蒽酮比色法测总糖
实验七 食品中总糖含量的测定
实验七食品中总糖含量的测定1.实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法。
2.实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
3.仪器及材料3.1仪器可见分光光度计（752型）、可调试移液器或移液管、电子分析天平、水浴锅、电炉子、25mL具塞比色管3.2试剂标准葡萄糖储备液（1.0mg/ml）：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖1.0000g，配制成1000ml溶液，即得每ml含糖为1000μg的标准溶液。
标准葡萄糖工作液(0.1mg/ml):100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
72%硫酸: 72mL 98% H2SO4加到28mL纯净水中，并不断搅拌。
0.1%蒽酮显色液: 0.1g蒽酮和1.0g硫脲，置于烧杯中，在搅拌状态下，缓慢加入100 ml 72%H2SO4 ，棕色瓶中低温存放两天，最好现配现用。
3.3材料市售玉米粉4.实验步骤4.1样品处理精确称取玉米粉0.200g置于锥形瓶中，加入少量温水充分溶解并定容至1000毫升，摇匀过滤备用。
4.2葡萄糖标准曲线的制作取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度(mg/ml )为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖--标准曲线的制作及样品检测0 1 2 3 4 5 6 待测葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 样品滤液1.0 蒸馏水/mL 补满定容2mL蒽酮试剂10 10 10 10 10 10 10 10 迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量
实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料1、仪器（1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；2、试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3、材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。
四、操作步骤1、葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
蒽酮比色法测总糖
蒽酮比色法测总糖：
实验步骤：
1、可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80℃水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
2、总糖的测定：取提取液1毫升（或0.5毫升，视情况而定）于试管中（空白中用1毫升蒸馏水代替），加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于
，冷却后在620nm波长处比色。
蒽酮试剂：1克蒽酮溶于72%的H2SO41000ml(98%的H2SO4+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱保存2~3周。
3、标准曲线的绘制：取干洁试管6支，依次加入葡萄糖标准液（100μg/ml）0、0.2、0.
4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，绘出标准曲线。
4、计算：C=AN/W
C—样品总糖含量（μg/g）
W—样品重量（g）
A—标准曲线查得的糖量（μg）
N—样品提取液占样品反应液的倍数。
蒽酮比色法测总糖
[1]姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42.1. 2试剂0. 1 mg / mL, 1葡萄糖标准溶液:准确称取10mg葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL.蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg于100mL二烧杯中，加入蒸馏水25 mL,，缓慢加入98%质量分数)浓硫酸75 mL,，边加边搅(于冰水浴中完成)，直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用(临用新配)。
浓盐酸、浓硫酸、NaOH，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
1. 3方法1. 3. 1显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。
向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL,，并加入蒸馏水至1m L,，分别加入不同量显色剂显色测定，以0. 1 mL,蒸馏水为空白对照。
1.3.2显色时间选择。
向10 mL二试管中加入0. 1mg / mL葡萄糖标液0. 1 mL二并加入蒸馏水至1mL,，在冰水浴中缓慢加入9 mL显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。
1.3.3葡萄搪标准曲线绘制。
改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水用量，再分别加入9mL显色剂，进行显色测定。
1.3.4正交试验确定提取条件。
采用正交试验，考查4个影响因素(料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问)对实验影响，因素水平见表1.1.3.5水溶性总搪提取。
取0. 5 g棉花纤维于150 mL圆底烧瓶中，加入30 mL,蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn,滤出提取液20 mL于50 mL 烧瓶中，加5 mol / L 盐酸5 mL继续在沸水浴中加热30 mLn，冷却后，滴加一滴酚酞，用5 mol / L, 1氧氧化钠中和至中性。
1. 3. 6水溶性总搪测定。
取提取液1 mL于10mL试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL,蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn，冷却后放置30min测定吸光度。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
蒽酮比色法测定棉花成熟纤维中水溶性总糖含量
ｍｇ・ｍＬ 葡 萄 糖标 液 ０ １ｍＬ并 加 入 蒸 馏 水 至 １ 。 ．
ｍＬ， 冰水 浴 中缓 慢 加 入 ９ｍＬ显 色剂 摇 匀 ， 在 改变
沸 水浴 时 间 ， 冷却 至室 温后测 体 系吸光度 。
１ ３ ３葡 萄 糖 标 准 曲 线 的绘 制 。 改 变 ０ １ｍｇ・ ．． ．
有 着重 要作 用 。一 般实验 室 常用 的 比较 简便 、 捷 快
的总糖 测定 方 法为 比色 法 ， ３ ５二 硝 基水 杨 酸 比 如 ，一
色 法 、 甲苯 胺 比色 法Ｅ 苯 酚一 酸 法 、 酮 邻 、 硫 蒽 比色法 ¨ 等 。 ４
本 文采 用水 煮 法 提 取 成 熟 棉 纤 维 中水 溶 性 总 糖 ， 用 蒽 酮 比色 法 测 定其 含 量 ； 出 了成 熟 棉 并 找 花 纤维 中水 溶性 总糖 的最 佳 提 取条 件 ， 蒽酮 比色 对
１ ３ 方 法 ．
法 测定 总糖 含量 的最佳条 件 进 行 了选 择 ， 出 了标 做 准 曲线 ， 测 定 了不 同 产地 、 同 品 级成 熟 棉 花 纤 并 不
维 中水 溶性 总糖 含 量 。
１ ３ １ 色利 酮 一 酸 溶 液） 量 选 择 。 向试 管 ．． 显 蒽 硫 用
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｔ ｌＳｕ ａ ｎｔ ｎ ｓｉ ａ ｕ ｅ Ｃｏ ｔ ｎ Ｆｉ ｅ ｓｎ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆＴｏ ａ ｇ ｒ Ｃｏ ｅ ｔ ｎ Ｍ ｔ ｒ ｔｏ ｂ ｒＵ ｉ ｇ Ａｎｔ ｒ ｎ ｌ ｒ ｍ ｅ ｒ ｈ ｏ ｅ Ｃｏ ｏ ｉ ｔｙ
实 验材 料 ： 花 样 品来 自河 北 威 县 、 北 黄 梅 棉 湖 县 、 疆 石 河 子 市 和 库 尔 勒市 ， 新 由农 业 部 棉 花 品 质 监督 检 验测 试 中心 统一分 取试 验样 品 。 仪 器 ： ６新 世 纪 紫 外一 见 分 光 光 度 计 （ 京 Ｔ 可 北
实验五可溶性总糖的测定(精)
管号 1
葡萄糖 0
标准液 （ml）
蒸馏水 1
（ml）
葡萄糖 0
含量 （μg）
2
3
4
5
6
7
0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8
0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2
10 20 30 40 60 80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml， 加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取 出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以 吸光值作纵坐标作标准曲线。
三、仪器、试剂和材料
１、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架； 漏斗；容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制 使用。 ３、材料 小麦
四、操作步骤
１、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一
系列不同浓度的葡萄糖溶液：
可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
一、目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。
二、原理
强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟 甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物， 呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10 －100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量 成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３ 0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖 之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比 较合适。
２、植物样品中可溶性糖的提取
将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克， 放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖 煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容 量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一 50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测 定。
总糖的测定-蒽酮比色法
总糖的测定-蒽酮⽐⾊法植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮⽐⾊法）2010-5-24⼀、实验⽬的掌握蒽酮⽐⾊法测定总糖和还原糖含量的原理和⽅法，学会正确使⽤分光光度计。
⼆、实验原理游离的⼰糖或多糖中的⼰糖基、戊糠醛及⼰糖醛酸在浓硫酸的作⽤下脱⽔⽣成糠醛衍⽣物，糠醛衍⽣物与蒽酮缩合成蓝⾊的化合物，在620nm处有最⼤吸收，在⼀定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。
⽤酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底⽔解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进⾏定量测定。
三、实验材料1．可见分光光度计、电⼦天平(1/100)、粉碎机、⽔浴锅、电炉。
2．研钵、量筒、三⾓烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏⽃、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。
3．植物原料，如银⽿、⽊⽿、菜叶等。
四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当⽇配制使⽤。
2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏⽔并稀释⾄1 000ml（可滴加⼏滴甲苯作防腐剂）。
3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加⽔⾄100ml。
4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏⽔并稀释⾄100ml。
五、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的绘制取⼲净试管6⽀，按下表进⾏操作。
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。
2．样品中还原糖的提取和测定称取植物原料⼲粉0.1～0.5g，加⽔约3ml，在研钵中磨成匀浆，转⼊三⾓烧瓶中，并⽤约30ml的蒸馏⽔冲洗研钵2～3次，洗出液也转⼊三⾓烧瓶中。
于50℃⽔浴中保温半⼩时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容⾄100ml。
过滤，取lml滤液进⾏还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加⼊4ml蒽酮试剂，沸⽔浴中准确加热10min，取出⽤⾃来⽔冷却后⽐⾊，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
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啤酒中糖含量的测定
蒽酮比色法测总糖
一．实验原理
糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
二．仪器与药品
1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等
2.试剂：
(1)葡萄糖标准液（l00 µg/ml）：精确称取100mg干燥葡萄糖，先用蒸馏水定容至100ml，再取出10ml定容至100ml；
(2)浓硫酸；
(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用；
(4)啤酒（不用处理）。
三．实验步骤
1.葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.稀释：吸取啤酒1-2 m1稀释至500ml（先吸取2ml啤酒定容至100ml，再吸取10ml 已稀释的啤酒将其定容至50ml）
即2ml→100ml→取出10ml→定容至100ml
3.测定
吸取1.00ml已稀释的啤酒于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代啤酒。
以下操作同标准曲线制作。
根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。
四．数据记录与处理
1.校准空白值
2.标准曲线的绘制
3.由上面表格可作出下面的曲线
Y轴为校正后的A值
X轴为葡萄糖的浓度
4.待测啤酒
编号7 8 9
A 0.480 0.472 0.542
校正后A值0.484 0.480 0.546
5 .数据处理
由标准曲线可得：A=7.1256C(*)
啤酒的A的平均值为：（0.484+0.480+0.546）/3=0.503
将0.503代入(*)式得:C=A÷7.1256=0.0706（mg/ml)
则啤酒中总糖的含量为:0.0706×250=17.6（mg/ml)
=1.8（g/100ml)。