免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较
免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较目的对免疫透射比浊法测定血清胱抑素C的方法学性能行初步评价，并
与免疫散射比浊法进行比较。方法应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪分别对血清胱抑素C进行初步的方法学评价，包括精密度、线性回归试验、回收试验、干扰试验。结果免疫透射比浊法和免疫散射比浊法无论是批内还是批间精密度均符合要求，CV均0.95；免疫透射比浊法与免疫散射比浊法的回收率均>96%；干扰物试验结果显示血红蛋白、三酰甘油及胆红素均对测定无明显影响。结论免疫透射检验的灵敏度较高，检测范围广，与免疫散射试验的结果基本一致，系统误差小、抗干扰能力强，且更加快速、实用和便利。
[Abstract] Objective To initially evaluate the methodological properties of serum cystatin C by transmitted immunoturbidimetric assay and compare it with scatter turbidimetric assay. Methods Methodological evaluation was carried out for the serum cystatin C by Rohe Modular P automatic biochemical analyzer and SIEMENS BN ProSpec specific protein instrument，including precision，linear regression test，recovery test and interference test. Results Transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay both conformed to the requirements of intra-or inter-batch precision，and CV was 0.95；the recovery rates of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay were both>96%；interferent test results showed that hemoglobin，triglyceride and bilirubin had no significant effects on the determination. Conclusion The sensitivity of immune transmission test is high，the detection range is wide，which is consistent with the result of scatter turbidimetric assay. The system error is small，the anti-interference ability is strong，and it is more rapid，practical and convenient.
[Key words] Transmitted immunoturbidimetric assay；Scatter turbidimetric assay；Serum cystatin C；Methodology；Test
胱抑素C（CysC）又稱為半胱氨酸蛋白酶抑制剂C。近年来，由于高血压、糖尿病发病率的上升，其作为理想的反映肾小球滤过率的灵敏指标日益受到临床重视，国外对CysC的临床应用报道较多，认为其血浓度能够较准确地反映GFR[1-3]。目前已建立的多种测定方法，包括免疫荧光测定（FIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫透射比浊法（PETIA）与免疫散射比浊法（PENIA），我们应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪对CysC进行了初步的方法学比较[4-5]，现将结果报道如下。1 材料与方法
1.1 仪器
免疫透射比浊法使用Rohe Modular P全自动生化分析仪、免疫散射比浊法使用SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪。
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较
免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较 目的：对免疫透射比浊法与免疫散射比浊法在检测特定蛋白抗干扰能力的效果进行对比。方法：收集血清样本，且制作浓度不同的特定蛋白混合血清，同时将比例不同的两种干扰物置于混合血清当中，之后再用免疫透射比浊法、免疫散射比浊法对其进行测定，且对干扰率加以计算，以了解两种检测方法的抗干扰能力。结果：CH在9000与15000时，免疫散射比浊法对IgM进行检测受到干扰;Hb在9.9与29.8浓度时，免疫散射比浊法对高浓度IgM、低浓度CRP检测时受到干扰;采取免疫透射比浊法对三种含有干扰物的特定蛋白进行检测时，未受到任何干扰影响。结论：在对CH、Hb等干扰物的抗干扰能力方面，免疫透射比浊法比免疫散射比浊法更为优越。 标签：特定蛋白;免疫透射比浊法;免疫散射比浊法 在临床上，对于人血清内特定蛋白的检测，一般是采取免疫散射比浊法、免疫透射比浊法进行检测;然而，在检测的过程中，如游离血红蛋白、脂蛋白等会对检测的结果带来一定的干扰，继而影响检测结果的准确性[1]。对此，为保证血清检测的准确性，笔者对免疫透射比浊法、免疫散射比浊法在特定蛋白抗干扰能力的效果进行探讨，具体报道如下。 1.资料与方法 1.1对象 本次研究的样本源自于某医院门诊与住院患者当天的新鲜血清，其中排除存在脂血、溶血、浑浊等血清。同时，事前准备好IgM、CRP等浓度不等的混合血清，具体为IgM低浓度1.0～1.5g/L，高浓度大于2.0g/L;CRP低浓度4～10mg/L，高浓度大于100mg/L。 1.2仪器设备 选用Dade Behring BNProSpec特定蛋白测定仪、Roche Modular P全自动生化分析仪，试验所用试剂皆为仪器配套试剂。同时选取三个干扰物，即FBil（游离胆红素）、CH（乳糜）、Hb（血红蛋白），每种干扰物各准备两瓶试剂盒，一瓶作为空白对照使用，另外，干扰物的浓度具体为FBil3280μmol/L、CH15000FTU、Hb49.6μmol/L[2]。 1.3研究方法 首先，对混合血清进行制备，之后依据干扰试剂盒上的制备顺序，配制干扰物;将2ml的蒸馏水加入到每一个干扰物与空白对照内，复溶。然后，按照1：9的比例，把已经准备好的干扰物和混合血清混合在一起，制作成干扰物样本，其中含有干扰物的为样本甲，未加干扰物为样本乙[3]。把两个样本分别制定浓度
胱抑素C是评价肾功能损害的灵敏标记物
国内临床研究证实：胱抑素C是评价肾功能 损害的灵敏标记物 大量临床实验表明，胱抑素C（CystatinC）比血肌酐、尿素氮、肌酐清除率等目前常用的肾功能检测项目有更高的灵敏度和特异性，且操作简单，干扰因素较少，不仅在早期诊断肾功能损伤上有重要作用，而且在肾移植、儿童肾病、糖尿病合并肾功能损害等疾病中也有很好的临床诊断价值。”5月17日，在北京九强公司主办的“临床检验新项目研讨会”上，来自全国近百家三甲医院的专家，就胱抑素C的临床检验研究等进行了广泛交流。 目前临床常用的肾功能检测方法以血肌酐、尿素氮、肌酐清除率检测为主，但它们不能灵敏地反映肾功能早期损害，且会受到性别、年龄、操作等方面的影响，因此导致众多慢性肾脏病患者漏诊。 专家介绍，为确定胱抑素C在成人和儿童中的参考值范围，并比较胱抑素C与肌酐在肾小球滤过功能检测中的灵敏度，专家们采用速率散射比浊法，测定了116例正常成人、130例婴幼儿及儿童的血清胱抑素C水平，并对其进行性别和不同年龄组比较，同时还测定了109例各种疾病患者的血清胱抑素C、血清肌酐和肌酐清除率，并分别比较了胱抑素C和肌酐与肌酐清除率的相关性。结果表明：不同性别正常成人的血清胱抑素C水平有显著性差异（P＜0.001），但在同一性别三个年龄组中差异无显著性。将不同年龄组合并后统计其参考值范围为：男性17~60岁年龄组0.62~0.91毫克/升；女性17~60岁年龄组为0.52~0.83毫克/升；0~13岁儿童血清胱抑素C水平变化较大，出生后4个月内水平明显高于成人，出生5个月以后则下降至接近成人参考值范围。血清胱抑素C与血清肌酐有显著正线性相关（P ＜0.001），与肌酐清除率的对数值呈显著负线性相关。在肌酐清除率的检测上，胱抑素C比肌酐有更显著的符合率。实验中他们发现，在肌酐清除率>80毫升/分钟的患者中，有48%的人显示胱抑素C异常；60岁以上健康体检者中，有30%的人可见胱抑素C增高。他们的结论是：胱抑素C比肌酐能够更灵敏地反映临床肾脏滤过功能的损害；用胱抑素C代替肌酐清除率作为门诊患者肾小球滤过功能指标，值得推荐。 专家指出，化疗药物顺铂、卡铂可直接损害肾实质，引起肾功能损害。对此，以往临床常应用肌苷清除率来判断患者的肾小球滤过率。肌苷清除率检测操作繁琐，需要准确收集患者24小时尿液，且尿液计量存在较大误差。此外，肾小管可分泌肌苷，且个体间差异大，依据肌苷清除率或可高估肾小球滤过率，不能真实反映肾小球滤过率。而胱抑素C是一种低分子量蛋白质，可经肾小球自由滤过，在近曲小管被重吸收并完全降解，而肾脏是清除循环中胱抑素C的惟一器官，血清胱抑素C浓度主要由肾小球滤过率决定。此外，血清胱抑素C检测不受年龄、性别、炎症、饮食、体重以及肝功能变化的影响。由此可见，胱抑素C 是一种理想的反映肾小球滤过率变化的内源性标志物。 研究中，专家在患者化疗之前3天和化疗后第五天，分别为患者采血和收集其24小时尿，并采用Scr和Ucr酶法及CYSC颗粒增强免疫透射比浊法，分别测定患者的血肌酐、血清胱抑素C和肌酐清除率，以探讨顺铂化疗前后血清胱抑素C与肌酐清除率的相关性、血清胱抑素C对顺铂化疗肾功损害诊断的灵敏度和特异性以及血清胱抑素C能否替代肌酐清除率来评价顺铂对肾功能的损害。 研究结果表明，顺铂化疗前后血清胱抑素C与肌酐清除率的相关性明显大于血肌酐；轻度肾功能降低时，血清胱抑素C检测的灵敏度比血肌酐高,与肌酐清除率显著相关；ROC分析显示，血清胱抑素C对肌酐清除率减低的诊断灵敏度比血肌酐好，准确性与血肌酐相当；血清胱抑素C可替代肌酐清除率用于评价顺铂对肾功能的损害。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕 【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法 IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels of IgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0. 91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used for
免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较
免疫透射比浊法与散射比浊法检测血清胱抑素C的方法学比较目的对免疫透射比浊法测定血清胱抑素C的方法学性能行初步评价，并 与免疫散射比浊法进行比较。方法应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪分别对血清胱抑素C进行初步的方法学评价，包括精密度、线性回归试验、回收试验、干扰试验。结果免疫透射比浊法和免疫散射比浊法无论是批内还是批间精密度均符合要求，CV均0.95；免疫透射比浊法与免疫散射比浊法的回收率均>96%；干扰物试验结果显示血红蛋白、三酰甘油及胆红素均对测定无明显影响。结论免疫透射检验的灵敏度较高，检测范围广，与免疫散射试验的结果基本一致，系统误差小、抗干扰能力强，且更加快速、实用和便利。 [Abstract] Objective To initially evaluate the methodological properties of serum cystatin C by transmitted immunoturbidimetric assay and compare it with scatter turbidimetric assay. Methods Methodological evaluation was carried out for the serum cystatin C by Rohe Modular P automatic biochemical analyzer and SIEMENS BN ProSpec specific protein instrument，including precision，linear regression test，recovery test and interference test. Results Transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay both conformed to the requirements of intra-or inter-batch precision，and CV was 0.95；the recovery rates of transmitted immunoturbidimetric assay and scatter turbidimetric assay were both>96%；interferent test results showed that hemoglobin，triglyceride and bilirubin had no significant effects on the determination. Conclusion The sensitivity of immune transmission test is high，the detection range is wide，which is consistent with the result of scatter turbidimetric assay. The system error is small，the anti-interference ability is strong，and it is more rapid，practical and convenient. [Key words] Transmitted immunoturbidimetric assay；Scatter turbidimetric assay；Serum cystatin C；Methodology；Test 胱抑素C（CysC）又稱為半胱氨酸蛋白酶抑制剂C。近年来，由于高血压、糖尿病发病率的上升，其作为理想的反映肾小球滤过率的灵敏指标日益受到临床重视，国外对CysC的临床应用报道较多，认为其血浓度能够较准确地反映GFR[1-3]。目前已建立的多种测定方法，包括免疫荧光测定（FIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫透射比浊法（PETIA）与免疫散射比浊法（PENIA），我们应用Rohe Modular P全自动生化分析仪与SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪对CysC进行了初步的方法学比较[4-5]，现将结果报道如下。1 材料与方法 1.1 仪器 免疫透射比浊法使用Rohe Modular P全自动生化分析仪、免疫散射比浊法使用SIEMENS BN ProSpec特定蛋白仪。
血清胱抑素C—评估肾小球滤过率的敏感指标
血清胱抑素C—评估肾小球滤过率的敏感指标 自从1985年以来，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)已被视为检测肾功能的良好标志物，由于其不受许多生理病理因素的影响，同肾小球滤过率(GFR)的其他标志物相比具有众多优越性。cystatin C 在一系列生理病理过程中也发挥着作用，有重要的临床意义。 一、肾功能评价和肾功能标志物 临床评价肾脏疾病进展和严重程度，一般以肾功能为参考，肾功能一般以肾小球滤过率（GFR）反映。它是反映肾功能最重要的指标。GFR指在一定时间内通过肾小球的血浆量（定义为在单位时间内肾脏将若干容积血浆内的物质从体内清除，其单位一般为ml/min物质）。它不能直接测定，必须借助某物质的肾清除率来反映。根据GFR标志物来源，分外源性和内源性。外源性标志物包括菊粉(inulin)、碘海醇(iohexol)、51Cr-EDTA、99mTc-DTPA等。内源性标志物包括血清肌酐(Scr)、尿素(Urea)、β2-微球蛋白（β2-M）、β-痕迹蛋白(BTP)以及血清胱抑素C(CystatinC，Cys C)。 二、肾小球滤过率检测现状 1、外源性标志物肾清除率测定方法被视为GFR评判的“金标准”；但存在许多不足。首先这些物质费用昂贵；其次同位素标记的物质涉及放射暴露问题；另外标本采集、实验操作烦琐；碘海醇测定需要特殊仪器设备（射线荧光光谱仪）；加之受 年龄、性别和体表面积的影响，尤其是无法实现危急患者检测的及时性，从而限制其在临床的应用。 2、内源性标志物是在评价肾小球滤过功能实验中最常用的指标。 理想内源性标志物应具备：⑴稳定的生成率；⑵稳定的血浓度，不受其他病理变化的影响，不与蛋白结合；⑶肾小球自由滤过；⑷肾小管不分泌、不重吸收；⑸无肾外清除。 目前常用的指标为血清肌酐(Scr)、尿素(Urea)、内生肌酐清除率(Ccr)，但由于受许多肾外因素，如年龄、性别、身高、肌肉量、膳食结构、机体疾病状况、药物等，以及肾小管对肌酐的分泌等影响，使这些指标不能满足内源性标志物的要求。⑴尿素(Urea)虽然首先被作为肾功能评价指标，但它不能满足内源性GFR标志物的要求，并且受机会疾病状况的影响较大，如充血性心衰、营养不良、进食困难等，而更为重要的是肾小管有明显的被动重吸收。⑵血清肌酐（Scre）作为肾功能主要评判指标已有40余年，由于检测简便和费用低廉而受欢迎。体内肌酐有外源性和内源性两类，外源性来源于膳食，内源性来源于肌肉中肌酸和磷酸肌酸的代谢。研究表明肌酐水平受年龄、性别、体形、身高、肌肉量以及膳食结构等诸多因素的影响，肾小管分泌肌酐也是不可忽视的因素，同一个体不同时间段以及不同个体肾小管分泌肌酐速率不同。研究表明约30%的慢性肾病患者GFR评估偏高，其主要原因就是肾小管对肌酐的分泌；如果药物抑制肾小管分泌、剧烈体育运动和进食荤食等则出现GFR评估偏低现象；另外，机体GFR下降至正常水平30%以下时，Scre才会升高。⑶内生肌酐清除率（Ccre）一直被认为是反映GFR较好的指标，但也存在很多不足之处。首先，24小时连续收集尿液标本，这给护理人员带来很大的工作量，而且经常收集不全，这会造成分析误差。其次，肾小管的排泌也会干扰Ccre的测定，引起Ccre假性增高。
免疫比浊法和免疫投射比浊法(修改版)
免疫比浊法和免疫投射比浊法 1.定义： （1）免疫比浊法：在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反应液体的浊度，并由此推算样品中的抗原含量。 （2）免疫投射比浊法：当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒 的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。一般 采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。2.原理 （1）免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规 定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促 聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使 反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的 量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增 加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算 出检样中抗原的含量。 （2）免疫透射比浊法是抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免 疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被 吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊
计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。 3.关系 4．免疫比浊法适用的仪器 紫外可见分光光度计 全自动生化仪 全自动生化仪常见的检测方法 终点法 连续检测法 比浊法 均相酶免疫分析
免疫散射比浊法
免疫散射比浊法 免疫散射比浊法是一种近年来发展迅速的检测技术，它是一种非常有效的检测方法，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。本文将重点讨论免疫散射比浊法的工作原理、优缺点以及实际应用。 首先，我们来看看免疫散射比浊法是如何工作的。散射可以将一个物质分解成一系列衍射线，而比浊法则利用物质的衍射线的强度变化来检测物质的结构。与其他衍射技术（如X射线衍射）相比，比浊可以更快速地检测物质结构，因为它可以利用衍射瓦数的变化来进行衍射数据的分析。此外，比浊法也具有更高的灵敏度，因此能够检测出更多的病原体和药物抗体。 免疫散射比浊法的主要优点是检测速度快、灵敏度高、数据分析方便、精度高，能够在短时间内准确地检测出病原体和药物抗体。另外，由于免疫散射比浊法所分析的数据是不可见的，因此可以有效避免偏见和偶然性，使得结果更加准确可靠。 但是，这种技术也存在一些弊端。首先，免疫散射比浊仪的费用高昂，这一衍射装置的成本非常高，在普通实验室范围内难以实现；其次，免疫散射比浊法需要高精度的衍射装置，偶尔可能会受到其他衍射技术影响；最后，由于免疫散射比浊法只能检测物质的分子形状，因此无法直接检测物质的化学结构。 免疫散射比浊法在实际应用中被广泛应用于生物学领域，如检测病毒和细菌的形态及分子结构、检测抗体的类型及效力以及检测药物的活性成分以及作用机制等。例如，近年来研究人员利用免疫散射比
浊法成功地检测出了一种新型的HIV拮抗药物，它能够在体外有效抑制HIV病毒的复制。此外，免疫散射比浊法还可用于分析生物分子活性成分，例如乳糖苷酶等，以及其他药物分子。 综上所述，免疫散射比浊法是一种技术上先进、灵敏度高、数据分析方便、精度高的检测技术，广泛应用于生物学领域，能够快速准确地检测出物质的病原体和药物抗体。尽管其存在一定的缺点，但是它仍然是检测病原体和药物抗体的理想选择。
血清胱抑素C测定的临床意义及方法学进展
血清胱抑素C测定的临床意义及方法学进展 在肾小球滤过功能试验中，血清肌酐、尿素及内生肌酐清除率是最常用的指标。由于以上指标尚存诸多不足，故人们一直在寻找新的反映肾小球滤过率变化的指标。胱抑素C是一种低分子量蛋白质，是半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族的成员之一，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的理想的内源性标志物。血清胱抑素C浓度在作为肾功能试验时优于血清肌酐浓度。至于胱抑素C测定的方法学，已有快速、简便且可自动化的“颗粒加强免疫比浊法”的最新报道，使血清胱抑素C测定的广泛临床应用成为可能。 胱抑素C（Cystatin c）由Grubb等首先报道其血清浓度与GFR密切相关，可作为肾小球滤过功能指标[1]。近年来有关胱抑素C测定的临床应用及方法报道日渐增多，本文就胱抑素C的结构与功能，作为反映肾小球滤过功能的内源性标志物及方法学进展作一综述。 1 胱抑素C的结构与功能 胱抑素C，以前也被称为γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13KDa,由120个氨基酸残基组成，是一种分泌性蛋白质。细胞先合成一个带信号肽的前体蛋白，编码胱抑素C的基因位于人类第20号染色体，大约为4.3Kb，包含3个外显子，基因上游45-50核苷酸处为“TATA盒样”序列（ATAAAA）。胱抑素C 基因5′-侧翼区GC含量较高，转录起始位点上游400bp序列的G+C＞70%，富含GC 的“岛”也包括外显子1及内含子1、5′侧的一部分，整个富含GC“岛”约900bp，G+C 含量为73%。此区域CpG/GpC比值接近于1，因此此区CpG是非甲基化的。在胱抑素C基因5′侧翼1Kb序列中发现了2个“GC盒”（GGGCGG），此区也发现了增强子核心样序列（GTGGAAGG）。由以上可见，胱抑素C基因5′侧翼序列与“看家基因”的启动子区具有相同的特性，即缺乏典型的“CAAT盒”、富含GC、有与转录因子Spl结合的“GC 盒”。故可将胱抑素C基因看作是“看家基因”（house-keeping gene），即此基因在所有组织恒定持续地转录及表达。Northernx印迹也发现胱抑素C基因在所有的被观察的组织均表达，包括肾、肝、胰、肠、胃、肺及胎盘[2]。 由于胱抑素C是一种分泌性蛋白质，故广泛地存在于各种体液中，如脑脊液、血液、唾液、精浆等。至于胱抑素C的确切生物学功能目前还了解不多，研究发现胱抑素C是半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族的成员之一，是目前发现的对组织蛋白酶B抑制作用最强的抑制物，对木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、组织蛋白酶H及L也有抑制作用，故胱抑素C的一个生理学功能可能是调节半胱氨酸蛋白酶的活性。胱抑素C基因突变可导致遗传性胱抑素C淀粉样血管病（HCCAA），可发生脑动脉血管破裂，这是目前发现的直接与胱抑素C相关的临床疾病。 2 胱抑素C作为反映肾小球滤过功能的内源性标志物 由于胱抑素C基因属“看家基因”，能在几乎所有的有核细胞表达，无组织学特异性，故机体胱抑素C产生率相当恒定。因胱抑素C是一种低分子量蛋白质，可经肾小球自由滤过，在近曲小管被重吸收并降解，肾脏是清除循环中胱抑素C的唯一器官，所以血清胱抑素C浓度主要由GFR决定，由此可见胱抑素C是一种理想的反映GFR变化的内源性标志物。 grubb及Simonsen等[1]首先研究了血中低分子量蛋白质（β2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、胱抑素C）浓度与GFR（51Cr-EDTA清除率）的相关性，发现血清胱抑素C、β
免疫透射比浊法
免疫透射比浊法 一、原理 当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick 等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合物，一定的条件包括：①对抗体的要求，作为体液或组织中蛋白质种类很多，若要快速特异检测，要求有单价特异抗体才能与抗原形成复合物。某一种蛋白质，有其特异抗体才能与该抗原结合，形成免疫复合物进行定量，若抗体不纯混杂有另一种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大杂烩，结果偏高；②抗原抗体比例适当，因免疫复合物形成有三个阶段，第一阶段是复合物形成抗原抗体复合物；第二阶段是初步形成抗原抗体复合物，此阶段是复合物交联成大的网格状结构；第三阶段是复合物聚合产生絮状沉淀。只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体，此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。在抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加，其测定只能在反应曲线的左侧进行（见图18-4）；③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，如聚二乙醇6000等。溶液pH为6.5～8.0之间为宜。载脂蛋白有形成两性螺旋片（amphipathic helix）的特性，对脂质（特别是磷脂）有高度亲和力，与脂质结合后有时会掩盖抗原位点或构象改变，可以部分或完全丧失对抗血清的特异反应。为此，载脂蛋白检测过程中有必要先暴露抗原位点，所用试剂有表面活性剂，尿素，盐酸胍和吐温等解离蛋白剂，或用四甲基脲脱脂或有机溶剂脱脂等暴露抗原决定簇等方法，血清脂蛋白颗粒中的载脂蛋白，能在短时间内形成抗原抗体复合物进行定量；④抗原不能过量，因为抗原过量，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光散射或光吸收减少，检测结果反而偏低。
散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白的比较
散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白的比较标签：散射比浊法；透射比浊法；血浆蛋白 散射比浊分析（nephelometry assay）是一种微量、快速、自动化检测体液中特定蛋白质成分的免疫化学分析技术。该技术是将免疫测定与散射比浊法的原理相結合而设计的一种快速免疫测定方法，主要用于对体液中单蛋白成分的测定。免疫透射比浊分析（turbidimetry）是一种比较老的方法，最常用于生化指标的测定。 我们应用散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白并对结果进行分析，现报道如下： 1 材料与方法 透射比浊法采用日本OLYMPUS生产的AU640全自动生化仪与配套试剂及校准品。散射比浊法用贝克曼公司生产的IMMAGE全自动比浊仪与配套试剂及校准品。质控品使用省临检中心的质控样品。检验样品为68份健康人混合血清。 2 仪器性能评价 2.1批内精密度测定 透射比浊法的CV值：IgG 1.50%、IgA 0.95%、IgM 1.95%、C3 2.98%、C4 3.98%。仪器标明为CV≤5%。散射比浊法的CV值分别为IgG 1.30%、IgA 0.80%、IgM 1.75%、C3 2.08%、C4 3.14%。 2.2批间精密度测定 透射比浊法的CV值：IgG 3.15%、IgA 1.24%、IgM 2.36%、C3 3.66 %、C4 4.28%。仪器标明为CV≤5%。散射比浊法的CV值分别为IgG 1.52%、IgA 0.96%、IgM 1.96%、C3 2.37%、C4 3.56%。 2.3准确度的检测 2批6份质控样品结果见表1，透射比浊法测定与靶值的偏差分别为0.1、0.12、0.1、0.1、0.1、0.1。散射比浊法测定与靶值的偏差分别为0.1、0.12、0.1、0.1、0.1、0.1。结果显示，两种方法都有较高的准确性，见表1。 3 讨论 从以上结果看出，透射比浊法测定法用于血浆免疫蛋白测定有一些缺陷：①溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大，分子太小则阻挡不了光线的通
胱抑素C临床检验及在肾脏疾病应用中的研究进展
胱抑素C临床检验及在肾脏疾病应用中 的研究进展 【摘要】胱抑素 C 也被称为y-微量蛋白y -后球蛋白，由人体核细胞产生，肾小球滤过而被清除，正常生理状态下血清胱抑素 C 水平恒定。胱抑素 C 的临 床检测实现了自动化、标准化、检验结果的可比性，所以目前它是一个最好、最 有效反映肾小球滤过功能的标志物。本文对胱抑素 C 临床检验及在肾脏疾病中 的研究进展进行综述。 【关键词】胱抑素；临床检验；肾脏疾病； 胱抑素 C(cystatinC，CysC)是一种非糖化蛋白,由个氨基酸组成，相对分 子量 130kd，产生于人体所有有核细胞,不受年龄、性别、饮食、肌肉量和运 动的影响，生成量非常稳定，仅在使用大剂量糖皮质激素或甲状腺功能异常时 影响 CysC的产生。CysC可以自由通过肾小球滤过膜的机械屏障与电荷屏障，并几乎全部在近曲小管重吸收，不被肾小管分泌。Cys C 的临床检测实现了自 动化、标准化、检验结果的可比性，是目前最好、最有效反映肾小球滤过功能的 一个标志物，评价肾小球滤过率（GFR）敏感性和特异性可达到 89%~97%。 1 CysC在临床检验中研究进展 1．1 检验方法及参考品研究进展 检测CysC的方法可概括为均相法和非均相法。因非均相法具有耗时长、线 性范围窄、难以自动化等缺点，而被均相法替代。目前，检测 CysC的均相 法主要包括颗粒增强透射免疫比浊法 (particle—enhanced PETIA)、颗粒增强 散射比浊法 (particle—enhancedBe—pholemetryimmunoassay，PENIA)。 PETIA法可实现自动化、高通量、检测周期短等优点而更被广泛应用，以Roch和丹麦 DAKO公司为代表；以 Siemens公司为代表 PENIA法因其准确度 高、线性范围宽、不精密度低等特点而常被作为比对方法进行性能评价。自
不同透析方式尿毒症患者血清胱抑素C清除的研究
不同透析方式尿毒症患者血清胱抑素C清除的研究 梁国玉 【摘要】目的:评价以不同方式透析的尿毒症患者血清胱抑素C 清除效果.方法:将36 例维持性血液透析患者随机分为A、B 两组,每周透析3 次,A 组每周血液透析滤过(hemodiafiltration,HDF)1 次,B 组每两周血液透析滤过1 次.每两月检查透前、透后血清胱抑素C、β2- 微球蛋白浓度,观察6 个月.结果:A 组前、中、后二月透前血清胱抑素C 浓度分别为(6.79±1.45)、(5.73±1.88)、(4.48±1.48)mg/L,β2- 微 球蛋白浓度分别为(22.54±2.20)、(20.06±6.20)、(18.11±6.10)mg/L.B 组前、中、后二月透前血清胱抑素C 浓度分别为(6.79±1.71)、(5.89±1.38)、 (5.06±1.35)mg/L,β2- 微球蛋白浓度分别为(21.03±4.17)、(20.00±3.69)、(18.24±4.67)mg/L.两组前、中、后二月透前血清胱抑素C、β2- 微球蛋白浓度比较差异无统计学意义(P>0.05).后二月透前血清胱抑素C、β2- 微球蛋白浓度与前 二月比较差异有统计学意义(P<0.05).血清胱抑素C 下降率(cystatin C reduction ratio,CyRR)、β2- 微球蛋白下降率(β2-microglobulin reduction ratio,β2-MRR) 均40%~50%,清除效果相当.结论:每周1 次HDF 与每2 周1 次HDF 对血清胱抑 素C、β2- 微球蛋白清除效果相似,血清胱抑素C 下降率可作为理想的中分子毒素 清除率指标. 【期刊名称】《中外医学研究》 【年(卷),期】2012(010)023 【总页数】3页(P1-3) 【关键词】血清胱抑素C;血液透析;血液透析滤过
血清胱抑素C、血清肌酐和血清尿素在临床检验中的比较和应用
血清胱抑素C、血清肌酐和血清尿素在临床检验中的比较和应用 09-05-18 管超楠 【摘要】目的讨论血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（血清胱抑素C）（Cys C）的浓度和血清肌酐（Scr）血清尿素（Sur）浓度在成年人肾功能评价中的意义比较。方法用颗粒曾强透视免疫比浊法在日产HITACHI 7600自动生化分析仪上测定血清胱抑素C，同时用苦味酸动力学法测定血清肌酐和尿酶速率法测定血清尿素浓度。结果血清胱抑素C异常结果检出率高于血清肌酐和血清尿素；血清胱抑素C浓度各相邻年龄组间比较，差异均有统计学意义（p<0.05），血清肌酐和血清尿素浓度各相邻年龄组间差异均无统计学意义（p>0.05）；血清胱抑素C、血清肌酐和血清尿素与年龄的相关系数r分别为0.535、0.342和0.279。结论在血清胱抑素C、血清肌酐和血清尿素中血清胱抑素C是评价成年人肾功能最理想的指标，但是联合检测血清胱抑素C、血清肌酐和血清尿素可以提高诊断的准确性 【关键词】半胱氨酸蛋白酶抑制剂C；血清肌酐；血清尿素；肾功能测试；成年人 自2000年开始，我国已经步入人口老龄化时代，如何提高成年人的生活质量预防各种老年病已经为各级政府及广大医务工作者所关注。由于成年人特有的生活工作压力，不健康的生活习惯和不规则的生活起居导致机体多脏器出现老年人才会表现出的机体脏器功能代偿。而肾脏率过功能也像机体的其他技能一样在逐渐受损，功能减退。所以对于成年人各种慢性疾病的前期体检预警成为成年人临床治疗的关键。而且慢性疾病的前期观察诊断对临床治疗的预后具有非常积极重要的作用。目前，临床通常以血清肌酐和血清尿素作为肾功能的实验室指标，但它们都有各自的弊端。今年来随着检验技术的发展及检测自动化，血清胱抑素C（cystatin C，Cys C）作为肾功能的实验室指标，倍受人们关注。本组以参加我院健康体检的250例成年人为对象，测定其血清胱抑素C、血清肌酐和血清尿素的浓度，来探讨血清胱抑素C和血清肌酐、血清尿素在评价成年人肾功能方面的作用比较。 材料与方法 1、对象：随机选取来我院进行健康体检的成年人250例，其中男性117例，女性133例，年 龄在50～59岁，均否认有原发性肝肾病史。按不同年龄分为4组：50～59岁组（其中男性10例，女性16例）；40～49岁组（其中男性19例，女性17例）；30～39岁组（其中男性69例，女性65例）20～29岁组（其中男性19例，女性37例）。 2、仪器与试剂：实验仪器为HITACHI 7600自动生化仪，胱抑素C检测试剂由BACKMAN实验系
PETIA法测定血清胱抑素C方法学的建立
PETIA法测定血清胱抑素C方法学的建立 张德亭;潘利琴;连国军;陈益川;许锴;赵长容;曹建明 【期刊名称】《山东化工》 【年(卷),期】2015(44)10 【摘要】建立了一种纳米胶乳微球增强透射免疫比浊法(PETIA)测定胱抑素C(Cys C)的新方法.方法为在pH值=8.0的磷酸盐缓冲液中,血清中的胱抑素C与测定试剂中经纳米胶乳微球修饰后的胱抑素C抗体反应后形成抗原-抗体复合物,并形成一定浊度,该浊度与样品中胱抑素C浓度成正比.该法线性范围0～8.00mg/L,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.88％～2.44％和1.12％～3.12％,回收率为99.0％～103.6％,与参考方法较具有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为Y=0.98X +0.13,r=0.9833.用PETIA法测定血清胱抑素C方法简便、灵敏可靠,适合推广应用. 【总页数】3页(P70-71,76) 【作者】张德亭;潘利琴;连国军;陈益川;许锴;赵长容;曹建明 【作者单位】温州市人民医院检验科,浙江温州325003;温州市人民医院检验科,浙江温州325003;温州医科大学环境与公共卫生学院,浙江温州325003;温州市人民医院检验科,浙江温州325003;温州市人民医院检验科,浙江温州325003;温州医科大学环境与公共卫生学院,浙江温州325003;温州医科大学环境与公共卫生学院,浙江温州325003 【正文语种】中文
【中图分类】R446.6 【相关文献】 1.透射比浊法和散射比浊法测定血清胱抑素C的方法学评价 [J], 王建琼;牛华;刘莉 2.PETIA法检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C方法学评价 [J], 郑瑾;李倩;吴蓉;康向东 3.胶乳增强免疫透射比浊法测定血清胱抑素C的方法学评价 [J], 胡修全;戴晓强 4.胶乳增强免疫透射比浊法测定血清胱抑素C的方法学评价 [J], 胡修全 5.镁离子增强的PETIA法检测血清胱抑素C试剂研制与评价 [J], 张德亭;潘利琴;连国军 因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买
透射和散射比浊法测定血清免疫球蛋白的评价
透射和散射比浊法测定血清免疫球蛋白的评价 孙虹;王凡;孙鷖;赵崇吉;张昱璠;牛华 【期刊名称】《临床检验杂志》 【年(卷),期】2005(23)3 【摘要】目的对同一临床实验室采用透射比浊和散射比浊法测定血清免疫球蛋白IgA、IgG和IgM结果偏差进行评估.方法按照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)EP9-A文件,以散射比浊为比较方法,透射比浊为实验方法进行对比及偏差 评估,将测定数据进行相关分析,并对两分析系统之间的预期偏差进行评估.结果IgA、IgG两法各浓度值测定结果的预期偏差均可以接受;IgM浓度为1.0g/L时,两法测 定结果的预期偏差不能接受,其余浓度值测定结果的预期偏差可以接受.结论在使用 性能较好的全自动生化分析仪及配套试剂的前提下,透射比浊法测定血清IgA、IgG 和IgM的结果与散射比浊法的测定结果基本一致. 【总页数】3页(P189-191) 【作者】孙虹;王凡;孙鷖;赵崇吉;张昱璠;牛华 【作者单位】云南省临床检验中心,昆明,650032;云南省临床检验中心,昆 明,650032;云南省临床检验中心,昆明,650032;云南省临床检验中心,昆明,650032; 云南省临床检验中心,昆明,650032;云南省临床检验中心,昆明,650032 【正文语种】中文 【中图分类】R446.6 【相关文献】
1.透射比浊法和散射比浊法测定免疫球蛋白和补体的评价 [J], 曾华;罗玲;何桂儿;罗晓红 2.透射比浊法和散射比浊法测定血清胱抑素C的方法学评价 [J], 王建琼;牛华;刘莉 3.速率散射比浊法测定血清免疫球蛋白和轻链在诊断M蛋白病中的应用 [J], 陈永亮;谢华斌;李云莲 4.用免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测血清免疫球蛋白的效果对比 [J], 张静;周真珍;邝林 5.免疫透射和免疫散射比浊法测定血清免疫球蛋白及补体的比较 [J], 但刚;胡宗海;李同心 因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买
一文了解胱抑素C的临床应用
一文了解胱抑素C的临床应用 胱氨酸蛋白酶抑制剂的超家族 在1981年明确了人类胱抑素C（Cystatin C）的氨基酸系列，但它没有显示与当时已知的任何超家族蛋白系列的同源性，事实证明它属于一个新的蛋白超家族。 图1. 人类胱抑素C的氨基酸系列和结构示意图 阴影区域是木瓜蛋白酶——类似半胱氨酸蛋白酶的抑制位点，它与由Asn残基组成的legumain抑制位点不重叠；箭头所示Leu残基，在脑出血时，它被Gln残基代替产生胱抑素C的变异体；星号所示Pro3残基，被部分羟基化。 图2. (A) 根据胱抑素C二聚体推出的胱抑素C的单体（B）在胱抑素C的结晶体中发现人类胱抑素C分子是八聚体 胱抑素C的氨基酸序列是胱抑素家族中第一个被检测的系列，但直到两年后，只有当研究者检测了鸡胱抑素的结构，并发现此两种蛋白44％的氨基系列相同，才确定胱抑素C的功能――半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。 又经二十年的研究，发现了另外十种人类半胱氨酸蛋白酶的抑制剂，并且发现它们与胱抑素C和鸡胱氨酸蛋白酶抑制剂有很强的同源性。因此，它们都属于人胱抑素超家族。 人胱抑素家族目前由11种已明确的蛋白组成。胱抑素家族1由胱蛋白酶抑制剂A和B组成，是唯一的细胞内蛋白；胱抑素家族2由胱抑素C，D，E，F，S，SA和SN组成，它们主要是细胞外和/或细胞间转运蛋白；胱抑素家族3由高和低分子量的激肽原（Kininogen）组成，它们主要是血管内蛋白，除了是半胱氨酸蛋白酶的抑制剂外，它们也参与凝结过程和血管活性肽的产生。 表1. 人胱抑素超家族 胱氨酸蛋白酶抑制剂的超家族 胱抑素C除了是木瓜蛋白酶——类似半胱氨酸蛋白酶的抑制剂外，最近被证实，它还能抑制半胱氨酸蛋白酶的其它家族成员，比如人
胶乳透射免疫比浊法
附件5 胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法） 注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。 本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。 目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的 —1 —
免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、全自动生化分析仪，散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。 从方法学上讲，本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法,不适用于散射免疫比浊法。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），胱抑素C测定试剂（免疫比浊法）管理类别为二类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。相关描述应至少包含如下内容： 1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应证背景情况 （1）胱抑素C的生物学特征、结构与功能、在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。 胱抑素C（Cystatin C, CysC）是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ—微量蛋白及γ—后球蛋白，广泛存在于各种组织的—2 —