BOXPCR技术在肺炎链球菌检测中应用
研究肺炎链球菌感染机制的细胞免疫实验
研究肺炎链球菌感染机制的细胞免疫实验肺炎链球菌是一种常见的致病菌，它引起的肺炎和其他感染病症给全球范围内的公共卫生带来了严重的威胁。
深入了解肺炎链球菌的感染机制对于开发有效的预防和治疗策略至关重要。
细胞免疫是机体对抗病原体感染的重要防线之一，通过研究肺炎链球菌感染机制的细胞免疫实验，我们可以更好地了解机体免疫应答的过程以及病原菌的逃逸机制。
在研究肺炎链球菌的感染机制时，细胞免疫实验是不可或缺的工具。
首先，我们需要选择合适的免疫细胞系进行实验。
肺炎链球菌主要感染上呼吸道，因此选择上呼吸道的免疫细胞系比如人类上呼吸道上皮细胞系（例如A549细胞系）或鼠标巨噬细胞（例如RAW264.7细胞系）是合适的。
在实验中，我们可以通过以下几个方面来研究肺炎链球菌感染机制：1. 细胞内杀菌活性的检测：细胞免疫的重要功能之一是其通过改变内环境来抑制病原菌的生存和复制。
使用细菌存活率测定、细胞内定位技术以及PCR等方法，可以评估肺炎链球菌感染下免疫细胞的杀菌活性。
比较感染组与对照组的差异，可以了解机体免疫应答过程中的变化。
2. 诱导的细胞因子产生：肺炎链球菌感染能够引起机体免疫细胞内炎症反应的产生。
在实验中，我们可以通过ELISA、流式细胞术等方法检测细胞因子如IL-1β、IL-6和TNF-α的产生水平，从而了解肺炎链球菌感染对细胞免疫的影响。
3. 受体介导的内吞作用：受体介导的内吞作用是细胞摄取病原菌的重要机制之一。
通过观察肺炎链球菌感染后免疫细胞中突变的受体表达情况、使用受体阻断剂、共定位染色等方法，可以研究肺炎链球菌感染对细胞内受体介导的病原菌内吞作用的影响。
4. 免疫细胞炎症相关基因表达的变化：肺炎链球菌感染后，免疫细胞内的基因表达会发生变化从而调控免疫应答。
通过使用实时定量PCR等方法，可以研究肺炎链球菌感染对免疫细胞内炎症相关基因表达的影响，如IL-1β、IL-6、TNF-α等。
除此之外，我们还可以使用细胞相互作用实验（如共培养、跨表达）来模拟细胞间的相互作用，以研究肺炎链球菌感染时不同细胞类型的相互作用对免疫应答的调控。
肺炎链球菌鉴定流程
肺炎链球菌鉴定流程肺炎链球菌（肺炎链球菌属）是导致人类社区获得性肺炎（CAP）最常见的病原体之一。
准确鉴定肺炎链球菌对于指导适当的抗菌治疗和监测抗菌剂耐药性的出现至关重要。
该鉴定过程涉及多个步骤，包括：革兰氏染色：革兰氏染色是鉴定肺炎链球菌的第一步，因为它是一种革兰氏阳性球菌，通常成链状排列。
形态学检查：通过显微镜检查革兰氏阳性标本，可以观察到肺炎链球菌的典型的链球菌形态。
链条的长度和排列模式可能因菌株而异。
荚膜染色：肺炎链球菌具有多糖荚膜，可通过荚膜染色技术（例如，奎肯斯泰特染色）显现出来。
荚膜的存在是肺炎链球菌鉴定的关键特征。
血清学检测：血清学检测，如奎肯斯泰特试验，可用于确定肺炎链球菌的荚膜血清型。
肺炎链球菌的荚膜由不同的血清型组成，每种血清型与不同的抗原性决定簇（PSA）相关。
生物化学测试：多种生物化学测试可用于确认肺炎链球菌的鉴别，包括：溶血反应：肺炎链球菌通常在绵羊红细胞琼脂平板上显示β溶血反应。
胆盐耐受性：肺炎链球菌可耐受高浓度的胆汁盐，这是区分其与其他链球菌的重要特征。
尿素酶活性：肺炎链球菌通常产生尿素酶，可水解尿素。
分子诊断：分子诊断方法，如聚合酶链反应（PCR），可用于快速鉴定肺炎链球菌，尤其是在培养困难的情况下。
PCR检测靶向肺炎链球菌基因，如lytA或cpsA。
抗菌剂敏感性测试：进行抗菌剂敏感性测试对于指导针对肺炎链球菌的适当治疗至关重要。
通常使用琼脂稀释法或扩散法来确定肺炎链球菌对各种抗菌剂的敏感性。
鉴定肺炎链球菌的流程通常涉及以下步骤：1. 革兰氏染色：确定标本中是否存在革兰氏阳性球菌。
2. 形态学检查：观察革兰氏阳性球菌的链球菌形态。
3. 荚膜染色：显示肺炎链球菌荚膜的存在。
4. 血清学检测：确定肺炎链球菌的荚膜血清型。
5. 生物化学测试：进行溶血反应、胆盐耐受性和尿素酶活性测试以确认鉴别。
6. 分子诊断：如有必要，进行PCR检测以快速鉴定肺炎链球菌。
7. 抗菌剂敏感性测试：确定肺炎链球菌对各种抗菌剂的敏感性。
国内耐药肺炎链球菌研究进展
国内耐药肺炎链球菌研究进展摘要】肺炎链球菌可引起细菌性肺炎、中耳炎和脑膜炎等多种侵袭性疾病，是当今发达国家和发展中国家共有的一个重要病原，WHO估计每年约有160万人因感染此菌而死亡，其中70万～100万为5岁以下儿童。
且多数生活在发展中国家。
由于抗生素长期的过度使用，许多肺炎链球菌菌株能够同时耐受多种常用抗生素，耐药肺炎链球菌正在朝着“超级细菌”方向发展。
面对这一严峻形势，科学家致力于肺炎链球菌耐药性研究及耐药基因的检测以及疫苗的开发，以期寻求理想的解决方法。
本文对国内肺炎链球菌的流行现状及其耐药基因相关检测方法和防治策略进行综述。
【关键词】肺炎链球菌药物耐受性基因实验室技术和方法疫苗【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）16-0308-03Progress of drug resistance of Streptococcus pneumoniae in China WEI Qiu-ling,Department of Clinical Laboratory, Binyang Women and Children Health Hospital, Guangxi 530400, China【Abstract】 Streptococcus pneumoniae is an important pathogen that causes devastating infectious diseases,such as bacterial pneumonia,otitis media and meningitis in both developed and developing countries. WHO estimates that eachyear about 1.6 million people have been infected with the bacteria anddeath ,Including 700000 ～ 1 million for children under the age of five. And most people in developing countries.Due to the excessive use of antibiotics, the resistanceof pneumococcal isolates to many of many of the commonly used antibiotics results in fewer effective antibiotics available for treatment. As the resistant S.pneumoniae is gradually approaching what the “superbug”is, t Facing the ser ious situation ,Scientists streptococcus pneumoniae resistance to research and drug resistance gene detection and vaccine development, so as to seek the ideal solution. This article provides an overview of the current status of drug resistance of S.pneumoniae and Resistance genes related detection methods and control strategy is summarized in this paper. in China.【Key words】 Streptococcus pneumonie drug tolerance gene laboratory technology and methods vaccinne肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）可从呼吸道或血流入侵，引起中耳炎、鼻窦炎和肺炎，严重时导致败血症和脑膜炎。
肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的PCR法鉴定
肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的PCR法鉴定Ξ杨永红 朱保权 宁淑敏 安真光(兰州医学院第二附属医院,兰州 730030)王 棣 王兴民(兰州生物制品研究所,兰州 730046)摘 要:肺炎链球菌是一种致病率和致死率很高的病原菌,若无丰富临床检测经验从临床标准中分离鉴定此菌较困难,本实验以寡核苷酸引物YH12YH2、YH72YH8分别扩增肺炎链球菌自溶素和溶血素基因的354bp和307bp 的DNA片段,通过改变各种反应条件,建立了这两种病原因子基因的PCR检测方法。
用此方法对20株肺炎链球菌标准菌株及7株对照菌株进行了鉴定;其扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和和AccI进行酶切以确认扩增产物是否正确;用酚2氯仿抽提纯化的全细胞DNA对PCR方法的检测灵敏度进行了测定;并利用此方法对28份临床标本分离物进行了鉴定。
结果 所有20株肺炎链球菌均可分别用引物YH12YH2、YH72YH8扩增出354bp 和307bp的DNA片段,而对照菌株均呈阴性;自溶素及溶血素基因的扩增产物分别经限制性内切酶TthHB81和AccI消化后产生的片段和预期的完全一致;两对产物均可从10fg的全细胞DNA中扩增出目的DNA片段。
所建立的两套PCR系统对28份临床标本分离物进行鉴定,其中PCR阳性的15份分离物经生化学特性检查被鉴定为肺炎链球菌。
本试验所建立的两套PCR检测系统具有特异性强,灵敏度高及操作简单等优点,均可用于肺炎链球菌的鉴定。
关键词:肺炎链球菌;自溶素;肺炎链球菌溶血素;聚合酶链式反应中图分类号:R37811+2 文献标识码:A 文章编号:100525673(2000)20049205Identif ication of Streptoccocus pneumoniae by polymerase chain reaction for amplif ication of autolysin and pneumolysin gene YA N G Yonghong,ZHU B aoquan,N IN G S humin,et al(Second A f f iliated Hospital of L anz hou Medical Col2 lege,L anz hou,730030) W A N G Di,W A N G Xinming(L anz hou Institute of Biological Products,L anz hou730046) Abstract:S t reptoccocus pneumoniae is a major cause of morbidity and mortality worldwide.It is difficult to isolate the or2 ganisms from clinical s pecimens without enough technical skill.It is the aim that a set of polymerase chain reaction(PCR) methods will be developed to identify the S.pneumoniae strains for this study.By altering various conditions,the PCRs were established by using primer sets YH12YH2and YH72YH8which respectively designed to amplify the DNA fragment in size of354by for autolysin gene and307bp for pneumolysion gene.Twenty strains of S.pneumoniae and7control strains were identified with the PCRs.The am plified products were digested respectively with restriction endonuclease Tth HB81and AccI to verify whether the fragments would be amplified correctly.The sensitivities were determined with the whole cell DNA purified with Phenol Chloroform.At the last,28clinical isolates were identified b y these PCR systems.The target fragments in size of354bp and307bp respectively related to gene of autolysin and pneumolysin were am2 plified in all of the20strains of S.pneumoniae,whereas all the other bacterial strains tested were negative in the two PCR systems.The digest patterns of restriction endonucleases were in conformity with the predicted sizes completely.Clear DNA fragments could be amplified from10fg of whole cell DNA in all of these two PCR s ystems.Fifteen of28strains iso2 lated from clinical s pecimens were positive in the two PCR systems.The strains that were positive in PCRs were also de2 fined to S.pneumoniae by the biochemical properties.The PCRs established in this study were useful to identify the S. pneumoniae strains since they were specific,sensitive and simple.K ey w ords:S t reptoccocus pneumoniae;Autolysin;Pneumolysin;Polymerase chain reaction 肺炎链球菌(S t reptoccocus pneumoniae)可引起肺炎、脑膜炎、中耳炎、鼻窦炎及菌血症等多种严重疾病,虽然在100年前就已分离到此菌并很早开始了对其分子遗传学及抗生素、疫苗的研究,但到目前为止,它仍然是一种致病率和致死率很高的病原菌。
两种不同基因引物检测痰液标本中肺炎链球菌的比较
ｃ ｅ ｔ ｅ ａ ｙ ｉ ａ ｉｎ ｓ ｗｉ ｏ ａ ｌ ｄ ａ ｃ ｄ ｏ ｔ ｓａ ｉ ａ ｔｉ ｈ ｍｏｈ ｒ ｐ ｎ ｐ ｔ ｔ ｔ ｌｃ ｌ ａ ｖ ｎ ｅ ｒ ｍｅａ ｔｔ ｇ ｓ ｃ ｅ ｈ ｙ ｃ ｒ
００ ） ． ５ 。经 对症 支持 治疗 均能 耐受并 完成 治疗 。 综上 所述 ， Ｂ—ｔｂ ｌ Ｉ 、ｕｖ ｉ 表 达 的进 展 ｕ ｕｉ ｌ ｓｒｉ ｎ高 ｎＩ ｖ
检 测肺 炎 链 球 菌 阴 性 的 １４例 标 本 中 ｃｓ 法 ９例 阳性 ， ｎ ８２法 ２ １ ｐＡ ｓ ９０ ｐ ９例 阳 性 。 统 计 分 析 表 明 ， ３种 方 法 的 阳 性 率 比较 存 在 显 著 性差异 （ ００ ） 结论 Ｐ＜ ．５ 。 ｃｓ 和 ｓｎ８ ２两 种 引 物 基 因定 量 检 测 肺 炎 链 球 菌 能 提 高 肺 炎 患 者 痰 液 标 本 肺 炎 链 球 菌 的 阳 性 率 。 ｐＡ ｐ ９０
两 种 引 物 共 同 检 测 结 果 与 培 养 结 果 相 符 ， 一 定 的 临床 应 用 价 值 。 有 关 键 词 肺 炎 链 球 菌 荧 光 定 量 Ｐ Ｒ Ｃ
（ 收稿 ：０ １— ３—１ ） ２１ ０ ６ （ 回 ：０ １— ３— １ 修 ２１ ０ ３）
两 种 不 同基 因 引物 检 测 痰 液 标 本 中肺 炎 链球 菌 的 比较
刘 丽 张 颖 杨 锦 红 田 鹏 鹏 李 向 阳
摘 要 目的 建立 ｃｓ ｐＡ和 ｓｎ ８２两 种 引 物 基 因 定 量 检 测 肺 炎 链 球 菌 检 测 方 法 。方 法 ｐ９ ０ 根 据 基 因库 中 两 种 基 因 的 序 列
Ｌ ｉＣＰ，Ｃｈ ｎＪ ｅ Ｓ，Ｃ ｅ Ｔ，ｅ １Ａ ｐ ａｅ Ｉｓｕ ｙｏ ｅ ｋｙｄ ｃ ｔｘ ｈｎＬ ｔａ． ｈ ｓ Ｉ ｔｄ ｆｗ ｅ ｌ ｏｅａ －
肺炎链球菌的检测与分型技术
2020/11/14
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The Ct value corresponding to the detection level of RT-
PCR and MRT-PCR for pneumococcal serotyping
Serotype
RT-PCT
MRT-PCR
Combined with other serotypes
年龄组, 岁
458例死亡。死亡率 >65岁: 7.55/100 000 < 1岁: 0.71 / 100 000
*覆盖2800万 (占美国人口9%)
2020/11/14
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/ncidod/DBMD/abcs/survreports/spneu06.pdf
欧洲1985 – 2006年<2岁儿童侵袭性肺炎球菌疾 病发病（发表的研究）
2020/11/14
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沒有感染者
帶菌者
发病者
2020/11/14
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肺炎链球菌疾病负担
突破血脑屏障 肺炎球菌菌血症
脑膜炎 脑脊液渗漏
鼻窦炎
突破呼吸道粘 膜纤毛防御系 统
中耳炎 鼻咽部移殖
腹膜炎 关节炎等
突破吞噬细胞防御系统
肺炎
2020/11/14 Salyers AA, Whitt DD. In: Bacterial Pathogenesis: A Molecular Approach. 2nd ed. Washington, USA: 10 ASM Press; 1994. p. 322-31
12A
19F
6C
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7A
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荧光定量PCR技术在肺炎链球菌检测中的应用
荧光定量PCR技术在肺炎链球菌检测中的应用作者：李靖柴文戍来源：《医学信息》2014年第24期摘要：目的通过荧光定量PCR技术对痰中肺炎链球菌（SP）的检测，明确其较传统检测方法的优越性。
方法收集2013年1月～2014年1月入住我院呼吸科的123例AECOPD患者，对合格痰标本（108例）进行培养，观察培养结果；通过荧光RT-PCR技术检测痰标本中的SP，并粗略估算SP的感染率。
结果合格痰标本108份，SP培养阳性率6.5%；而应用荧光PCR定量检测，阳性率为58.3%，粗略估计AECOPD中SP的感染情况，约为17.6%。
结论荧光定量PCR对细菌的检测明显优于传统培养方法。
关键词：肺炎链球菌；COPD急性加重期；荧光定量PCR；痰细菌培养1 资料与方法1.1一般资料收集我院123例临床确诊的AECOPD患者，入院时间为2013年1月～2014年1月，其中男性78例，女性45例，年龄46～87岁，既往有吸烟史者54人。
全部病例符合中华医学会呼吸病学会慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2007年及2013年修订版）的诊断标准[1，2]，患者主要表现有气促加重，常伴有喘息、胸闷、咳嗽加剧、痰量增加、痰液颜色和（或）黏度改变、发热及全身症状等，入院患者均具有CT，排除其他病变如肺癌、单纯肺炎、肺结核、肺间质病等，10例患者合并支气管扩张，入院前应用抗生素者22例。
为减少抽样误差并排除季节及环境因素的影响，研究时间>1年。
1.2 实验仪器与试剂基因扩增仪（型号为Roche Light Cycler480），全自动细菌鉴定药敏分析仪（美国碧迪）。
引物、探针、标准品（大连宝生物工程有限公司合成）；肺炎链球菌标准菌株，型号为BZW23112；柱式小量细菌基因组 DNA 抽提试剂盒[3] （W6511）（上海华舜生物技术有限公司）。
1.3 方法1.3.1 痰标本的收集留取患者入院后次日清晨的合格痰标本。
合格标本的判定标准（显微镜下）：鳞状上皮细胞25个/低倍视野，或两者比例1.3.2 痰培养过程合格痰液标本2h内进行培养操作。
数字PCR技术在微生物检测中的应用
数字PCR技术在微生物检测中的应用随着科技的发展，分子生物学领域的技术也在不断地更新和进步。
其中，数字PCR技术作为一种高精度、高灵敏的检测技术，得到了广泛的关注和应用。
尤其是在微生物检测领域，数字PCR技术因其独特的优势，已经逐渐成为了一种主流的检测手段。
数字PCR技术在微生物检测中的应用，与传统的PCR技术相比，具有更高的灵敏度和精度。
数字PCR技术采用了数字信号放大的方式，使得其能够更加准确地检测微生物的存在和数量。
特别是在病原微生物的检测及数量测定方面，数字PCR技术的应用更是发挥了非常重要的作用。
另外，数字PCR技术的检测效率也比传统PCR技术高，这主要是因为数字PCR技术是基于微量反应体系的，可以同时检测多个样品，从而大大提高了检测效率和效益。
此外，数字PCR技术还具有一些传统PCR技术不具备的特殊优点，如对微生物的检测结果更加稳定和可靠，能够为微生物学研究提供更加精确的数据等等。
那么，数字PCR技术在微生物学领域的应用现状又是如何的呢？首先，数字PCR技术在微生物学领域的应用范围非常广泛，可以用于家畜、野生动物、鱼类、昆虫等各种生物体内微生物的检测。
尤其在水产养殖业中，数字PCR技术被广泛应用于溶解性浓度高、复杂、交替出现的病原菌及其它常规检测难度较大的病原菌的检测和定量。
其次，数字PCR技术在微生物检测中还能够解决传统PCR技术无法解决的一些问题。
例如，数字PCR技术可以应用于微生物表达谱的基因芯片实验中。
数字PCR技术对微生物基因表达分析领域的重要性体现在，它可在快速、精确的同时进行微生物的增强、可靠性更佳、定位最准确，得到微生物基因表达差异性研究所需的可靠数据。
最后，也是最重要的，数字PCR技术在微生物学检测中还有很大的发展和应用空间。
随着数字PCR技术的不断完善和升级，其应用范围和效果将会更加显著和优越。
近年来，数字PCR技术已经逐渐应用于快速检测和监测病原微生物的趋势，成为近年来病原微生物检测技术发展的热点话题之一。
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万方数据
・２ｌＯ・
第２８卷第３期２０ｌＯ年６月
实验与检验医学
ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＡＮＤＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＥＤｌＣＩＮＥ
Ｖ０１．２８Ｎｏ．３
Ｊｕｎ．２０１０
公司），ＤＮＡＭａｒｋｅｒ（１ｋｂＤＮＡＬａｄｄｅｒ）（上海生工工程公司）。
１．３ＢＯＸ—ＰＣＲ引物ＢＯＸ—ＰＣＲ所用引物由上海生工工程公司合成。
ＢＯＸＡ：５’一ＡＴＡＣＴＣＴＴＣ．ＧＡＡＡＡＴＣＴＣＴＴＣＡＡＡＣ一３’。
２方法
２．１菌种复苏经菌落形态、奥普托欣试验敏感（５０ｍｌ／ＬＣＯ：环境，抑菌罔＞１４ｍｍ判为敏感）和胆汁溶菌试验等常规鉴定．如若需要用数码鉴定系统进一步鉴定．肺炎链球菌菌株保存于一２００Ｃ１００９／Ｌ的脱脂牛奶中。
检测前融解后接种于哥伦比亚血琼脂平板。
３７℃，５０ｍｌ，ＬＣＯ，条件下孵育１８。
２４ｈ。
２．２临床标本处理痰液液化：３７℃水浴１ｈ．２０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｒａｉｎ．取上清液ｌｍｌ１３．０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ弃上清．在沉淀中加入裂解液１００—１５００１１．然后进行ＤＮＡ提取。
２．３ＢＯＸ—ＰＣＲ采用ＣＴＡＢ法提取肺炎链球菌染色体ＤＮＡ。
２５０１１反应体系：引物１０１１，模板２０１１．ＤＥＰＣ水９．５０．１，ｍｉｘ１２．５斗１。
反应条件为：９４℃预变性５ｒａｉｎ，９１℃变性ｌｍｉｎ，４８℃复性２ｍｉｎ．７４℃延长２ｒａｉｎ，４０个循环后７４℃延长５ｍｉｎ。
取反应产物１００．１，加２０．Ｉ溴酚蓝于８０Ｖ电压２０∥Ｌ琼脂糖凝胶电泳１．５ｈ后．０．５ｍｇ／Ｌ溴化乙锭溶液染色成像．紫外光下照相。
２．４特异性实验金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、化脓性链球菌、自假丝酵母菌分别进行ＤＮＡ提取，ＢＯＸ—ＰＣＲ检测．同时以标准菌株ＡＴＣＣ４９６１９做阳性对照．无菌蒸馏水作为空白对照。
２，５敏感性实验将肺炎链球菌标准菌株纯培养后．制成菌悬液进行计数．然后１０倍梯度稀释菌液成：ｌＯＳｅｆｕ／ｍｌ、１０４ｃｆｕ／ｍｌ、ｌｏｓｃｆｕ／ｍｌ、１０２ｃｆｕ／ｒｎｌ、１０１ｅｆｕ／ｍｌ、１００ｃ甜ｆｎｌ．然后进行ＤＮＡ提取和ＢＯＸ—ＰＣＲ检测。
以无菌蒸馏水做宅白对照。
２．６临床标本检测用ＢＯＸ—ＰＣＲ方法和传统的细菌培养法同时检测５０例临床标本（痰液３５例、血液１０例、脑脊液５例），比较两种方法的检出率。
结果
ｌＢＯＸ—ＰＣＲ扩增结果
被检测的２３株肺炎链球菌菌株进行扩增后均获得ＢＯＸ图谱．按相差的条带个数以及位置不同随机依次命名为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ等型（图１），仅相差一个条带或条带数量相同而信号强弱有差异的为同一型的不同亚型的原则，可将２３菌株分为Ａ、Ａｌ、Ａ２、Ｂ、Ｃ、Ｃｌ、Ｄ、Ｄ１、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ和Ｋ等不同型或亚型共１１个型１５个亚型。
最多的Ａ型有８株，分属３个不同的亚型，最多的是Ａ亚型有４株。
图ｌ肺炎链球菌ＢＯＸ—ＰＣＲ图谱
２特异性实验
ＢＯＸ—ＰＣＲ方法对肺炎链球菌扩增后．获得较多的、多条的条带，而其他５株非肺炎链球菌及空白对照均未扩增出产物。
表明ＢＯＸ—ＰＣＲ具有良好的特异性（图２）。
图２特异性实验ＢＯＸ—ＰＣＲ结果
注：从左至右分别为ｍａｒｋｅｒ、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、化脓性链球菌、白假丝酵母菌。
３敏感性实验
分别选取菌悬液浓度为ｌｏｓｃｆｕ／ｍｌ、ｌ＆ｃｆｕ／ｍｌ、ｌｏｓｃｆｕ／ｍｌ、ｌｏｓｃｆｕ／ｍｌ、１０ｔｃｆｕ／ｍｌ、ｌＯｏｃｆｕ／ｍｌ的肺炎链球菌ＤＮＡ进行扩增．结果是除ｌＯｏｃｆｕ／ｍｌ外均扩增出产物．表明该方法最低可检出ｌＯ－ｃｆｕ／ｍｌ的菌悬液（图３）。
注：从左至右分别为ｍａｒｋｅｒ、１０５ｅｆｕ／ｍｌ、ｌｌＹｅｆｕ／ｍｌ、ｌｏ乇ｆｕ枷、１０２ｅｆｕ／ｍｌ、１０１ｃｆｉｄｍｌ、１０％ｆｕ／ｍｌ。
４临床标本检测结果
万方数据
万方数据。