鉴别培养基
人教版高中生物选修1专题2课题2选择培养基和鉴别培养基(共19页)
尿素的利用：尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能 直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后 才能被植物利用。 尿素分解菌分解尿素的原因：土壤中的细菌能合成脲 酶分解尿素。 脲酶 2NH + CO + H O CO(NH2)2 2 3 2
筛选出尿素分解菌的应用价值: 1.研究其生活习性，为提高农业 生产创设条件； 2.挑选与培养优良菌种，服务农 业生产...
依据：在寻找目的菌种时，要根据它对生存环境的
要求，到相应的环境中去寻找。
启示：
实验室中微生物的筛选原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包 括 营养、温度、pH 等)，同时 抑制 或 阻止 其 它微生物生长。
选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时 抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
选择培养基的制作（金牌学案P22）
如培养基中加入青霉素,可筛选出酵母菌和霉菌。
培养基加入某种化学物质，以抑制不需要 选择培养基 的微生物的生长，只生长具有特定目的的 微生物。
含青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌 含高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物 含四环素等抗生素的培养基: 分离导入目的基因的 受体细胞 鉴别培养基 在培养基中加入某种指示剂，鉴别特定的 微生物，可以存在其他微生物。
【资料三】刚果红染色法（P29）
培养基组成 讨论：刚果红（CR）呢？ CMC-Na 5-10g (水溶性羧甲基纤维素钠) 方法一： 先培养微生物，再加入刚果 酵母膏 1g 红进行颜色反应； KH2PO4 0.25g
土豆汁 琼脂
100mL 15g
方法二：在倒平板时就加入 刚果红。
上述物质溶解后，加蒸 馏水定容至1000mL
鉴别培养基的例子
培养基是细胞培养所需的基础材料，它可以提供细胞所需的营养，促进细胞的生长和增殖。
鉴别培养基的方法有很多，下面是一些常见的例子：
1.通过外观鉴别：不同的培养基可能会有不同的颜色和透明度，可以根据外观进行鉴别。
2.通过成分鉴别：可以查看培养基的成分表，看看是否符合需要的细胞所需的营养成分。
3.通过细胞培养效果鉴别：可以观察细胞在不同培养基中的生长情况，看看哪种培养基对细胞的生长最有促进作用。
4.通过pH值鉴别：培养基的pH值对细胞的生长有很大的影响，可以通过测量培养基的pH 值来鉴别。
5.通过培养基的保存期限鉴别：培养基有一定的保存期限，过期的培养基可能会对细胞的生长造成不利影响，可以通过查看培养基的保存期限来鉴别。
鉴别培养基的概念
鉴别培养基的概念随着生物技术的不断发展，培养基作为生物学研究的重要工具之一，也得到了越来越广泛的应用。
在微生物学领域中，鉴别培养基是一种常用的培养基类型，它不仅可以提供适合微生物生长的营养物质，还能通过特定的组分和条件，使不同种类的微生物在培养基上表现出不同的生长特征，从而实现对微生物的鉴别和分类。
本文将对鉴别培养基的概念、种类、制备和应用等方面进行探讨。
一、鉴别培养基的概念鉴别培养基是指通过调整培养基组分和条件，使不同种类的微生物在培养基上表现出不同的生长特征，从而实现对微生物的鉴别和分类的培养基。
鉴别培养基可以通过不同的生长特征，如形态、色素、产物、代谢途径等，来区分不同种类的微生物。
鉴别培养基的设计需要根据不同的微生物分类学特征和生理学特征，选择合适的培养基组分和条件进行调整，以达到鉴别的目的。
二、鉴别培养基的种类鉴别培养基根据不同的鉴别特征和目的，可以分为许多不同的类型。
以下是常见的几种鉴别培养基：1.差异培养基差异培养基是通过改变培养基中某些组分或添加特殊成分，使得不同菌株在培养基上表现出不同的生长特征。
常见的差异培养基有MacConkey培养基、Eosin Methylene Blue(EMB)培养基、XLD(肠杆菌属选择性培养基)培养基等。
2.选择性培养基选择性培养基是通过添加抑制某些微生物生长的成分，来选择性地培养某些微生物。
选择性培养基通常用于寻找某些特定微生物或排除其他微生物的情况，以便在混合菌落中鉴别和分离。
常见的选择性培养基有Sabouraud培养基、VRBD(沙门氏菌选择性培养基)培养基、MRS(乳酸菌选择性培养基)培养基等。
3.指示培养基指示培养基是通过添加某些指示剂，使得某些微生物在培养基上表现出明显的颜色变化或其他鉴别特征。
指示培养基通常用于鉴别某些特定的微生物，以便快速、准确地进行鉴别。
常见的指示培养基有MacConkey培养基、TSA(三氯化铁糖果蜜培养基)培养基、Blood Agar(血琼脂培养基)培养基等。
微生物培养基的分类
应用：实验室内，研究微生物营养、代谢、菌种选
育、菌种鉴定、生物测定等定量要求较高的研究。
2.天然培养基
又称复杂培养基，采用动植物组织或微生物细胞 或其提取物和粗消化产物制成的。 营养物质来源于天然物质。
天然物质：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麦芽汁、玉米粉、
用途：分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等 。
凝固剂：琼脂、明胶和硅胶三种。 凝固剂要求: ①不被微生物利用分解，生长温度范围为固体。 ②凝固点温度不能太高。琼脂:45 -55℃ ③无毒，灭菌不会破坏。 ④透明及粘着力强。 ⑤凝胶强度和韧度要适中。
2.半固体培养基
在液体培养基中加入少量凝固剂,使之呈柔软的糨糊 状或直接将营养物质配制成半流体状态的培养基。
应用：微生物生理生化特性研究、大规模的工业生 产（啤酒、葡萄酒、乳制品生产）。
液体流乙醇酸盐流体培养基
好氧菌，厌氧菌，兼性厌氧菌的检验
（三）按照培养基的功能分 (1)基础培养基:含有一般微生物生长繁殖所需的基
本营养物质的培养基。 用途:作为一些特殊培养基的基础成分。 细菌:牛肉膏蛋白胨培养基 霉菌:马铃薯葡萄糖琼脂培养基 酵母菌:麦芽汁琼脂培养基
紫色菌落
菌群
培养基是微生物菌种生长繁殖和发酵的重 要物质基础，也是微生物赖以生存的外界环 境。在科学实验和实际生产中，会遇到许多 问题，有些培养基即是液体培养基，又是选 择培养基也可能是天然培养基，掌握不同类 型的培养基特点，并将之灵活地应用于具体 的实际工作之中。
与选择培养基区别： 加富培养基：增加所要分离的微生物数量，成为优 势菌，逐步淘汰其他微生物。 选择培养基：抑制不需要微生物的生长，使所需要 菌成为优势菌。
鉴别培养基的概念
鉴别培养基的概念鉴别培养基是现代微生物学领域中的一个重要概念。
它是指一种特殊的培养基，可以用来鉴别不同种类的微生物。
这种培养基通常包含了多种不同的化学物质，可以提供微生物生长所需的营养物质，并且可以通过不同的反应来鉴别不同种类的微生物。
鉴别培养基的发展历史可以追溯到19世纪末期。
当时的微生物学家们开始尝试在培养基中添加不同的化学物质，以便区分不同的微生物。
最早的鉴别培养基是用来鉴别大肠杆菌和链球菌的，它们分别被称为MacConkey培养基和Blood Agar培养基。
随着时间的推移，越来越多的鉴别培养基被开发出来，以满足不同的鉴别需求。
鉴别培养基可以通过多种方式进行鉴别，包括生理特性、形态特征、代谢产物等。
例如，MacConkey培养基可以通过菌落的颜色和形态来鉴别大肠杆菌和其他肠道细菌；Blood Agar培养基可以通过菌落的颜色和形态来鉴别链球菌和其他血液细菌。
除了常规的鉴别培养基外，还有一些特殊的鉴别培养基，如选择性培养基和差异培养基。
选择性培养基可以通过抑制某些微生物的生长来选择性地培养其他微生物，从而实现鉴别。
差异培养基则是通过微生物的代谢产物来鉴别不同的微生物。
例如，Eosin Methylene Blue Agar（EMB）培养基可以通过微生物的代谢产物来鉴别大肠杆菌和其他肠道细菌。
鉴别培养基的应用范围非常广泛，涵盖了许多不同的领域。
在医学领域，鉴别培养基可以用来诊断病原微生物的感染，从而帮助医生选择合适的治疗方案。
在食品工业领域，鉴别培养基可以用来检测食品中的微生物污染，从而保证食品的安全性。
在环境科学领域，鉴别培养基可以用来研究微生物在不同环境条件下的生态学特性。
总之，鉴别培养基是现代微生物学领域中的一个重要概念。
它可以通过多种方式来鉴别不同种类的微生物，广泛应用于医学、食品工业和环境科学等领域。
随着科学技术的不断发展，相信鉴别培养基还将继续发展和创新，为人类健康和生活的提升做出更大的贡献。
细菌的分离与鉴定题目
细菌的分离与鉴定一、名词解释1、细菌分离及鉴定：使用人工的方法使细菌在适当的环境和营养基质中生长繁殖，获取纯种、进行鉴定与研究等。
2、培养基：人工配置的供细菌生长繁殖的营养基质，是用人工方法将多种营养物质按照各种细菌的需要而组合成的混合营养料。
3、选择性培养基：在培养基中加有出营养成分以外的抑制物质，使之具有选择性，有利于目的细菌的检出和识别，而抑制其他非目的菌的生长或使其生长不佳。
4、鉴别培养基：利用各种细菌分解糖类和蛋白质能力及代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物，观察细菌在其中生长对底物的利用，从而鉴别细菌的培养基。
5、系统鉴定：通过病原菌的形态结构、生长特性、抗原性和病原性等检测，并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型。
6、基因探针技术：用标记物标记细菌染色体或质粒DNA上的特异性片段之辈成细菌探针，待检标本经过短时间培养后，经过点膜、裂解变性、预杂交和杂交后，利用探针上标记物发出的信号可以知道杂交结果并判断杂交结果并判断病原体的性质。
7、毒力：病原细菌的致病能力的强弱。
通常病原细菌的毒力越大，其致病性越强。
8、半数致死量：在一定的时限内能使半数实验动物感染后发生死亡所需的活的细菌量或毒素量。
9、复杂染色法：应用两种或两种以上的染料或再加媒染剂进行染色的方法称为复杂染色法。
10、抑制剂：用于抑制非检出菌的生长或使其少生长，以利于检出菌的生长。
二、填空1、培养基的主要成分有营养物质、水分、凝固物质、抑制剂和指示剂。
2、当琼脂含量为1%-2%时可制成固体培养基，含量为0.3%-0.5%时可制成半固体培养基。
3、常用的抑制剂有胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸盐、四硫磺酸盐、叠氮钠、一些染料及某些抗生素等。
4、常用指示剂有酚红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红、甲基红、酸性复红等。
5、鉴别培养基主要供生化反应试验用，如糖发酵培养基、七叶苷培养基等。
6、常用的接种方法有平板划线接种法、斜面接种法、倾注培养法、穿刺接种法、半固体培养基接种法、液体接种法、平板涂布接种法。
常见微生物培养基
常见微生物培养基Medium含有碳水化合物、含氮应用化学药品配成并标液体培养基不易长期保有不同。
一般培养基在对一些需严格灭菌的培2~6。
C的冰箱内。
1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克 1.00.5 1.5水100毫升在烧杯内加水100火上加热。
待烧杯内各10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,30分钟。
配方二马铃薯培养基250500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。
在烧杯上做好2pH值调到7.5左右。
每支试管内加入10毫升配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升2、放线菌培养基配方一可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升595使它溶解。
在烧杯外做好pH值到7.27.4备用。
配方二面粉琼脂培养基面粉60克琼脂20克水1000毫升50030分钟。
另取500pH值到7.43、真菌培养基配方一Sabouraud’s蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升40本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
配方二马铃薯糖琼脂培养基2001000液中加入10煮沸溶解后加糖20用。
把这培养基的pH值调到7.27.4杆菌。
配方三黄豆芽汁培养基黄豆芽100克琼脂15克葡萄糖20克水1000毫升301000把这培养基的pH值调到7.27.4配方四豌豆琼脂培养基豌豆80粒琼脂5克水200毫升取801小4、食用菌菌种培养基配方一马铃薯—蔗糖--琼脂培养基20%马铃薯煮汁1000毫升蔗糖20克琼脂18克200100020分钟足水分到100020%pH配方二综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000 毫升磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克葡萄糖20克维生素10毫克琼脂18克先配制20%整pH值到6该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
鉴别培养基
麦康凯琼脂麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。
不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。
麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。
MACCONKEY AGARMacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment created by fermenting lactose. Organisms that do not ferment lactose do not cause a color change.配方g/l蛋白胨 20.0 乳糖 10.0 胆盐 5.0 氯化钠 5.0 中性红 0.075 琼脂 12.0 pH 7.4±0.配制取52克CM7，加1升蒸馏水，加热至溶解完全，121℃灭菌15分钟。
待琼脂表面变干方可接种。
特点CM7符合世界卫生组织（WHO）推荐的培养基。
工业用于检测水、乳制品和生物标本的大肠菌群和肠道致病菌，临床用于分离肠细菌。
此培养基可抑制革兰氏阳性菌，可区分乳糖发酵性和非发酵性菌。
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麦康凯琼脂
麦康凯可能是世界上常用的一种鉴别培养基，它主要通过乳糖发酵鉴别肠道致病菌，还能抑制革兰氏阳性菌生长，发酵乳糖的细菌能使培养基变红，这是因为细菌发酵乳糖产酸而使培养基的PH值变成酸性的。
不发酵乳糖的细菌没有颜色的变化。
麦康凯抑制阳性菌的生长，是因为其中加了结晶紫。
MACCONKEY AGAR
MacConkey agar is probably the most popular solid differential medium in the world. It is mainly used in identification of lactose fermenting, Gram-negative enteric pathogens and for inhibiting growth of Gram-positive organisms. Bacterial colonies that can ferment lactose turn the medium red. This red color is due to the pH indicators response to the acidic environment created by fermenting lactose. Organisms that do not ferment lactose do not cause a color change.
配方g/l
蛋白胨 20.0 乳糖 10.0 胆盐 5.0 氯化钠 5.0 中性红 0.075 琼脂 12.0 pH 7.4±0.
配制
取52克CM7，加1升蒸馏水，加热至溶解完全，121℃灭菌15分钟。
待琼脂表面变干方可接种。
特点
CM7符合世界卫生组织（WHO）推荐的培养基。
工业用于检测水、乳制品和生物标本的大肠菌群和肠道致病菌，临床用于分离肠细菌。
此培养基可抑制革兰氏阳性菌，可区分乳糖发酵性和非发酵性菌。
还可以区分耶尔森菌和巴斯德氏菌，巴斯德氏菌不能生长。
以下是各菌种在麦康凯琼脂经35℃培养24小时后的菌落外观：
菌种形态菌落颜色、
大肠杆菌红色、非黏液样有胆盐沉淀环
产气杆菌粉红色、黏液样
肠球菌红色、微小、圆形
链球菌苍白粉红色、不透明
绿脓杆菌棕绿色、荧光绿
乳糖发酵性菌红色
乳糖非发酵性菌无色
沙门氏菌无色大菌落
使用
按常规操作，将尿液、粪便、污水等标本接种至麦康凯琼脂，分离单菌落，35℃培养18-24小时。
其实该菌最重要的用途还不只是在肠道细菌的鉴别上，对于非发酵菌的鉴定中就有一项是麦康凯生长，主要是观察细菌对胆盐的耐受性的，在这里是作为一项生化反应试验而应用的。
另外，在实际工作中巧妙的利用不同细菌在各种不同的培养基上的生长特性就可以快速的对细菌进行初步分群和鉴定：
例如：痰标本，直接接种标本后的第二天，如果在血琼脂上形成针尖状透明小菌落，在巧克力培养基上形成无色到灰色半透明，光滑闪光菌落，在麦康凯上不生长，直接涂片均为G-细小杆菌，或者细丝状杆菌的就多半是嗜血杆菌；
而如果在CSF标本，血琼脂上生长良好，含万古霉素巧克力不生长，麦康凯上不生长，直接涂片是杆菌，氧化酶阴性，触酶阳性，动力阳性，哪怕染出来看起来是“G-杆菌”，我也不会考虑G-，而会毫不犹豫的判断为G+杆菌，李斯特菌！
中国蓝平板
中国蓝平板中含有中国蓝和玫瑰红酸。
中国蓝在酸性溶液中呈蓝色，在碱性溶液中呈微蓝至无色。
玫瑰红酸在酸性溶液中呈黄色，在碱性溶液中呈红色。
此培养基pH7.4，制好后应呈淡紫色。
过碱呈鲜红色，过酸呈蓝色，均不适用。
玫瑰红酸能抑制革兰阳性细菌生长，但对大肠埃希菌没有抑制作用，故粪便标本接种量不宜过多。
多数肠道致病菌不分解乳糖，其菌落为透明或半透明淡红色；大肠埃希菌分解乳糖产酸，形成大而浑浊的蓝色菌落。
中国篮平板正常颜色是蓝色,不是红色,这一点要注意.
该平板的指示剂就是中国篮，时何种成分有待查找。
35度18小时培养后细菌颜色如下：
中国蓝平板中的生长现象：
显蓝色大肠埃希氏菌菌落大小 3－4mm
葡萄球菌属菌落大小 1mm
链球菌菌落大小 0.5mm
不显色沙门氏菌，沙雷氏菌属等
中国蓝平板指示剂是用的10g/L中国蓝的水溶液，其水溶液应隔水煮沸灭菌使用，不发酵乳糖细菌的菌落是半透明，淡紫红色，分解乳糖的细菌是大而浑浊的蓝色菌落
大肠杆菌菌落蓝色，克雷伯兰粉色大而粘稠，不动杆菌粉色，沙门氏菌和痢疾杆菌为透明，嗜麦芽窄食单孢菌为黄粉色特别典型，霉菌、酵母杨真菌也都可生长，易于鉴别，建议你试一试。
记录部分
科玛嘉念珠菌显色培养基（大多数典型菌落形态）
白色念珠菌草绿色翠绿色
热带念珠菌蓝绿色铁蓝色
光滑念珠菌紫色光滑型
克柔念珠菌粉红色粗糙型、菌落大
中国蓝平板细菌生长现象：
显蓝色大肠埃希氏菌菌落大小 3－4mm
葡萄球菌属菌落大小 1mm
链球菌菌落大小 0.5mm
不显色沙门氏菌，沙雷氏菌属等
不发酵乳糖细菌的菌落半透明，淡紫红色，
分解乳糖的细菌大而浑浊的蓝色菌落
大肠杆菌菌落蓝色，
克雷伯兰粉色大而粘稠，
不动杆菌粉色
沙门氏菌和痢疾杆菌透明
嗜麦芽窄食单孢菌黄粉色
SS琼脂平板
使用方法：
1、原理：
胨、牛肉膏粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；乳糖、葡萄糖为可发酵的糖类；三号胆盐、柠檬酸钠和煌绿抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长；硫代硫酸钠和柠檬酸铁用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；中性红为pH指示剂，发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色；琼脂是培养基的凝固剂。
称取本品56.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，待冷至50℃左右，在无菌环境中，倾注灭菌平皿，待凝固后，备用。
2、分离：用接种环取增菌液一环，划线接种于平板上。
3、培养：将平板放入恒温培养箱中，36±1℃培养18—24h。
4、观察结果。
本培养基倾注平皿，待冷却后呈暗红色，质控菌株接种后。
36±1℃培养18—24h，观察结果如下表：
用途：用于沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养。
主要有ss平板，EMB:伊红美兰培养基和双糖铁培养基，
肠道致病菌不分解乳糖，所以在SS平板上生长的菌落为无色透明的小菌落。
如能产生H2S，则菌落中心呈黑色。
大肠杆菌在SS平板上一般不生长，但如粪便标本接种得多，大肠杆菌量多所以仍有少数生长。
大肠杆菌能发酵乳糖产酸，菌落呈红色，或菌落中心显红色，很容易和致病菌区分。
观察半固体-双糖铁培养基结果。
如果双糖铁培养基中乳糖不发酵，可能为肠道致病菌。
根据葡萄糖发酵结果、运动力的有无等可初步判定为哪一类细菌。
伊红美兰培养基上大肠埃希菌(非致病菌)发酵乳糖产酸，结合伊红美兰形成紫黑色金属光泽有色的菌落，伤寒沙门菌等(致病菌)不发酵，不能结合乳糖伊红美兰，形成无色的菌落
SS为强选择性培养基.其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。
如柠檬酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用及煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠杆菌的生长。
对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。
硫代硫酸钠有助于大肠菌的着色，柠檬酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒副作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。
中性红指示剂可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落。
表10-1 大肠杆菌在普通琼脂平板及选择鉴别培养基上的菌落特征
培养基菌落特征
普通琼脂平板圆形，中等大小，灰白，整齐，光滑菌落
SS平板呈红色
中国蓝平板呈蓝色
伊红美蓝平板呈紫黑色，有金属光泽
*Salmonella -Shigella medium ss是沙门氏菌贺志氏菌的意思
请问霍乱弧菌进行分离培养时常用的选择培养基TCBS是那些成分组成?
其他细菌在碱性pH平板上不易生长,故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基; 在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形,光滑,透明. 常用的选择培养基为：硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBS),霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落。