继代培养
细胞工程名词解释
细胞工程名词解释1.细胞株：从原代培养或细胞系获得的具有特定性质或标志，并在随后培养期间始终保持具有其特性的细胞。
2.细胞系：从初代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群。
3.密度抑制：随着细胞密度进一步增大，细胞内因营养枯竭和代谢产物的影响抑制正常细胞分裂的现象。
4.接触抑制：随着细胞数量的不断增多，相互接触融成片，正常细胞由于接触限制运动的现象。
5.干细胞：一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
6.植物组织培养：无菌条件下，将离体的器官，组织，细胞，胚胎，原生质体等培养在人工配置的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤组织，潜伏芽或者产生新的完整植株的一种实验技术。
7.外植体：植物组织培养中用来进行离体无菌培养的离体材料，可以是器官，组织，细胞和原生质体。
8.愈伤组织：由外植体组织增生的细胞产生的一团不定型的疏散排列的薄壁细胞。
9.褐化：由于组织中的多酚氧化酶被激活，使细胞的代谢发生变化，酚类物质被氧化后产生醌这类棕色物质，对外植体有毒害作用，严重时死亡。
10.继代培养：愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养枯竭水分丧失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移就叫继代培养。
11.玻璃化：表现为试管苗叶，嫩梢是水晶透明或半透明，水浸状，整株矮小，叶片皱缩成卷曲，脆弱易碎，叶表缺少角质层，错质没有功能性气孔，不是栅栏组织只有海绵组织。
12.离体快速繁殖：利用细胞的再生特性，在组织培养下加快繁殖材料的个体生长，提高繁殖系数。
13.细胞全能性：一个活细胞所具有发育成完整生物个体的潜在能力14.植物细胞培养：在离体条件下将植物的单个细胞或小的细胞团在培养基中进行培养在使其增值的一种技术。
15.细胞悬浮培养：单个的游离细胞或细胞团在液体培养基中进行培养的技术。
（用胚，胚轴，子叶）16.固定化培养技术：将游离的细胞包埋在多糖或多聚化合物制备成的网状支持物中，培养液呈流动状进行无菌培养的一门技术。
试管苗的增殖和生根培养
盐母液：80ml；钙盐母液160ml;有机物母液80ml。
1mg/L 6-BA取8ml，0.1mg/L NAA取16ml。
混匀。
c.待琼脂完全溶解后，加入规定用量的蔗糖（240g），继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即8L。
注意：a)、调节培养基的酸碱性至pH5.8b)、培养基的分装，配制好的培养基要趁热分装，培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧。
本次实验中4L分装到150个左右三角瓶，每人3瓶。
2. 培养基的灭菌培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。
消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。
同时将接种工具进行灭菌。
3．试管苗转接（1）准备：提前将经过灭菌的培养基、接种工具、吸水纸、器皿及待转接材料放入超净工作台内，打开紫外灯消毒20min。
（2）转接：对菊花、香石竹、马铃薯、月季等节间明显的多茎段嫩枝材料，采取切茎段的方式，茎段长1cm左右，带1-2个茎节，可将茎段垂直插入培养基中，或水平放入培养基表面，一刺激侧芽的萌动；对生姜，草莓等茎间不明显的芽从，采取分离芽从的方式扩繁。
c.待琼脂完全溶解后，加入规定用量的蔗糖（240g），继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），最后加蒸馏水至所需体积，即8L。
2. 培养基的灭菌培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。
消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。
同时将接种工具进行灭菌。
3．试管苗转接（1）准备：提前将经过灭菌的培养基、接种工具、吸水纸、器皿及待转接材料放入超净工作台内，打开紫外灯消毒20min。
植物组织培养的培养基
★植物组织培养培养基的主要成分1.无机营养物：无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁,这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA（螯合剂）的混合。
2.碳源：培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖，用量通常为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所代替，但一般应增加用量，而且最好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。
3.有机营养成分：包括人工合成或天然的有机附加物（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等）。
最常用的有酪朊水解物(水解乳蛋白、水解酪蛋白CH)、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁(CM)及各种氨基酸如甘氨酸（氨基乙酸）等。
维生素：在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有硫氨素（维生素B1）、盐酸吡哆醇（维生素B6）和维生素H（生物素）、泛酸钙等、肌醇（环己六醇）、烟酸。
在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）和氯化胆碱等维生素。
这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。
(细胞工程)名词解释
一、名词解释细胞工程:是应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。
通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。
外植体:是指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料。
植物组织培养：（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
（狭义）组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
愈伤组织：在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。
胚状体〔embroid〕:—对应于胚〔embryo〕，在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。
离体无性繁殖：是在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖的技术。
跟常规的繁殖方法相比它是一种微型操作过程，因此，有时就直接称之为微繁继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织.芽等）。
细胞分化:指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
细胞脱分化:已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分化组织状态的过程。
细胞再分化:脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。
人工种子:亦称体细胞种子。
早期的人工种子概念是：体细胞胚经过人工种皮包被后而形成的体细胞种子。
现在指任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之为人工种子。
植物细胞全能性:指每个植物细胞都具有形成完整植株的能力，因为每个细胞都具有全套的遗传基因，无论是性细胞还是体细胞在特定条件下可以进行表达。
植物组织培养步骤
植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
组织培养的步骤一、培养基配制配制培养基有两种方法可以选择，一是购买培养基中所有化学药品，按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂，如MS、B5等。
自己配制可以节约费用，但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题，给实验带来麻烦。
就目前国内的情况看，大部分还是自己配制。
为了方便起见，现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。
1、配制几种母液（1）配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
分别称取NH4NO3 165g KH2PO4 17gKNO3 190g CaCl2·2H2O 44gMgSO4·7H2O 37g各自配成1L的母液。
倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（2）配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。
依次称取KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025gH3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025gMnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025gZnSO4·7H2O 0.86g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
分别称取CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。
植物组织培养名词解释
全能性：一个具有完整的膜系统和细胞核的生活细胞，在适宜的条件下可通过细胞分裂与分化，再生出一个完整的植株胚性细胞：构成胚胎的所有细胞几乎都保持着未分化的状态和旺盛的细胞分裂能力，其细胞质浓稠、细胞核较大、细胞与细胞之间没有很大差别，又称分生细胞、未分化细胞。
生长：由于原生质的增加而引起的植物体体积或重量的不可逆增加。
发育：个体生命周期中植物体的构造和机能从简单到复杂的质变过程，是植物体各部分，各器官相互作用的结果，只能从整体水平上表现。
分化：来自同一合子或遗传上同质的细胞变为形态、机能和化学构成上异质细胞的过程。
愈伤组织：是指一种没有器官分化但有进行活跃分裂的细胞团。
器官发生:愈伤组织的部分细胞先分化产生根（或芽）,在另一种培养基上产生芽（或根）,形成完整植株胚状体发生:愈伤组织中产生出一些与种子中胚相似的结构，即同时形成一个有苗端和根端的两极性结构，在另一培养基上同时发展成根与芽，这一过程与种子中胚的形成和种子萌发时形成幼苗的过程相似再分化：由无分化的愈伤组织的细胞再转变成为具有一定结构，执行一定生理功能的细胞团和组织，构成一个完整的植物体或植物器官的现象（过程）植物组织培养:分离一个或数个体细胞(somatic cell)、植物体的一部分在无菌试管(in vitro)的适当条件下培养的技术维管结节：由愈伤组织培养中普遍存在的分生组织结节继续分化而来，内部是管胞，外围形成层状细胞。
茎尖培养：用茎尖作为外植体的离体无菌培养原生质体：除细胞壁外的细胞内生命物质的总称。
无性繁殖系：来自一个祖先的无性繁殖的后代群体。
外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
脱分化:已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分化组织状态的过程。
愈伤组织:在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。
胚状体:—对应于胚〔embryo〕，在离体培养过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。
细胞工程题库精简版
细胞工程题一、名词解释1.植物组织培养：是指将植物组织在适当培养条件下诱导长成完整植株的技术。
2.植物的器官发生：指离体培养的组织或细胞团分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
3.脱分化：已有特定结构和功能的植物组织的细胞，在一定的条件下被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程。
4.愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团5.外植体：植物体上切下来进行培养的部分组织或器官。
可以是器官、组织、细胞和原生质体。
6.继代培养：指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养7.体细胞胚：又叫胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
8.植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
9.人工种子：又称合成种子或体细胞种子，是指将植物离体培养的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。
10.植物脱毒：利用物理、化学或生物学方法脱除植物所感染的病毒，在无菌条件下培养不带病毒的植株，进行快速繁育无病毒种苗的技术。
11.看护培养：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。
这块愈伤组织被称为看护组织。
12.细胞系：是以一种细胞为主、能在体外长期生存的不均一的细胞群体13.细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。
14.细胞融合：指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。
15.体细胞杂交：指将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。
16.单倍体：细胞中含有正常体细胞一半染色体数的个体，即具有配子染色体组的个体。
17.花药和花粉培养：指离体培养花药和花粉，形成花粉植株，从中鉴定出单倍体植株并使之二倍体化的细胞工程技术。
组培操作步骤
培养条件：MS为基础培养基，加入ZT 1.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L。
培养基配方：1.生长调节剂的配制：（1）6-BA：母液浓度1 mg/ml，5 mg6-BA + 5 ml水。
培养基内激素浓度0.5 mg/L，0.5 ml母液/1L培养基。
（2）IBA：母液浓度0.1 mg/ml，5 mgIBA + 50 ml水。
培养基内激素浓度0.1 mg/L，1 ml母液/1L培养基。
（3）NAA：母液浓度0.1 mg/ml，5 mgNAA + 50 ml水。
培养基内激素浓度0.1 mg/L，1 ml母液/1L培养基。
以上生长调节剂配制完成后，装入棕色瓶中，保存在冰箱中。
2.初代培养初代培养基配制：（1）MS40 g + 白糖10 g + 琼脂2.0 g，加热溶解，定容至1L。
（2）加激素，1 mg/ml的6-BA母液0.5 ml，0.1 mg/ml的IBA母液1 ml，0.1 mg/ml 的NAA母液1 ml。
（3）用1mol氢氧化钠调整pH=5.6，加0.5 ml左右。
分装，每瓶20 ml。
（4）灭菌，121℃，15min。
初代组培操作步骤：1.芽体消毒和预处理，取材前2天左右（晴天），待取材植株喷施800倍多菌灵一次，并用用透气纸袋套袋备用。
2.剪取半木质化供试材料，去除大叶，保留叶柄，用洗洁精、牙刷浸泡刷洗一遍，清水冲洗1 h，晾干，将枝条剪成3-5 cm的含2-3个腋芽的茎段。
3常规灭菌，在超净工作台上用75%酒精浸泡30 s，无菌水冲洗3次，每次1 min。
4. 2%次氯酸钠溶液加几滴Tween80，消毒6-15 min，无菌水冲洗3-4次，每次1 min。
5.用无菌滤纸吸干水分，将腋芽部分剥离，接种于无糖初代培养基上，一周后转接。
3.继代培养培养基配制同初代培养。
(1)用75%酒精处理超净工作台台面、搁板、两侧。
(2)将培养基及接种工具等放在超净工作台上，打开紫外灯灭菌30min(3)接种前用75%酒精擦拭培养皿和接种工具，再在火焰上烘烤。
植物细胞培养
悬浮细胞的生长动态
悬浮培养细胞的同步化
• 细胞同步化：同一悬浮培养体系的所有细 细胞同步化： 胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。 胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。 • 植物细胞在悬浮培养中容易团聚并进入不 同程度的分化状态，因此， 同程度的分化状态，因此，要达到完全同 步化是十分困难的。 步化是十分困难的。 • 同一培养体系的植物细胞经常不能处于同 一细胞周期，这种差异使悬浮细胞分裂、 一细胞周期，这种差异使悬浮细胞分裂、 代谢以及生理生化状态等复杂化。 代谢以及生理生化状态等复杂化。 • 通过一定的理化措施可以使同一体系中的 细胞达到相对同步化。 细胞达到相对同步化。
悬浮培养（Suspension culture） ）
• 悬浮培养 是细胞培养的基本方法，是将单 是细胞培养的基本方法，
个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行 培养增殖的技术。 培养增殖的技术。 • 特点 1. 培养细胞可不断增殖，且生长速度快。 培养细胞可不断增殖，且生长速度快。 2. 液体状态下便于细胞和营养物质的充分接 触和交换，细胞状态可以相对保持一致。 触和交换，细胞状态可以相对保持一致。
低温处理
• 可以提高培养体系中细胞同步化的程度 – Okamura等曾采用此方法使胡萝卜悬浮细 等曾采用此方法使胡萝卜悬浮细 胞较好地同步化。 胞较好地同步化。 – 梅兴国等（2001）采用 ℃低温处理红豆 梅兴国等（ ）采用6℃ 杉细胞也获得较明显同步化效果。 杉细胞也获得较明显同步化效果。 • 可能的原因 – 不同的温度对细胞的有丝分裂有极明显的 影响，在一定范围内， 影响，在一定范围内，温度下降使细胞分 裂速度减慢，细胞周期延长， 裂速度减慢，细胞周期延长，从而相应地 延长了分裂期的时间，使分裂指数提高， 延长了分裂期的时间，使分裂指数提高， 细胞同步化率升高。 细胞同步化率升高。
植物组织培养技术考试复习题解析
植物组织培养技术考试复习题一、填空题1、组织培养的理论依据是：植物细胞的全能性。
2、根据培养的外植体材料不同，可将植物组织培养分为以下几种类型：愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞培养、原生质体培养、遗传转化。
3、植物组织培养实验室一般划分为洗涤室、培养基配置室、缓冲室、无菌接种室、培养室、观察室、驯化室等分室，其中植物组织培养实验室对无菌条件要求最严格的区域是无菌接种室。
4、培养基成分主要包水分、无机盐类、有机营养成、植物生长调节物质、天然物质、pH 、凝固剂。
5、目前应用最广泛的组培基本培养基是MS培养基。
6、培养基最常用的碳源是糖类物质，使用浓度在1%-5%常用3 %。
7、培养基中加入活性炭的目的：减少外植体的褐变8、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值高则有利于根的形成:其比值低则有利于芽的形成。
9、一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象称为"J兑分化_"10、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行（高压蒸汽）灭菌,而要进行过滤方法灭菌。
11、确定花粉发育时期最简捷有效的方法是压片镜检法。
12、液体培养基和固体培养基最主要的区别是：固体培养基中添加了琼脂粉，而液体培养基一般不添加。
13、细胞悬浮培养的方法有分批培养和连续培养。
14、外植体灭菌常用的消毒剂是酒精，使用浓度一般为70—75%。
15、具有防止褐变作用的维生素是抗坏血酸（维生素c）。
16、常用防止褐变的试剂有有机酸、硫代硫酸钠。
17、组培中按照污染的对象分，常见的污染类型有细菌性污染_、真菌性污染。
18、在使用超净工作台进行无菌操作前，应先将借种器械放进超净工作台，并打开紫外线灯和风机组工作进行消毒20分钟左右。
19、配制培养基调节pH值时常用氢氧化钠溶液和稀盐酸溶液。
20、某溶液在使用前已配制成100倍的母液，在使用时，若需要配制1/2 L的培养基，则需要吸取母液的量是5ml。