葡萄酒中铁含量的测定操作指南

葡萄酒中铁含量的测定---邻菲罗啉比色法
操作指南（180min内完成所有考核内容）
原理:
样品经处理后，试样中的三价铁在酸性条件下被盐酸羟胺还原成二价铁，与邻菲啰啉作用生成红色螯合物，其颜色的深度与铁含量成正比，用分光光度法进行铁的测定。

（于480 nm波长处）
1、准备要求：
（1）仪器的准备
见附录1
（2）试剂的准备
见附录1
（3）仪器的洗涤
1）所用玻璃仪器均需按照洗涤要求清洗干净；
2）所用水为蒸馏水。

（4）仪器的检查
考核前应认真检查、核对仪器、做到仪器完好、无缺。

2、考核内容：
（1）考核要求
1) 铁标准使用液（1mL溶液含有10μg铁）的配制
吸取 10.00mL铁标准贮备液于100mL容量瓶中，用0.5％硝酸溶液稀释至刻度，此溶液每毫升含10μg铁。

2) 铁标准系列的配制
吸取铁标准使用液 0.00，0.40，0.80，1.00，1.40mL（含 0.0，4.0，8.0，10.0，14.0μg铁）分别于五支25mL比色管中，补加水至10mL，加5mL乙酸-乙酸钠溶液、1mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置5 min后，再加入1mL 邻菲啰啉溶液，然后补加水至刻度，摇匀，放置5 min，备用。

该系列用于标准工作曲线的绘制。

3）标准工作曲线的绘制
在480nm波长下，测定标准系列的吸光度。

根据吸光度及相对应的铁浓度绘
制标准工作曲线（或建立回归方程）。

4）样品处理（同时以蒸馏水替代酒样做空白试验）
吸取酒样 1.00 mL 于 50 mL 凯氏烧瓶中，置电炉上缓缓蒸发至近干，取下稍冷后，加0.5mL 浓硫酸、1 mL 过氧化氢，加热消化。

如果消化液颜色较深，继续滴加过氧化氢溶液，直至消化液无色透明。

稍冷，加10 mL 水微火煮沸 3 min ，取下用自来水淋流冷却。

同时做空白试验。

5）试样的测定
将试样及空白消化液用纯水分别洗入25mL 比色管中（注意：洗涤用水的用量要非常少），在每支管中加入一小片刚果红试纸，用氨水（1.2mL 左右）中和至试纸显蓝紫色（pH4～5），然后各加5mL 乙酸-乙酸钠溶液，加1mL 盐酸羟胺溶液，摇匀，放置5min 后，再加入1mL 邻菲啰啉溶液，然后补加纯水至刻度，摇匀，放置5 min ，在分光光度计上于480nm 波长处测出的吸光度，从标准工作曲线上查出铁的含量（或用回归方程计算）。

6）结果计算 V
m m X 0
-=
式中：X ——样品中铁的含量，mg ／L ；
m ——测定用样品中铁的含量，μg ； m 0——试剂空白液中铁的含量，μg ； V ——取样体积，mL 。

所得结果应表示至一位小数。

7）测定结束后，填写上交分析测试报告单。

（2）安全文明操作
1）正确执行实验室安全操作规程。

2）遵守实验室规则，认真、如实记录实验数据。

3）保持实验台面及周围环境整洁，仪器、用品摆放整齐。

附录1：
实验项目名称：葡萄酒中铁含量的测定-邻菲啰啉比色法。