基因工程载体的分类及其特性
UMBRELLA
基因工程载体的分类及其特性
田文晓 1343001125
按照来源和性质分类
1、 质粒载体
① 复制：通常情况下一个质粒含有一个与相应的顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区。
在不同的质粒中，复制起始区的组成方式不同，有的可决定复制的方式，例如滚环复制和θ
复制；在大肠杆菌中使用的大多数载体都带有一个来源于 pMB1 质粒或 ColE1 质粒的复制
起始位点。
② 拷贝数：质粒拷贝数分为严谨型与松驰型。严谨型质粒每个细胞中拷贝数大约为1 ～几个；
松驰型质粒拷贝数较多，可达几百。
③ 不相容性：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒
导入后，在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。不相容的质粒一般都利用同一复制系统，
从而导致不能共存于同一宿主中。两个不相容性质粒在同一个细胞中复制时，在分配到子细
胞的过程中会竞争，随机挑选，微小的差异最终被放大，从而导致在子细胞中只含有其中一
种质粒。
④ 转移性：指在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。它需要
移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因子 bom 及其内部的转移缺口位点 nic。
2、 噬菌体载体（包括λ噬菌体、M13噬菌体载体）
1) λ噬菌体载体：大的外援插入片段在质粒中不稳定，转导是比转化效率更高的过程，避免出
现无插入片段的空载体。
2) M13噬菌体载体：可以对任意克隆基因进行DNA进行诱变，测序方便，可以制备单链测序模
板；含有噬菌体DNA的噬菌体颗粒从转化细胞中分泌出来后，可以在生长平板上收集。
① 超感染免疫性：溶原性细菌在被噬菌体感染并溶原化后，不会被同种噬菌体再次感染。
② 经过若干世代后，溶原性细菌会开始进入溶菌周期，即溶原性细菌的诱发。此时，原噬菌体
从宿主基因组上切离下来进行增殖。
3、 粘粒载体（柯斯质粒）
① 具有λ噬菌体的特性。柯斯质粒载体在克隆了合适长度的外源DNA，并在体外被包装成噬菌
体颗粒之后，可以高效地转导对λ噬菌体敏感的大肠杆菌寄主细胞。但该载体不包含λ噬菌
体的全部必要基因，因此不能够通过溶菌周期，无法形成子代噬菌体颗粒。
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② 具有质粒载体的持性。柯斯质粒载体具有质粒复制子，因此在寄主细胞内能够像质粒DNA一
样进行复制，并且在氯霉素作用下，同样也会获得进一步的扩增。此外，柯斯质粒载体通常
也都具有抗菌素抗性基因，可供作重组体分子表型选择标记。
③ 具有高容量的克隆能力。柯斯质粒载体的分子仅具有一个复制起点，一两个选择记号和COS
位点等三个组成部分，其分子量较小，一般只有5～7kb左右。因此，柯斯质粒载体的克隆
极限可达45kb左右。
④ 具有与同源序列的质粒进行重组的能力。一旦柯斯质粒与一种带有同源序列的质粒共存在
同一个寄主细胞当中时，它们之间便会形成共合体。因此，假若柯斯质粒与质粒各自具有一
个互不相同的抗药性记号及相容性的复制起点，那么当他们转化到同一寄主细胞之后，便可
容易的筛选出含有两个不同不同选择记号的共合体分子。
4、 病毒载体
① 转导效率高、复杂的装配过程由细胞完成、不同病毒载体具有不同表达特点。
② 根据病毒载体在主细胞中的存在情况分为瞬时表达病毒载体和稳定表达病毒载体。
5、 人工染色体
① 可以容纳更长的DNA片段，用较少的克隆就可以包含特定的基因组全部序列，从而保持了基
因组特定序列的完整性，有利于物理图谱的制作。
按照功能和用途分类
1、 克隆载体（又分为质粒载体、噬菌体载体、粘粒载体、人工微小染色体特征如上方
的按来源的分类）
① 能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。
② 容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。
③ 容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体
DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。
④ 容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。
⑤ 有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能
容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。
2、 表达载体（包括原核表达载体和真核表达载体）
1) 原核表达载体：繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定，基因克隆及表达系统成熟完善，
全基因测序完成，被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物。
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2) 真核表达载体：基因表达调控机理比较清楚，遗传操作方便，技术成熟，成本低廉，不含特
异性病毒，不产生内毒素，安全性高。
① 表达载体(Expression vectors)就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、
RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。
3、 测序载体
① 测序载体包括单链载体、双链载体，如M13、Puc系列，PGEM系列。测序载体一般含有一段
多酶切位点区，便于外源DNA片段的插入、重组。在插入片段的旁边，有合适的测序引物互
补序列。双链DNA载体，可以从插入片段的两侧同时测定DNA链的顺序，故提高了测序效
率。
4、 转化载体
① 为了把任何一个基因或DNA序列整合到所要的生物体基因组，把来自所要的生物体的一个
基因或DNA序列克隆进一个环状载体，通过同源重组整合进基因组。用同一种载体克隆外源
DNA序列后去转化该生物体，通过转化载体和整合载体之间的同源性而插入，将外源DNA序
列插入该生物体基因组。
5、 穿梭载体
① 这类载体不仅具有细菌质粒的复制原点及选择标记基因,还有真核生物的自主复制序列
(ARS)以及选择标记性状,具有多克隆位点.通常穿梭载体在细菌中用于克隆,扩增克隆的基因,
在酵母菌中用于基因表达分析.
6、 多功能载体
① 同时具有以上两种或多种载体功能的载体。
基因工程载体
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基因诊断
利用基因工程载体携带特定的检测基因或标记物， 对疾病相关基因进行快速、灵敏的检测和诊断。
应用领域与前景
农业生产
通过基因工程载体将优良性状基因导入农作物或家畜家禽的 基因组中，改良品种性状，提高产量和品质。
前景
随着科学技术的不断进步和创新，基因工程载体的研究和应 用将更加深入和广泛。未来，基因工程载体有望在个性化医 疗、精准农业、生物安全等领域发挥更大的作用，为人类健 康和生活质量的提高做出更大的贡献。
人工染色体载体
概念
人工染色体载体是一种基于天然染色体结构设计的基因工程载体，可模拟天然染色体的功 能和特性。
优点
人工染色体载体具有较大的容量，可容纳多个外源基因和调控元件。此外，人工染色体载 体还具有稳定的遗传特性和较低的免疫原性，可实现外源基因的长期稳定表达和遗传。
缺点
人工染色体载体的构建和操作相对复杂，技术难度较大，且成本较高。目前主要应用于基 础研究和临床试验阶段。
潜在生态风险分析
基因污染
基因工程载体可能通过水平基因转移等方式，将外源基因 导入非目标生物体内，造成基因污染。
生态平衡破坏
外源基因的导入可能对目标生物及其相关生物种群的生态 平衡产生不良影响，如改变种间竞争关系、影响食物链等。
生物多样性减少
基因工程载体的广泛应用可能导致生物多样性减少，特别 是对一些濒危物种和生态系统的影响更为显著。
人类健康影响评估
食品安全问题
基因工程载体在食品生产中的应用，如转基因作物，可能对人体健 康产生潜在风险，如引发过敏反应、产生毒素等。
医药安全问题
基因治疗等医疗手段的应用，可能存在潜在的安全隐患，如基因编 辑的脱靶效应、基因治疗的副作用等。
第三章基因工程载体
大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因lacZ系统
i
PO
lacZ
调控蛋白P
β-半乳糖苷酶 分解半乳糖
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β-半乳糖苷酶基因lacZ突变体M15
a-互补显色反应（蓝白斑筛选）
i
PO
lacZ -
调控蛋白P
诱导剂IPTG α-肽段
β-半乳糖苷酶-
分解半乳糖
分解X-gal
产物呈现蓝色
18
互补显色反应
19
(四)带有尽可能多的单一限制性酶切位点 单一的限制性酶切位点可供外源DNA定点插入； 较多不同的单一限制酿酶切位点，可有选择地供
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单链切割 连接
线性DNA （L型）
开环DNA
（oc型）
单链切割 连接
共价闭合环形DNA （SC型）
环形双链的质粒DNA分子具有三种不同构型
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(三)质粒DNA的理化性质 质数DNA具有一般核酸分子的理化特性。
能溶于水，不溶于乙醇等有机溶剂， 在一定pH下可解离而带电荷 能吸收紫外线，可嵌入某些染料，如溴化乙锭。 比较能抗切割和抗变性。
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(6)传递性：有些质粒在细菌间能够传递，具有传递性的 质粒带有一套与传递有关的基因。
(7)消除性：存在于宿主细胞中的质粒，可用某些办法将 其去除。
(8)复制类型：严紧型质粒的复制受到宿主细胞蛋白质合 成的严格控制，松弛型质粒的复制不受宿主细胞蛋白质 合成的严格控制。
(9)表现型：不同的质粒有不同的表型。如对抗生素的抗 性等。
个细菌细胞中所含有的质粒DNA分子的数目。
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根据宿主细胞所含的拷贝数多少，可将质粒分成：
严紧型
低拷贝数的质粒，每个宿主细胞中仅含有 1-3份的拷贝，称这类质粒为“严紧型”复 制控制的质粒(stringent plasmid)；
基因工程的载体
常用抗生素的作用方式及抗性机理
抗生素名称 氨苄青霉素 （Amp） 氯霉素 （Cm） 卡那霉素 （Kan） 链霉素 （Sm） 四环素 （Tet） 作用方式 抗性机理 一种青霉素的衍生物，通过干扰 bla抗性基因编码的一种周质酶，即β-内 细菌胞壁合成之末端反应，而杀 酰胺酶，可特异的切割amp的β-内酰胺 死生长细胞。 环，从而失去杀菌效力。 一种抑菌剂，通过同核糖体50S 亚基的结合作用，干扰细胞蛋白 质的合成，并阻止肽键的形成。 cat抗性基因编码乙酰转移酶，特异地使 氯霉素乙酰化而失活
λ噬菌体载体
结构特点: ①线性双链DNA分子 ②具非必需区(约1/3长度） ③两端具12个核苷酸单链互补粘性末端 ④可在E.coli中大量繁殖 ⑤可克隆15Kb左右的外源DNA
（2）质粒的基本特性
1) 2) 3) 4) 5) 自主复制性 不相容性 可扩增性 可转移性 携带遗传标记 野生型的质粒DNA上往往携带一个或多个遗传 标记基因，这使得寄主生物产生正常生长非必需 的附加性状，包括：抗生素、抗抗生素、抗重金 属、产生细菌毒素等。对DNA重组分子的筛选具有 重要意义。
（3）质粒DNA的转移
质粒自主转移
导入
+
自主转移
+
无DNA转移
donor
H H
H
+
辅助转移
H
+
质粒的辅助转移
H
H
+
Notransfer
质粒的重组转移
R-重组DNA分子
重组
+
DNA 转移
R
+ R
（4）质粒的命名
人工组建的质粒 第一个字母是质粒的英文名字（Plasmid）的第一 个字符p, 用小写。后面有两个字母是大写，代表质 粒的发现者和实验室名称，再后面是质粒的编号。
基因工程常用的三种载体
基因工程常用的三种载体
基因工程常用的三种载体
基因工程是一种用于改变和改造生物体遗传基因的技术，它是利用分子生物学技术提高生物性状的一种新技术。
在基因工程中，需要使用一种材料将外源基因投入细胞中，这种材料就是载体。
基因工程中常用的载体有以下三种：
1. 质粒载体. 质粒载体是一种比较常见的基因工程载体，具有较强的稳定性，它是一种质粒DNA，也称为质粒DNA，不是单链DNA，它是由细菌质粒的DNA结合其它分子，形成质粒DNA的结构，具有可复制性能，可以在细菌或动物细胞中复制，具有较强的稳定性。
2. 杆状病毒载体. 杆状病毒载体是一种比较常见的基因工程载体，它由病毒的全基因组和其它分子形成，用来转移外源基因到细胞中，可以把外源基因转移到细胞核或任何其它的地方，可以实现基因工程的目的。
3. 化合物载体. 化合物载体是一种新型的载体，它是由多种不同的分子组成的，可以将外源基因转移到细胞核或其它位置，并且可以把这些基因在细胞中表达出来，从而实现基因工程的目的。
基因工程常用的三种载体
基因工程常用的三种载体基因工程是一门综合性的学科，其中一个关键方面是使用载体进行基因转移和操控。
载体是一种可以携带和传递特定基因的DNA分子。
在基因工程中，常用的载体有质粒、噬菌体和人工染色体。
下面将详细介绍这三种载体的相关信息。
1. 质粒（Plasmid）质粒是一种环状双链DNA分子，通常存在于细菌细胞内，也可通过人工方法导入其他生物体内。
质粒是最常用的基因工程载体，因其结构相对简单且易于操作，可以携带外源基因并通过转染等方法传递到细胞中。
质粒的大小通常在1-20千碱基对之间，具有自主复制和不受宿主基因组限制的能力。
质粒常用于基因克隆、表达以及基因敲除等研究。
例如，在基因克隆中，通过将目标基因插入质粒中的多克隆位点，可以将质粒转化到宿主细胞中进行扩增和分析。
质粒也常用于表达外源基因，可以将目标基因与促进其表达的启动子及调控元件结合在一起，构建表达载体进入目标细胞中，使其产生目标蛋白。
2. 噬菌体（Bacteriophage）噬菌体是一种寄生于细菌的病毒，是基因工程中另一常用的载体。
噬菌体具有高度选择性对细菌进行感染和复制的能力，因此可以利用噬菌体来转移和表达外源基因。
噬菌体载体通常比质粒大，可以携带更长的DNA序列。
噬菌体常用于噬菌体展示技术和抗体库构建。
噬菌体展示技术是一种用于筛选蛋白质相互作用、抗体或潜在药物靶点的方法。
通过将目标多肽或蛋白质与噬菌体表面蛋白基因融合，在噬菌体所感染的细菌中进行筛选。
另外，噬菌体也常用于构建噬菌体抗体库，通过大规模的筛选，筛选出具有特定抗体活性的噬菌体克隆。
3. 人工染色体（Artificial Chromosome）人工染色体是通过基因工程方法人为合成的染色体模拟体，在某些情况下可用于携带超长的DNA分子。
人工染色体被设计成可以稳定传递和复制的DNA分子，通常包括一个原核或真核的起始序列、一个中央控制区域和一个终止序列。
人工染色体在基因组学和基因治疗研究中发挥着重要作用。
基因载体名词解释
基因载体名词解释基因载体是指在基因工程和基因治疗中被用来转移和携带目标基因的工具。
它具有能够在细胞间、细胞内、细胞外传递DNA的特性，且能够确保目标基因在宿主细胞内稳定、高效地表达。
基因载体主要有以下四种类型：1. 病毒载体病毒载体是一种常用于基因治疗的工具，能够有效地将外源基因传递到宿主细胞内。
病毒可以利用其天然的生物学特性将核酸迅速送入宿主细胞，并产生目标蛋白。
但是，病毒基因载体存在着安全问题，因为它们有可能引起免疫反应和细胞突变。
2. 质粒载体质粒载体是一种非病毒的基因载体，它通常被制造成环形DNA，可以携带一个或多个目标基因，然后通过转染将其引入宿主细胞。
质粒载体相对低廉，并且在制造和使用方面比较方便，因此是常用的载体之一。
3. 脂质体载体脂质体载体是指一种由合成化学物质构建而成的小囊泡，包裹着外源DNA。
它可以将内部DNA有效地运送到细胞内，并且不会引起免疫反应。
脂质体载体通常使用转染技术，是在实验室中进行基因转移和基因治疗的重要载体之一。
4. 磁性纳米粒子载体磁性纳米粒子载体是近年来非常流行的基因载体类型。
它的特点是将内部的基因载体变成磁性纳米颗粒，以便于基因转移和植入宿主细胞，并且能够准确定位细胞，从而实现靶向基因治疗。
此外，磁性纳米粒子载体经常用于分子影像学和药物导向运输。
综合来看，基因载体在基因治疗和基因工程中扮演着重要角色。
不同类型的载体对于不同的基因治疗和基因工程实验有着不同的优缺点。
因此，在选择和设计载体时，需要对实验目的、所研究的基因和宿主细胞类型等因素进行谨慎的考虑和筛选。
植物基因工程载体
植物基因工程载体转查尔酮合酶矮牵牛花抗CMV病毒转基因番茄抗CMV病毒转基因甜椒植物基因工程载体分类l质粒转化载体l病毒转化载体Ti质粒转化载体是目前最主要的、最常用的植物基因工程载体。
根瘤农杆菌及Ti质粒的发现Ti质粒是在根瘤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA分子。
根瘤农杆菌及Ti质粒的发现根瘤农杆菌感染植物细胞后，根瘤农杆菌的Ti质粒上的T-DNA被转移并整合到植物细胞染色体上，并引起植物形成冠瘿瘤。
冠瘿瘤根瘤农杆菌Ti质粒在结构上可分为四部分：l T-DNA又称转移DNA区：在农杆菌侵染植物体时，其从Ti质粒上被切割并转移到植物细胞中去，该序列与肿瘤形成有关l毒性区域即vir(virulence)区域：该区段的基因表达激活T-DNA的转移，使植物致瘤。
l接合转移区：存在与细菌接合转移有关的基因，调控Ti质粒在农杆菌之间的转移l复制起始区：保证Ti质粒进行自我复制。
只有Vir区和T-DNA区与冠瘿瘤生成相关。
T-DNA的结构和功能结构特点：左右两端（TL、TR）具有25个碱基对的顺向重复序列；去除TR，失去T-DNA转移和整合功能，不能致瘤；左边界的缺失，对致瘤性无明显影响。
T-DNA上编码的基因有两类：一类是编码冠瘿碱合成酶及分解代谢的基因；另一类是诱发肿瘤的基因转移过程：农杆菌感染后，植物细胞接受刺激，释放信号分子，反过来激活农杆菌Ti质粒上的vir基因；农杆菌粘附到植物细胞壁。
植物激素诱导vir基因表达，其表达产物引起T-DNA脱离质粒，并位移进入植物细胞中,进入植物细胞的T-DNA整合并表达。
受伤的植物细胞产生乙酰丁香酮乙酰丁香酮激活vir基因农杆菌T-DNA整合到植物基因组中合成植物生长素、细胞分裂素、冠瘿碱，冠瘿瘤形成野生型的Ti质粒作为载体的缺陷l Ti质粒分子质量过大，一般在160-240kb，操作麻烦。
l缺乏合适的克隆位点l T-DNA区导致植株产生冠瘿瘤，阻碍细胞的分化和植株的产生；l缺乏大肠杆菌的复制起始位点和筛选标记。
基因工程(基因工程的基本条件-载体系统)
(二)质粒载体(Plasmid)
1. 质粒的一般生物学特征
质粒是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而 自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子；
质粒常见于原核细菌和真菌中； 绝大多数的质粒是DNA型的； 绝大多数的天然DNA质粒具有共价、封闭、环状的分
子结构，即cccDNA； 质粒DNA的分子量范围：1-300 kb。
D-DNA ocDNA cccDNA
但变性的线性染色体DNA分子复性时不准确，也不迅 速，因此彼此聚集形成网状结构,通过离心分离便与变 性的蛋白质及RNA一起沉淀下来，而仍滞留在上清液中 的质粒DNA则可用酒精等沉淀收集。
沸水浴法 用含有EDTA和TritonX-100的缓冲液悬浮菌体； 加溶菌酶裂解细菌细胞壁； 沸水浴40秒钟； 离心，用无菌牙签挑去沉淀物； 乙醇或异丙醇沉淀质粒DNA；
λ噬菌体生物学特性：溶原状态
➢λ噬菌体感染大肠杆菌后，除能裂解细胞外，也 可能将其DNA直接整合到宿主细胞的染色体DNA上， 并不产生子代噬菌体颗粒，这种情况为溶原状态； ➢整合主要由λ-DNA上的cI和int两基因的产物所激 活，而这两个基因的开放与关闭又取决于宿主细胞 本身的性质； ➢人们可以根据需要改变λ-DNA或宿主细胞的性质， 使噬菌体或处于溶原状态，或处于溶菌状态；
4363 bp
ROI
➢用于基因克隆
ROP Origin of Replication Hind II
Sal I Bal I
pUC18/19：
EcoRI SstI KpnI SmaI BamHI XbaI SalI PstI SphI HindIII
➢分子量2686bp； GAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTT
基因工程的载体种类
基因⼯程的载体种类基因⼯程的载体对于外源基因的复制、扩增、传代乃⾄表达⾄关重要，其必需具备以下条件：①具有有效运载能⼒，能够进⼊宿主细胞；②对多种限制酶有单⼀或较少的切点，最好是单⼀切点，即本⾝是⼀个复制⼦，携带外源基因前后均能在宿主细胞内⾃主复制，或者能够整合到宿主细胞中；③在宿主中能控制外源基因的表达活动；④要有筛选标记，鉴定⽅便，装卸⼿续简单；⑤容易控制，安全可靠。
在基因⼯程（DNA重组）中，使⽤的载体有：①克隆载体（clone vector），即以繁殖DNA分⼦为⽬的的载体；②穿梭载体（shuttle vecto），⽤于真核⽣物DNA⽚段在原核⽣物中增殖，然后在转⼊真核⽣物细胞宿主表达；③表达载体（express vector），⽤于⽬的基因的表达。
现在对载体提出了更⾼的要求，如：⾼拷贝数、具有强启动⼦和稳定的mRNA、具有⾼的分离稳定性和结构稳定性、转化频率⾼、宿主范围⼴、插⼊外源基因容量⼤且可以重新完整地复制与转录、和宿主细胞匹配等。
此外，载体在宿主不⽣长或低⽣长速率时仍能⾼⽔平地表达⽬的基因。
但达到上述要求的载体很少，尤其是当动物细胞作为宿主细胞时，⽬前能⽤的主要时病毒，进⼊宿主的⽬的基因⼀般只能是⼀个基因，⽽以基因组或多个基因同时进⾏重组还有⼀定困难。
⼀、质粒克隆载体除酵母杀伤质粒（killer plasmid）为RNA外，其他质粒多位环状DNA分⼦，每个质粒都有⼀段DNA复制起始点的序列，帮助实现质粒的复制。
质粒⼀般决定抗⽣素的抗性、产⽣抗⽣素酶系、糖酵解酶系、降解芳⾹族化合物酶系、肠毒素及限制-修饰酶系等。
其中严紧型复制控制质粒的复制与宿主染⾊体同步，并与宿主蛋⽩质合成有关，与DNA聚合酶I活性⽆关，蛋⽩质合成停⽌，质粒与宿主染⾊体复制亦停⽌，故只有1个或少数⼏个拷贝；⽽松弛型复制控制质粒的复制与宿主染⾊体复制不同步，与蛋⽩质合成⽆关，与DNA聚合酶I活性有关，蛋⽩质合成停⽌，质粒仍可复制，故可以在宿主有10—206个拷贝。
第三章 基因工程载体
表达载体与克隆载体的区别
Hale Waihona Puke 强启动子，一个可诱导的强启动子可使外源基因 有效的转录 在启动子下游区和ATG（起始密码子）上游区有 一个好的核糖体结合位点序列（SD序列），促进 蛋白质翻译 在外源基因插入序列的下游区要有一个强转录终 止序列，保证外源基因的有效转录和mRNA的稳 定性
表达型载体（expression vector）
Apr TcS为重组子 Apr Tcr为原载体 ApS Tcr为重组子 即为非重组子
pUC系列的质粒载体
pBR322质粒的复制起点 Amp抗性基因，但核苷酸序列不含有原来限制 性核酸内切酶的单一酶切位点 大肠杆菌β-半乳糖酶基因（lacZ）的启动子及其 编码α-肽链的DNA序列，此结构特称为lacZ‘基 因 位于lacZ'基因中的靠近5”端的一段多克隆位点 (MCS ，multiple cloning sites)区，但它 并不破坏该基因的功能
4、
去除两 个PstI
pBR318 （6.3Kb)
酶切 体外重组 酶切
pBR313
EcoRII片 断去掉
pBR322 (4.3Kb)
pBR320 (2.8Kb)
四、常用质粒载体类型
1、克隆质粒载体
2、表达质粒载体
3、多功能质粒载体
4、穿梭质粒载体
1、克隆质粒载体
克隆质粒载体是指专用于基因或DNA片断无性繁
pBR322插入失活效应
筛 选 重 组 子 的 示 意 图
Amp r
1)限制酶切 2)DNA重组 无DNA插入
Tc
有DNA插入
Amp r Tcr