富血小板纤维蛋白(PRF)诱导骨髓间质干细胞分化成骨细胞的实验
通讯作者：王稚英，Email：weisiwei703@hotmail．com。
收稿日期：2011－12－16·短篇论著·富血小板纤维蛋白（PRF）诱导骨髓间质干细胞分化成骨细胞的实验研究魏思维1，王稚英2（辽宁医学院附属第二医院口腔颌面外科，辽宁锦州121000）摘要：目的研究富血小板纤维蛋白在诱导骨髓间质干细胞向成骨细胞转化的作用。
方法取7天新西兰大白兔股骨，分离骨髓间质干细胞进行体外培养，在各自的培养条件下分为三组：实验组（不同剂量的PRF 组）、空白对照组（MSCS组）和阳性对照组（BMP－2组）。
三组细胞的比较采用MTT测定细胞增值率、PNPP法测定碱性磷酸酶的表达、免疫组化标记Ⅰ型胶原蛋白的表达、检测细胞为成骨细胞。
结果细胞形态学观察，MSCS分化后，细胞形态从长梭形变成三角形，多角形，立方形；MTT测定细胞增殖显示，随着PRF膜剂量的增加，细胞增殖数量增加，PRF剂量为4，5mL时，与BMP－2组差别不大；ALP活性结果显示，MSCS分化后，ALP 活性远高于MSCS细胞。
两者差异具有显著统计学意义（t=24．608，p=0．000）；免疫组化标记Ⅰ型胶原结果显示，PRF组分化后的MSCSⅠ型胶原表达显著。
结论富血小板纤维蛋白可以诱导骨髓间质干细胞分化为成骨细胞，分化的类成骨细胞具有成骨细胞的特性，可以作为自体材料应用于口腔种植学领域里骨缺的修复。
关键词：富血小板纤维蛋白（PRF）；骨髓间质干细胞；分化；成骨细胞中图分类号：R331．143文献标识码：BThe study of the function of PRF in the processof inducing MSCs into osteoblastsWEI Si－wei，WANG Zhi－ying（The Second Affiliated Hospital，Liaoning Medical College，Jinzhou，Liaoning121000，P．R．China）Abstract：【Objective】to study the function of PRF in the process of inducing MSCs into osteoblasts．【Meth-ods】isolate MSCs from the femur of7－day－old rabbits and divided into3groups．Experimental group（different does of PRF），control group（MSCs）and positive control group（BMP－2）．Use MTT assay to calcuLate cell prolif-eration rates of each group，use PNPP assay to measure expression of alkaline phosphatase（ALP），and use IHC to de-tect collagen one．【Results】morphological observation shows cells shape change from long spindle into triangle，quad-rangle and polygon after MSCs differentiation．MTT shows cell proliferates as PRF does increases．ALP expression of differentiated MSCs is higher than MSCs（t=24．608，p=0．000）．IHC shows collagen one express significantly in ex-perimental group．【Conclusion】PRF promotes the process of inducing MSCs into osteoblasts．It can be used as autog-enous material in bone repairmen of oral implantology．Key words：platelet－rich fibrin，PRF；mesenchymal stem cell，MSCS；trans－differentiation；osteoblast cells种植领域里常见的临床难题是骨缺损，骨组织工程技术的发展为骨缺损提供了新的途径，骨髓间质干细胞被认为是骨组织工程理想的种子细胞，它可在体外大量扩增并保持成骨潜能。
由于目前用于骨组织工程的大多数材料在生物活性和机械性能等方面不能满足临床要求，模拟天然骨的成分和结构，寻找新的组织修复材料随即成为口腔种植学领域里的热点。
富血小板纤维蛋白为自体全血离心的产物，是一种自体移植物，全血经低速离心的过程中促发凝血，血液中的纤维蛋白原缓慢聚合成纤维蛋白，结构为三分子网状结构。
由于这种网状结构与人类天然的组织结构非常相似，又具有诱导细胞迁移和细胞增殖，从而加速愈合过程的功能。
骨移植手术的初期，移植物内的细胞成分依靠进入的营养物质而存活。
PRF的纤维蛋白立体网状结构，使得营养成分及氧气轻松弥散至细胞周围，促进骨髓间质干细胞分化为成骨细胞，沉积骨质，加速成骨的形成。
本文是在细胞水平上研究骨髓间质干细胞分化为成骨细胞这一过程中PRF膜的作用，指导PRF膜在整形外科及口腔种植等多领域里的应用。
1材料与方法1．1材料1．1．1实验动物新生（7天）新西兰大白兔两只，雌雄不限。
1．1．2实验仪器及试剂培养皿、离心管、DMEM培养基、青－链霉素溶液、胰蛋白酶、胎牛血清、I型胶原酶、小鼠抗兔I型胶原蛋白单克隆抗体、山羊抗小鼠IgG多克隆抗体、DAB 显色剂、倒置显微镜、离心机、二氧化碳培养箱，10mL离心采血管等。
1．2方法1．2．1兔BMSCs的分离培养1．2．1．1原代细胞的分离培养将出生7天的新西兰大白兔脱颈处死，75%乙醇浸泡10min，在无菌操作下取双侧股骨和胫骨，去除肌肉，骨膜，剪去股骺，用注射器抽取完全培养基（含13%胎牛血清的DMEM）冲出骨髓，反复吹打均匀制成单细胞悬液，200目筛网过滤，分装于2个25mL的培养瓶中，置于37ħ、5%CO2及饱和湿度条件下静置培养4d，第5天初换液，可以看到细胞贴壁生长，呈梭形，经测定为骨髓间质干细胞。
1．2．1．2细胞的传代扩增与培养原代细胞培养，贴壁瓶底约80%－90%，（约为细胞培养的10 14d）用0．25%胰蛋白酶含（0．01%EDTA）2－3mL消化。
镜下观察，待细胞趋向收缩时，吸去胰蛋白酶，加入10%FBS的DMEM培养基终止消化，然后加入13%FBS的DMEM培养基轻轻吹打，使细胞脱壁，检测并调整细胞密度，按l：2传代培养。
传代后培养瓶放回培养箱静置过夜，观察贴壁情况。
以后各代细胞生长至贴壁80－90%时，以上述方法，按1：2传代培养。
用倒置相差显微镜观察各代细胞形态变化和生长状况。
1．2．1．3PRF膜的制取取五只健康成年新西兰大白兔，抽取耳缘静脉血，分置于5个真空离心采血管中，2400转/分，低速离心10min，静止5min。
即可得到PRF膜。
采血容量分别为10ˑ3、20ˑ3、30ˑ3、40ˑ3、50ˑ3（mL），根据10mL静脉血离心1mLPRF膜计算，实验用PRF膜剂量分别为1、2、3、4、5mL。
1．2．1．4BMSCs的诱导分化将MSCS细胞按104/孔接种于4个六孔细胞培养板中，给予13%FBS的DMEM培养液培养24h更换培养液。
设无PRF组（MSCS组）、实验组（1mLPRF、2mLPRF、3mLPRF、4mLPRF、5mLPRF），阳性对照组（BMP－2终浓度为100ng）七种培养条件，每种培养条件各有三个孔。
我们将此培养基称为实验用培养基。
所有培养液每2天1次。
在第1、3、5天共三个时间段进行观察。
1．3检测指标1．3．1MTT取第三代对数生长期PRF膜上成长的骨髓基质干细胞，消化、计数，分别调整密度为5ˑ104/mL按照3：7的比例接种于3块96孔培养板，设置PRF的剂量为1、2、3、4、5mL的浓度组，以及单独的骨髓基质干细胞作为阴性对照组和以BMP－2（终浓度为100ng）为阳性对照组，每个浓度组及对照组分别设立3个复孔，每孔加满150uL，边缘24孔用PSB液填充。
置于37ħ，5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养过夜。
3块96孔板分别培养1d、3d、5d后，依次取出，于相应培养板的各小孔加人5mg/mL MTT液0．02mL，送5%CO2孵育箱内培养5h，取出培养板后吸取每孔内的培养液，仅留下极少量的残液，加人0．2mLDMSO（二甲基亚矾）振荡10min。
而后用MTT测定光密度，检测波长为492nm，参考波长为620nm。
表1不同组别OD值的比较分析组别OD F P 1mlPRF组0．069ʃ0．01689．5480．0002mlPRF组0．234ʃ0．1023mlPRF组0．300ʃ0．0604mlPRF组0．399ʃ0．0435mlPRF组0．433ʃ0．039表2不同组别OD值的比较分析组别OD F P 4mlPRF组0．399ʃ0．0433．3640．0425mlPRF组0．433ʃ0．039BMP－2组0．408ʃ0．041由SPSS软件进行统计处理得出结论，单独骨髓间质干细胞与BMP－2的浓度为0ng/mL的OD值，P＜0．05，有统计学意义。
PRF膜作用后的混合培养组，其OD值跟剂量有关，随着PRF剂量的增大，OD值增高，由此可见PRF膜与骨髓间质干细胞共同作用，成骨细胞分化过程上有协同促进作用。
1．3．2PNPP法测定细胞内ALP活性按上述方法培养细胞，以2．5ˑ105接种于96孔板，37ʎC培养24h后取出，加入不同浓度的PRF膜，分别在第1、3、5天进行ALP活性检测。
弃去上清液，磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution，PBS）冲洗3次，每孔加入0．1%TritonX－100，37ʎC作用30min，用BCA法测定蛋白浓度，加入0．2mol/L的NaOH 50μL，振荡均匀，酶标仪405nm波长检测吸光度值D450。
统计学分析ALP活性数据采用xʃs表示，两组之间比较采用配对设计t检验，采用SPSS16．0软件进行统计处理，以a=0．05为检验标准，P＜0．05差异具有统计学意义。
附图PRF诱导下的成骨细胞1．3．3免疫组化细胞检测实验各组细胞爬片经多聚甲醛固定20min后，SP法行Ⅰ型胶原蛋白免疫细胞化学染色。
血小板浓缩制品PRPRFCGF综述
血小板浓缩制品血小板作为一种多功能细胞,不仅在血栓形成和止血中发挥作用,而且在血管发生、组织修复和炎症过程中也扮演着重要的角色[1]。
血小板被激活后，可释放多种生物活性物质，在促进组织愈合方面起重要作用。
目前的血小板浓缩制品经过几代发展主要有以下几种：富血小板血浆（platelet rich plasma，PRP），富血小板纤维蛋白（platelet rich fibrin，PRF）,浓缩生长因子（CGF，Concentrate Growth Factors）。
一发展历史1984年，As s o i o n[2]等发现了人血浆中提取的富血小板血浆(platelet—rich plasma，PRP)中含有多种生长因子，当PRP与氯化钙以及牛凝血酶混合后，各种生长因子即从血小板中的α颗粒中释放出来。
但是牛凝血酶的使用往往伴随着凝血因子Ⅴ、Ⅺ抗体的形成，并且存在着威胁生命的凝血紊乱发生的可能性[3]。
作为第二代浓缩血小板，富血小板纤维蛋白（PRF）是由Choukroun。
PRF是富纤维蛋白凝胶，由患者静脉中抽取的新鲜血液制作而成，属于新一代的血小板浓缩物，它制备简单无需任何生物添加剂的处理。
在PRF通过离心分离的制备过程中，血小板被激活同时大量脱颗粒细胞中蕴含的重要的生长因子释放出来[4]。
浓缩生长因子(CGF)是Sacco首先研发的[5]，与PRF一样，CGF由静脉血分离制备而成。
不过，两项技术的离心速度有所不同。
与PRF不同，CGF技术采用的速度从2400到2700rpm不等，这是为了分离静脉血中的细胞，因此CGF中富含纤维蛋白凝块比PRF中的大得多，而且更粘稠，纤维蛋白的含量也更多。
二详细介绍1 PRPPRP 制取方法及组成结构PRP 最早由 Assoian 于 1984 年提取制备[2]，是自身静脉血经梯度离心分层后位于白细胞上方的富含血小板的血浆部分，含有全血中 70%以上的血小板，于其中加入凝结剂(常用 10%氯化钙和凝血酶)可形成胶状物，激活后血小板α颗粒释放出多种生长因子，如转化生长因子-β(TGF-β)、骨形成蛋白(BMPs)、血小板衍生生长因子(PDGF)、类胰岛素生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)等[6-8]。
间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程
间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学开发思路和流程干细胞是一种具有自我更新能力和多潜能分化的细胞，可以分化成为各种类型的细胞，包括脂肪细胞和骨细胞。
间充质干细胞（MSCs）是一种重要的干细胞类型，它们存在于各种组织中，如骨髓、脂肪组织和胎盘组织等。
间充质干细胞成脂成骨分化的实验方法学开发，是生物医学研究中一个重要的课题。
本文将从方法学开发的思路和流程入手，对间充质干细胞成脂成骨分化实验方法学进行探讨。
一、研究背景间充质干细胞成脂成骨分化是指间充质干细胞在一定的诱导条件下分化为脂肪细胞或骨细胞的过程，这一过程在细胞生物学和再生医学领域具有重要意义。
成脂成骨分化的研究有助于深入了解骨质疏松症、骨折愈合和脂肪代谢等疾病的发病机制，同时也为干细胞治疗提供了理论基础。
因此，开发一套可靠的实验方法学对于间充质干细胞成脂成骨分化研究至关重要。
1.确定分化诱导条件间充质干细胞在体外培养时，可通过添加不同的生长因子、细胞因子或药物来诱导其分化为脂肪细胞或骨细胞。
因此，确定最佳的分化诱导条件是方法学开发的第一步。
此过程需要考虑到诱导因子的种类、浓度、培养时间等因素，以及不同来源的间充质干细胞在分化过程中的差异性。
2.确定评价指标分化过程中，需要通过一系列的生物化学和分子生物学方法来评价间充质干细胞的脂肪细胞或骨细胞特征。
这些评价指标包括脂肪细胞的油红O染色、脂肪球形成实验，以及骨细胞的矿化实验、ALP染色等。
确定合适的评价指标对于评估分化效果至关重要。
3.确定实验方案在确定了分化诱导条件和评价指标后，需要制定详细的实验方案。
包括细胞的处理方法、诱导条件的优化、实验的时间节点等，以便后续实验的顺利进行。
1.间充质干细胞的提取和培养首先需要从适当的组织中分离和提取间充质干细胞，并进行细胞培养。
这一步需要注意细胞的纯度和活性，以保证后续实验的准确性。
2.分化诱导实验将培养好的间充质干细胞分别进行脂肪和骨分化诱导实验，根据预先确定的诱导条件进行处理。
血小板浓缩制品PRP PRF CGF 综述
血小板浓缩制品血小板作为一种多功能细胞,不仅在血栓形成和止血中发挥作用,而且在血管发生、组织修复和炎症过程中也扮演着重要的角色[1]。
血小板被激活后，可释放多种生物活性物质，在促进组织愈合方面起重要作用。
目前的血小板浓缩制品经过几代发展主要有以下几种：富血小板血浆（platelet rich plasma，PRP），富血小板纤维蛋白（platelet rich fibrin，PRF）,浓缩生长因子（CGF，Concentrate Growth Factors）。
一发展历史1984年，As s o i o n[2]等发现了人血浆中提取的富血小板血浆(platelet—rich plasma，PRP)中含有多种生长因子，当PRP与氯化钙以及牛凝血酶混合后，各种生长因子即从血小板中的α颗粒中释放出来。
但是牛凝血酶的使用往往伴随着凝血因子Ⅴ、Ⅺ抗体的形成，并且存在着威胁生命的凝血紊乱发生的可能性[3]。
作为第二代浓缩血小板，富血小板纤维蛋白（PRF）是由Choukroun。
PRF是富纤维蛋白凝胶，由患者静脉中抽取的新鲜血液制作而成，属于新一代的血小板浓缩物，它制备简单无需任何生物添加剂的处理。
在PRF通过离心分离的制备过程中，血小板被激活同时大量脱颗粒细胞中蕴含的重要的生长因子释放出来[4]。
浓缩生长因子(CGF)是Sacco首先研发的[5]，与PRF一样，CGF由静脉血分离制备而成。
不过，两项技术的离心速度有所不同。
与PRF不同，CGF技术采用的速度从2400到2700rpm不等，这是为了分离静脉血中的细胞，因此CGF 中富含纤维蛋白凝块比PRF中的大得多，而且更粘稠，纤维蛋白的含量也更多。
二详细介绍1 PRP1.1 PRP 制取方法及组成结构PRP 最早由Assoian 于1984 年提取制备[2]，是自身静脉血经梯度离心分层后位于白细胞上方的富含血小板的血浆部分，含有全血中70%以上的血小板，于其中加入凝结剂(常用10%氯化钙和凝血酶)可形成胶状物，激活后血小板α颗粒释放出多种生长因子，如转化生长因子-β(TGF-β)、骨形成蛋白(BMPs)、血小板衍生生长因子(PDGF)、类胰岛素生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)等[6-8]。
Choukroun's PRF对体外培养人脂肪干细胞增殖及成骨分化的影响
Choukroun's PRF对体外培养人脂肪干细胞增殖及成骨分化的影响作者：刘元媛柳大烈南华黄佳诚单磊来源：《中国美容医学》2013年第01期[摘要]目的：观察自体富血小板纤维蛋白Choukroun's PRF（Choukroun's platelet-rich fibrin）对体外培养人脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）增殖及成骨分化能力的影响。
方法：取吸脂术者自愿捐献的脂肪组织分离培养ADSCs，采用Choukroun法制备自体PRF备用，观察细胞生长情况。
取第3代ADSCs分别向骨细胞、脂肪细胞、神经球细胞定向诱导分化鉴定，并行细胞表面抗原CD29、CD45、CD90流式检测鉴定。
将第3代ADSCs 分别采用含PRF的普通培养基（PRF组Ⅰ）和不含PRF的普通培养基（对照组Ⅰ）进行培养，观察细胞生长情况，培养1天、3天、5天、7天后采用CCK-8试剂检测细胞增殖活性。
另外分别采用含PRF的成骨诱导培养基（PRF组Ⅱ）、不含PRF的成骨诱导培养基（对照组Ⅱ）及不含PRF的普通培养基（空白组）进行培养，第7天、14天、21天、28 天行碱性磷酸酶活性（ALP活性）检测；诱导细胞培养后第7天、14天天各组分别行von Kossa染色观察钙结节形成情况。
结果：第3代ADSCs倒置显微镜下观察大多呈梭形，向骨细胞、脂肪细胞、神经干细胞定向诱导鉴定均为阳性，流式检测鉴定CD29、CD90为阳性，CD45为阴性。
CCK-8法示PRF组Ⅰ的OD值均大于对照组Ⅰ，两组比较差异均有统计学意义（P[关键词]自体PRF；人脂肪来源干细胞（ADSCs）；增殖；成骨分化[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）01-0040-03The effect of Choukroun's PRF on the proliferation and osteogenetic differentiation of human adipose-derived stem cells in vitroLIU Yuan-yuan，LIU Da-lie，NAN Hua，HUANG Jia-cheng，SHAN Lei（Department of Plastic and Aesthetic，Zhujiang Hospita of Nanfang Medical University，Guangzhou 510282，Guangdong，China）Abstract： Objective To observe the effect of Choukroun's PRF （Choukroun's platelet-rich fibrin） on the proliferation and osteogenetic differentiation of human adipose-derived stem cells in vitro. Methods Human ADSCs （adipose-derived stem cells） were isolated from adipose tissue obtained from donor undergoing liposuction and were cultured，and autologous PRF was prepared by Choukroun method，and growth condition of ADSCs was observed.ADSCs at passage 3 were cultured in adipogenic，osteogenetic and neurospheres differentiation medium and underwent identification，flow cytometric analysis for cell surface antigen CD29，CD45 and CD90 wereperformed. ADSCs at passage 3 cultured by common culture medium containing PRF （PRFgroupⅠ）， and cultured by common culture medium without PRF （control groupⅠ）. Growth condition of the cells was observed by inverted microscope. CCK-8 method was used to observe cell proliferation activity 1，3，5，7 days after culture. Then ADSCs cultured by osteogenic induction culture medium containing PRF （PRF groupⅡ）， cultured by osteogenic induction culture medium without PRF （control groupⅡ） and cultured by common culture medium without PRF （blank group）.ALP activity detection was conducted 7，14，21 and 28 days after culture. Von Kossa staining was performed on the three groups 7 and 14 days after culture to detect the formation of calcium nodule. Results Most ADSCs at passage 3 were spindle-shaped under the inverted microscope. Adipogenic ， osteogenetic and neurospheres differentiation were positive， and flow cytometric analysis of CD29 and CD90 were positive，CD45 were negative. CCK-8 method revealed the Optical Density value of PRF groupⅠwere all greater than control groupⅠ，and there were significant diferences between two groups （PKey words：Autologous PRF； human adipose-derived stem cells； cell proliferation；osteogenetic differentiation国内外许多研究已经证明血小板浓缩物被激活后可释放出多种细胞生长因子，1984年，Assion从人血浆提取富血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP），大量研究表明PRP内富含血小板，血小板脱颗粒后，可以释放大量生长因子，可促进软硬组织愈合再生，已应用于整形美容和创伤外科等领域[1-2]。
富血小板血浆诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化的实验研究
ｃ ａｇｓａｄａ ａ ｎ ｈ ｓｈｔｓ ＡＬ ａｅ ｃｉ ｔ ｗ ｒ ｄ ｔ ｔ ｙｉ ｍ ｎｈｓ ｃ ｅ ｃｌ ｔ ｎｎ ； ｒ ａｉ ｈｎ ｅ ｎ ｌ ｌ ｅｐ ｏｐ ａ ｅ（ Ｐ ｓ）ａｔ ｉ ｅｅ ｅｅ ｅ ｂ ｕ ｏ ｉｏｈｍｉ ａ ｉｇｆ ｍ ｔ ｎ ｋｉ ａ ｖｙ ｃｄ ｍ ｔ ａｓｉ ｏ ｏ
ｔｄ ａ ｄ ｃ ｌｕ ｅ ｎｔ ｈ ｈ ｒ ａ ｓ ｇ ｔ ｎ ｔｅ ｒ ｓｉ ｎ ｄ ｉ ｔ ｗｏ ｇ ｏ ｐｓ ｈ ｏ ｔｏ ｒ ｕ ｒ ｒ ａｅ ｅ ｎ ｕ ｔ ｒ ｄ ｉ ｏ ｔｅ ｔ ｉｄ ｐ ｓ ａ ｅ，ｈｅ ｈ ｙ ｗｅ ｅ ａ ｓｇ ｅ ｎ ｏ ｔ ｒ ｕ ：ｔ ｅ ｃ ｎ ｌｌｇｏ ｐ ｗｅ ｅ ｔｅ ｔｄ ’
成 宁学 院学报 （ 医学 版 ）０ ０年第 ２ ２１ ４卷第 ６ ［ｏｒ ｌｆ ｉ ｎ ｇＵｉ ￣ ｙＭ ｄ ａ Ｓｉ ｃｓ ］ Ｊ ｎ ａ ｉ ｎ ｍ ｉ（ ｅｉ ｌｃ ｎｅ） ｕ ａｏ Ｘ ｎ ｎ ｖ ｔ ｃ ， ｅ
４１ ６
富 血 小 板 血 浆 诱 导 脂 肪 干 细 胞 向 成 骨 细 胞 分 化 的 实 验 研 究
ｉ ｎａ ｒ ｕ ｒ ｉ ｅ ０ｍ ｌ ｍｅ ｔｌｇ ｏ ｐ ｗｅ ｅ ｇｖ ｎ １ ／Ｌ ＲＰ ｉ ｄ ｉ ｏ ｏ ａ ｌｔ ｅ ｔｅ ｔ ｅ ｎ ｔｅ ｃ ｎｒ ｌｇ ｏ ｐ． Ｃｅｌｍｏ ｐ ｏ ｏ ｉａ Ｐ ｎ ａ ｄ ｔ ｎ ｔ ｌ ｈ ｒ ａｍ ｎｔｉ ｈ ｏ ｔｏ ｒ ｕ ｉ ｌ ｒ ｈ ｌｇ ｃ ｌ
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富血小板血浆（PRP）治疗膝骨性关节炎的研究进展
富血小板血浆（PRP）治疗膝骨性关节炎的研究进展发布时间：2021-05-12T12:54:25.127Z 来源：《医师在线》2021年7期作者：祝丰成1 庞佳宁2 王云华3 李海欣4付乐良5 吴志雄[导读] 膝骨性关节炎(Knee osteoarthritis，KOA)是老年人群中的临床常见病之一，祝丰成1 庞佳宁2 王云华3 李海欣4付乐良5 吴志雄★昆明市第二人民医院骨科云南昆明 650204【摘要】膝骨性关节炎(Knee osteoarthritis，KOA)是老年人群中的临床常见病之一，传统保守治疗方法虽然比较多样化，但多数只能起到缓解病人的疼痛的目的，并不能延缓KOA病情的进展，最终常需行膝关节置换手术。
富血小板血浆（platelet-rich plasma, PRP）是外周血经两次离心后提取的血小板浓缩物，众多研究表明，关节腔内注射PRP可有效改善KOA病人的临床症状，但是其应用尚不够广泛，治疗方法也缺乏规范性，治疗效果存在差异及争议，尚未形成统一应用标准。
本文通过回顾目前关于PRP治疗KOA的基础研究，动物及临床试验，对PRP的制备过程、作用机制、临床疗效及目前存在的问题进行综述。
【关键词】富血小板血浆；PRP；骨性关节炎；KOA；膝膝关节骨性关节炎(Knee osteoarthritis，KOA)，是一种以关节软骨病损为主，合并骨、韧带和滑膜组织等退行性病理变化为主要特征的慢性骨性疾病，同时伴随严重的骨骼肌肉功能失调及关节生态微环境紊乱、关节面软骨破坏、缺失、大量致炎因子生成[1]。
临床症状因疾病进展程度不同而略差异，主要表现关节疼痛、尤其上下楼时疼痛明显，关节屈伸活动受限，深蹲后不能独立站起，长距离行走困难等，发展至后期会出现关节畸形甚至导致肢体残疾。
目前对于KOA早中期的治疗方法大体包括口服消炎镇痛药物、物理疗法、关节腔注射药物以及手术干预等。
这些治疗方法在一定程度上能改善临床症状，大部分患者在短期内能有较明显的疗效，但都有各自的局限性，对于患者关节软骨损伤的修复以及延缓疾病进展并没有理想的效果[2]。
富血小板纤维蛋白、冻干法以及其联合应用研究进展
富血小板纤维蛋白、冻干法以及其联合应用研究进展【摘要】富血小板纤维蛋白（prf）是一种新型的生物材料，其可促进软硬组织再生的能力已得到国内外学者的认可，而随着科技的发展，冷冻干燥技术也迅速提高，但对于将冻干法与prf联合应用，将冻干法的优点结合到富血小板纤维蛋白内，目前还尚未有研究报告。
本文将就prf、冻干法以及其联合应用的研究进展进行阐述。
【关键词】富血小板纤维蛋白；冷冻干燥法【中图分类号】r-3 【文献标识码】a 【文章编号】1004-4949（2013）06-299-021 引言随着种植技术的飞速发展，人们生活水平的不断提高，及对美观要求的提高，社会对种植的需求量越来越大。
但临床上，口腔种植骨缺损仍是难题。
2000年，choukroun等首次发现富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin，prf），它取自于自体血，不添加任何人工制剂，很好的避免了免疫排斥反应及交叉感染。
近年来，对于prf的研究已经成为一个热点问题，大量文献表明prf中富含的生长因子，对成骨有显著的影响[1]。
但对于这些对成骨有重要作用的生长因子易于流失，无法长期作用于成骨，并且不能长期保存等缺点，仍有待于研究。
冷冻干燥技术最早于1813年由英国人wollaston发明。
1909年shsckell试验用该方法对抗毒素、菌种、狂犬病毒及其它生物制品进行冻干保存，取得了较好效果。
药品冻干后，可在室温下避光长期贮存，需要使用时，加蒸馏水或生理盐水制成悬浮液，即可恢复到冻干前的状态。
与其它干燥方法相比，药品冷冻干燥法具有非常突出的优点和特点。
但药品冷冻干燥技术是一门边缘学科，需要生物学、药学、制冷、真空和控制等知识的交叉和综合，因此仍存在亟待解决的问题[2]。
大量文献表明，冻干后的蛋白质药品可呈疏松多孔状，能长期稳定保存，并且可通过复水从而恢复其活性。
根据此特性，冷冻干燥技术已广泛应用于制备固体蛋白质药物、口服速溶药物以及药物包埋剂脂质体等药品。
富血小板血浆对骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化的影响
定 向分化 为成骨细胞 的作用及机制 。 方法
共 培养 ， 观察 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 诱导 分 化过 程 中茜 素红 染 色 阳性 率 ， 应 用 酶标 仪 检 测碱 性 磷酸 酶 （ ａ ｌ ｋ ａ ｌ ｉ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ａ ｓ ｅ ， Ａ Ｌ Ｐ ） 活性 ， 应 用
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法检测 Ｂ ＭＳ Ｃ ｓ 诱导分化过程 中骨钙 素 （ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｎ ， Ｏ Ｃ Ｎ）及 结缔组 织生 长 因子 （ ｃ ｏ ｎ ｎ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ， Ｃ Ｔ Ｇ Ｆ）
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山西 医科大学学报 ，２ ０ １ ３年 １ ０月 ，第 ４ ４
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富 血 小 板 血 浆对 骨 髓 间 充质 干 细 胞 向成 骨 细 胞 定 向分 化 的 影 响
富血小板纤维蛋白(PRF)体外促进兔骨髓间充质干细胞在钛板表面黏附增殖的
富血小板纤维蛋白（PRF）体外促进兔骨髓间充质干细胞在钛板表面黏附增殖的研究孙喜谦，王稚英（辽宁医学院，辽宁 锦州 121000)摘要:目的 探讨富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin ,PRF）在体外对钛板表面兔骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells ,BMSCs）增殖粘附的影响。
方法 将体外培养的BMSCs植入钛板上，试验组盖PRF，对照组不盖PRF,同时进行BMSCs培养，通过免疫荧光、噻唑蓝（MTT）比色试验检测比较两组细胞的黏附和增殖能力，从而对比评价骨髓间充质干细胞在钛板上粘附和生长增殖情况。
结果 免疫荧光显示两组钛板上的细胞随时间延长而增多，24h时PRF组细胞形态较好，细胞数量较多。
MTT结果显示24h和48h时PRF组MTT值大于对照组，而72h时两组没有统计学差异。
结论 PRF能够促进兔骨髓间充干细胞在钛表面粘附和增殖。
关键词:钛；骨髓间充质干细胞；富血小板纤维蛋白；细胞黏附；细胞增殖中图分类号：R 246.83 文献标识码：B骨结合的形成是口腔种植成功与否的关键。
种植体植入牙槽骨后，未分化的骨祖细胞和多能间充质干细胞迁移至种植体骨界面，与种植体表面产生早期的粘附，影响细胞的增殖分化等一系列反应。
骨髓间充质干细胞作为一种具有增殖和分化潜能的多能干细胞[1]，其在种植体表面黏附、增殖将直接影响着种植体骨整合的形成。
Choukroun's platelet-rich fibrin(PRF)是新一代自体血液制品[2]。
其降低炎性反应和抗感染作用已经得到认可，已逐步应用到包括口腔种植等临床实践中。
Dohan报道证明PRF可促进多种细胞增殖分化，特别是其有促进BMSCs增殖并向成骨细胞分化的能力[3]。
本试验通过研究PRF对兔BMSCs在钛板表面黏附和增殖的影响，模拟种植体表面骨结合初期BMSCs的细胞行为,为临床种植应用和BMSCs体外增殖提供理论依据。
富血小板纤维蛋白在骨缺损修复中引导成骨能力的动物实验研究(摘要)
促进牛血清白蛋 白的吸附 ， 抑制细菌的粘附同时增强了成纤维细胞的粘附 ， 对生物学封闭的形成具有积极 的 影响。
【 关键词 】 种植体颈部 ； 钛； 阳极氧化 ； 微纳米形貌
种 植 与种 植 修 复 临床 应 用 体 会
吴 燕平 周 文清 陈璐 姚 宁 卢静华 陈 娟 孙诚 诚 顾 玉红 （ 南通 市 口腔 医院种 植 中心 ）
密度测量 ２周、 ４周 Ａ与 ｃ组无统计学差异 ， Ａ、 ｃ组与 Ｂ 、 Ｄ组之 间分别具有统计学差异 ， ８周 Ａ组与 ｃ 、 Ｂ组 之间无统计学差异 ， 与 Ｄ组分别存在统计学差异。讨论： Ｐ Ｒ Ｆ的作 用机制及效果对 比研究 。结论 ： （ １ ） Ｐ Ｒ Ｆ
联合骨粉引导骨再生早期效果优于单独使用骨粉或覆盖胶原膜。（ ２ ） Ｐ Ｒ Ｆ覆盖骨粉及 Ｐ Ｒ Ｆ混合骨粉引导骨 再 生效 果基 本 相 同。 【 关键词 】 富血小板纤维蛋 白； 骨缺损 ； 引导骨再生
【 摘
要】 目的： 观察种植牙及其修复后的临床效果。方法 ： ６ ５ 例缺失牙患者 ， 采用瑞士 Ｎ Ｏ Ｕ Ｖ Ａ Ｇ Ｍ Ｄ ２ ０种
植机植入 Ｉ Ｔ Ｉ 、 Ｂ Ｅ Ｇ Ｏ 、 Ｄ Ｅ Ｎ Ｔ Ｉ Ｕ Ｎ系统植体共 １ ２ ６颗。结果 ： 临床观察最长 ７ ２月（ ６年） ， 最短 １ 月， 种植体与骨 结合 良好 ， 修复后咬殆关系 良好 ， 咀嚼功能 良好 ， 无一例失败 ， 临床疗效 良好。结论： 种植手术和种植修复的 成功 ， 与严格把握好适应症 ， 术前周密计划 ， 手术操作技术 以及种植修复设计与操作技术密切相关 。
富 血 小 板 纤 维 蛋 白在 骨 缺 损 修 复 中 引 导 成 骨 能 力 的 动 物 实 验 研 究
许 丰伟 柳 忠豪