小鼠骨髓的综合性实验报告
实验五小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞的采集与处理
小鼠麻醉
将小鼠麻醉，并固定在 操作台上。
暴露骨髓
用消毒手术刀切开小鼠 的腿骨，暴露骨髓腔。
采集骨髓细胞
用注射器吸取生理盐水， 冲洗骨髓腔，收集骨髓
细胞。
细胞处理
将采集的骨髓细胞进行 洗涤、离心、分离等处 理，得到所需的细胞样
本。
骨髓细胞的培养与观察
细胞培养
将处理后的骨髓细胞接种在细胞 培养皿中，加入适量的细胞培养 基，在适宜的温度和湿度条件下 进行培养。
率之间存在正相关关系。
本实验为进一步研究致突变物的 致突变作用提供了有力证据，有 助于深入了解致突变物的致癌机
制。
对实验结果的理解与讨论
本实验结果表明，致突变物能够诱导小 鼠骨髓细胞微核的形成，这可能是致突 变物导致基因突变和细胞恶性转化的重 要机制之一。
实验结果还提示，致突变物的致突变作用可 能与其在体内的代谢活化有关，因此需要进 一步研究致突变物的代谢活化过程及其与微 核形成之间的关系。
实验五小鼠骨髓细胞 微核试验
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 • 结论与讨论
01 实验目的
了解微核试验的原理
微核试验是一种用于检测染色体畸变和DNA损伤的细胞遗传 学方法。它通过观察细胞中微核（微小的细胞核）的数量， 来评估细胞受到的遗传损伤程度。
染色体结构畸变
分析实验组和对照组的染色体结构畸变类型，如断裂、倒位、重 复等。
染色体数目畸变
观察染色体数目畸变情况，包括非整倍体、多倍体等。
畸变类型与实验条件关系
探讨不同实验条件下染色体畸变类型的差异及其与实验条件的关系。
实验结果与预期结果的比较
小鼠骨髓细胞微核试验
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4.3 固定
将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，甲醇 溶液固定15分钟，取出，晾干。不能及时 染色的涂片也应固定好保存。
4.4 染色
将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的 Giemsa (Giemsa储备液1份+pH6.8的磷酸盐 缓冲液9份) 染色10~15分钟，冲洗，晾干。
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MN NCE
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红细胞
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电镜
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单个微核
多个微核
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Hale Waihona Puke 16医学ppt17
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3 器材与试剂
3.1 器材 解剖器械，生物显微镜，载玻片 等。
3.2 试剂 甲醇（分析纯）、甘油（分析 纯）、小牛血清、生理盐水、Giemsa 储备 液、 pH 6.8磷酸盐缓冲液
3.3 阳性对照物 环磷酰胺
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4 操作步骤
4.1 试验动物及处理
动物选择 小鼠是微核试验的常规动物，通常用7～12
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4.5 观察计数
低倍镜下观察，选择细胞完整、分散均匀， 着色适当的区域，再在油镜下观察计数。
多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞 （NCE）呈橘黄色。典型的微核多为单个、 圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致， 呈紫红色或蓝紫色 。
计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计 数200个细胞中PCE与NCE的比值。
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化学致突变物
染色体
作用于纺锤丝
无着丝点,片或环
整条染色体 带着丝粒的环和断片
形成微核
小鼠骨髓的综合性实验报告
5、掌握对实验动物进行药物处理的一般程序；
6、掌握进行实验设计的一般程序和规则，并锻炼实践能力。
二、实验原理、实验流程或装置示意图
1、骨髓细胞具有高度的分裂增殖能力。因此可以直接得到中期细胞而不必象血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养。经秋水仙素处理后，分裂增殖中的骨髓细胞由于纺缍体的形成受到抑制，染色体不能正常趋向两极而使之停留于中期，同时染色体缩短，轮廓清晰，把收获的细胞进行低渗，固定处理，使细胞处于膨胀状态，再将细胞悬液滴在载片上，使细胞破裂，染色体散开，染色后即可观察到染色体。
四、实验方法步骤及注意事项
一、小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
1、处理：用1.5mg/kg秋水仙素腹腔注射处理小鼠（注射量为0.1ml/10g体重）。即用以上配制的秋水仙溶液按每10g体重注射0.1ml。注射后24小时，可以取骨
2、处死：断颈法处死小鼠。剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。去股骨的髋面，将吸有2.2%柠檬酸三钠溶液的小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓细胞，反复吹打直至股骨呈白色，制成细胞悬液。
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氯化汞
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实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小鼠骨髓的综合性实验报告
小鼠骨髓的综合性实验报告本科学生综合性实验报告学号姓名学院专业、班级实验课程名称:教师及职称开课学期至学年学期填报时间年月日云南师范大学教务处编印一( 实验设计方案实验名称实验序号实验室实验时间一、实验目的1、学习并掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法。
2、观察小鼠染色体的形态特征,统计细胞的染色体数目。
3、了解微核发生的机制;4、掌握微核实验的一般程序和实践意义;5、掌握对实验动物进行药物处理的一般程序;6、掌握进行实验设计的一般程序和规则，并锻炼实践能力。
二、实验原理、实验流程或装置示意图1、骨髓细胞具有高度的分裂增殖能力。
因此可以直接得到中期细胞而不必象血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养。
经秋水仙素处理后，分裂增殖中的骨髓细胞由于纺缍体的形成受到抑制，染色体不能正常趋向两极而使之停留于中期，同时染色体缩短，轮廓清晰，把收获的细胞进行低渗，固定处理，使细胞处于膨胀状态，再将细胞悬液滴在载片上，使细胞破裂，染色体散开，染色后即可观察到染色体。
2、微核(Micronucleus):染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。
末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。
凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。
各种类型的骨髓细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。
嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，因胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡桔红色。
骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群。
三、实验设备及材料1、材料:小白鼠(2n=40)2、器具:注射器(1ml，5ml各一支)、托盘、解剖剪、镊子、吸管、离心管、离心机、载片、滤纸、白纱布小块等。
小鼠骨髓染色体实验报告
实验课名称遗传学实验实验名称小鼠骨髓细胞染色体的制备与观察成绩________________姓名王大锤实验报告系列年级学号组别时间温度实验原理及目的实验目的1、学习小鼠骨髓细胞染色体制片程序；2、掌握空气干燥法制片方法；3、观察了解小鼠的端着丝粒染色体的形态。
实验原理1、染色体标本制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是其它技术（如显带、原位杂交等）的先决条件。
2、骨髓细胞染色体染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
动物染色体制备最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
在骨髓细胞中，有丝分裂的指数很高，可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞或其它组织需要经过体外培养。
3、空气干燥法指细胞经过秋水仙素处理、低渗处理、充分固定和滴片等步骤之后，使载片在空气中自然干燥的方法。
实验材料、仪器及试齐U仪器：光学显微镜，2mL注射器，5号针头，10mL刻度离心管，吸管，试管，试管架，载玻片，盖片，离心机，光学显微镜，解剖器具（解剖盘，剪子、镊子）。
材料：小白鼠（Mus musculus 2n=40 ）,体重约18-20g （65-90日龄），雌雄皆可。
试剂及其他：秋水仙素溶液（100卩g/mL）, 2%柠檬酸钠溶液，0.075M KCl，冰醋酸，甲醇，Giemsa原液, 0.01 M 磷酸缓冲液（PBS, pH 7.4）1•预处理生命与环境科学学院实验报告进行秋水仙素处理。
取骨髓前3-4h给小鼠经腹腔注入秋水仙素（100卩g/ mL）0.3-0.4mL。
2. 取骨髓处死动物，立即取后肢骨。
用剪刀剪掉、清除腿部的皮肤和肌肉，然后从股骨两端关节头处剪下股骨，立即用2%柠檬酸钠溶液冲洗干净。
剪掉股骨两端膨大的关节头，使其露出骨髓腔，用吸有适当量的柠檬酸钠溶液注射器，从一端插入注射针头，将骨髓吹入10mL刻度离心管中，可反复吹洗数次，直至股骨变白为止。
3.小鼠骨髓细胞微核试验
Giemsa染色时网织红细胞呈蓝灰色，称为多染红细胞；而成熟红细 胞染色呈橘红色，称为正染红细胞。
三.实验步骤 1.染毒：昆明种小鼠，环磷酰胺100mg/kg腹腔注射。 2.骨髓液制备和涂片：颈椎脱臼处死动物。解剖后取胸骨或股骨， 去除肌肉，剪去骨骺，将骨髓挤出或冲洗出，滴于载玻片推片。 3.固定：晾干后甲醇固定15秒，取出晾干。 4.染色：晾干后以新鲜配制的Giemsa染液染色5-10分钟，自来水冲 洗，晾干。 5.观察计数：低倍镜选择分布均匀、染色较好的区域，油镜下观察 计数。含有微核的PCE/1000个PCE；PCE/NCE。
实验三 小鼠骨髓多染红细胞微核试验
重庆医科大学实验教学管理中心 公共卫生实验原理 3.掌握镜下辨认微核的技术
二.实验原理： 细胞分裂过程中在染色体断裂剂或纺锤体毒物作用下，细胞染色体 断裂产生不含着丝粒的断片，或者整条染色体遗失在细胞质中，形 成微核。 染色与主核一致，大小相当于细胞直径的1/20-1/5，圆形或椭圆 形，一个或多个。 在多种细胞中出现。 在红细胞成熟前组后一次分裂后数小时主核排除而微核保留。
红细胞发育过程： 骨髓多能干细胞→定向干细胞→原红细胞→早幼红细胞→中幼红细 胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞 从原红细胞到晚幼红细胞需分裂3-4次。形成晚幼红细胞后即不再 分裂，在发育过程中主核排出形成网织红细胞。网织红细胞含有少 量RNA，甲酚蓝染色成蓝色丝网状。网织红细胞进一步发育，RNA消 失成为成熟红细胞。
四.结果分析与评价 1.PCE/NCE比值约为1（0.6-1.2）。比值小于0.1表明PCE生成严重 受抑制，染毒剂量过大。 2.用统计方法分析结果。 五.实验成功的关键 1.制作良好的骨髓涂片 2.优质的染色
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小鼠骨髓的综合性实验报告
YUNNAN NORMAL UN I VER SITY
本科学生综合性实验报告
学号姓名
学院专业、班级
实验课程名称：
教师及职称
开课学期至学年学期
填报时间年月曰
云南师范大学教务处编印
一（实验设计方案
实验名称实验序号
实验室实验时间
一、实验目的
1、学习并掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法。
2、观察小鼠染色体的形态特征，统计细胞的染色体数目。
3、了解微核发生的机制；
4、掌握微核实验的一般程序和实践意义；
5、掌握对实验动物进行药物处理的一般程序；
6掌握进行实验设计的一般程序和规则，并锻炼实践能力
二、实验原理、实验流程或装置示意图
1、骨髓细胞具有高度的分裂增殖能力。
因此可以直接得到中期细胞而不必象
血淋巴细胞或组织那样要经过体外培养。
经秋水仙素处理后，分裂增殖中的骨髓细胞由于纺缍体的形成受到抑制，染色体不能正常趋向两极而使之停留于中期，同时染色体缩短，轮廓清晰，把收获的细胞进行低渗，固定处理，使细胞处于膨胀状态，再将细胞悬液滴在载片上，使细胞破裂，染色体散开，染色后即可观察到染色体。
2、微核（Micronucleus）: 染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。
末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。
凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。
各种类型的骨髓细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。
嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，因胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡桔红色。
骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群。
三、实验设备及材料
1、材料：小白鼠（2n=40）
2、器具: 注射器（ 1 ml ，5ml 各一支）、托盘、解剖剪、镊子、吸管、离心管、离心机、载片、滤纸、白纱布小块等。
3、药品： 0.15mg/ml 秋水仙素，1%柠檬酸三钠，固定液（3份甲醇，1份冰乙酸，临用时现配），Giemsa染液，2.2%柠檬酸钠，0.01M磷酸缓冲液（PBS）
pH6.8。
4、生物显微镜、解剖剪、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、塑料吸瓶、吸水纸等。
四、实验方法步骤及注意事项
、小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
1、处理：用1.5mg/kg秋水仙素腹腔注射处理小鼠（注射量为0.1ml/10g体重）。
即用以上配制的秋水仙溶液按每10g体重注射0.1ml。
注射后24小时，可以取骨
2、处死：断颈法处死小鼠。
剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪
去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。
去股骨的髋面，将吸有 2.2%柠檬酸三钠溶液的小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓细胞，反复吹打直至股骨呈白色，制成细胞悬液。
3、低渗：将细胞悬液在1000rpm/min离心5min,弃除上清液，留0.5ml摇匀。
向细胞液中再加入1%的柠檬酸三钠溶液5ml 用吸管轻吹打均匀，在室温低渗
30min。
低渗期间，配制固定液，即甲醇：冰醋酸为3:1（v/v），置4 ?冰箱中备用。
4、预固定（1次）：低渗处理后的细胞悬液离心5分钟，留1ml原液，摇匀。
加入新配制的固定液至6ml，吹打均匀，固定5分钟，再在1000rpm/min离心3-5min，去掉上清液。
5、固定（2次）：沿离心管壁慢慢加入新配制的固定液6ml，用吸管轻轻吹打均匀，室温下固定5min，1000rpm/min 3min ，弃去上清; 如此
反复固定两次（共固定3次）。
6、根据管底细胞量的多少，加入新配制的固定液0.3~ 0.8ml ，用吸管打均匀，
使其形成细胞悬液。
7、滴片：将预冷的载玻片（0?冰浴），水平或倾斜45? 角放置，用吸管吸取细胞悬液，从约0.5 -1m 高处滴1~2滴到片子上，用口将其吹干，静置使其干燥。
8. 染色：将干燥的玻片放入2ml吉姆萨原液加入40ml磷酸缓冲液（pH6.8）配成的染液中染色20min,用磷酸缓冲液（pH6.8）冲洗，晾干后镜检。
二、微核试验方法：
1、骨髓的制取：断颈法处死小鼠。
用剪刀剪开腿部的皮肤，用镊子夹住小鼠的股骨，剪去股骨周围的肌肉，将小鼠的两股骨取出，擦净股骨上的肌肉。
去股骨的髋面，将吸有0.85% Nacl 生理等渗液小注射器的针头插入，反复几次吹出骨髓细胞。
反复吹打使其混合均匀，制成细胞悬液。
将细胞悬液在1000转/分离心 5 分钟，弃除上清液。
2、涂片:在离心管中加入少量的小牛血清（约0.3ml）混匀后，按血常规涂片法涂片，长度约2cm ~3cm （涂片时一次涂成）。
在空气中晾干。
3、固定：将干燥的涂片放入甲醇液中固定5min。
即使当日不染色，也应固定后保存。
4、染色：将固定过的涂片放入Giemsa应用液中，染色20min ~30min，然后立即用0.1mol/L 磷酸盐缓冲液冲洗。
5、封片：用滤纸及时擦干染片背面的水滴，再用双层滤纸轻轻按压染片，以吸附染片上残留的水分，再在空气中晃动数次，以促其尽快晾干，然后放入二甲苯中透明5min,取出滴上适量光学树脂胶，盖上盖玻片，写好标签。
每只动物计数1000 个嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，微核率以千分率表示。
数据处理:利用统计学软件SPSS勺单因素方差分析或t检验等方法，进行数据处理，分析实验结果（如后表）。
五、实验数据处理方法
微核试验数据统计总表1:
受试物剂量组各受试小鼠1000个受检细胞中含微核细胞数
别 mg/Kg 1 2 3 4 5 6 7 8 对苯二酚 120 1 38 33 35 37 34 35 36 30
80 2 28 31 30 32 29 28 33 27
40 3 20 25 21 23 28 26 24 22
1.5 2 29 25 23 26 24 27 25 24 氯化汞 3 1 22 25 20 26 21 23 22 18 阴性对照 3 2
1 4 3 5 3 9 蒸馏水
阳性对照 40mg/kg 38 44 45 40 36 41 43 39 环磷
酰胺 体重 表2 对苯二酚对动物骨髓嗜多染红细胞微核发生率
组 别 剂量 动物数 受检细胞数 含微核细胞数 微核率 P 值
（g/kg 体重）（只）（个）（个）（％。
）受试物120 8 8000
80 8 8000 对苯二
酚 40 8 8000
溶剂对照（蒸馏水） 8 8000
阳性物对照 环磷酰胺 （mg/kg 体重） 40
6（ 参考文献
[1] 孟紫强，阮爱东，桑楠等.SO2污染对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的诱发作 用 . 环境科学， 2002， 23（4）123-125.
[2] 孟紫强，桑楠，张波等 . 二氧化硫体内衍生物诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微 核的效应环境科学学 . 报， 2000， 20（2）239-243.
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[4] 周晓蓉，李百祥，邱向红等 . 小鼠骨髓及肝血中嗜多染红细胞微核率的比较 秋水仙素 3 1 36 33 32 34 35 31 31 37
1 3 24 21 23 20 19 25 2
2 19
2 2 16 22 21 19 20 18 17 15 1
3 13 17 15 16 1
4 1
5 17 13
卫. 生毒理学杂志，1999，13（1）66-67.
[5] 曹佳.微核实验在中国的应用、发展与展望. 遗传，2003，25(1)73-76.
二(实验报告
1( 实验现象与结果
2( 对实验现象、实验结果的分析及其结论
3( 实验总结教师评语及评分: 签名: 年月日。