免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较

免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕

【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法

IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels of

IgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0.

91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used for

determination of IgG, while immune scatter turbidity method could be beneficial for evaluation of the disease condition.

【期刊名称】《重庆医学》

【年(卷),期】2012(041)020

【总页数】2页(P2034-2035)

【关键词】散射测浊法和比浊法;免疫球蛋白

【作者】刘少华;邓文平;李燕

【作者单位】重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验

科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000

【正文语种】中文

人体免疫球蛋白(Ig)测定，是检查人体免疫功能状态最直接而简单的方法，只有选择好的检测方法才能保证检验结果的准确性。本文选用Olympus AU640和Beckman Immage 800特定蛋白仪对252名健康成人进行了Ig测定，并同时IgG高值和低值进行了测定。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2010年10～12月在本院进行健康体检的单位职工252名，其中，男146名，女106名；年龄20～60岁。排除系统性疾病和感染性疾病。

1.2 方法健康体检人群中抽空腹静脉血3 mL，置于不抗凝无菌试管中，3 500

r/min，离心5 min，收集血清-20 ℃保存。免疫球蛋白定量测定试剂盒分为两类；一类是Beckman Immage 800特定蛋白仪及相关配套试剂，测定方法为免疫散

射比浊法，一类是Olympus AU640全自动生化分析仪上使用北京利德曼生化股份有限公司生产的Ig测定试剂，测定原理为免疫透射比浊法。所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。Ig高值对照和低值对照，选用住院患者在检查Ig时结果中IgG>20.0 g/L和IgG<4.0 g/L各20份，分别作为高值和低值血清对照。同时选用脑脊液10份作IgG测定。Beckman Immage 800特定蛋白仪配套试剂提供的健康人群参考范围，IgG:7.0～16.2 g/L，IgM:0.6～2.63 g/L，IgA:0.68～4.00 g/L。

1.3 统计学处理采用SPSS13.0统计软件作方差分析，数据用±s表示，两组间比较用t检验或秩和检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法下健康体检人群的IgG、IgA、IgM水平分别用Olympus AU640和Beckman Immage 800特定蛋白仪对252名健康体检人群进行了IgG、IgA、IgM测定，结果见表1。IgG、IgM和IgA 3种Ig测定结果显示,用免疫透射比浊法和用免疫散射比浊法测定，其结果差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 健康成人IgG测定结果(±s，g/L)仪器

nIgGIgMIgAOlympusAU64025211.46±4.921.51±1.062.08±1.51BeckmanIm mage80025211.85±3.721.60±0.912.15±1.19

表2 IgG高值和低值测定结果(±s，g/L)仪器

nIgG(>20.0)IgG(<4.0)OlympusAU6402031.22±10.562.15±1.37BeckmanIm mage8002031.60±12.352.49±1.50

2.2 测定IgG高值和低值水平同样用上述方法测定IgG>20.0 g/L和IgG<4.0 g/L 患者血清各20份，两种方法测定线性都比较宽，在低值和高值处都能够进行测定结果的显示。结果见表2。

2.3 脑脊液测定结果见表3。由表3可以看出，对于一些微量的Ig标本，用免疫

散射比浊法可以实现测定，而用免疫透射比浊法测定就可能会漏掉一些阳性结果表现。

表3 10例脑脊液IgG测定结果(±s，g/L)样本号12345OlympusAU640---0.75-BeckmanImmage8000.400.54-1.100.69

-：无数据。

3 讨论

Ig是由浆细胞合成和分泌的一组具有多方面微生物活性的蛋白质分子，是机体内体液免疫的重要效应分子，是具有抗体活性，能与抗原特异性结合，激活补体等功能的蛋白质，按照组成结构不同可将其分为IgG、IgM、IgA、IgD、IgE 5类，其中IgD、IgE含量较少，临床上常用IgG、IgM、IgA水平测定作为评定机体体液免疫功能的一项重要指标，其含量可因疾病而大量增减。免疫比浊法是目前临床上测定血清IgA、IgG和IgM的主要方法，包括透射比浊法和散射比浊法。两种方法的测定原理和仪器不同，其结果有所差异。免疫透射比浊法主要检测抗原-抗体复合物所形成的浊度，本实验中用Olympus AU640全自动生化分析仪检测，该分析仪具有处理能力大、测试速度较高、标本用量少的优点；免疫散射比浊法是从不同角度测量抗原-抗体复合物微粒的散射光强度和浊度的变化，用Beckman Immage 800蛋白分析仪检测。一般认为散射比浊法的灵敏度高、重复性好,但国内研究显示散射比浊法和透射比浊法准确性、精密度均比较好[1-2]。

本研究比较了免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定IgG、IgM、IgA的结果，发现差异无统计学意义，其偏差位于临床可接受范围，说明二者均为IgG、IgA、IgM 的可靠测定方法，与国内研究结果相同。全自动生化分析仪的应用,使Ig的检测速度大为加快，测定费用略微偏低，可用于常规人群的体检和一般项目检查。本研究结果显示，脑脊液Ig测定结果中使用免疫散射比浊法测定出结果较免疫透射比浊法更多，说明抗原-抗体反应形成的复合物颗粒大小不一，对于浊度的形成

帮助不一，透射比浊法测定的是浊度的改变，对于微小颗粒产生的浊度反应微弱，而散射比浊法多测定了复合物对散射光的改变，微小颗粒的影响就比较明显。故测定精准度更高的特定蛋白分析仪如Beckman Immage 800，其受干扰因素较少，对于疾病的治疗效果监测和药物治疗效果的监测则更好[3-4]。本实验也提示对于常规检查中Ig测定可选用免疫透射比浊法进行，而对于需要测定更准确的临床治疗过程中的Ig测定，则选用免疫散射比浊法测定更好。

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免疫比浊法检测免疫球蛋白

免疫比浊法检测免疫球蛋白免疫比浊法检测免疫球蛋白一、实验目的利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品）二、实验原理 1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。 2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG 作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。本实验采用透射法。 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性

免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较

免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较目的：对免疫透射比浊法与免疫散射比浊法在检测特定蛋白抗干扰能力的效果进行对比。方法：收集血清样本，且制作浓度不同的特定蛋白混合血清，同时将比例不同的两种干扰物置于混合血清当中，之后再用免疫透射比浊法、免疫散射比浊法对其进行测定，且对干扰率加以计算，以了解两种检测方法的抗干扰能力。结果：CH在9000与15000时，免疫散射比浊法对IgM进行检测受到干扰;Hb在9.9与29.8浓度时，免疫散射比浊法对高浓度IgM、低浓度CRP检测时受到干扰;采取免疫透射比浊法对三种含有干扰物的特定蛋白进行检测时，未受到任何干扰影响。结论：在对CH、Hb等干扰物的抗干扰能力方面，免疫透射比浊法比免疫散射比浊法更为优越。标签：特定蛋白;免疫透射比浊法;免疫散射比浊法在临床上，对于人血清内特定蛋白的检测，一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而，在检测的过程中，如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰，继而影响检测结果的准确性[1]。对此，为保证血清检测的准确性，笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨，具体报道如下。 1.资料与方法 1.1对象本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜血清，其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。同时，事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清，具体为IgM低浓度1.0～1.5g/L，高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4～10mg/L，高浓度大于100mg/L。 1.2仪器设备选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪，试验所用试剂皆为仪器配套试剂。同时选取三个干扰物，即FBil（游离胆红素）、CH（乳糜）、Hb（血红蛋白），每种干扰物各准备两瓶试剂盒，一瓶作为空白对照使用，另外，干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。 1.3研究方法首先，对混合血清进行制备，之后依据干扰试剂盒上的制备顺序，配制干扰物;将2ml的蒸馏水加入到每一个干扰物与空白对照内，复溶。然后，按照1：9的比例，把已经准备好的干扰物和混合血清混合在一起，制作成干扰物样本，其中含有干扰物的为样本甲，未加干扰物为样本乙[3]。把两个样本分别制定浓度

乳胶增强透射比浊法和速率散射比浊法检测C—反应蛋白相关性分析

乳胶增强透射比浊法和速率散射比浊法检测C—反应蛋白相关性分析目的乳胶透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法检测C-反应蛋白结果的相关性分析；方法随机收集239例住院患者，采用两种检测方法测定C-反应蛋白浓度，并比较其检测结果相关性；结果当C-反应蛋白浓度>20mg/L（r=0.944）时乳胶透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法相关性较C-反应蛋白浓度20mg/L）86例进行统计分析。 1.4统计方法计量资料用x±s表示，采用SPSS19.0对数据进行统计分析。 2结果两种方法对不同浓度的CRP检测比较，由表1可见，在低、中值时，全血CRP与血浆CRP相关性不如高值相关性好，相关系数分别为r=0.786、0.822、0.944。具有统计学意义，见表1。表1可得：不同的方法检测CRP结果有一定的差异，需要早日完善其检测的标准化，当CRP低浓度表达时采用速率散射免疫比浊法检测更为敏感和准确，可认为两种检测方法测定CRP结果有差异。 3讨论 CRP是由肝脏细胞合成和分泌的非特异性炎症反应因子。IL-6、IL-1、TNF-a 等能够调节其生成。CRP的高低与急性冠脉综合征病情的严重程度存在一定的相关性，可作为监测病情、预测冠心病严重性的常规指标之一，对观察疗效、判断预后也具有重要意义[4]，同时，血浆CRP水平与青年脑梗死患者病情的发展、预后也密切相关，是青年脑梗死的危险因素，检测其含量可判断患者脑梗死的严重程度及预后[5]。乳胶增强透射免疫比浊法基本原理是将抗体吸附于乳胶颗粒上，当抗原抗体结合时，乳胶随之发生凝集反应，形成不同大小的乳胶颗粒，从而阻断光线的透射，通过透射光线的减弱程度判断乳胶凝集的程度。其具有快速、准确和简便的特点[6]。速率散射免疫比浊法是以一定波长的光沿水平轴照射，当碰到免疫复合物后将可导致光线的散射，抗原抗体复合物的形成速率与光的散射强度成正比，还能动态测定抗原抗体结合反应效率。在本研究中发现，当CRP浓度小于20mg/l时，乳胶增强透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法检测C-反应蛋白相关性低，P＜0.05，具有统计学意义，两种方法检测CRP结果具有显著差异。当CRP浓度大于20mg/l时，二者检测方法相关系数为0.944，说明这两种检测方法的检测效率有所提高。根据以往的文献报道及本实验室经验，我们认为当CRP低浓度表达时，乳胶增强透射免疫比

免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较

免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法 IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels of IgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0. 91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used for

免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较

免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较目的对免疫透射比浊法测定血清胱抑素C的方法学性能行初步评价，并与免疫散射比浊法进行比较。方法应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪分别对血清胱抑素C进行初步的方法学评价，包括精密度、线性回归试验、回收试验、干扰试验。结果免疫透射比浊法和免疫散射比浊法无论是批内还是批间精密度均符合要求，CV均0.95；免疫透射比浊法与免疫散射比浊法的回收率均>96%；干扰物试验结果显示血红蛋白、三酰甘油及胆红素均对测定无明显影响。结论免疫透射检验的灵敏度较高，检测范围广，与免疫散射试验的结果基本一致，系统误差小、抗干扰能力强，且更加快速、实用和便利。 [Abstract] Objective To initially evaluate the methodological properties of serum cystatin C by transmitted immunoturbidimetric assay and compare it with scatter turbidimetric assay. Methods Methodological evaluation was carried out for the serum cystatin C by Rohe Modular P automatic biochemical analyzer and SIEMENS BN ProSpec specific protein instrument，including precision，linear regression test，recovery test and interference test. Results Transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay both conformed to the requirements of intra-or inter-batch precision，and CV was 0.95；the recovery rates of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay were both>96%；interferent test results showed that hemoglobin，triglyceride and bilirubin had no significant effects on the determination. Conclusion The sensitivity of immune transmission test is high，the detection range is wide，which is consistent with the result of scatter turbidimetric assay. The system error is small，the anti-interference ability is strong，and it is more rapid，practical and convenient. [Key words] Transmitted immunoturbidimetric assay；Scatter turbidimetric assay；Serum cystatin C；Methodology；Test 胱抑素C（CysC）又稱為半胱氨酸蛋白酶抑制剂C。近年来，由于高血压、糖尿病发病率的上升，其作为理想的反映肾小球滤过率的灵敏指标日益受到临床重视，国外对CysC的临床应用报道较多，认为其血浓度能够较准确地反映GFR[1-3]。目前已建立的多种测定方法，包括免疫荧光测定（FIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫透射比浊法（PETIA）与免疫散射比浊法（PENIA），我们应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪对CysC进行了初步的方法学比较[4-5]，现将结果报道如下。1 材料与方法 1.1 仪器免疫透射比浊法使用Rohe Modular P全自动生化分析仪、免疫散射比浊法使用SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪。

检测方法比较

激光散射速率法：激光散射技术是指用激光作光源，在入射光方向以外，借检测散射光强度、频移及其角度依赖等而得到粒子重量、尺寸、分布及聚集态结构等信息的方法的统称，有着广阔的用途。就检测纳米材料而言，主要涉及频移及其角度依赖性的检测，这种散射技术又称动态光散射、准弹性光散射及光子相关光谱，分别以测定参数的性质、能量转移的大小及测定方法的原理而得名。散射比浊法：散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90°直角，当向样品中加入凝血激活剂后，随样品中纤维蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加。当样品完全凝固以后，散射光的强度不再变化，通常是把凝固的起始点作为0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光学的变化，将其转化为电信号，经过放大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线透射比浊测定法:是测定入射光强度由于溶液中粒子的散射而降低的程度，它并不直接测定散射的光强。这一点与分光光度测定法极为类似。用这种方法时，多用聚乙二醇（PEG）作为反应增强剂。这种非离子型聚合物可以降低抗原抗体复合物的溶解度。免疫层析法:是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。目的: 评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性.方法: 用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度. 结果: 两种方法在8～20 mg/L 、20～40 mg/L、40～80 mg/L、80～160 mg/L、160～300 mg/L范围内测定C 反应蛋白的相关系数是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997,说明两种方法的相关性是良好的,而在低值1～8 mg/L的测定中两方法的相关系数为0.928.结论: 速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的CRP检测结果.

免疫散射比浊法

免疫散射比浊法免疫散射比浊法是一种近年来发展迅速的检测技术，它是一种非常有效的检测方法，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。本文将重点讨论免疫散射比浊法的工作原理、优缺点以及实际应用。首先，我们来看看免疫散射比浊法是如何工作的。散射可以将一个物质分解成一系列衍射线，而比浊法则利用物质的衍射线的强度变化来检测物质的结构。与其他衍射技术（如X射线衍射）相比，比浊可以更快速地检测物质结构，因为它可以利用衍射瓦数的变化来进行衍射数据的分析。此外，比浊法也具有更高的灵敏度，因此能够检测出更多的病原体和药物抗体。免疫散射比浊法的主要优点是检测速度快、灵敏度高、数据分析方便、精度高，能够在短时间内准确地检测出病原体和药物抗体。另外，由于免疫散射比浊法所分析的数据是不可见的，因此可以有效避免偏见和偶然性，使得结果更加准确可靠。但是，这种技术也存在一些弊端。首先，免疫散射比浊仪的费用高昂，这一衍射装置的成本非常高，在普通实验室范围内难以实现；其次，免疫散射比浊法需要高精度的衍射装置，偶尔可能会受到其他衍射技术影响；最后，由于免疫散射比浊法只能检测物质的分子形状，因此无法直接检测物质的化学结构。免疫散射比浊法在实际应用中被广泛应用于生物学领域，如检测病毒和细菌的形态及分子结构、检测抗体的类型及效力以及检测药物的活性成分以及作用机制等。例如，近年来研究人员利用免疫散射比

浊法成功地检测出了一种新型的HIV拮抗药物，它能够在体外有效抑制HIV病毒的复制。此外，免疫散射比浊法还可用于分析生物分子活性成分，例如乳糖苷酶等，以及其他药物分子。综上所述，免疫散射比浊法是一种技术上先进、灵敏度高、数据分析方便、精度高的检测技术，广泛应用于生物学领域，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。尽管其存在一定的缺点，但是它仍然是检测病原体和药物抗体的理想选择。

免疫透射比浊法

免疫透射比浊法一、原理当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4）；③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。溶液pH为6.5～8.0之间为宜。载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix）的特性，对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。

免疫比浊法和免疫投射比浊法(修改版)

免疫比浊法和免疫投射比浊法 1.定义：（1）免疫比浊法：在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反应液体的浊度，并由此推算样品中的抗原含量。（2）免疫投射比浊法：当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。2.原理（1）免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。（2）免疫透射比浊法是抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊

计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。 3.关系 4．免疫比浊法适用的仪器紫外可见分光光度计全自动生化仪全自动生化仪常见的检测方法终点法连续检测法比浊法均相酶免疫分析

浅谈免疫比浊法技术优势

浅谈免疫比浊法技术优势孙立芳;赵静【摘要】目的:了解免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的优缺点.方法:通过检测免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的灵敏度和精密度及比较两者的优缺点.得知两者的优势.结果:免疫透射比浊法比免疫散射比浊法具有很多优势.结论:免疫透射比浊法比免疫散射比浊法具有很多优势.但免疫透射比浊法存在灵敏度较低的问题,至开发出了胶乳增强技术,抗原抗体结合发生凝聚反应,这种技术变非均相反应为均相反应,大大的提高了灵敏度,这就使该技术有更好的应用优势. 【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2012(024)023 【总页数】3页(P2870-2872) 【关键词】免疫透射比浊;免疫散射比浊;优势【作者】孙立芳;赵静【作者单位】烟台市心理康复医院,山东,烟台,265200;烟台市心理康复医院,山东,烟台,265200 【正文语种】中文【中图分类】R446.6 比浊法也称浊度法，属于散射光谱分析，是在比色的基础上发展起来的，其测定理论、方法、计算等许多方面和比色法相似，但本质上又有区别［1］。各种浊度都

没有特异(吸收光谱)，只是悬液中的粒子将入射光散射(遮挡)，致使透光度减弱。浊度法分正免疫透射比浊测定技术和免疫散射比浊测定技术，是目前检测人血清中特定蛋白的2种常用方法。目前以散射比浊为原理的特定蛋白分析仪已在医学检验领域普遍使用。人们传统地认为散射比浊法要比透射比浊法更灵敏，准确度高，包括许多教科书也这样述说。20世纪70年代起出现了微量免疫沉淀测定法，即免疫透射比浊测定和免疫散射比浊［1］，自此免疫比浊测定逐渐被广泛应用于临床体液中蛋白质含量检测的领域。近几年来，免疫透射比浊测定技术被广泛使用在全自动生化分析仪上，实现高速、灵敏和自动化。一束光线通过有悬浮质点的胶体溶液时，会产生丁铎尔现象，这是胶体粒子散射光的结果。粒子被光照射后而发光，同时受到散射和吸收两个因素的影响而使透射光的强度相应减弱，这一现象主要取决于粒子的大小，即当粒子直径大于入射光波波长的一半(半波长)时，就发生散射现象。根据检测器的位置及接受光信号的性质，浊度分析可分为透射比浊法和散射比浊法两大类。免疫透射比浊法(Turbidimetry):一束光线通过带有微小粒子的悬浮液和胶体溶液时，此溶液受到光散射和光吸收两个因素影响可使光的强度减弱，减弱的程度与溶液中微小粒子的含量成正比。通过测定透射光强度，推导出溶液中待测物的浓度。以检测抗原为例，在反应液中抗体量足够的情况下，待测抗原越多，形成的抗原抗体复合物也越多，同时与其他物理因素，如抗原抗体反应的时间，光源强弱和波长，光检测器与反应杯间的距离等密切相关。它是在光源的光路方向上，通过测量透射光强度，与入射光强度的比值(光线减弱的程度)来测定胶体溶液的质点浓度。散射比浊法(Nephelometry):一束光线通过带有微小粒子的悬浮液和胶体溶液时，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和颗粒大小和多少密切相关，通过测量在入射光的一定角度上复合物颗粒发出的散射光强度，推导出溶液中待测物的浓度。以检测抗原为例，在反应液中抗体量足够的情况下，待测

用免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白的效果对比

用免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白的效果对比张静;周真珍;邝林【期刊名称】《当代医药论丛》【年(卷),期】2014(000)016 【摘要】目的：对比分析用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白（Ig）的临床效果。方法：对2014年6月～2014年8月期间在我院进行常规体检的130例健康人的体检资料进行回顾性研究。我们分别使用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法对这130人的血清免疫球蛋白G、血清免疫球蛋白A和血清免疫球蛋白M的水平进行常规检测，再使用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法对这130人血清免疫球蛋白G的水平进行精确检测，并将这两种检测方法测得的结果进行对比。结果：用两种检测方法对这130人血清免疫球蛋白G、血清免疫球蛋白A和血清免疫球蛋白M的水平进行常规测定的结果大体相同，二者相比差异无显著性（P<0.05）。用免疫散射比浊法精确测定的这130人血清免疫球蛋白G最大值与最小值的差值，小于用免疫透射比浊法精确测定的这130人血清免疫球蛋白G最大值与最小值的差值，但二者相比差异无显著性（P<0.05）。结论：用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法常规检测血清免疫球蛋白水平的结果大体相当，但免疫透射比浊法的操作方法要比免疫散射比浊法简单，而且检测费用较低，因此免疫透射比浊法可作为临床上常规检测血清免疫球蛋白的首选方法。不过，在需要精确检测血清免疫球蛋白G时，应将免疫散射比浊法作为首选方法。【总页数】2页(P201-202)

【作者】张静;周真珍;邝林【作者单位】河南省郑州市中医院检验科河南郑州 450002; 郑州大学第五附属医院河南郑州 470000;河南省郑州市中医院检验科河南郑州 450002; 郑州大学第五附属医院河南郑州 470000;河南省郑州市中医院检验科河南郑州 450002; 郑州大学第五附属医院河南郑州 470000 【正文语种】中文【中图分类】R446.62 【相关文献】 1.免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测特定蛋白的比较 [J], 张倩;周敬静;徐华 2.免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较 [J], 彭凤;徐晓萍;王琳;应春妹 3.免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测特定蛋白的比较研究 [J], 彭凤;应春妹;徐晓萍;于嘉屏 4.C反应蛋白采用免疫透射比浊法和干式免疫荧光法检测的结果对比 [J], 许军生;谭洪辉;刘付明军;石建设 5.M蛋白对免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测免疫球蛋白的干扰 [J], 韩建华;程歆琦;吴洁;嵇巍;邸茜;张俊保;金成;苏薇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买

免疫比浊法伪浊度的原因和处理方法做分析和总结。

免疫比浊法伪浊度的原因和处理方法做分析和总结。免疫浊度分析法包括透射免疫比浊法、散射免疫比浊法、免疫乳胶浊度测定法等。免疫浊度分析由于其反应的特殊性，决定了该方法容易受到抗体性质和质量、抗原抗体的比例以及检测体系等一系列因素的影响。 1、抗体质量免疫比浊测定法要求抗体的特异性强、效价高，亲和力强。特异性差的抗血清，由于含有大量杂抗体，反应后可形成非特异性浊度(“伪浊度”)，出现假性升高。使用低效价(<1:20)抗体会使试剂消耗增多，同时也可增加“伪浊度”的产生。 2、抗体类型根据抗血清来源的动物种类不同，抗体可分为R型 (rabbit type)和H 型(horse type)。R型抗体亲和力较强，与抗原结合后不易解离，在抗体过剩时易形成大而稳定的复合物；但抗原过剩时，则形成可溶性复合物。H型抗体亲和力弱，抗原、抗体结合后极易解离，而且抗原或抗体过剩易形成可溶性复合物。R型抗体是用于免疫比浊测定的较为理想的试剂。 R型 H型抗体的定义总结 1、用沉淀反应对不同来源的免疫血清进行比较后，可将抗体按等价带范围大小分为两种类型，即R型抗体和H型抗体。R型抗体的等价带较

宽，具有较大的抗原、抗体合适比例范围，与相应抗原结合易出现可见的抗原-抗体复合物，仅在抗原过量时，才出现小分子的可溶性抗原-抗体复合物，如兔、羊的免疫血清。H型抗体的等价带较窄，其抗体与抗原的合适比例范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合物，如马、人的免疫血清。 2、抗原、抗体比例抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。当抗原过量时，形成的免疫复合物分子小，而且会发生解离，使浊度下降，光散射减少；当反应液中抗体过量时，免疫复合物的形成随着抗原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增。因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基本原则。抗体过量必须适量，因此实验中掌握抗体的浓度是关键。一般原则是事先确定某一被测物的正常值，以高于或低于此正常值的50%作为测定范围，抗体在此范围内均应保持过剩。为了减少“伪浊度”的出现，还应对抗原（待测样品）进行适当的稀释。目前全自动免疫浊度测定仪一般具有抗原过量的自动监测功能，并能对含过量抗原的待测样品进行自动稀释，重新监测。其设计原理是：在抗体过量的前提下，待测抗原在反应液中与抗体快速反应形成稳定

免疫比浊法测C反应蛋白

免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。抗体（Ab）与可溶性抗原（Ag）反应，形成一定结构的免疫复合物，成为悬浮于反应溶液中的微粒。在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质，可用仪器检测，提高了检测的速度、灵敏度和易操作性。免疫比浊测定注意事项： 1、抗原或抗体量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差。 2、应维持反应管中抗体蛋白始终过剩。 3、易受到脂血的影响。分类 1.免疫透射比浊法抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。 2.免疫散射比浊法一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强。散射光的强度还与各种物理因素，如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。散射比浊法又分为速率散射比浊法和终点散射比浊法。 3.免疫胶乳比浊法胶乳比浊法即是将待测物质相对应的抗体包被在直径为15－60nm的胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。实验八免疫比浊法测定C-反应蛋白【原理】血清C反应蛋白（CRP）与试剂中抗人CRP抗体结合，形成免疫复合物，一起吸光度增加，在波长340nm和700nm处测定免疫复合物浊度。根据吸光度增加

散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白的比较

散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白的比较标签：散射比浊法；透射比浊法；血浆蛋白散射比浊分析（nephelometry assay）是一种微量、快速、自动化检测体液中特定蛋白质成分的免疫化学分析技术。该技术是将免疫测定与散射比浊法的原理相結合而设计的一种快速免疫测定方法，主要用于对体液中单蛋白成分的测定。免疫透射比浊分析（turbidimetry）是一种比较老的方法，最常用于生化指标的测定。我们应用散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白并对结果进行分析，现报道如下： 1 材料与方法透射比浊法采用日本OLYMPUS生产的AU640全自动生化仪与配套试剂及校准品。散射比浊法用贝克曼公司生产的IMMAGE全自动比浊仪与配套试剂及校准品。质控品使用省临检中心的质控样品。检验样品为68份健康人混合血清。 2 仪器性能评价 2.1批内精密度测定透射比浊法的CV值：IgG 1.50%、IgA 0.95%、IgM 1.95%、C3 2.98%、C4 3.98%。仪器标明为CV≤5%。散射比浊法的CV值分别为IgG 1.30%、IgA 0.80%、IgM 1.75%、C3 2.08%、C4 3.14%。 2.2批间精密度测定透射比浊法的CV值：IgG 3.15%、IgA 1.24%、IgM 2.36%、C3 3.66 %、C4 4.28%。仪器标明为CV≤5%。散射比浊法的CV值分别为IgG 1.52%、IgA 0.96%、IgM 1.96%、C3 2.37%、C4 3.56%。 2.3准确度的检测 2批6份质控样品结果见表1，透射比浊法测定与靶值的偏差分别为0.1、0.12、0.1、0.1、0.1、0.1。散射比浊法测定与靶值的偏差分别为0.1、0.12、0.1、0.1、0.1、0.1。结果显示，两种方法都有较高的准确性，见表1。 3 讨论从以上结果看出，透射比浊法测定法用于血浆免疫蛋白测定有一些缺陷：①溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通

免疫透射比浊法及干化学法测定血清白蛋白方法学比较及偏倚评估

免疫透射比浊法及干化学法测定血清白蛋白方法学比较及偏倚评估【摘要】目的通过评估免疫透射比浊法与干化学法测定ALB的偏倚,探讨两种方法检测ALB结果间的偏差是否在允许的范围,保证检测结果的可比性。方法依据NCCLS标准化文件EP9-A2 [1],每天取临床样本8份,分别用免疫透射比浊法与干化学法进行双份测定,共测定5 d,去除离群点,计算相关系数及预期偏差,以CLIA’88规定的室间质评(ALB+10%)允许误差的1/2作为方法比较结果系统误差的允许限值,进行偏倚的评估。结果干化学法与免疫透射比浊法比较,r�2=0.934,在医学决定水平20 g/L,35 g/L,52 g/L时,干化学法的预期相对偏倚分别10.4%,6.8%,3.2%, 在Xc= 20 g/L及Xc=35 g/L时, 两种方法存在统计学差异。结论以免疫透射比浊法作为比较方法,干化学法测定ALB的结果存在正偏差,测定结果的偏差随着ALB浓度的减低而增大,在低浓度时差异更显著,两者相关性差。因此,实验室内使用不同分析方法检测同一分析物时,建议对各方法进行方法学比较及偏倚评估,明确方法间的差异,并建立各方法的参考范围,特别是建立不同方法在不同医学决定水平浓度的参考值,以保证检测结果的可比性。【关键词】血清白蛋白;免疫透射比浊法;干化学; 偏

倚 Turbidimetric Immunoassay Method and Dry-slide Bromocresol Green Method in(ALB)Serum Albumin Determination: A Methodological Comparison and Bias Assessment FENG Pin-ning,GAO Ling,YU Xiong-wen,et al. Laboratory Medicine Department of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China 【Abstract】 Objective The article compares the bias assessments of turbidimetric immunoassay method and dry-slide bromocresol green method in ALB detection, and discusses whether the bias of the two detection results are within the range permitted, so as to ensure the comparability of the results.Method According to NCCLS standardization document EP9-A2 [1], firstly 8 clinical samples are daily taken and tested duplicates under each method, altogether five days. Next the outlier points are excluded and correlation coefficients and expected deviations are calculated. The value is restricted by 1/2 of the error that

不同检测方法检测免疫球蛋白轻链比值的比较

不同检测方法检测免疫球蛋白轻链比值的比较王召晓【摘要】目的比较流式细胞术法和速率散射比浊法在免疫球蛋白轻链κ/λ的比值,检测结果是否有一致性.方法用这两种方法分别对32例患者的外周血B淋巴细胞膜上κ、λ轻链的表达率、血清和尿液中的游离κ、λ轻链含量进行测定,并分别计算κ/λ比值.结果 3个不同组别的标本两两分组,分别进行检测方法的一致性比较,用Kappa检验进行统计分析,结果为B细胞组和血清组的k值为0.881,血清组和尿液组的k值为0.885,B细胞组和尿液组的k值为0.885.结论 2种检测方法在κ/λ比值上有极强的一致性.对于血清和尿液中κ/λ比值异常的标本,建议同时检测B淋巴细胞膜上的κ/λ比值,以确定该标本是否有B淋巴细胞克隆性表达的存在.%Objective To compare the different ratios of immunoglobulin light chain κ,λ by flow cytometry and rate nephelometry, to test whether there is consistency between the result s. Methods To test κ,λ light chain expression of B lymphocyte membrane, the content of κ,λ light chain in serum and urine of 32 cases by flow cytometry and rate nephelometry, and to calculate the k/X ratio respectively. Results 3 groups are divided into two-two group and compared consistency with each other in Kappa test. Kappa is used to statistical analysis, the results show that, k value of B cell group and serum group is 0.881, serum group and urine group is 0.885, B cell group and urine group is 0.885. Conclusion The tests prove that there is strong consistency between flow cytometry and rate nephelometry. For some specimens with abnormal κ,λ ratio in serum and urine, we should