免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较
目的：对免疫透射比浊法与免疫散射比浊法在检测特定蛋白抗干扰能力的效果进行对比。方法：收集血清样本，且制作浓度不同的特定蛋白混合血清，同时将比例不同的两种干扰物置于混合血清当中，之后再用免疫透射比浊法、免疫散射比浊法对其进行测定，且对干扰率加以计算，以了解两种检测方法的抗干扰能力。结果：CH在9000与15000时，免疫散射比浊法对IgM进行检测受到干扰;Hb在9.9与29.8浓度时，免疫散射比浊法对高浓度IgM、低浓度CRP检测时受到干扰;采取免疫透射比浊法对三种含有干扰物的特定蛋白进行检测时，未受到任何干扰影响。结论：在对CH、Hb等干扰物的抗干扰能力方面，免疫透射比浊法比免疫散射比浊法更为优越。
标签：特定蛋白;免疫透射比浊法;免疫散射比浊法
在临床上，对于人血清内特定蛋白的检测，一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而，在检测的过程中，如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰，继而影响检测结果的准确性[1]。对此，为保证血清检测的准确性，笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨，具体报道如下。
1.资料与方法
1.1对象
本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜血清，其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。同时，事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清，具体为IgM低浓度1.0～1.5g/L，高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4～10mg/L，高浓度大于100mg/L。
1.2仪器设备
选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪，试验所用试剂皆为仪器配套试剂。同时选取三个干扰物，即FBil（游离胆红素）、CH（乳糜）、Hb（血红蛋白），每种干扰物各准备两瓶试剂盒，一瓶作为空白对照使用，另外，干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。
1.3研究方法
首先，对混合血清进行制备，之后依据干扰试剂盒上的制备顺序，配制干扰物;将2ml的蒸馏水加入到每一个干扰物与空白对照内，复溶。然后，按照1：9的比例，把已经准备好的干扰物和混合血清混合在一起，制作成干扰物样本，其中含有干扰物的为样本甲，未加干扰物为样本乙[3]。把两个样本分别制定浓度
临床医学检验主管技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第二十章 免疫检验自动化仪器分析讲义
第二十章免疫检验自动化仪器分析 第一节自动化免疫浊度分析系统 免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（＜19S），在增浊剂（如PEG 、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（＞19S），使反应液出现浊度。 根据检测器的位置及其所检测的光信号性质不同，免疫浊度分析可分为免疫透射比浊法 （turbi-dimetry）和免疫散射比浊法（nephelometry）。 一、免疫透射比浊法 （一）原理 可溶性抗原抗体反应后形成的免疫复合物，使介质浊度发生改变，光线通过抗原抗体反应后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收，在保持抗体过量的情况下，吸光度（A值）与免疫复合物量呈正相关。与已知浓度的抗原标准品相比较，可确定标本中抗原的含量。 （二）仪器工作过程 1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。 2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。 3.按方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。 （三）方法评价 透射比浊法灵敏度比单扩法高5～10倍，CV小于10%，操作简便，结果准确，且能用全自动或半全自动生化分析仪进行检测，常用于生化指标的测定。 本法的不足在于： ①抗体用量较大 ②灵敏度较散射比浊法低 ③耗时较长 二、免疫胶乳比浊法 用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚。分散的单个胶乳颗粒直径位于入射光波长之内，不阻碍光线通过，当2个或2个以上胶乳颗粒凝聚时，透射光和散射光即出现显著变化。抗原-抗体反应后溶液的吸光度或散射光强度与待测抗原浓度呈正相关。采用透射比浊法或散射比浊法测定。 （二）方法评价 本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng／L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子（RF）可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F（ab’）2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。 三、免疫散射比浊法 （一）原理 溶液中的微粒受到光线照射后，微粒对光线产生反射和折射而形成散射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因素密切相关。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕 【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法 IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels of IgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0. 91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used for
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较-精选文档
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较 在临床上，对于人血清内特定蛋白的检测，一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而，在检测的过程中，如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰，继而影响检测结果的准确性[1]。对此，为保证血清检测的准确性，笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨，具体报道如下。 1.资料与方法 1.1对象 本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜 血清，其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。同时，事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清，具体为IgM低浓度1.0～1.5g/L，高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4～10mg/L，高浓度大于100mg/L。 1.2仪器设备 选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪，试验所用试剂皆为仪器配套试剂。同时选取三个干扰物，即FBil（游离胆红素）、CH（乳糜）、Hb（血红蛋白），每种干扰物各准备两瓶试剂盒，一瓶作为空白对照使用，另外，干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、
CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。 1.3研究方法 首先，对混合血清进行制备，之后依据干扰试剂盒上的制备顺序，配制干扰物;将2ml的蒸馏水加入到每一个干扰物与空白对照内，复溶。然后，按照1：9的比例，把已经准备好的干扰物和混合血清混合在一起，制作成干扰物样本，其中含有干扰物的为样本甲，未加干扰物为样本乙[3]。把两个样本分别制定浓度不等的若干个样本，具体浓度见下表1所示。最后采取特定蛋白测定仪与全自动生化分析仪展开特定蛋白的抗干扰试验检测，同时对其干扰率进行计算。 1.4统计学分析 本次研究所得全部数据，均采取软件Excel加以分析与处理。其中，干扰率计算公式为：含有干扰物组的均值减去空白对照组的均值，之后再除以空白对照组的均值。注意，特定蛋白（已加入干扰物）所测得的均值，高于浓度相同的空白对照组的正负5%，那么则判定为检测受到了干扰[4]。 2. 结果 经检测发现，CH在9000与15000时，免疫散射比浊法对IgM 进行检测时，受到干扰影响;Hb在9.9与29.8浓度时，免疫散射比浊法对高浓度IgM、低浓度CRP检测时，受到干扰影响。采取免疫透射比浊法对三种含有干扰物的特定蛋白进行检测时，未受到任何干扰影响。具体情况见下表1所示。
免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较
免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较目的对免疫透射比浊法测定血清胱抑素C的方法学性能行初步评价，并 与免疫散射比浊法进行比较。方法应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪分别对血清胱抑素C进行初步的方法学评价，包括精密度、线性回归试验、回收试验、干扰试验。结果免疫透射比浊法和免疫散射比浊法无论是批内还是批间精密度均符合要求，CV均0.95；免疫透射比浊法与免疫散射比浊法的回收率均>96%；干扰物试验结果显示血红蛋白、三酰甘油及胆红素均对测定无明显影响。结论免疫透射检验的灵敏度较高，检测范围广，与免疫散射试验的结果基本一致，系统误差小、抗干扰能力强，且更加快速、实用和便利。 [Abstract] Objective To initially evaluate the methodological properties of serum cystatin C by transmitted immunoturbidimetric assay and compare it with scatter turbidimetric assay. Methods Methodological evaluation was carried out for the serum cystatin C by Rohe Modular P automatic biochemical analyzer and SIEMENS BN ProSpec specific protein instrument，including precision，linear regression test，recovery test and interference test. Results Transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay both conformed to the requirements of intra-or inter-batch precision，and CV was 0.95；the recovery rates of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay were both>96%；interferent test results showed that hemoglobin，triglyceride and bilirubin had no significant effects on the determination. Conclusion The sensitivity of immune transmission test is high，the detection range is wide，which is consistent with the result of scatter turbidimetric assay. The system error is small，the anti-interference ability is strong，and it is more rapid，practical and convenient. [Key words] Transmitted immunoturbidimetric assay；Scatter turbidimetric assay；Serum cystatin C；Methodology；Test 胱抑素C（CysC）又稱為半胱氨酸蛋白酶抑制剂C。近年来，由于高血压、糖尿病发病率的上升，其作为理想的反映肾小球滤过率的灵敏指标日益受到临床重视，国外对CysC的临床应用报道较多，认为其血浓度能够较准确地反映GFR[1-3]。目前已建立的多种测定方法，包括免疫荧光测定（FIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫透射比浊法（PETIA）与免疫散射比浊法（PENIA），我们应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪对CysC进行了初步的方法学比较[4-5]，现将结果报道如下。1 材料与方法 1.1 仪器 免疫透射比浊法使用Rohe Modular P全自动生化分析仪、免疫散射比浊法使用SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪。
检测方法比较
激光散射速率法：激光散射技术是指用激光作光源，在入射光方向以外，借检测 散射光强度、频移及其角度依赖等而得到粒子重量、尺寸、分布及聚集态结构等信息的方法的统称，有着广阔的用途。就检测纳米材料而言，主要涉及频移及其角度依赖性的检测，这种散射技术又称动态光散射、准弹性光散射及光子相关光谱，分别以测定参数的性质、能量转移的大小及测定方法的原理而得名。 散射比浊法：散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90°直角，当向样品中加入凝血激活剂后，随样品中纤维蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加。当样品完全凝固以后，散射光的强度不再变化，通常是把凝固的起始点作为0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光学的变化，将其转化为电信号，经过放大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线 透射比浊测定法:是测定入射光强度由于溶液中粒子的散射而降低的程度，它并不直接测定散射的光强。这一点与分光光度测定法极为类似。用这种方法时，多用聚乙二醇（PEG）作为反应增强剂。这种非离子型聚合物可以降低抗原抗体复合物的溶解度。 免疫层析法:是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。 目的: 评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性.方法: 用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度. 结果: 两种方法在8～20 mg/L 、20～40 mg/L、40～80 mg/L、80～160 mg/L、160～300 mg/L范围内测定C 反应蛋白的相关系数是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997,说明两种方法的相关性是良好的,而在低值1～8 mg/L的测定中两方法的相关系数为0.928.结论: 速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中可以得到较为准确的CRP检测结果.
用免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白的效果对比
用免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白的效 果对比 张静;周真珍;邝林 【期刊名称】《当代医药论丛》 【年(卷),期】2014(000)016 【摘要】目的：对比分析用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白（Ig）的临床效果。方法：对2014年6月～2014年8月期间在我院进行常规体检的130例健康人的体检资料进行回顾性研究。我们分别使用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法对这130人的血清免疫球蛋白G、血清免疫球蛋白A和血清免疫球蛋白M的水平进行常规检测，再使用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法对这130人血清免疫球蛋白G的水平进行精确检测，并将这两种检测方法测得的结果进行对比。结果：用两种检测方法对这130人血清免疫球蛋白G、血清免疫球蛋白A和血清免疫球蛋白M的水平进行常规测定的结果大体相同，二者相比差异无显著性（P<0.05）。用免疫散射比浊法精确测定的这130人血清免疫球蛋白G最大值与最小值的差值，小于用免疫透射比浊法精确测定的这130人血清免疫球蛋白G最大值与最小值的差值，但二者相比差异无显著性（P<0.05）。结论：用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法常规检测血清免疫球蛋白水平的结果大体相当，但免疫透射比浊法的操作方法要比免疫散射比浊法简单，而且检测费用较低，因此免疫透射比浊法可作为临床上常规检测血清免疫球蛋白的首选方法。不过，在需要精确检测血清免疫球蛋白G时，应将免疫散射比浊法作为首选方法。 【总页数】2页(P201-202)
【作者】张静;周真珍;邝林 【作者单位】河南省郑州市中医院检验科河南郑州 450002; 郑州大学第五附属医院河南郑州 470000;河南省郑州市中医院检验科河南郑州 450002; 郑州大学第五附属医院河南郑州 470000;河南省郑州市中医院检验科河南郑州 450002; 郑州大学第五附属医院河南郑州 470000 【正文语种】中文 【中图分类】R446.62 【相关文献】 1.免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测特定蛋白的比较 [J], 张倩;周敬静;徐华 2.免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较 [J], 彭凤;徐晓萍;王琳;应春妹 3.免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测特定蛋白的比较研究 [J], 彭凤;应春妹;徐晓萍;于嘉屏 4.C反应蛋白采用免疫透射比浊法和干式免疫荧光法检测的结果对比 [J], 许军生;谭洪辉;刘付明军;石建设 5.M蛋白对免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测免疫球蛋白的干扰 [J], 韩建华;程歆琦;吴洁;嵇巍;邸茜;张俊保;金成;苏薇 因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买
乳胶增强透射比浊法和速率散射比浊法检测C—反应蛋白相关性分析
乳胶增强透射比浊法和速率散射比浊法检测C—反应蛋白相关性分 析 目的乳胶透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法检测C-反应蛋白结果的相关性分析；方法随机收集239例住院患者，采用两种检测方法测定C-反应蛋白浓度，并比较其检测结果相关性；结果当C-反应蛋白浓度>20mg/L（r=0.944）时乳胶透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法相关性较C-反应蛋白浓度20mg/L）86例进行统计分析。 1.4统计方法计量资料用x±s表示，采用SPSS19.0对数据进行统计分析。 2结果 两种方法对不同浓度的CRP检测比较，由表1可见，在低、中值时，全血CRP与血浆CRP相关性不如高值相关性好，相关系数分别为r=0.786、0.822、0.944。具有统计学意义，见表1。 表1可得：不同的方法检测CRP结果有一定的差异，需要早日完善其检测的标准化，当CRP低浓度表达时采用速率散射免疫比浊法检测更为敏感和准确，可认为两种检测方法测定CRP结果有差异。 3讨论 CRP是由肝脏细胞合成和分泌的非特异性炎症反应因子。IL-6、IL-1、TNF-a 等能够调节其生成。CRP的高低与急性冠脉综合征病情的严重程度存在一定的相关性，可作为监测病情、预测冠心病严重性的常规指标之一，对观察疗效、判断预后也具有重要意义[4]，同时，血浆CRP水平与青年脑梗死患者病情的发展、预后也密切相关，是青年脑梗死的危险因素，检测其含量可判断患者脑梗死的严重程度及预后[5]。 乳胶增强透射免疫比浊法基本原理是将抗体吸附于乳胶颗粒上，当抗原抗体结合时，乳胶随之发生凝集反应，形成不同大小的乳胶颗粒，从而阻断光线的透射，通过透射光线的减弱程度判断乳胶凝集的程度。其具有快速、准确和简便的特点[6]。速率散射免疫比浊法是以一定波长的光沿水平轴照射，当碰到免疫复合物后将可导致光线的散射，抗原抗体复合物的形成速率与光的散射强度成正比，还能动态测定抗原抗体结合反应效率。 在本研究中发现，当CRP浓度小于20mg/l时，乳胶增强透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法检测C-反应蛋白相关性低，P＜0.05，具有统计学意义，两种方法检测CRP结果具有显著差异。当CRP浓度大于20mg/l时，二者检测方法相关系数为0.944，说明这两种检测方法的检测效率有所提高。根据以往的文献报道及本实验室经验，我们认为当CRP低浓度表达时，乳胶增强透射免疫比
免疫比浊法和免疫投射比浊法(修改版)
免疫比浊法和免疫投射比浊法 1.定义： （1）免疫比浊法：在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反应液体的浊度，并由此推算样品中的抗原含量。 （2）免疫投射比浊法：当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒 的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。一般 采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。2.原理 （1）免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规 定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促 聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使 反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的 量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增 加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算 出检样中抗原的含量。 （2）免疫透射比浊法是抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免 疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被 吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊
计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。 3.关系 4．免疫比浊法适用的仪器 紫外可见分光光度计 全自动生化仪 全自动生化仪常见的检测方法 终点法 连续检测法 比浊法 均相酶免疫分析
浅谈免疫比浊法技术优势
浅谈免疫比浊法技术优势 孙立芳;赵静 【摘要】目的:了解免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的优缺点.方法:通过检测免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的灵敏度和精密度及比较两者的优缺点.得知两者的优势.结果:免疫透射比浊法比免疫散射比浊法具有很多优势.结论:免疫透射比浊法比免疫散射比浊法具有很多优势.但免疫透射比浊法存在灵敏度较低的问题,至开发出了胶乳增强技术,抗原抗体结合发生凝聚反应,这种技术变非均相反应为均相反应,大大的提高了灵敏度,这就使该技术有更好的应用优势. 【期刊名称】《中国民康医学》 【年(卷),期】2012(024)023 【总页数】3页(P2870-2872) 【关键词】免疫透射比浊;免疫散射比浊;优势 【作者】孙立芳;赵静 【作者单位】烟台市心理康复医院,山东,烟台,265200;烟台市心理康复医院,山东,烟台,265200 【正文语种】中文 【中图分类】R446.6 比浊法也称浊度法，属于散射光谱分析，是在比色的基础上发展起来的，其测定理论、方法、计算等许多方面和比色法相似，但本质上又有区别［1］。各种浊度都
没有特异(吸收光谱)，只是悬液中的粒子将入射光散射(遮挡)，致使透光度减弱。 浊度法分正免疫透射比浊测定技术和免疫散射比浊测定技术，是目前检测人血清中特定蛋白的2种常用方法。目前以散射比浊为原理的特定蛋白分析仪已在医学检 验领域普遍使用。人们传统地认为散射比浊法要比透射比浊法更灵敏，准确度高，包括许多教科书也这样述说。20世纪70年代起出现了微量免疫沉淀测定法，即 免疫透射比浊测定和免疫散射比浊［1］，自此免疫比浊测定逐渐被广泛应用于临床体液中蛋白质含量检测的领域。近几年来，免疫透射比浊测定技术被广泛使用在全自动生化分析仪上，实现高速、灵敏和自动化。 一束光线通过有悬浮质点的胶体溶液时，会产生丁铎尔现象，这是胶体粒子散射光的结果。粒子被光照射后而发光，同时受到散射和吸收两个因素的影响而使透射光的强度相应减弱，这一现象主要取决于粒子的大小，即当粒子直径大于入射光波波长的一半(半波长)时，就发生散射现象。根据检测器的位置及接受光信号的性质，浊度分析可分为透射比浊法和散射比浊法两大类。 免疫透射比浊法(Turbidimetry):一束光线通过带有微小粒子的悬浮液和胶体溶液时，此溶液受到光散射和光吸收两个因素影响可使光的强度减弱，减弱的程度与溶液中微小粒子的含量成正比。通过测定透射光强度，推导出溶液中待测物的浓度。以检测抗原为例，在反应液中抗体量足够的情况下，待测抗原越多，形成的抗原抗体复合物也越多，同时与其他物理因素，如抗原抗体反应的时间，光源强弱和波长，光检测器与反应杯间的距离等密切相关。它是在光源的光路方向上，通过测量透射光强度，与入射光强度的比值(光线减弱的程度)来测定胶体溶液的质点浓度。 散射比浊法(Nephelometry):一束光线通过带有微小粒子的悬浮液和胶体溶液时，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和颗粒大小和多少密切相关，通过测量在入射光的一定角度上复合物颗粒发出的散射光强度，推导出溶液中待测物的浓度。以检测抗原为例，在反应液中抗体量足够的情况下，待测
免疫透射比浊法检测CRP部分性能指标评价
免疫透射比浊法检测CRP部分性能指标评价 易火春;颜水堤;朱建辉;陈珠菊;方佳斌;曾燕丽;章静雯 【期刊名称】《国际检验医学杂志》 【年(卷),期】2012(033)018 【摘要】目的对免疫透射比浊法测定C反应蛋白(CRP)部分性能指标进行评价.方法用免疫透射比浊法测定血清CRP,依据美国临床实验室标准化协会(CLIS)文件要求进行精密度、线性范围评价,并与免疫散射比浊法进行比较.结果 CRP在3.14、6.70 mg/L时,总不精密度分别为3.45%和2.21%,均小于CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(10%);免疫透射比浊法测定血清CRP在0.12～410 mg/L范围内线性良好,相关方程为Y＝1.010 9X-0.086 1;与西门子BNII全自动特定蛋白分析仪免疫散射比浊法比较,回归方程为Y=0.968 1X+0.600 6,r=0.993 3(P<0.01).结论免疫透射比浊法检测CRP重复性好、线性范围宽,与免疫散射比浊法具有很好相关性,操作简单,检测速度快,完全符合急诊检测的需要. 【总页数】2页(P2244-2245) 【作者】易火春;颜水堤;朱建辉;陈珠菊;方佳斌;曾燕丽;章静雯 【作者单位】厦门大学附属中山医院临床检验中心,福建厦门,361004;厦门大学附属中山医院临床检验中心,福建厦门,361004;厦门大学附属中山医院临床检验中心,福建厦门,361004;厦门大学附属中山医院临床检验中心,福建厦门,361004;厦门大学附属中山医院临床检验中心,福建厦门,361004;厦门大学附属中山医院临床检验中心,福建厦门,361004;厦门大学附属中山医院临床检验中心,福建厦门,361004【正文语种】中文
免疫散射比浊法
免疫散射比浊法 免疫散射比浊法是一种近年来发展迅速的检测技术，它是一种非常有效的检测方法，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。本文将重点讨论免疫散射比浊法的工作原理、优缺点以及实际应用。 首先，我们来看看免疫散射比浊法是如何工作的。散射可以将一个物质分解成一系列衍射线，而比浊法则利用物质的衍射线的强度变化来检测物质的结构。与其他衍射技术（如X射线衍射）相比，比浊可以更快速地检测物质结构，因为它可以利用衍射瓦数的变化来进行衍射数据的分析。此外，比浊法也具有更高的灵敏度，因此能够检测出更多的病原体和药物抗体。 免疫散射比浊法的主要优点是检测速度快、灵敏度高、数据分析方便、精度高，能够在短时间内准确地检测出病原体和药物抗体。另外，由于免疫散射比浊法所分析的数据是不可见的，因此可以有效避免偏见和偶然性，使得结果更加准确可靠。 但是，这种技术也存在一些弊端。首先，免疫散射比浊仪的费用高昂，这一衍射装置的成本非常高，在普通实验室范围内难以实现；其次，免疫散射比浊法需要高精度的衍射装置，偶尔可能会受到其他衍射技术影响；最后，由于免疫散射比浊法只能检测物质的分子形状，因此无法直接检测物质的化学结构。 免疫散射比浊法在实际应用中被广泛应用于生物学领域，如检测病毒和细菌的形态及分子结构、检测抗体的类型及效力以及检测药物的活性成分以及作用机制等。例如，近年来研究人员利用免疫散射比
浊法成功地检测出了一种新型的HIV拮抗药物，它能够在体外有效抑制HIV病毒的复制。此外，免疫散射比浊法还可用于分析生物分子活性成分，例如乳糖苷酶等，以及其他药物分子。 综上所述，免疫散射比浊法是一种技术上先进、灵敏度高、数据分析方便、精度高的检测技术，广泛应用于生物学领域，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。尽管其存在一定的缺点，但是它仍然是检测病原体和药物抗体的理想选择。
黄疸因素对免疫透射比浊法检测血清白蛋白的影响
黄疸因素对免疫透射比浊法检测血清白蛋白的影响目的探讨免疫透射比浊法中黄疸对检测血清白蛋白结果的影响。方法将 双份已知白蛋白浓度（低、高值）的血清中分别加入胆红素纯品，制成含不同胆红素浓度梯度的黄疸血清，再用免疫透射比浊法测定其白蛋白含量，比较分析黄疸因素对血清白蛋白检测的影响。结果普通黄疸（胆红素浓度低于400 umol/L）对白蛋白检测结果无显著性差异（P>0.05）。结论选用免疫透射比浊法检测血清白蛋白对黄疸的抗干扰能力较强。 标签：黄疸；免疫透射比浊法；白蛋白；抗干扰 在临床工作中，人血清中很多因素对生化检测结果存在干扰，其中标本黄疸是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素[1]。随着现代医学的快速发展，检验结果的准确性在诊疗中起着重要的作用，多数诊疗的决定是根据实验室检验结果做出的。近来有公司推出血清白蛋白免疫透射比浊法的商品化试剂，该试剂基于抗原抗体结合反应开发出来的，具有特异性强，稳定性好的优点，但其抗干扰能力目前尚无权威性的报告，国内临床普遍担心由于标本因素会给检测结果带来影响，以致现在这种新型免疫透射比浊法的商品化试剂还没有在临床上大规模使用。因此，本实验单就黄疸因素对免疫透射比浊法检测血清白蛋白的影响进行探讨。现报道如下。 1 仪器与方法 1.1 仪器与试剂 1.1.1 仪器日立7180（日本）生化分析仪。 1.1.2 试剂及校准品采用芬兰Orion Diagnostica公司产品，批号为67748。 1.1.3 质控品低值、高值采用北京利德曼公司生产的质控液（低值208091G、高值205311E），中值采用北京豪迈公司生产的质控液（6872F）。 1.2 黄疸的血清标本的制备 取含低、高浓度白蛋白双份新鲜血清，白蛋白含量分别为35.50 g/L（低值白蛋白组）及51.08 g/L（高值白蛋白组），将胆红素纯品与上述双份新鲜血清制成含不同胆红素浓度梯度的黄疸血清，黄疸浓度依次为34.5 μmol/L，99.0 μmol/L，189.0 μmol/L，378 μmol/L，756 μmol/L。原低、高值白蛋白血清作为对照组标本。 1.3 原理 免疫透射比浊法是基于液相免疫沉淀反应原理的检测。将抗人白蛋白抗体加入到一定比例的样本和缓冲液中，抗体和样本中的白蛋白产生凝集反应，导致混
免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫比浊法检测免疫球蛋白 一、实验目的 利用免疫比浊法绘制标准曲线,并检测样品中免疫球蛋白的浓度.〔本小组检测的为IgG样 品〕 二、实验原理 1.抗原抗体反响〔Antigen-antibody reaction〕:抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反响.反响特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性.影响因素有：电解质、温度、酸碱度. 2.免疫比浊法：适宜比例的抗原抗体形成的免疫复合物,在PEG乍用下形成微粒,使样品浊 度发生变化.当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱, 根据光的强度改变可测得微粒浓度. 分类：①透射比浊法〔Transmission tubidimetry 〕当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时, 由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱,故在一定范围内吸光度与免疫复合物量 呈正相关.当抗体浓度固定〔过量〕,样品的浊度与其中所含抗原量成正比.〔特点〕透射比 浊操作简便,适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计,几乎所有的实验室均能开 展.缺乏的是灵敏度和精密度均不够理想,所需的抗血清量大,检测的时间较长.②散射比 浊法〔Nephelometry 〕光线通过检测溶液时, 被其中所含的抗原抗体复合物折射而局部偏转, 产生散射光,其强度与复合物的数量和散射夹角成正比,与光的波长成反比.〔特点〕优点 是灵敏度、精密度均较高,检测快速.其缺点是需特定的分析仪器,试剂价格高. 本实验采用透射法. 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反响中,为增强抗原抗体反响常使用增聚剂,3〜4%的聚乙 二醇,可破坏抗原抗体的水化层,促进抗原抗体靠近反响,但如浓度不适合,会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果. 三、实验材料 免疫球蛋白A,G〔IgA,IgG〕测定试剂〔试剂1[PEG],试剂2[羊抗人IgA, IgG] 〕〔1管/每组〕免疫球蛋白A, G〔IgA,IgG〕校准品,蒸储水,血清样本〔1管〕 微量加样枪、ep管〔离心管〕
C反应蛋白检测方法的研究进展
C反应蛋白检测方法的研究进展 摘要：C－反应蛋白作为一种急性相反应蛋白，本文从C－反应蛋白的发现到现在临床上的大量运用，回顾了C反应蛋白生物学特性和过去的检测方法，作重介绍了现代检测方法的原理、优缺点和灵敏度，对C－反应蛋白的检测法进行了较好的总结和概括。 关键词：C－反应蛋白散射比浊法免疫透射比浊法免疫荧光双抗体夹心法 ELISA法 1 C－反应蛋白简介 1.1 C－反应蛋白的发现 C－反应蛋白（C-neactveprotein,简称CRP）.Tillet和Rancis在1930年在美国的一家研究所里发现了一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物。1941年科学家们对其仔细研究后发现它出现于急性感染时的蛋白。正式命名为C－反应蛋白，并得到了广泛的应用。 1.2 C－反应蛋白的生物学结构及特性 CRP是一种环状五聚体蛋白，由五个亚单位组成，每个亚单位含206个氨基酸残基，分子量为23017，半衰期为19H。CRP表现出多种多样的生物学活性，其中主要包括对炎症反应的防御、调节作用、对炎症的吞噬反应等。另外，C－反应蛋白还可和细胞核抗原、凋亡细胞相结合，与免疫反应相关。有研究表明，超敏C反应蛋白有趋化单核细胞的作用，以此来产生组织因子，从而使补体系统激活，所以，C－反应蛋白在免疫疾病方面也有着极其重要的参考价值。 1.3 C－反应蛋白的研究 现代研究认为：C反应蛋白是由肝脏合成的因一系列感染或炎症因素刺激而产生的急性时相反应蛋白，在机体发生炎症、感染、心肌梗死及肿瘤等情况下，血浆浓度发生显著变化的一类蛋白质。在正常情况下含量极低, 但在炎症开始后
6H内即可检测得到。所以说CRP在感染时是极好的指标。长期以来,临床医生们 使用白细胞(WBC)计数及分类作为临床感染检测的常规指标,但缺陷是：有相当部 分的被细菌感染的患儿WBC计数及分类指标变化很不明显。随着研究的深入和检 测方法的改进，检测得更为细致的超敏C反应蛋白的出现了，这就为感染时的快 速诊断又提供了一个参考指标。相当大的程度上填补了WBC计数及分类指标的不足，因为在急性炎症状态下，C反应蛋白的浓度上升很高，可达上限的500倍[1]，作为一个极灵敏的指标，很容易被检测出来，但是，假如是慢性炎症，C反应蛋 白的浓度变化很小，于是，检测得更为精准的方法的出现成为必然，即超敏C反 应蛋白（hs-CRP）的检测出现了。 2检测方法 主要分为非免疫标记技术和免疫标记技术这两类，其原理都是制 备CRP单克隆抗体，与待测标本中的C－反应蛋白发生抗原抗体反应。区别在于标记和未标记。由于C－反应蛋白在血液中浓度较为稳定， 溯源性较强，于是更先进的技术，如标记技术，胶乳增强技术出现了。发展到现在，C反应蛋白的检测方法有非常多，随着标准化的建立，C －反应蛋白的测定成为一种高准确度、快速灵敏的检测方法。 2.1 非免疫标记技术 在过去，实验室大都采用免疫扩散和免疫电泳法检测C－反应蛋白，根据免疫沉淀环直径、凝集程度或呈色反应，从而计算出血清中 的CRP含量。这些方法较为粗略，可在感染较为严重时检测到CRP， 灵敏度一般大于l0mg/L。但随着胶乳增强技术的应用，大幅度提高了灵敏度。 胶乳凝集法
散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白的比较
散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白的比较标签：散射比浊法；透射比浊法；血浆蛋白 散射比浊分析（nephelometry assay）是一种微量、快速、自动化检测体液中特定蛋白质成分的免疫化学分析技术。该技术是将免疫测定与散射比浊法的原理相結合而设计的一种快速免疫测定方法，主要用于对体液中单蛋白成分的测定。免疫透射比浊分析（turbidimetry）是一种比较老的方法，最常用于生化指标的测定。 我们应用散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白并对结果进行分析，现报道如下： 1 材料与方法 透射比浊法采用日本OLYMPUS生产的AU640全自动生化仪与配套试剂及校准品。散射比浊法用贝克曼公司生产的IMMAGE全自动比浊仪与配套试剂及校准品。质控品使用省临检中心的质控样品。检验样品为68份健康人混合血清。 2 仪器性能评价 2.1批内精密度测定 透射比浊法的CV值：IgG 1.50%、IgA 0.95%、IgM 1.95%、C3 2.98%、C4 3.98%。仪器标明为CV≤5%。散射比浊法的CV值分别为IgG 1.30%、IgA 0.80%、IgM 1.75%、C3 2.08%、C4 3.14%。 2.2批间精密度测定 透射比浊法的CV值：IgG 3.15%、IgA 1.24%、IgM 2.36%、C3 3.66 %、C4 4.28%。仪器标明为CV≤5%。散射比浊法的CV值分别为IgG 1.52%、IgA 0.96%、IgM 1.96%、C3 2.37%、C4 3.56%。 2.3准确度的检测 2批6份质控样品结果见表1，透射比浊法测定与靶值的偏差分别为0.1、0.12、0.1、0.1、0.1、0.1。散射比浊法测定与靶值的偏差分别为0.1、0.12、0.1、0.1、0.1、0.1。结果显示，两种方法都有较高的准确性，见表1。 3 讨论 从以上结果看出，透射比浊法测定法用于血浆免疫蛋白测定有一些缺陷：①溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通
免疫透射比浊法
免疫透射比浊法 一、原理 当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4）；③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。溶液pH为6.5～8.0之间为宜。载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix）的特性，对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
常用的临床免疫学检测技术
常用的临床免疫学检测技术 第一讲免疫浊度技术 一、免疫浊度法基本原理 免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射或吸收，测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。 二、免疫比浊法的特点： 1、自动化免疫分析稳定性好，敏感性高(达ng/L)、精确度高（CV<5%)，干扰因素少，结果判断更加客观、准确，也便于进行室内及室间质量控制。 2、自动化免疫分析快速、简便，结果回报时间短，便于及时将各种信息向临床反馈，又可节约大量人力物力，利于大批量样品的处理。 3、自动化免疫分析能更好地避免标本之间的污染及标本对人的污染。 4、自动化免疫分析可利用多道计数器、测光仪，同一份样品同时测定几十种和临床有关的分析项目，血清用量少，具有明显的应用优势。 三、免疫浊度法分类 （一）透射光免疫浊度法 透射光免疫浊度法是个极简便的方法，测定方式是测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减，读数以吸收光单位（A）或OD表示，这种A值反映了入射光和透射光的比率。 （二）散射比浊法 散射比浊法应用越来越多，且有替代其他免疫定量法的趋势。散
射比浊的原理是根据雷利(Rayleigh)公式提出的，当复合物较小时（<3*10）呈全透射，透射与散射相当。当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射，在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表复合物的量。 1、终点散射比浊法 2、速率散射比浊法 速率法的灵敏度与特异性都优于终点法，前者的灵敏度比后者高出3个数量级之多，但终点法稳定性好。所谓速率，是在某单位时间内形成大于3*10以上的复合物量（不是积累数），当仪器测定到某一时间单位内形成的速率下降时，即出现速率峰，该峰值的高低，即代表抗原的量。 速率散射比浊法有三大特点： 1、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试； 2、比较准确，因其测定形成速率，抗原多， 速率快； 3、节省试剂。 （三）粒子强化免疫浊度测定法 粒子强化免疫浊度测定法的基本原理是，选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗体后，当遇到相应抗原时，则发生聚集，单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个胶乳颗粒凝聚时，则使透射光减少，这种减少的程度与胶乳凝集成正比，当然也与抗原量成正比。