2004~2005年南昌地区淋病奈瑟菌质粒谱型研究
临床淋病奈瑟菌外膜蛋白PⅠ基因重组质粒的构建与生物信息分析

文章编号:1003—8507(2007J19—3621—04中图分类号:R378.1+6文献标识码:A临床淋病奈瑟菌外膜蛋白PI基因重组质粒的构建与生物信息分析滕毅1,汪东篱2,雍刚3,谢志梅1,陈恒1,叶盛1,裴晓方1【论著】摘要:[目的]研究淋病奈瑟菌临床分离株外膜蛋白PI基因的结构特点和变异情况,为淋球菌疫苗靶位点的选取提供参考。
[方法]提取9株成都地区临床分离淋球菌的基因组,PCR扩增PI基因,与表达载体pET一30b(+)构建重组质粒pET-30b(+)一PI,重组子经双酶切鉴定后测序,利用一系列生物软件对序列进行生物信息学分析『结果]重组子经双酶切后,在5400bp和900bp左右分别得到条带,与预期片断的大小相符合:各PI序列在GeneBank中均搜索到相似性大干98.9%的相似序列,根据碱基数目及序列同源性比较结果,4条属于PIA亚型.5条蒋子PfB亚型:PIA亚型较PIB亚型(除2—7外)含有相对较高的仪一螺旋和B一折叠结构,具有单一筒状的三级结构,而PIB亚型含有相对较高的环或其他结构,其中的7-2具有相连接的两筒状结构。
[结论]成功构建9个pET一30l,(+)一PI重组子;PIA和PIB两亚型核苷酸数目、对应蛋白的二级结构和三级结构均有差异.两亚型内各核苷酸和氨基酸序列的变异程度也不同,本研究结果将为PI蛋白抗原靶位的筛选提供参考。
关键词:淋球菌;外膜蛋白PI;重组质粒:生物信,皂,分析CONSTRUCTIONOFNEISSERIAGONORRHOEAEPIGENERECOMBINANTSFRoMCLINI.CALISOLATESANDTHEBIoINFORMATICSANALYSIS删G】厂;.WAⅣGDong—li.YONGGang,et以.(DepartmentofMedicalLaboratoryTechnology,SchoolofPublicHealth,SiehuanUniversity,Chengdu们D舛J.China)“Abstract:。
南昌地区淋球菌对抗生素的耐药性及质粒谱分析

o s ia , a g h u, n o g 1 O O, ia;4 f Ho p t l Gu n z o ( g 5 O 8 Chn .Jin i o ica a en l n h l a t r o — a gx v n i l Pr M tr a d C id He lhCa eH s a
n a;2 Na c a g Si h Pe pl o pi l Na c a g, i n xi 3 0 3 Ch n . n h n xt o e s H s t , n h n J a g 3 0 0 , i a;3 Gu n o g Pr v n i lPe pl a . a gd n o i c a o e s
Anay i n a i i i e it nc nd p a m i r flso is ra g no r e e i n ha r a lsso ntbotcr ssa ea l s d p o ie fNese i o r ho a n Na c nga e
Nes e i g n r h e e( g n r o a ) i n h n r a M eh d Th ik d fu i n me h d wa s d t e e is ra o o r o a N. o r h e e n Na c a g a e . tos e d s i so t o s u e o d t r f
X I Da— e , E z ZH A N
Xu-u , AO eh a , ANG u 。 S U Xin o g Y ej n T Xu — u 。 W J n ,H a g t n , AN G h — u , U Ya — i g T S uh a X n p n , AN i 1 De Liwe . .
2006-2008年南昌地区淋球菌耐药检测结果分析

中图分 类号 :R 7 . 381 6
文献标 识码 : A
文 章编 号 :10 -29 (090-03-0 00 2420 )1 14 2
淋 病是 我 国发病率 较高 的性传 播疾 病 。抗生 素 的不规 范使 用 , 致淋球 菌 耐药率 不 断升高 , 而加 导 进
重疾病 治疗 的难 度 。为 了更 好地 了解 淋球 菌耐药 性
2 3 和 3 8 , 出 1 株 (2 0 ) P . . 检 6 1 . P NG 菌株 , 时 对 青 霉 素 、 同 四环 素 、 丙 沙 星 耐 药 的 菌 株 占 3 . % 。结 论 环 53
孢三嗪和大观霉素可作为治疗淋病的首选药物 。
关 键词 : 淋球菌 ; 最低抑菌 浓度 ; 耐药
代 1次 , 于脱脂 牛奶 ( 洗 江西 光 明英雄 乳业 股份 有 限 公 司) 于 一7 中, O℃冰箱 冻存备 用 。 1 2 淋球 菌标 准菌株 . 世界 卫生组 织 ( WHO) B E、 A、 、 J标 准 菌 株 , 其 中 A 菌株 为 P NG 阴性菌 株 , J株为 P N 阳性 P E、 P G
・1 4 ・ 3
亘堕堂堕堂堡
牟 第 4 卷第 1 A t Aa e i dc a i gi 09V l9 N 9 期 c cdma Meine a x 20 , o4 , o a e i Jn 1
2 0 -2 0 0 6 0 8年 南 昌地 区淋 球 菌 耐药 检 测 结果 分 析
为耐药 ; 丙沙 星 MI ≤0 0 / 环 C .6mg L为 敏感 ,. 2 0 1 ~
菌 株 , 球 菌 质 控 标 准 菌 株 ( TC 4 2 6 ; 准 菌 淋 A C 92 ) 标 株 由中国药 品生物 制 品检定 所提 供 。
淋病奈瑟菌耐药机制研究进展

淋病奈瑟菌为革兰阴性球菌,是淋病的病原 体。据WHO估计,全球每年新发病例超过6000 万,发展中国家发病率更呈明显上升的趋势。在我 国淋病的感染率居性传播疾病之首…。随着抗生 素的广泛使用,淋病奈瑟菌对抗生素的耐药率越来 越高,其机制主要由染色体和质粒的基因改变而引 起,按耐药性一般将淋病奈瑟菌分成以下几型:质 粒介导的产青霉素酶的淋病奈瑟菌(PPNG);质粒 介导的高度耐四环素淋病奈瑟菌(TRNG);PPNG/ TRNG质粒介导的对青霉素和四环素都耐药的淋病 奈瑟菌;CMRNG染色体介导的对青霉素和四环素 都耐药的淋病奈瑟菌;QRNG染色体介导的对喹诺 酮类耐药的淋病奈瑟菌。因此,研究对淋病奈瑟菌 的耐药机制,对指导临床用药,从而有效地控制淋 病的传播有着十分重要的意义。
B A
抗生素有不同的耐药率及耐药机制,对青霉素耐药
的主要机制是产生13一内酰胺酶;对四环素耐药的 主要机制是细胞膜对药物的通透性降低;对大环内 酯类、大观霉素耐药的主要机制是作用靶位的改 变;对氟喹诺酮类耐药的主要机制是gyrA及paxC 基因的突变;对第三代头孢菌素类敏感性降低或耐 药的机制尚未明确。 2.1青霉素青霉素属于13一内酰胺类抗生素,淋 病奈瑟菌对其已普遍、高度耐药,这种耐药主要表 现为质粒和染色体介导两种机制。 2.1.1质粒介导的耐药机制 质粒介导的耐药机
1.1.1
PBPs是一些位于细胞膜上的酶类,包括:
淋病奈瑟菌的耐药机制 system)起着重要作用。
肽聚糖转肽酶、葡萄糖转基酶、羧肽酶,对维持细菌 胞壁的稳定起着重要作用,同时也是B一内酰胺类 抗生素的主要靶位点,B一内酰胺类抗生素是通过 与淋病奈瑟菌细胞膜上PBPs结合,影响细胞壁的 合成来杀灭淋病奈瑟菌。在淋病奈瑟菌的耐药机 制中,已知ponA、PenA等基因是编码PBPs的基 因,当ponA及PenA基因突变时,可以使相应氨基
106株淋病奈瑟菌的耐药性分析

【 e od】 Nie a oohee R st c, uc ti y K y rs w e s i g r oa, e sne Ss p bi s r n ia e il t 【 uh rsa d es T eC nr f opt ,h t 10 1 C ia A to d rs】 h e t o si Sa o 5 5 3 , h e H l a n u n 淋病奈 瑟菌是淋病 的病原体 , 国 目 是我 前性传播 疾病中 发病率 最高 的一种 , 它可造 成不孕 、 不育 及新生 儿淋 病性 眼
r fr n e fr t ep e e t n a d t ame t f o o r e .M e h d T es s e t i t o5 a t it g n sw st s ee e c o h r v n i e t n n rh a o n r og to s h u c p i l y t i o i a e t a t bi n b cn e —
gnr oa ( R G)acutdfr 64 oor e T N h l cone . %.T epe a neo pol ai rs t c a 2 3 , hl nn f o2 h r l c f irf xcn— ei a ew s . % w i oeo ve c o s n 9 e
ac t w r 9 . % (7 16 ,adp n iiae—po ui ner e e 1 5 a e 9 /0 ) n e i lns c r c g—N i ei gnr oa ( P G)5 . % ( 1 d n es r oo hee P N s a 75 6/
淋病奈瑟菌耐药流行病学及机制研究进展

(硎G)和高水平耐四环索的淋病奈瑟菌(骶矾G)分别
占钙%和18。8%;对阿谢霉褰的耐药率为94。7%;对 氧氟沙星、洛美沙星和环丙沙墅的耐药率分别为 97。5%、95。0%程95。0%[61。 2耐药机制
project,GISP)2005年共收集了6199
2。l染色体介导淋病奈瑟菌耐药:染色体上的基因位 熹的突变孳l起戆游病奈瑟蕊在一定水平上对抗生索的 耐受理象被髂为染色嚣分导的耐蕊,一般必低拳乎耐 药,丽多位点突变可导致多重耐药。染色体介导的与 青霉素及岛四环素耐药相关的主要位点包括penA、 ponA、penB、penC、mtr及tet[引。研究发现,编码PBP2的
2.3.2
粒按其分子太小分海3释:◇39。5kb结会覆粒或传递
质粒,又称“亚洲糍”R质粒,它与耐药质粒在菌株间传
播有关;②7—7。4kb和5,5.3kb的耐药性质粒,具有 编码争痰酰胺酶纂透穗关鹃嚣霞子,叉稼“非溯鎏”嚣
质粒;③4.2kb的隐蔽质粒,几乎存在予所有淋瘸奈瑟 菌。耐隐蔽性质粒能整合予细菌染色体上(包括无质
疆j||羧学2009冬5月繁30卷(第5期)Sid,uumltendrilJⅫ'nd,2009,Vol。30。觞。5
・753・
淋病奈瑟菌耐药流行病学及机制研究进展
雒玉辉。综述;林昭春审校
(蹬jll翁人民医院疫默性病辨变麟,l莲tJll成都61(X)31>
i关键谲】辩痛;琳病奈瑟菌;流静病学;耐筠机制 【巾图分类号】R 759。2 【文献标识码】B
*
膏霉素结合蛋自2基因(pe畦)出现点突变,在对毒霉
素敏感的淋病奈瑟菌株的penA插入一个精氨酸序列
《泓),就会导致其编磁的青霉素结合凝自2(弼砣)
结构的改变,使PBp2与霄霉素的亲和力下降,细胞膜 对青霉素的渗透性降低,缨菌耐药承警升赢l豁。penC
临床淋病奈瑟氏菌为何会对内胺类药物耐药论文

临床研究淋病奈瑟氏菌为何会对内胺类药物耐药摘要:淋病奈瑟菌是淋病的病原体。
淋病是常见的性传播疾病之一,也是我国目前监测的8种主要性传播疾病中发病人数最多的一种。
通过对淋病奈瑟菌体外药物敏感性的监测,掌握其药物敏感谱变迁和发现其新的耐药菌株,对淋病的防治工作是十分重要的。
结论:說明在我國青霉素已不能作為治療淋病奈瑟氏菌的藥物。
说明在我国青霉素已不能作为治疗淋病奈瑟氏菌的药物。
关键词:淋病奈瑟氏菌;内胺类药物耐药;临床研究【中图分类号】r969【文献标识码】b【文章编号】1672-3783(2012)10-0056-01我们收集了158例淋病奈瑟菌,并对其耐药性进行分析如下。
1材料和方法1.1菌株来源:158株淋病奈瑟菌来源于本院妇产科与石河子二附院性病门诊送检的女性宫颈分泌物。
1.2细菌培养与菌种鉴定:淋病奈瑟菌选用生物-梅里埃生产的淋病奈瑟菌选择性培养基,烛缸35℃,孵育24~48小时。
菌种鉴定采用杭州天和微生物试剂有限公司生产的奈瑟菌属细菌生化微量鉴定管。
1.3药物敏感性:抗菌素纸片选用生物-梅里埃生产的青霉素、壮观霉素、头孢曲松、头孢噻肟、四环素、环丙沙星、氧氟沙星等7种。
药敏采用纸片扩散法,按美国nccls药敏纸片法规定的标准判定结果。
2结果淋病奈瑟菌对7种抗菌素药物敏感性监测显示,对壮观霉素敏感率最高达100%。
3讨论(1)β-内胺类药物治疗淋病奈瑟氏菌感染的传统药物是青霉素,其是通过与细菌内膜靶蛋白青霉素结合蛋白(penicillin bindi 淋病奈瑟氏菌proteins,pbps)结合,使转失活,破坏细菌细胞膜的完整性,使细菌死亡。
細菌對β-內胺類藥物的耐藥機制是:一是產生β-內胺:1975年首次報道產β-內胺淋球菌(pp淋病奈瑟氏菌),pp淋病奈瑟氏菌為淋病奈瑟氏菌獲得tem-1基因質粒所致,因其產生的β-內胺可以特異性的打開青霉素等藥物分子結構中的β-內胺環,使藥物完全失去抗菌活性,tem-1基因檢測陽性即可確定為pp淋病奈瑟氏菌菌。
某地区淋球菌流行株耐药性及质粒谱型研究

The Re e r h o t s a c n he Ant b otc Re i t nc nd Pl s i o ie f Ne s e i n r o a n a c ng i i i s s a e a a m d Pr f l s o o s r a Go or h e e i Li o he
初 瑞 雪 , 卫 东 孟
( 东 省 聊 城 市人 民 医 院 山
2 20 ) 5 0 0
摘 要 : 目的 检 测 该 地 区淋 病 奈 瑟 菌 ( ) 床 分 离株 的 耐 药 性 和 质 粒 谱 型 , 临床 合 理 用 药 和 连 续 监 测 NG 耐 药性 动 态 NG 临 为
改 变提 供 参 考 。 方 法 从 本 院 门诊 淋 病 患者 分 泌 物 中分 离 N 菌株 , 测 其 对 常 用 治 疗 药 物 的 最 小抑 菌 浓 度 、 否产 青 霉 素 酶 , G 检 是 提 取 并分 析 质 粒谱 型 。 结果 分 离获 得 5 2株 NG, 中产 青 霉 素 酶 1 其 7株 (2 6 ) 四 环 素 耐 药 1 3 .9 , 5株 (8 8 ) 环 丙 沙 星 耐 药 2.5 , 5 1株 ( 8 0 ) 大 观 霉 素 耐 药 1株 ( .2 ) 未 发 现 头孢 曲松 钠 耐 药株 ;5 (6 5 ) 出 4种 质 粒 , 质 粒 谱 型 。结 论 大 9. 8 , 1 9 , 4 株 8.4 检 6种
1 6 耐 药结 果 判 读 按 《 国 l 检 验 操 作 规 程 》 3版 ) 敏 . 全 临床 ( 药 试 验判断标准判读耐药结 果。
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对淋病奈瑟菌 的 最 小 抑 菌 浓 度 & ! 青霉素的最 S V U$ 终浓度为 "+ * " %!0 M Z# 将 移 液 器 吸 取 ’ ") Z分 8 别接种于含不同浓 度 青 霉 素 的 培 养 基 中 ! 接种量为 *点 ’ 在含 ’, U ( " &U a ^ = % # Y 培养 ! & ! 培养箱中 ! 以无菌落形成时抗菌药物的最高稀 1 后观察结果 ! 释度为 S 按美国临床实验室标准化委员会 & V U! [ U P
摘要 !目的 ! 研究南昌地区淋病奈瑟菌质粒谱型的分布情况 % 方法 ! " 采 用 碱 裂 解 法 提 取 淋 病 奈 瑟 菌 质 粒& " 采 (# !# 用琼脂糖电泳法测定质粒分子量大小 $ 并对菌株的青霉素耐药现象与 &+ ’S F质 粒 的 关 系 进 行 分 析%结 果! ! ( 0株 淋 病奈瑟菌中有 ! 质粒总检出率为 ) 质粒谱共分 * 型 $ 以 &+ " # 株菌携带质粒 $ &+ ’ ", & ’S F f!+ #S F和! &+ ’S F f 分别占 % 未检出 %+ 南昌地区淋病奈瑟菌质粒谱 &+ ’S F f!+ #S F 为主 $ "+ * %, 及 ! &+ * *, $ !S F 的 ; 质粒 % 结论 ! 型的分析对该地区淋病的防治有重要意义 & &+ ’S F 质粒与青霉素耐药密切相关 % 关键词 !淋病奈瑟菌 &药物敏感性 &质粒谱 " # 中图分类号 ! ; * ’& ; % *!!! 文献标识码 ! 9!!! 文章编号 ! ( " " )$0 ( ) & ! " " # " *$" " ( !$" !
&) 健铭报 道 ( 杭州市质粒谱以! &+ ’S Ff&+ ’S Ff
均由标准菌株质控 #
G! 结果
GM L! 淋病奈瑟菌质粒谱型 质粒 ! ( 0株 淋 病 奈 瑟 菌 中 有 ! " # 株 携 带 质 粒! 总检出率为 ) 共检出 & 种 分 子 量 的 质 粒 ! 分 &+ ’ ", ! 别为 !+ " " ! 其中 #S F &+ ’S F ! &+ ’S F及! ’+ !S F &+ ’S F质 粒 携 带 率 最 高 为 * )+ 0 !, ! !+ #S F耐药 性质粒携带 率 为 * 以 "+ ( 0, # 质 粒 谱 型 共 有 * 种 ! &+ ’S F f!+ #S F和! &+ ’S Ff&+ ’S Ff!+ #S F 为主 ! 分别占 % 见表 (" 图 (# "+ * %, 及 ! &+ * *, !
表G $ GM G! 青霉素耐药现象与 OM P4 1 质粒的关系 &
表 !! 青霉素耐药性与 OM $ P4 1 质粒关系 & )aL J O
质粒 & $ S F &+ ’ &+ ’f!+ # ! &+ ’f&+ ’ ! &+ ’f&+ ’f!+ # 敏感 & 菌株数 $ 中介 & 菌株数 $ 耐药 & 菌株数 $ ( " " " " % " ! ( " # & & ! ’ !
%) $( 标准 判 断 其 对 青 霉 素 的 敏 感 性 ! 每批试验 U Z -
N! 讨论
淋病是我国及全世界发病率最高的性传播疾病 之一 # 对淋病奈瑟菌质粒的研究始于 ! " 世纪 * "年 代 #( ) * % 年美国的 X K I 5 B H 5首次从(例淋病患者 8 身上 检 测 到 !+ 以后陆续检测 #S F 的 隐 蔽 性 质 粒! 到耐青霉素质粒 & 亚洲型 &+ " 非 洲 型 %+ &!&+ *S F ! $ " 高度耐四环素质粒 & $ 和接合性 &S F ! ’+ !S F !%+ 质粒 & $ # ! &+ ’S F 本实验 & 对! ! " " &!! " " ’ 年$ ( 0株淋病奈瑟菌 质粒进行检测 ! 有! 质粒总检出率 " # 株菌携带质粒 ! 为) &+ ’ ", # 检 出 携 带 &+ ’S F质粒的( * &株淋病 奈瑟 菌 中 有 ( 对 青 霉 素 耐 药! 表明 # 0株& ) #+ ’ ’, $ # &+ ’S F质 粒 与 青 霉 素 耐 药 密 切 相 关 & " ""+ " ’$ 同时 ! 并非所有含 &+ ’ S F 质粒的菌株均对青 霉素耐 药! 其原因可能与质粒的小部分基因缺失有关 # 淋病奈瑟菌的质粒谱存在明显的地区差异 # 朱
6 / ( 1 %/ $ "7 2 0 8 * & 17 , U & 2 " 8UB " & 8 8 " , & 0_ % , , $ " 0 " ) 8 2 0 / " 1 E& %B 0 % # $ 0 % ( , & % H H O H H P !G <V <G
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者脓性分泌物中分离所得 ! 经革兰染色 " 糖发酵及氧 化酶试验鉴定后置于 $* " Y 冰箱冻存备用 # $ 由中国药品生物制 ! ! 淋病奈瑟 菌 标 准 菌 株 % 品检定所提供 # $ % \ U 基础培养基& = R E B F ! 培 养 基 及 青 霉 素% 公司 $ 加入 ( 青 霉 素 为 美 国 9M ", 新 鲜 羊 血 ’ H 6 4 @ E 公司生产的标准品 #
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