培养基的制备实验报告材料

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培养基的制备实验报告

培养基的制备实验报告

培养基的制备实验报告本次实验的目的是制备培养基,为细菌的分离、培养和纯化提供良好的条件。

下面将从实验的步骤、注意事项、结果及讨论等方面进行介绍。

一、实验步骤1、准备物质:本次实验需要的物质有蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂、蔗糖、粉红色指示剂等。

2、称量:按照配方称取所需要的物质,放置于烧杯中。

3、加水:将溶液加到烧杯中,使用热水搅拌溶解。

4、调pH值:使用磁力搅拌器搅拌溶液,同时加入酸、碱溶液调整其pH值。

5、加入琼脂:琼脂在液态时将其加入培养基中,在0.5小时后,将烧杯放入水浴中,加热至琼脂溶解。

6、灭菌:将培养基热量至65℃进行灭菌处理。

二、注意事项1、称量精准:由于配方中各种物质的比例不同,所以在称量时应该特别注意精准。

2、调pH值准确:必须要根据实验要求,合理的加入酸、碱溶液,使pH值调整在适宜的范围内。

3、琼脂的加入和热力均匀:琼脂的加入需要在液态状态下进行,加入方法应该温和,慢慢地注入。

在加热的过程中也需要注意热力的均匀分布。

4、灭菌时间和方法:都应该根据实验要求进行相应的调整和安排,保证灭菌的效果。

三、结果及讨论培养基制备完成后,我们使用其进行实验,成功得到了所需的细菌菌落。

同时我们也根据实验结果对制备过程中的一些问题进行了总结和讨论。

1、物质的准确称量对实验结果影响较大。

2、pH值的调整应详细了解各个物质对呈酸、碱性的影响。

3、琼脂的加入要在合适的液态下进行,加热过程要均匀。

4、灭菌的方法和时间应根据实验要求进行相应的调整和安排。

综上所述,本次实验是制备培养基,为细菌的分离、培养和纯化提供良好的条件。

实验过程中我们按照步骤并严格注意了一些细节问题,最终得到了满意的结果,更加深入了我们对实验的了解。

培养基的配置实训报告

培养基的配置实训报告

一、实训目的通过本次实训,了解培养基配置的基本原理和操作步骤,掌握培养基的配制方法,熟悉不同类型培养基的配制特点,提高实验室操作技能,为后续微生物实验打下坚实基础。

二、实训时间2021年X月X日三、实训地点实验室四、实训材料1. 实验仪器:锥形瓶、烧杯、玻璃棒、煮培养基的铁盅(或小锅)、培养皿、量筒、滴管、pH试纸、纱布、棉花、灭菌锅等。

2. 实验试剂:牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、氯化钠、蒸馏水、10%HCl、10%NaOH等。

五、实训内容1. 配制液体培养基(1)称量:根据配方,准确称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、氯化钠等试剂,放入锥形瓶中。

(2)溶解:向锥形瓶中加入适量的蒸馏水,用玻璃棒搅拌使试剂溶解。

(3)定容:用蒸馏水补足锥形瓶中的溶液至规定体积。

(4)调节pH值:用pH试纸测试溶液的pH值,如不符合要求,可用10%HCl或10%NaOH进行调节。

(5)过滤:用纱布过滤溶液,去除杂质。

(6)分装:将过滤后的溶液分装于锥形瓶中,封口膜封好,套上橡皮筋。

(7)灭菌:将装有培养基的锥形瓶放入灭菌锅中,按照说明书进行灭菌。

(8)冷却:待压力仪表的压力降为0时,打开灭菌锅取出培养基。

2. 配制固体培养基(1)称量:根据配方,准确称取牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、氯化钠等试剂,放入锥形瓶中。

(2)溶解:向锥形瓶中加入适量的蒸馏水,用玻璃棒搅拌使试剂溶解。

(3)调节pH值:用pH试纸测试溶液的pH值,如不符合要求,可用10%HCl或10%NaOH进行调节。

(4)加热溶解琼脂:将锥形瓶放入电磁炉上煮沸,待琼脂完全溶解后,用玻璃棒搅拌均匀。

(5)过滤:用纱布过滤溶液,去除杂质。

(6)分装:将过滤后的溶液分装于锥形瓶中,封口膜封好,套上橡皮筋。

(7)灭菌:将装有培养基的锥形瓶放入灭菌锅中,按照说明书进行灭菌。

(8)冷却:待压力仪表的压力降为0时,打开灭菌锅取出培养基。

(9)制作斜面培养基:待培养基冷却至50℃左右,将锥形瓶倾斜,使培养基沿试管壁形成斜面。

平板培养基制备实验报告

平板培养基制备实验报告

一、实验目的1. 掌握平板培养基的制备方法及原理。

2. 了解培养基在微生物实验中的应用。

3. 学习并掌握无菌操作技术。

二、实验原理平板培养基是一种用于微生物培养的固体培养基,其主要成分包括琼脂、营养物质、水等。

琼脂是一种从海藻中提取的胶状物质,具有良好的凝胶性,可在高温下溶解,冷却后形成固体。

在制备平板培养基时,需将琼脂溶解于水中,加入营养物质,调节pH值,最后进行灭菌处理。

三、实验材料1. 琼脂:2g2. 营养物质:牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖等(根据实验需要选择)3. 水:100ml4. pH试纸5. 灭菌锅、三角瓶、烧杯、玻璃棒、量筒、天平、无菌操作台、无菌操作工具、无菌培养基平板等四、实验步骤1. 称取琼脂2g,加入100ml水中,用玻璃棒搅拌至琼脂完全溶解。

2. 称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖等营养物质,根据实验需要加入适量的量。

3. 将溶解后的琼脂溶液加热煮沸,同时不断搅拌,防止琼脂沉淀。

4. 使用pH试纸检测琼脂溶液的pH值,根据实验需要调节pH值至适宜范围。

5. 将调节好的琼脂溶液倒入无菌培养基平板中,轻轻摇匀,使琼脂均匀分布。

6. 将培养基平板放入灭菌锅中,进行高压蒸汽灭菌,压力为0.1MPa,时间为20分钟。

7. 灭菌完成后,取出培养基平板,待其冷却至室温。

8. 将冷却至室温的培养基平板放入无菌操作台中,用无菌操作工具进行平板划线接种。

9. 将接种后的平板倒置,放入培养箱中,根据实验需要调整培养温度和时间。

五、实验结果通过平板培养基的制备,成功得到了无菌、均一的固体培养基。

在适宜的培养条件下,平板上会出现不同形态的菌落,可用于微生物的分离、鉴定和培养。

六、实验讨论1. 在制备平板培养基时,应注意无菌操作,防止杂菌污染。

2. 琼脂的质量对平板培养基的质量有很大影响,应选择优质琼脂。

3. 在调节培养基pH值时,应根据实验需要选择合适的pH范围。

4. 平板培养基的灭菌方法为高压蒸汽灭菌,压力和时间应根据实验需要调整。

pda培养基的制备实验报告

pda培养基的制备实验报告

pda培养基的制备实验报告
PDA培养基制备

微生物实验中需要用到很多的培养基,而PDA是其中一种比较常见的,也是很容易配置的。

工具/原料

新鲜土豆;琼脂;葡萄糖


电磁炉;锅(带盖);漏勺;刀


烧杯;纱布;玻璃棒;天平;称量纸;去离子水等
方法/步骤
这里按1L配制:
先用刀将土豆去皮,称取200g,然后切成条状
将锅和漏勺刷干净,并用去离子水清洗一遍,并在锅中加入1L去离子水
然后放在电磁炉上煮,等到土豆丝差不多煮烂时(用漏勺很容易碰断),关电磁炉;将纱布叠8层,然后放在烧杯上,将锅里的东西倒在上面过滤
.
将烧杯补充到1L,倒入已清洗的锅中(去离子水),打开电磁炉(900W左右即可)然后放入20g葡萄糖和18g琼脂粉,并用玻璃棒不断搅拌至完成溶解将上述液体倒入1L烧杯中,补充不足水分(去离子水),然后装入500ml的锥形瓶中,用封口膜封上,用橡皮筋缠下,外面再用报纸包一层
放入高压灭菌锅中,121°C 30min
.
整理实验器材,清洗仪器
注意事项

琼脂粉不要一次全部倒进去,等锅热时,一点一点倒进去
•。

培养基的制配的实训报告

培养基的制配的实训报告

一、实训目的1. 掌握培养基的基本概念和制备方法。

2. 学习不同类型培养基的特性和应用。

3. 提高实验室操作技能,确保实验的准确性和安全性。

二、实训环境1. 实验室:具备无菌操作条件,配备高压蒸汽灭菌器、电子天平、高压锅、三角瓶、玻璃棒、酒精灯、无菌操作台等设备。

2. 原料:黄豆饼粉、尿素、K2HPO4、MgSO4.7H2O、NaCl、AEO9、糊精等。

三、实训原理培养基是微生物生长繁殖的必需物质,根据其成分和用途可分为多种类型。

本实训主要制备一种适用于脂肪酶生产的培养基。

四、实训过程1. 称量与溶解- 称取10g糊精、30g黄豆饼粉、10g尿素、0.5g K2HPO4、0.5g MgSO4.7H2O、1g NaCl和0.5g AEO9,置于1000mL的三角瓶中。

- 加入少量去离子水,用玻璃棒搅拌至糊精完全溶解。

- 将溶液转移至高压锅中,补足至1000mL。

2. 灭菌- 将高压锅加热至121℃,维持15分钟,进行高压蒸汽灭菌。

3. 冷却与分装- 将灭菌后的培养基冷却至室温。

- 将培养基分装至无菌试管中,每管10mL。

4. 调pH值- 使用pH计测定培养基的pH值,调节至9.0~10.0。

5. 接种与培养- 将制备好的培养基置于26℃恒温培养箱中培养48小时。

五、实训结果1. 培养基制备成功,无杂菌污染。

2. 脂肪酶产量达到预期水平。

六、实训总结1. 本实训成功制备了适用于脂肪酶生产的培养基,为后续实验提供了基础。

2. 通过实训,掌握了培养基制备的基本步骤和注意事项,提高了实验室操作技能。

3. 认识到培养基制备过程中无菌操作的重要性,确保实验结果的准确性。

七、改进意见1. 在称量过程中,应注意精确称量,避免误差。

2. 在灭菌过程中,应确保高压锅的压力和温度达到要求,以保证培养基的无菌性。

3. 在分装过程中,应注意无菌操作,避免污染。

4. 在培养过程中,应注意观察培养基的形态和颜色变化,及时发现问题并采取措施。

常用培养基实验报告总结

常用培养基实验报告总结

一、实验目的1. 熟悉培养基的制备方法及原理。

2. 掌握培养基灭菌的基本操作。

3. 了解培养基在微生物培养中的应用。

二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的营养基础,其制备方法及质量直接影响微生物的生长和实验结果。

本实验主要制备牛肉膏蛋白胨培养基,该培养基含有微生物生长所需的各种营养物质,适用于多种微生物的培养。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、蒸馏水、pH试纸、无菌水、高压蒸汽灭菌器、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平等。

2. 实验仪器:高压蒸汽灭菌器、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平、无菌操作台等。

四、实验步骤1. 配制培养基(1)称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂等试剂,按比例加入蒸馏水。

(2)将混合液加热溶解,用pH试纸检测pH值,调整至7.0-7.2。

(3)将溶解后的培养基倒入三角瓶中,分装至每瓶100mL。

2. 灭菌(1)将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中,设定灭菌参数:121℃,15分钟。

(2)待压力升至所需值后,开始计时,灭菌完成后关闭电源,自然冷却至室温。

3. 冷却与倒平板(1)将灭菌后的培养基取出,待其冷却至50-55℃。

(2)将冷却后的培养基倒入无菌平板中,用玻璃棒搅拌均匀。

(3)待培养基凝固后,用无菌镊子取出平板,标记并放置于培养箱中。

4. 接种与培养(1)将待分离的微生物接种于平板上,采用平板划线法或稀释涂布法。

(2)将接种后的平板放入培养箱中,根据微生物生长特点调整培养温度和时间。

五、实验结果与分析1. 成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基,符合实验要求。

2. 培养基灭菌效果良好,未发现污染现象。

3. 在培养过程中,观察到微生物生长旺盛,说明培养基质量合格。

六、实验总结1. 通过本次实验,掌握了培养基的制备方法及原理,了解了培养基在微生物培养中的应用。

2. 熟悉了培养基灭菌的基本操作,提高了无菌操作技能。

3. 通过实验,了解了不同微生物对培养基的需求,为今后的实验研究奠定了基础。

培养基制配的实训报告

培养基制配的实训报告

1. 掌握培养基的基本原理和制配方法。

2. 学会实验室无菌操作技术,提高实验室基本技能。

3. 培养团队合作精神,提高实验操作能力。

二、实训环境1. 实验室环境:温度适宜、通风良好、光线充足。

2. 实验器材:无菌操作台、高压蒸汽灭菌器、电子天平、移液器、培养皿、试管、玻璃棒、酒精灯、镊子等。

3. 实验材料:牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、无菌生理盐水、无菌试剂等。

三、实训原理培养基是微生物生长繁殖所必需的养料,其主要成分包括碳源、氮源、无机盐、维生素等。

本实训以牛肉膏和蛋白胨为主要碳氮源,葡萄糖为碳源,琼脂为凝固剂,蒸馏水为溶剂。

四、实训过程1. 称量:按照配方要求,准确称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂等固体试剂。

2. 溶解:将称量好的固体试剂放入烧杯中,加入适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌至完全溶解。

3. 调节pH:用精密pH计测定溶液pH,根据需要用1mol/L的盐酸或氢氧化钠溶液调节pH至适宜范围。

4. 灭菌:将溶解好的培养基倒入锥形瓶中,用酒精灯进行灭菌处理,防止微生物污染。

5. 灭菌后的培养基冷却至50℃左右,加入适量的蒸馏水,使培养基浓度适宜。

6. 倒平板:将冷却至50℃左右的培养基倒入培养皿中,用无菌玻璃棒均匀铺平,待凝固后备用。

7. 分装:将制备好的培养基分装至无菌试管中,密封,备用。

1. 培养基制备成功,符合实验要求。

2. 学生掌握了培养基的基本原理和制配方法。

3. 学生提高了实验室无菌操作技能。

六、实训总结1. 通过本次实训,使学生了解了培养基的制备过程,掌握了培养基的基本原理和制配方法。

2. 学生通过无菌操作,提高了实验室基本技能。

3. 实训过程中,学生培养了团队合作精神,提高了实验操作能力。

本次实训取得了良好的效果,达到了预期的目的。

在今后的实验教学中,我们将继续加强实验室基本技能的培养,提高学生的综合素质。

同时,针对实验中出现的问题,及时进行总结和改进,确保实验教学的质量。

制备培养基实验报告

制备培养基实验报告

一、实验目的1. 掌握培养基的制备原理和方法。

2. 了解不同类型培养基的配制过程和用途。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作步骤。

4. 体验无菌操作技术,确保实验结果的准确性。

二、实验原理培养基是人工配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。

根据微生物的营养需求和实验目的,培养基可以含有碳源、氮源、无机盐、生长因素和水等成分。

不同类型的培养基适用于培养不同的微生物。

三、实验材料1. 培养基原料:牛肉膏、蛋白胨、琼脂、葡萄糖、酵母提取物、氯化钠等。

2. 器材:三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、pH试纸、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台等。

四、实验步骤1. 培养基配制1.1 称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、酵母提取物、氯化钠等原料,按照一定比例溶解于去离子水中。

1.2 将溶解后的溶液转移至三角瓶中,用玻璃棒搅拌均匀。

1.3 调整培养基的pH值至适宜范围(一般为7.0-7.6)。

1.4 将三角瓶置于高压蒸汽灭菌锅中,进行高压蒸汽灭菌,温度为121℃,压力为0.1MPa,时间为15分钟。

1.5 灭菌后,将培养基冷却至室温。

2. 平板制备2.1 将灭菌后的培养基倒入平板模具中,使其均匀分布。

2.2 将平板模具置于室温下冷却凝固。

2.3 将平板翻转,放置于无菌操作台上。

3. 无菌操作3.1 在无菌操作台中,用无菌接种环取适量菌种,接种于平板培养基上。

3.2 用无菌接种环在平板培养基上划线,形成菌落。

3.3 将接种好的平板置于适宜的温度和湿度条件下培养。

五、实验结果1. 通过高压蒸汽灭菌,制备的培养基均无菌,可用于微生物培养。

2. 在适宜的温度和湿度条件下培养,平板培养基上出现单菌落。

六、实验讨论1. 培养基的制备是微生物实验的基础,掌握培养基的制备原理和方法对于微生物实验的成功至关重要。

2. 高压蒸汽灭菌是保证培养基无菌的关键步骤,操作过程中要注意密封、压力和时间等因素。

3. 无菌操作是微生物实验的重要环节,要严格按照无菌操作规范进行。

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培养基的制备实验报告材料(文章一):培养基的制备与灭菌实验报告(详细)(一)、实验题目:培养基的制备与灭菌(二)、实验目的:(1)、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。

(2)、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。

(三)、实验器材:(1)、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

(2)、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

(四)、实验原理:(1)、培养基的制备包括一下几种成分:(1)水分:主要成分。

(2)N源:包括无机氮和有机氮。

(3)C源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

(4)无机盐:如NaCl、KH2PO4等。

微量元素:Cu、K、Mg、S、P、Zn。

有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

(2)、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类:按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。

(3)、灭菌:用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

(1)高压蒸汽灭菌:将物品放入封闭的加压灭菌器,加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基,110℃、30min。

(2)干热灭菌:微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温,所以含水量小,不利于蛋白质受热变性,所以温度高,时间长。

(3)紫外灭菌:诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。

(4)过滤除菌:实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22μm)。

除病菌需更小。

(五)、实验步骤:(1)、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯,加入100mL水,用玻璃棒搅匀溶解,移入三角瓶,并加入1.5g琼脂。

加上棉塞,迅速拔出能发出清脆声响即可,用报纸包住并系好麻绳。

(2)、包移液管和培养皿(1)包一包培养皿(一包五个):用手压紧、塞好,折出棱角,包好后摇晃没有培养皿相互碰撞的声音即可。

(2)包2支移液管:用棉花塞好移液管尾部,露出1~2cm即可。

取长条报纸,一端折90°角,紧密严实沿30°角卷好移液管,尾部叠好防止散开。

(3)、高压蒸汽灭菌(1)灭菌前要先看水位是否合适。

(2)将包好的待灭菌物品放入内层锅,不要装得太挤,棉塞不应染上培养基。

(3)加盖,两两对称旋紧螺栓。

(4)设定条件:0.1MPa、121℃、20min,进行加热。

(5)先打开排气阀,待空气排尽后,关上排气阀。

(6)结束后,自然降温,压力降为0后,打开排气阀取出物品。

(4)、干热灭菌(1)将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内,关好门箱。

(2)设定条件:160~170℃,恒温2h。

(3)结束后,切断电源,自然降温,降到70℃以下后开箱取物。

(六)、思考题:(1)、你配制的是什么培养基?选择培养基。

(2)、选择培养基与鉴别培养基的区别?这两种培养基的应用情况。

选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。

其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率。

如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物分散酵母菌或霉菌时,可添加适量的青霉素、四环素或链霉素,以抑制细菌和放线菌的生长。

鉴别培养基是在成分中加入有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基,此类培养基一般用于鉴定不同微生物。

如EMB即伊红美乳糖造就基。

大肠杆菌分解乳糖产生大量混合酸,可染上酸性伊红,伊红和美兰结合,菌落被染成深紫色,从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光。

(文章二):《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告实验目的1.学习和掌握配制培养基(以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例)的一般方法和原理。

2.了解消毒和灭菌的原理,掌握常用灭菌方法的操作步骤。

实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中.微生物种类繁多,营养类型多样,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多。

但是,不同种类的培养基中,一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。

不同微生物对PH要求不一样.雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的,而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。

所以配制培养基时,都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。

此外,由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物,因此,已配制好的培养基必须立即灭菌.如果来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内,通过加热,使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽,然后关闭排气阀.继续加热,此时由于蒸气不能道出,而增加了灭菌器内的压力,从而使沸点增高,得到高于100℃的温度。

导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供作微生物生长繁殖之用。

基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂,琼脂在常用浓度下96℃时溶化,实际应用时,一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌,因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:牛肉膏3.0g 蛋白胨10.0 g NaCl5.0g 水1000ml pH7.4—7.6 实验仪器与药品1.溶液或试剂:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol /L HCl。

2.仪器或其他用具:试管、三角瓶、1000ml烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(pH5.5-9.0)、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。

实验步骤(一)牛肉膏蛋白胨培养基的制备1.称量(假定配制1000ml培养基)按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯(或1000ml刻度搪瓷杯)中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。

也可放在称量纸上,称量后直接放人水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。

2.溶化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量(如约700ml),用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解,将药品完全溶解后,补充水到所需的总体积(1000ml);如果配制固体培养基时,将称好的琼脂放人已溶的药品中,再加热溶化,最后补足所损失的水分。

3.调pH 在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH,如果偏酸.用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其PH,直至pH达7.4-7.6。

反之,用1mol/LHCl进行调节。

4.过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利某些实验结果的观察。

可以省去(本实验勿需过滤)。

5.分装液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

分装三角瓶的虽则根据需要而定,一般以不超过三角瓶容积的一半为宜,如果是用于振荡培养用,则根据通气量的要求酌情减少;有的液体培养基在灭菌后,需要补加一定量的其他无菌成分,如抗生素等,则装量一定要准确。

固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。

分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

半固体分装一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

6.加塞培养基分装完毕后,在试管口或三角瓶口上塞上棉塞(或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。

7.包扎加塞后,将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。

8.灭菌将上述培养基以0.103MPa,l21℃,20min高压蒸气灭菌。

9.摆斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜l0.无菌检查将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24-48h.以捡查灭菌是否彻底。

注意事项1.蛋白胨很容易吸湿,在称取时动作要迅速,另外,称量时严防药品混杂.一把牛角匙用于一种药品.或称取一种药品后,洗净——擦干——再称职另一药品——瓶盖也不要盖错。

2.在琼脂溶化过程中.应控制火力,以免培养基因沸腾而溢出容器。

同时,需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦,制培养基时,不可用铜或铁锅加热溶化,以免离子进入培养基中,影响细菌生长。

3.对于有些要求PH较精确的微生物,其PH的调节可用酸度计进行(使用方法、可参考有关说明书)。

pH不要调过头,以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。

配制pH低的琼脂培养基时.若预先记好PH 并在高压蒸汽下灭菌,则琼脂因水解不能凝固。

因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌,再调整pH。

4.分装过程中,注意不要使培养基沾在管(瓶)口上,以免沾污面塞而引起污染。

(二)高压蒸汽灭菌法步骤1.加水使用前在锅内加入适量的水,加水不可过少,以防将灭菌锅烧干,引起炸裂事故。

加水过多有可能引起灭菌物积水。

水面与三角架相平为宜2.装料将灭菌物品放在灭菌桶中,不要装得过满。

3.加盖盖好锅盖,按对称方法旋紧四周固定螺旋,打开排气阀。

4.加热排气加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出,待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时,排出的气流很强并有嘘声时,维持2—3min以排除冷空气。

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