免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫比浊法检测免疫球蛋白
一、实验目的
利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品）
二、实验原理
1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。
2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG 作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。
分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。
本实验采用透射法。
3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性
聚集影响结果。
三、实验材料
免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）
免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管）
微量加样枪、ep管（1.5mL离心管）
酶标仪、水浴箱
四、实验步骤
1.在7个EP管中各加250μL IgG试剂1（PEG）。
2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。
3.混匀后37℃水浴5min。
4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。
5.混匀后37℃水浴10min。
6.分别吸取200μL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。
五、实验结果与数据处理
2.标准曲线
3.样本浓度：y=0.604代入x=26.648g/L
由此得稀释之前样本的浓度为79.945g/L
误差：（79.945-34.8）/34.8*100％=129.73%
误差分析：
①抗原抗体反应需要一定孵育时间和温度，而操作中由于加样的速度限制，无法严格控制各管的反应时间；本次制作标准液时量极小，很有可能出现未混匀、挂壁的情况；标准液吸取量小会导致移液枪的误差被放大。
②免疫比浊法的基本原理是基于抗原抗体结合，而这个结合反应有特殊性，只有在一定范围浓度中，两者比例合适时检测结果才准确，否则会产生带现象，已有文章表明，稀释前后检测结果偏差很大(朱爱萍, 郭书云, 赵锐. 免疫比浊法检测异常血清免疫球蛋白的方法学探讨[J]. 现代检验医学杂志, 1999(4):33-34.)，所以我认为此样本虽然是由原液稀释三倍所得，但在溶液中IgG抗体的浓度都相同的情况下，两管中抗原抗体比例相差很大，所以检测结果也有偏差是可以理解的。同时再结合散点图拟合出的标准曲线，可以发现，浓度较高的两管标准液距离拟合曲线的偏差是最大的，由此推断，1：1原液和1：2原液并不适合本次实验中所给的羊抗人抗体浓度（未知）。所以，误差来源除了以上所说原因之外，还有本次实验提供的抗体浓度，并不适合原液中IgG浓度的检测，而稀释三倍后的样品属比较适合的范围。所以最大的误差来源是抗体浓度的选择，虽然抗体浓度是保证过量的，但是过量的程度相对每个管来说是不同的，1：1和1：2也许需要更大的浓度。
六、思考
1.本实验采用的免疫比浊法适用于人体内哪几种Ig？
人体血清中含有五类免疫球蛋白，分别为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。其中前三种含量相对较高，而IgD和IgE含量极低，膜结合型IgD构成BCR，是Bcell成熟的标志，IgE在正常人血清中含量最少，与Ⅰ型超敏反应和寄生虫感染有关。理论上此五种Ig均可以采用免疫比浊法检测含量，但临床上常只检测前三种含量较高、疾病相关性更强的Ig，在考虑寄生虫感染和变态反应性疾病时还可以检测血清中IgE 的含量。
2.检测血清等体液标本中某种抗原分子的方法？
原理同本实验，采用抗原抗体结合的原理，凝集反应、沉淀反应、
中和反应，以及免疫荧光法和酶联免疫吸附试验等，在使用抗原抗体结合原理时，将抗体加入荧光可以直接检测荧光强度来定量检测抗原含量，而酶联免疫吸附试验还可采用双抗体法以级联放大更易检测。
3.使用免疫比浊法时，抗原抗体的比例应采用哪个区域？
应采用抗体过量的前带，因为所检测的物质是抗原，希望所加样品中的抗原完全与抗体结合形成微粒，所有的微粒均可吸收酶标仪中透过的光线。因为吸光度OD值与溶液中颗粒的浓度成正比，而计算时默认颗粒的浓度与样品中所含抗原的浓度相当，所以，只有在抗体含量过量时，才能保证所有抗原都能与抗体结合形成微粒，降低因抗原未完全结合抗体所带来的误差。而且结合本次误差，不同管抗体过量的程度也应该大致相当。
4.为何波长选择700nm？
抗原抗体结合后的吸光度受抗原抗体种类的影响，本次采用的是羊抗人Ig抗体，应该由经验值可知700nm是IgG抗原抗体结合后最大的吸收波长，在最大吸收波长处通过测吸光度来测浓度所得结果的误差最小。
免疫功能检查参考值及临床意义
免疫功能检查参考值及临床意义 2010-09-24 15:32:56 作者：佚名来源：网络转载 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12 1.免疫球蛋白G(IgG) 【单位】克/升(g/L)。 【正常值】单相免疫扩散或免疫比浊法:脐带血7.6～17.0克/升，新生儿7.0～14.8克/升，1～6个月3.0～10.O克/升，6个月～2岁5.0～12.O克/升，6～12岁7.0～15.0克/升，12～16岁7.5～15.5克/升，成人7.6～16.6克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白G型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、黑热病、慢性肝炎活动期及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于肾病综合征、自身免疫性疾病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及某些肿瘤等。 2.免疫球蛋白A(IgA) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿0～120毫克/升，1～6个月30～820毫克/升，6个月～2岁140～1 080毫克/升，2～6岁230～1 900毫克/升，6～12岁290～2 700毫克/升，12～16岁500～3 000毫克/升，成人710～3 350毫克/升。 【临床意义】 (1)增高:常见于免疫球蛋白A(IgA)型多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肝硬化、湿疹、血小板减少及某些感染性疾病。 (2)降低:常见于自身免疫性疾病、输血反应、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷及吸收不良综合征。 3.免疫球蛋白M(IgM) 【单位】毫克/升(mg/L)。 【正常值】单相免疫扩散法或免疫比浊法:新生儿50～200毫克/升，1～6个月150～700毫克/升，6个月～2岁250～1 300毫克/升，2～6岁350～1 500毫克/升，6～12岁400～1 800毫克/升，12～16岁500～1 800毫克/升，成人700～2 000毫克/升。 【临床意义】
免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫比浊法检测免疫球蛋白 一、实验目的 利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品） 二、实验原理 1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。 2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。 分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。 本实验采用透射法。 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。 三、实验材料 免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管） 微量加样枪、ep管（1.5mL离心管） 酶标仪、水浴箱 四、实验步骤 1.在7个EP管中各加250μL IgG试剂1（PEG）。 2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。 3.混匀后37℃水浴5min。 4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。 5.混匀后37℃水浴10min。 6.分别吸取200μL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。 五、实验结果与数据处理 2.标准曲线
体液免疫球蛋白测定
体液免疫球蛋白测定 第一节血清IgG、IgA、IgM测定 血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。 一、血清IgG、IgA、lgM测定 （一）单向环状免疫扩散法 该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。 （二）免疫比浊法 该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。 二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义 （一）年龄 新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。 （二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高 慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。 （三）单一免疫球蛋白升高 主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。 （四）免疫球蛋白降低 先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。 第二节血清IgD和IgE测定 正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。膜结合型IgD（mIgD）构成BCR，是B 细胞分化发育成熟的标志。未成熟的B细胞仅表达mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD。活化的B 细胞或记忆B细胞其表面的mIgD逐渐消失。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量高达12%。IgE为亲细胞抗体，可引起Ⅰ型超敏反应。IgE可能与机体抗寄生虫免疫有关。 第1页
复旦大学免疫实验免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫比浊法检测免疫球蛋白 时间：地点：实验人： 1基本原理： 样本中的IgA、IgG与试剂中的抗IgA和抗IgG的特异性抗体结合，产生不溶性免疫复合物，使得反应溶液产生浊度。溶液浊度与样本中IgA、IgG的浓度成正比。在合适的nm处（700nm）测吸光度，通过计算可以得到IgA、IgG的浓度。 2实验材料： 免疫球蛋白A、G（IgA、IgG）测定试剂（试剂1、试剂2） 免疫球蛋白A、G（IgA、IgG）校准品 蒸馏水、血清样本 微量加样枪、ep管（1.5ml离心管） 酶标仪、水浴箱 3实验方法步骤 在酶标管内反应。 从左到右共做6管试剂： 1：IgG试剂1（125μl）+蒸馏水1μl 2：IgG试剂1（125μl）+校准品1μl 3：IgG试剂1（125μl）+样本1μl 4：IgA试剂1（150μl）+蒸馏水3μl 5：IgA试剂1（150μl）+校准品3μl 6：IgA试剂1（150μl）+样本3μl 混匀，37度水浴五分钟。 继续添加试剂，从左到右： 1、2、3：IgG试剂2（42.5μl） 4、5、6：IgA试剂2（50μl） 混匀，37度水浴五分钟。 在OD700nm测取吸光度，记录数据。 4.实验结果： 4.1 IgG蛋白： 空白管吸光度0.051 校准管吸光度1.155 样本管吸光度0.699 IgG校准浓度31.3g/L 待测血清样本中免疫球蛋白含量IgG浓度（g/L）= 0.699-0.051/1.155-0.051 ×31.3=18.4g/L 实验结果偏高，且误差为（18.4-16.0）/16.0 ×100% =15.0% 4.2 IgA蛋白： 空白管吸光度0.049 校准管吸光度0.372 样本管吸光度0.212 IgA校准浓度4.15g/L 待测血清样本中免疫球蛋白含量IgA浓度（g/L）=0.212-0.049/0.372-0.049
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法-检验科免疫室作业指导书
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法 1.原理 分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。 标本采集： 标本采集前病人准备：受检者空腹 标本种类：血清或血浆 标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。 标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。避免反复冻融。 标本运输：室温运输 标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。 试剂 6.1试剂名称：免疫球蛋白M检测试剂盒 6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司 6.3包装规格：60Test/kit 6.4试剂盒组成： 缓冲液30ml 空白缓冲液30ml 抗血清试剂0.5ml
定标液0.5ml 磁卡1张 仪器设备： 仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪 仪器厂家：芬兰Orion集团公司 仪器型号：Turboxplus 8.操作步骤： 8.1试剂配制： 8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。 8.1.2空白缓冲液：液体待用。 8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。 8.2收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。 8.3为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。 8.4准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕 【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法 IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels of IgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0. 91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used for
免疫球蛋白IgG测定
免疫球蛋白IgG测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白G抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3 标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.
4 试剂 4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgG试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白G抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂。 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：4周。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgG校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
免疫球蛋白G(IgG) 免疫比浊法
项目免疫球蛋白G（IgG） 方法免疫比浊法 目录1．检测原理 2．标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3．试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4．仪器 5．操作 6．计算 7．操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8．参考值 9．临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理 405nm
样本中IGG + 试剂中的IGG抗体-----------------大分子免疫复合物 在405nm监测生成的复合物的浊度变化，与样本中IGG含量成正比。 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂： 不使用抗凝剂。 2.4 标本处理： 血标本室温放置30min～45min后离心分离血清，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清置洁净试管加盖2-8℃保存。 3．试剂 3.1 试剂： R1：PEG4 缓冲液： 包含高分子强化剂的磷酸盐缓冲液。含有0.095%的叠氮化钠。 R2：IgG抗血清，含0.095%的叠氮化钠。 3.2：校准血清 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的多项免疫类标准液。其中包含免疫球蛋白G的定值。 校准频次： 全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性： 原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
免疫球蛋白检测方法
免疫球蛋白检测方法 一、前言 免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）是免疫系统中的重要成分，能 够识别和结合抗原，并参与免疫反应。因此，检测人体内的Ig水平对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。本文将介绍常见的Ig检测方法。 二、血清学方法 血清学方法是目前常用的Ig检测方法之一，包括酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫分析法（RIA）和比浊法等。 1. 酶联免疫吸附法（ELISA） ELISA是一种高灵敏度、高特异性的检测方法，适用于多种样本类型。其基本原理为：将抗原或抗体固定在微孔板上，加入待检样品后与其 相互作用，再加入特异性标记物进行检测。其中标记物可以是酶、荧 光素或放射性同位素等。 具体操作步骤如下：
1）将抗原或抗体溶液加入微孔板孔中，并在4℃下静置过夜。 2）将孔洗涤干净后加入待检样品，并在室温下孵育一定时间。 3）将孔再次洗涤干净，加入特异性标记物，并在室温下孵育一定时间。 4）将孔再次洗涤干净，加入底物，并在室温下孵育一定时间。 5）停止反应，测量吸光度值。 2. 放射免疫分析法（RIA） RIA是一种高灵敏度的检测方法，适用于检测低浓度的Ig。其基本原 理为：将放射性同位素标记的抗体与待检样品中的Ig结合，然后通过放射计检测放射性同位素的放射性活度来确定Ig的含量。 具体操作步骤如下： 1）将待检样品与放射性同位素标记的抗体混合，在4℃下静置过夜。 2）加入固相抗体，在4℃下静置过夜。 3）用放射计测量固相上的放射性活度，并通过标准曲线计算出待检样
品中Ig的含量。 3. 比浊法 比浊法是一种简单、快速、经济的检测方法。其基本原理为：将待检样品与特异性沉淀剂混合，形成沉淀后通过比浊法测量沉淀的光密度来确定Ig的含量。 具体操作步骤如下： 1）将待检样品与特异性沉淀剂混合，并在室温下孵育一定时间。 2）离心沉淀，将上清液取出。 3）用比色计或分光光度计测量上清液的光密度，并通过标准曲线计算出Ig的含量。 三、电泳法 电泳法是一种常用的蛋白质分离和检测方法，包括聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）和免疫固定电泳法（IFE）等。 1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）
免疫实验,对流免疫电泳 ,免疫比浊溶血实验
免疫实验,对流免疫电泳 ,免疫比浊溶血实验 免疫实验是生命科学中非常重要的一种实验技术，它通常用于检测血清中抗体或其它免疫反应分子的含量、识别特定的分子结构，以及鉴定抗原和抗体的交互作用等。其中涉及到的技术手段也非常繁多，下面我将着重介绍对流免疫电泳和免疫比浊溶血实验这两种技术。 对流免疫电泳是一种利用电泳和抗体-抗原交互作用原理的分析技术。它可以快速地分离和检测出血清中的不同类型免疫球蛋白。具体操作步骤如下： 首先，将需要检测的血清标本加入一种被分离物抗体浸渍的石蜡条或高分子凝胶中，拍平并等待凝胶凝固。然后，加上一种被检测的抗原标记物，通常使用放射性同位素、酶或荧光染料作为标记。当抗体与抗原结合时，这些标记物也随之紧密结合在其上，形成复合物。随着复合物的形成，它们在凝胶中开始移动，直到其达到与该复合物大小同等的电荷质量比。然后，加上电场，复合物将沿电场布局在凝胶中，从而形成一条与电场方向大致平行的对流带。在对应位置破裂凝胶，分析不同样品的对流带，可以快速、准确地确定其免疫球蛋白的种类和含量。 免疫比浊溶血实验是一种利用血清中抗体与相应抗原间的特异性结合作用引起溶血反应析出现象，以检测抗体的含量和活性的实验方法。在此实验中，我们需要将血清和口香糖酐混合，使其等比例溶解，然后加入一定浓度的相应抗原（通常为红细胞抗原）。随着抗体与抗原结合，它们最终会形成网状复合物，从而导致红细胞溶解，此过程可观察到裂解和溶解反应的现象。 通常情况下，使用抗人丙型溶血球素（血型试剂）作为抗原，将其加到不同的稀释血清中，通过测量反应光密度，可以得到抗体与抗原之间的复合和溶解反应程度。免疫比浊溶血实验的优点是检测速度快，灵敏度高，适用范围广泛。 总之，免疫实验技术在生命科学研究中扮演着极为重要的角色，对流免疫电泳和免疫比浊溶血实验是其中的两种典型代表。我们可以根据自己的需要和实验目的，灵活选择适当的技术手段，以提高实验效率和准确度，为揭示生命科学研究中一些重要的问题提供更加全面和精准的解答。
实验测试方法免疫比浊法原理
实验测试方法免疫比浊法原理 免疫比浊法（immunoturbidimetry）是一种常用的实验测试方法，用 于测定血清或尿液中特定分析物质的浓度。它基于免疫学原理，通过测量 可见光的散射程度来获得目标物质的浓度信息。在实验中，样品中的目标 物质与专门设计的抗原抗体反应，形成可见性沉淀物，从而引起溶液的浑 浊程度的变化。 免疫比浊法的原理可以概括为以下几个步骤： 1.抗原抗体反应：在实验开始前，需要将抗原抗体组分预先混合。抗 原可以是目标物质的衍生物或合成物，而抗体是特异性识别和结合抗原的 蛋白质。 2.沉淀形成：向样品中加入混合的抗原抗体溶液，使其与样品中的目 标物质相互作用。当目标物质存在于样品中时，抗体会识别并与其结合， 形成可见性沉淀物。 3.光散射测量：实验中使用的光散射测量器可以测量光线通过沉淀物 混浊的溶液时的散射程度。目标物质的浓度越高，形成的沉淀物越多，溶 液的浑浊程度越高，从而引起更强的散射。 4.标准曲线计算：为了准确测量目标物质的浓度，需要根据已知浓度 的标准品制备一条标准曲线。标准品的浓度范围一般从低浓度到高浓度逐 步增加。通过测量标准品和待测样品的散射程度，并使用标准曲线进行外 推和内推，可以得出待测样品中目标物质的浓度。 免疫比浊法的优点包括操作简单、结果快速、成本较低和高灵敏度。 然而，它也存在一些限制和注意事项。由于光散射测量主要基于理论计算，因此需要确保实验中的测量条件如温度、光源强度和检测器的响应都是稳
定和准确的。另外，免疫比浊法在样品中可能存在其他干扰物质时可能会 失去灵敏度和特异性。因此，在进行免疫比浊法实验时，需要进行一系列 的控制实验来检测和排除干扰因素。 除了免疫比浊法，还有其他一些常用的免疫学方法，如酶联免疫吸附 试验（ELISA）和放射免疫分析（RIA）。这些方法在分析物质浓度的测量 范围、特异性和精确度方面可能略有不同。因此，在选择适当的实验方法时，需要考虑样品性质、目标物质的特征和实验室的设备和技术条件。 免疫比浊法在临床和生物医学研究中得到了广泛的应用。例如，它可 以用于测定血清中的蛋白质、抗体、激素等分析物质的浓度。它还可以用 于诊断和监测许多疾病，如肿瘤标志物、感染性疾病、自身免疫性疾病等。此外，免疫比浊法还可以应用于农业、环境科学和食品安全等领域。 总之，免疫比浊法是一种基于免疫学原理的实验测试方法，通过测量 光线在沉淀物混浊的溶液中的散射程度来测定目标物质的浓度。它具有操 作简单、结果快速和高灵敏度等优点，广泛应用于临床和生物医学研究， 以及其他领域的分析和监测。
胶乳免疫比浊法
胶乳免疫比浊法 胶乳免疫比浊法（immunoelectrophoresis,IPE）是一种用于测 定机体内抗原、抗体和其他物质浓度的快速、准确的分析技术，它被广泛应用于临床医疗、疾病研究、环境检测、食品安全等领域。 这种免疫比浊法是由美国科学家史蒂夫布赖斯特（Steve Briese）于1959年发明的，它利用了免疫学联合电泳来检测和定量抗体和抗原。该方法主要由以下几步组成：1）抗体样本和抗原样本混合，使 双方发生交联反应；2）将反应液置于一特定的电泳板上，使用电流 将未发生免疫反应的抗原和抗体分别迁移到不同的比浊带内；3）用 后胶乳法对免疫比浊带进行处理，使抗体和抗原相应的结合；4）在363nm波长下记录比浊带的位置，以测定抗体的浓度。 由于胶乳免疫比浊法抗体定量分析的准确性、灵敏性和特异性比其他检测方法要强，因此，该方法已经被广泛用于定量检测机体内抗体类分子与抗原之间的相互作用。 在临床医疗中，胶乳免疫比浊法常用于检测抗球蛋白（IgG）、抗体调节蛋白（IgA）、抗体结合蛋白（IgM）、抗原抗体复合物等，也可以用于检测肿瘤标志物和糖皮质激素（ACTH）等激素。此外，这种技术还被用于研究疾病的免疫学机制，检测血清中的抗原和抗体，以及免疫诊断某些疾病。 此外，由于胶乳免疫比浊法可以快速、准确的检测抗体，因此也被广泛用于食品安全检测中。例如，它可以用来检测食品中的抗生素残留、致敏物质、化学污染物等，以保证食品安全。
通过胶乳免疫比浊法可以快速准确地测量抗原和抗体的浓度，该方法在临床医学、疾病研究、环境检测和食品安全等领域具有重要的应用价值。然而，胶乳免疫比浊法也存在一些不足，例如，由于测量物质的相互作用太多，检测结果容易受干扰。此外，某些抗体、抗原和其他物质在复杂体系中可能会发生复合反应，从而使得结果不准确。 因此，在使用胶乳免疫比浊法检测抗原、抗体和其他物质浓度时，应该结合其他技术，如免疫荧光定量技术、免疫酶联技术等，进行多种检测，以提高结果的准确性和可靠性。 总的来说，胶乳免疫比浊法是一种强大的分析技术，它具有准确性、灵敏性、特异性和快速性，应用于临床研究、环境检测和食品安全领域有着重要的意义。