以免发生脱片。
为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。
比较常用的挂胶片有明胶片，APES 胶片和多聚赖氨酸胶片等，免疫组化染色尤需要使用胶片。
病理科优化冷冻切片1、选取适当的新鲜组织块，放在冷冻托上，放入冷冻切片机中冻透2、修块、切片。
冷冻切片通常厚6〜8口并把切片贴于载玻片上3、在酒精灯上轻烤片刻，放入固定液中 2 分钟。
4、然后快速HE 染色（可在酒精灯上加热进行，以缩短时间）。
5、封片、贴标签后，送诊断室（15 分钟之内完成）。
石蜡切片常见问题及优化解决方法30分钟以上才能进行染色。
5 分钟 5 分钟 1 分钟 1 分钟 1 分钟 1 分钟 1 分钟6 分钟 1 分钟HE 染色操作常规流程切好的片子应在60~70C 左右的烤箱中烘烤 HE 染色手工程序： 脱蜡1、 二甲苯1（ AR ）2、 二甲苯 AR ）3、 100%酒精1（ AR 、无水乙醇）4、 100%酒精"（AR 、无水乙醇）5、 95%酒精（工业酒精或医用酒精）6、 80%酒精（工业酒精或医用酒精）7、 自来水浸洗以上 3~7 称为进水过程。
常规病理染色技术
切片无污染
15
有污染物：减15分
切片染色对比清晰、红蓝适
20
①细胞核着色灰淡或过蓝：减4分；
度、透明度好
②红蓝对比不清晰：减4分
③透明度差：减1-4分；
④组织结构不清：减5-8分
切片封胶适中、无气泡，洁
10
①封胶外溢：减3分
净
②有气泡：减3分
③切片不洁净：减4分
切片标签端正牢固，编号清
10
①标签粘贴不端正及牢固：减3-5分
1g苏木精所需氧化剂的量： 100mg 40-100mg 90mg 35mg 200mg 50mg
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在几种氧化剂中，碘酸钠为首选氧化剂，其优点是在 室温下易溶于水，无需加热，稳定性好。 理论上，1g苏木精（3水）被完全氧化成苏木红需要 185mg碘酸钠。 1g苏木精（无水）被完全氧化成苏木红需要218.2mg 碘酸钠。 在实际配制苏木精染液时，常用半量碘酸钠，目的是 先使部分苏木精氧化成苏木素，染液中未被氧化的苏 木素在染液保存和使用过程中慢慢被完全氧化。
五、HE切片的规范技术标准
1 2 3 4 5
6
7 合计
质量标准
满分（分）
质量缺陷减分
切片完整
15
①稍不完整：减1-7分
②不完整：减8-15分
切片厚薄均匀
15
①厚薄不均：减3-6分
②切片厚，影响诊断：减7-15分
切片无刀痕、无皱褶、无颤
15
①有刀痕、皱褶、颤痕尚不影响诊断：减2-7分；
痕
②影响诊断：减8-15分。
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分化液： 0.5ml 浓盐酸+99.5ml 70%酒精 蓝化液： 1g碳酸锂+100ml蒸馏水 0.3ml浓氨水+99.7ml蒸馏水
大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE 染色步骤如下：（一）固定与修块取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。
6小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。
（二）脱水与透明1．75%乙醇50分钟2．85%乙醇50分钟3．95%乙醇（I）30分钟4．95%乙醇（II）30分钟5．100%乙醇（I）30分钟6．100%乙醇（II）30分钟7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟8．二甲苯（I）20分钟9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定）若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。
在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。
全过程约需要5h。
（三）浸蜡、包埋与修蜡块1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。
2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。
不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。
为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。
（四）切片在载玻片上擦少量甘油蛋白。
可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹匀，呈半干状为佳。
切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。
每个组织块捞片2张。
过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。
（五）脱蜡、染色与脱水倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓度的影响。
全过程约需要60分钟。
1．脱蜡（1）二甲苯（I）15分钟（2）二甲苯（II）15分钟（3）100%乙醇2分钟（4）95%乙醇（I）1分钟（5）95%乙醇（II）1分钟（6）蒸馏水浸洗1分钟2．染色（7）苏木精30秒钟（8）自来水冲洗60秒。
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病理切片染色方法
病理切片染色是病理学中常用的一种技术，通过对组织切片进行染色，可以观察和分析组织结构、细胞形态和病理变化，从而对疾病进行诊断和鉴定。
本文将介绍常见的病理切片染色方法，包括常规染色、特殊染色和免疫组织化学染色。
一、常规染色
常规染色是最常用的病理切片染色方法之一，主要包括血液染色和组织染色。
1. 血液染色
血液染色常用的染色剂有偏碱性染料和酸性染料。
偏碱性染料如伊红、结晶紫和新蓝等，可用于染色细胞核和嗜酸性颗粒；酸性染料如朗格汉斯染剂、伊红B和伊红O等，可用于染色细胞质和嗜碱性颗粒。
2. 组织染色
组织染色主要是为了观察细胞核、细胞质和细胞间质的结构，常用的染色剂有苏木精-伊红、伊红-酸性品红和伊红-伊红B等。
二、特殊染色
特殊染色是指用于特定目的的染色方法，常用于观察特定组织结构、细胞器和病理变化。
1. 酶组织化学染色
酶组织化学染色是利用酶的催化作用来观察组织和细胞中的特定物质。
常见的酶包括过氧化物酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶等。
2. 共聚焦显微镜染色
共聚焦显微镜染色是一种高分辨率的显微镜技术，可以观察细胞内的亚细胞结构和分子分布。
常用的染色剂有荧光染料如DAPI、荧光素和罗丹明B等。
三、免疫组织化学染色
免疫组织化学染色是利用抗体与抗原的特异性反应来观察组织和细胞中的蛋白质分布和表达情况。
免疫组织化学染色常用的标记物有酶标记物和荧光标记物，常用的抗体有单克隆抗体和多克隆抗体。
四、染色结果的评价
染色结果的评价是病理切片染色中的重要步骤，可以通过显微镜观察染色结果的颜色、强度和分布情况，进而判断组织和细胞的状态和病变程度。
总结：
病理切片染色方法是病理学中常用的一种技术，通过染色可以观察和分析组织结构、细胞形态和病理变化，为疾病的诊断和鉴定提供重要依据。
常规染色、特殊染色和免疫组织化学染色是常见的病理切片染色方法，每种方法都有其特定的应用范围和适用对象。
在进
行染色时，我们需要注意染色剂的选择、染色时间的控制和染色结果的评价，以保证染色结果的准确性和可靠性。
通过病理切片染色技术的应用，我们可以更加全面地了解疾病的发展和变化，为临床治疗提供有力支持。