微生物工程实验指导
微生物学实验指导书(1-5)
微生物学实验指导书目录实验一实验室环境和人体表面微生物的检查 (2)实验二普通光学显微镜的使用和细菌的简单染色 (5)实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色 (12)实验四放线菌和真菌的制片、染色和形态观察 (16)实验五酵母菌形态观察与死活细胞鉴别及显微镜直接计数法 (20)生命科学学院微生物学教研室编写实验一实验室环境和人体表面微生物的检查微生物以其微小的形体广泛地分布在自然环境的各个角落，包括空气、土壤、水、动植物、人体的体表和某些脏器。
在有人群活动的场所，特别是人口密度相对大的一些地方，如：商场、影剧院、会议室、教室、实验室等都会散落着细菌的营养体、芽孢和霉菌的孢子。
只不过因为它们体积太微小（细菌的大小在1~10μm之间），远远低于人肉眼的分辨极限（人眼的正常分辨能力一般为0.25mm，即250μm），而看不见它们，但它们确实真实存在。
由于空气、器具、器皿、人体体表等处缺乏微生物进行繁衍所需要的足够水分和营养物，它们只是“暂居”于此。
一旦满足它们的营养要求，在适宜的温度条件下，它们将迅速地生长、繁殖，其“子孙后代”将会聚集在一起，形成一个人眼可见的群体——菌落。
不同微生物形成的菌落差异很大，人们可根据菌落的形状、大小、质地、颜色对它们进行表观的判断和认识。
不同环境条件中栖息的微生物有所不同，有些是对人无害的腐生菌，有些是致病菌，有些则是改变条件才可致病的条件致病菌。
本实验是对初学者的入门实验，通过从实验室内空气、实验者的头发、皮肤、手指、钱币等处取样，接种于营养琼脂培养基，37°C培养1~2天，可验证微生物的存在，并观察微生物菌落的形态和数量。
一、实验器材1.培养基肉膏蛋白胨琼脂平板。
2.溶液和试剂无菌水。
3.仪器和其他用品灭菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。
二、目的要求1.通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物。
2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特征。
微生物工程实验报告
实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。
4.每2人一组，每人一份实验报告。
二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。
三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。
2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。
4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。
5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。
6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。
2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。
取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。
B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。
加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。
C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。
保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。
微生物学实验指导.
微生物实验守则微生物学实验的目的是：加深对微生物学理论知识的理解；扎实掌握实验的基本操作，并牢固建立无菌操作的概念；培养学生认真观察、发现问题、分析问题和解决问题的工作能力；树立学生实事求是、严肃认真的科学态度和勤俭节约、协作攻关的优良作风。
为了提高教学效果，保证实验质量和实验室安全，特提出如下注意事项。
1.每次实验前必须充分预习实验教材，以了解实验的目的、原理和方法，熟悉实验操作中的主要步骤和环节。
2.非必要的物品不要带入实验室，必须带进的物品应放在不影响实验操作的地方。
3.实验时认真听教师的讲解，仔细观察示范操作。
4.许多微生物有潜在的致病能力。
实验中要严格无菌操作，以免培养的微生物进入外界环境，并保证所培养的微生物不受污染。
①实验室内严禁餐饮。
②实验前洗手并用酒精棉球擦拭手和台面。
③实验操作过程中，要严格进行无菌操作，以防止菌体间交叉感染或致病菌对人体造成危害。
④在进行接种操作时，要关闭门窗，以防止空气对流，要尽量减少走动和讲话，以防止尘埃飞扬和唾沫四溅。
⑤用过的带菌吸管、滴管、玻片、涂布棒和移液器枪头等，用酒精或来苏尔等浸泡以后再进行清洗。
⑥离开实验室之前要用肥皂洗手。
⑦实验室中的菌种和物品等，未经教师允许，不得携带出实验室。
凡需进行培养的材料，都应注明菌种名、接种日期、处理方法及操作者姓名（或组别），放在制定的培养箱中进行培养。
5.如发生培养菌的器皿打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况时，应立即报告指导教师，及时处理，菌液污染实验台面或其他物件时，应及时用3％的来苏尔或5％的石炭酸液擦拭消毒。
6.爱护仪器、设备，严格按照操作规程使用仪器、设备，以确保仪器的安全和学生的人身安全，并做好使用记录，确保仪器的正常使用。
7.按时观察实验现象，认真及时的做好实验记录，对于当时不能得到实验结果而需要连续观察的，则需记下每次的实验结果，以便分析。
清晰填写实验报告作业，科学阐述实验结论。
8.节约水、电，适量取用药品等耗材。
微生物工程实验指导
微生物工程实验指导 田沈 范黎 杨秀山编首都师范大学生命科学院微生物系2005年8月目 录实验一 土壤中稀有放线菌的分离和纯化 (3)实验二 抗生菌的体外鉴别 (6)实验三 淀粉质原料的酒精发酵 (9)实验四 四环素的定向发酵及效价测定 (15)实验五 菌种保藏 (18)实验六 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的原生质体融合 (25)附录Ⅰ 实验常用培养基配方及其配制方法 (27)附录Ⅱ 实验中常用试剂的配制 (32)参考书目 (33)实验一 土壤中稀有放线菌的分离和纯化目的1、了解采集土样的要求和方法。
2、掌握由土壤中分离稀有放线菌的基本原理和操作技术。
3、学习并掌握土壤稀释法和微生物的纯培养技术。
原理筛选放线菌是新抗研究的重要课题之一。
迄今为止，已发现的抗生素有80%皆来自于放线菌。
放线菌主要存在于土壤中，并在土壤中占有相当大的比例。
一般地，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。
通常，随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。
土壤是微生物的大本营，其中的放线菌多以链霉菌为主，因此人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌。
若以常规方法进行分离，得到的几乎全部是链霉菌。
然而，当采用加热处理土样、选用特殊培养基或添加某种抗生素等方法时，均可提高稀有放线菌的获得率。
由土壤中分离放线菌的方法很多，其中包括稀释法、弹土法、混土法和喷土法等，本实验主要采用稀释法，并通过选用特殊培养基的方法，来获得少量稀有放线菌。
仪器和材料1、培养基：葡萄糖天门冬素琼脂，精氨酸琼脂，高氏1号琼脂，以上每种培养基皆用500ml三角瓶分装250ml。
2、灭菌物品：牛皮纸袋，培养皿，1ml、5ml吸管，250ml三角瓶分装90ml无菌水（含30粒玻璃珠），18×180mm试管分装9ml无菌水，牙签，玻璃刮铲，18×180mm试管中分装10 ml 1‰K2Cr2O7母液。
(完整版)微生物学实验指导书
03微生物在自然界和人类生活中的作用阐述微生物在生态系统、工业生产、医疗卫生等领域的重要性。
01微生物的定义与分类包括细菌、真菌、病毒等微生物的基本概念和分类方法。
02微生物的生物学特性介绍微生物的形态、结构、生理生化特性等。
微生物学概述01实验室安全制度包括实验室安全守则、危险标识识别、紧急情况下的应对措施等。
02实验操作规范介绍实验前准备、实验过程中的操作规范、实验后清理等注意事项。
03生物安全阐述生物安全的概念、生物安全级别的划分及相应防护措施。
实验室安全与规范介绍显微镜的种类、使用方法和维护保养。
显微镜介绍离心机的类型、使用方法和维护保养。
离心机阐述培养箱和摇床的工作原理、使用方法和注意事项。
培养箱与摇床包括分光光度计、电泳仪、PCR 仪等设备的简要介绍和使用方法。
其他常用设备常用仪器与设备实验报告格式包括标题、作者、摘要、正文、结论、参考文献等部分的撰写要求。
数据处理与图表制作介绍数据处理的方法、图表的制作规范及注意事项。
实验结果分析与讨论阐述实验结果的分析方法、讨论实验结果的合理性及可能存在的问题。
实验报告提交与评审说明实验报告的提交方式、评审标准及相关注意事项。
实验报告撰写要求03根据实验需求，选择适当的培养基类型，如营养琼脂、马丁氏琼脂等。
选择合适的培养基按照培养基配方准确称量各成分，加入蒸馏水或去离子水，加热溶解后调整pH 值。
配制培养基将配制好的培养基分装到试管、培养皿等容器中，采用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌处理。
培养基分装与灭菌培养基制备与灭菌微生物接种与培养接种前准备准备好无菌操作台、无菌接种环、酒精灯等接种工具，确保无菌操作环境。
微生物接种采用划线法、倾注法等方法将待测微生物接种到培养基上。
培养条件设置根据微生物的生长需求，设置好培养温度、湿度和光照等条件。
观察前准备准备好显微镜、载玻片、盖玻片等观察工具，确保无菌操作环境。
微生物形态观察通过显微镜观察微生物的形态、大小、排列方式等特征，记录并描述观察结果。
微生物学实验指导
微生物实验守则微生物学实验的目的是：加深对微生物学理论知识的理解；扎实掌握实验的基本操作，并牢固建立无菌操作的概念；培养学生认真观察、发现问题、分析问题和解决问题的工作能力；树立学生实事求是、严肃认真的科学态度和勤俭节约、协作攻关的优良作风。
为了提高教学效果，保证实验质量和实验室安全，特提出如下注意事项。
1.每次实验前必须充分预习实验教材，以了解实验的目的、原理和方法，熟悉实验操作中的主要步骤和环节。
2.非必要的物品不要带入实验室，必须带进的物品应放在不影响实验操作的地方。
3.实验时认真听教师的讲解，仔细观察示范操作。
4.许多微生物有潜在的致病能力。
实验中要严格无菌操作，以免培养的微生物进入外界环境，并保证所培养的微生物不受污染。
①实验室内严禁餐饮。
②实验前洗手并用酒精棉球擦拭手和台面。
③实验操作过程中，要严格进行无菌操作，以防止菌体间交叉感染或致病菌对人体造成危害。
④在进行接种操作时，要关闭门窗，以防止空气对流，要尽量减少走动和讲话，以防止尘埃飞扬和唾沫四溅。
⑤用过的带菌吸管、滴管、玻片、涂布棒和移液器枪头等，用酒精或来苏尔等浸泡以后再进行清洗。
⑥离开实验室之前要用肥皂洗手。
⑦实验室中的菌种和物品等，未经教师允许，不得携带出实验室。
凡需进行培养的材料，都应注明菌种名、接种日期、处理方法及操作者姓名（或组别），放在制定的培养箱中进行培养。
5.如发生培养菌的器皿打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况时，应立即报告指导教师，及时处理，菌液污染实验台面或其他物件时，应及时用3％的来苏尔或5％的石炭酸液擦拭消毒。
6.爱护仪器、设备，严格按照操作规程使用仪器、设备，以确保仪器的安全和学生的人身安全，并做好使用记录，确保仪器的正常使用。
7.按时观察实验现象，认真及时的做好实验记录，对于当时不能得到实验结果而需要连续观察的，则需记下每次的实验结果，以便分析。
清晰填写实验报告作业，科学阐述实验结论。
8.节约水、电，适量取用药品等耗材。
成信工环境工程微生物学实验指导03培养基的制备和灭菌技术
实验三培养基的制备和灭菌技术一、实验目的（一）熟悉灭菌前的准备工作。
（二）掌握培养基和无菌水的制备方法。
（三）掌握高压蒸气灭菌技术。
二、实验仪器、材料（一）培养皿（直径90 mm）10套，试管（15 mm×150 mm）5支，（18 mm×180mm）5支，移液管（10 mL）1支，（1 mL）2支，锥形瓶（250 mL）2个，烧杯（500 mL）1个，玻棒2支，玻璃珠30粒。
（二）纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）。
（三）精密pH试纸6.4～8.4、10％HCl、10％NaOH。
（四）牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、或市售营养琼脂培养基、蒸馏水。
（五）高压蒸气灭菌锅、烘箱、煤气灯或酒精灯。
三、实验内容（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．洗涤玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。
培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净。
移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。
洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入烘箱中烘干、备用。
2．包装（1）移液管的吸端用细铁丝将少许棉花塞入构成l～1.5 cm长的棉塞（以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹人管内）。
棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑人管内。
将塞好棉花的移液管的尖端，放在4～5 cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端（图7A)，用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头折叠打结。
按实验需要，可单支包装或多支包装，待灭菌。
（2）用棉塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住棉塞的制作：按试管口或锥形瓶口大小估计用棉量，将棉花铺成中心厚，周围逐渐变薄的圆形，对折后卷成卷，一手握粗端，将细端塞入试管或锥形瓶的口内，棉塞不宜过松或过紧，用手提棉塞，以管、瓶不掉下为准。
棉塞四周应紧贴管壁和瓶壁，1不能有皱折，以防空气微生物沿棉塞皱折侵入。
棉塞插入2／3，其余留在管口（或瓶口）外，便于拔塞。
微生物学实验指导MICROBIOLOGYEXPERIMENT微生物学实验指导微生物学实验
接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，让温度逐渐上升。当温度升至 100℃时，关闭排气孔。调节温度控制器旋钮，直至箱内温度达到所需要温度（ 160～170℃）位置会自动控制调节温度，保持此温度 2h。注意不可再拨动调节旋钮和通气孔 。
4．降温
切断电源、自然降温。
干热灭菌的原理
• 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固 变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与 其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细 胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水 量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热 灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～ 2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器 皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗 吸过含有微生物培养物的吸管：2%来苏尔或0.25%新洁尔灭 消毒液中浸泡24小时然后洗 吸管内壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗
培养皿的包扎： 牛皮纸或旧报纸包紧，一般以5～8套培养皿包成1包
吸管的包扎： 1 在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用
三、实 验 器 材
玻璃仪器： Ａ每人: 培养皿 4套； 大试管 4只。 Ｂ每组：三角瓶 5只； 烧杯（500ml）1只； 烧杯（1000ml）1只； 中试管 7只； 吸管（ 0.5ml 3支，5ml 2支）共5支
洗涤用品： 去污粉、肥皂、清洗剂、毛刷等。
包扎用品：棉花、扎绳、包扎纸等。
四、实验步骤
• 掌握对玻璃器皿的清洗、包扎方法与干 热灭菌的操作过程。
二、实验原理
• 微生物学实验要求较高的无菌状态，因此， 实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭 菌从而用以培养微生物，所以对其质量、 规格、洗涤和包扎方法均有一定要求。清 洁的玻璃器皿是实验得到正确结果的先决 条件，包扎方法要能保证防止污染杂菌。 空的玻璃器皿一般用干热灭菌.
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微生物工程实验指导适用生物技术专业食品与生物工程学院2008.1实验一 发酵实验用玻璃器皿灭菌前的包扎方法一、目的：学习发酵实验用玻璃器皿在灭菌前的包扎工作，并了解灭菌后的使用方法。
二、原理：为保持发酵实验用玻璃器皿灭菌后的无菌状态，需要对它们灭菌前进行包扎，这些工作看起来简单，但如操作不当或不按操作规程去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的失败。
三、材料和设备5ml吸管30只，9cm培养皿 10套，120*12mm试管 120只，250ml三角瓶30个，脱脂棉0.5斤，天然棉0.5斤，8层纱布30块，线绳。
四、方法1、洗涤1 新器皿应用2﹪盐酸浸泡数小时再洗涤。
2 琼脂块不能倒入下水道。
3 含菌培养基一般先煮再洗。
4 洗涤后玻璃器皿上水应均匀湿润而无条纹和水珠。
2、包扎① 平皿的包扎：10个一包。
前9个方向一致，最后一个反放，用纸卷成卷，也可放在特制铁桶中灭菌。
② 吸管的包扎：在吸管尾部塞入少许脱脂棉，脱脂棉长约1cm，距管口约0.5cm，以防止在使用时造成污染。
脱脂棉松紧适当，多余的棉花可用火焰烧掉。
每支吸管用约6cm宽纸条，吸管头部包衬双层纸，以30－45º卷起，吸管尾部用剩余纸条打成一结，防止散开，标上容量。
使用时，从吸管中间凝断包扎纸带，抽出吸管。
③ 试管的包扎：用天然棉做成棉塞，紧贴管臂，松紧适宜，棉塞要实，2/3塞进管口。
也可用硅胶塞。
十只一把，外加牛皮纸，扎好。
脱脂棉易吸水，可能造成染菌。
④三角摇瓶的包扎：用8层纱布（大小适宜），塞入瓶口2/3，瓶外部分揪成一团，再用一层牛皮纸或两层报纸把纱布遮严（以免打湿），包扎，用绳子系成活扣。
使用时，去掉包扎纸，拿去纱布，接种后，将纱布塞进瓶口，纱布四角拉下，用绳子系成活扣。
五、作业体会这样做有哪些好处？实验二 灭菌技术及其应用一、目的：掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和操作。
二、原理：灭菌的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌目的。
电热干燥箱适用于玻璃器皿的灭菌（培养皿、吸管等），高压蒸汽灭菌锅适用于含水培养物和玻璃器皿的灭菌。
三、材料和设备电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅。
四、方法：（一）电热干燥箱操作步骤及注意事项：1．装箱将准备灭菌的玻璃器具洗涤干净、晾干，用纸包裹好，放入电热干燥箱内。
关好箱门。
2．灭菌接通电源，打开排气孔，温度升至80℃－100℃时关闭气孔，继续升温至160℃－170℃，恒温2h。
3．灭菌结束后，断开电源，自然降温至60℃，打开电热干燥箱门，取出物品放置备用。
注意事项：1．器皿在烘箱内不宜装得太满、太紧，以免影响温度的均匀上升。
2．灭菌物品不能直接放在烘箱底板上，防止包纸烘焦。
3．灭菌温度恒定在160℃－170℃为宜，温度过高，纸和棉花会被烤焦。
4．降温时，待温度自然降至60℃以下再打开箱门，取出物品，以免因温度过高而骤然降温，导致玻璃器皿和玻璃箱门炸裂。
（二）、高压蒸汽灭菌锅操作步骤及注意事项：1．加适量水，放入物品。
物品间要有空隙，盖子对称拧紧。
2．通电加热，将锅内空气排放干净，排放空气的方法有两种，a.开放气阀，待冒热蒸汽3－5min即可；b.压力升至0.05Mpa时打开放气阀，使压力降为零。
放完空气后，关闭放气阀，压力在0.105-0.13Mpa之间时，计时约25分钟左右。
（含糖多、有生物活性物质的培养基，灭菌压力应小些，时间长些。
）3. 锅内压力降为零后，方可开盖取物。
注意事项：1.在使用高压蒸汽灭菌器进行灭菌时，蒸汽灭菌器内冷空气的排除是否完全极为重要。
当水蒸气中含有空气时，压力表所表示的压力是水蒸气压力和空气压力的总和，不是水蒸气的实际压力，对应的温度不是灭菌器内的实际温度，实际温度偏低，达不到灭菌所需的温度。
因此，必须将灭菌器内的冷空气完全排除，才能达到完全火菌的目的。
2.不能在压力尚未降到零时就打开锅盖或强行放气，否则易造成灭菌有效时间缩短和容器中的液体爆沸。
3.对某些体积较大或蒸汽不易穿透的被灭菌物品，如固体曲料、土壤、草炭等，则应适当延长灭菌时间，应将灭菌时间延长至1～2h。
三、作业：实验中可能会出现什么问题？如何解决？实验三 学习接种技术和超净工作台的使用一、目的：了解接种前的准备工作，掌握各种接种方法和超净工作台的使用方法。
二、原理：微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。
由于实验目的、培养基种类及容器等不同，所用接种方法不同，如斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等，以获得生长良好的纯种微生物。
为此，接种必须在无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作。
同时，因接种方法的不同，常采用不同的接种工具，如接种环、接种针、移液管和玻璃涂棒等。
三、材料和设备大肠杆菌斜面，黑曲霉斜面，肉汤斜面，查氏培养基斜面，超净工作台，接种室（接种室 5平方米、缓冲室 2平方米，高≤2.5m；设推拉门，接种室与外室有小厨窗，用于传递物品及减少人员进出次数）。
四、方法：1、接种前的准备工作：5﹪的石炭酸喷雾，拖地；75﹪乙醇擦拭台面，将所有接种物品先放入超净工作台内，打开超净工作台风机和紫外灯，预热、杀菌30min。
2、接种75﹪乙醇擦手。
接种时，动作应准确迅速，注意无菌操作。
细菌采用划线法接种，霉菌采用菌块或孢子划线接种。
每人接细菌斜面（大肠杆菌）和真菌（黑曲霉）斜面各一只。
（标上日期、时间、姓名）3、培养细菌斜面37℃培养1天，真菌斜面28℃培养2天，观察是否染菌。
五、注意事项：1．所有接种物品应一次性放入超净工作台内。
2．超净工作台内物品不可放的太满，酒精灯与进风口之间不可放置高大器皿，以免应响接种效果。
3．接种过程中，开盖15min的营养琼脂平板，盖盖37℃培养24－28h 后，平板内菌落数不超过4个，则认为接种室无菌程度良好。
六、作业：1．接种前为什么超净工作台要预热30min。
2．接种前后为什么要灼烧接种环（钩）。
3．操作过程中可能会出现什么问题？如何解决？实验四 活性干酵母的酒精发酵一、实验目的酒精发酵是典型的糖的无氧酵解途径。
通过实验让学生理解糖的无氧酵解途径并了解厌氧发酵的工艺过程。
二、实验原理在无氧的培养条件下，酵母菌利用糖发酵为酒精和二氧化碳的作用即为酒精发酵，反应式为：C6H12O6 2C2H5OH ＋ 2CO2通过对表观发酵度的测定，可以判断酒精发酵的进程。
表观发酵度公式为：发酵度 = (D-d) / D × 100％D表示未发酵时的糖度，d表示发酵后摇动去除二氧化碳后的糖度。
三、实验材料及仪器手持糖度计，蔗糖，活性干酵母，250mL三角瓶；100mL烧杯，8层纱布，线绳，玻棒，10％HCl，pH试纸，10mL吸管，试管。
四、实验方法1.活性干酵母活化：称取2g活性干酵母，用10mL的2%蔗糖溶液，38℃保温活化30分钟。
2．培养基制备：将pH为5.5的 10％蔗糖溶液的装在250mL三角瓶中，装液量为200mL。
121℃灭菌10分钟。
3．接种发酵：将活化好的酵母，以5％的接种量，接入到蔗糖溶液的中，35℃静止发酵48小时。
4．每间隔12小时测定1次表观发酵度，观察发酵现象。
五、作业：1．发酵前，为什么要对活性干酵母进行活化？2．酒精发酵时，为什么培养基不需要彻底灭菌，也能保证正常发酵？3．通过对表观发酵度的测定，记录酒精发酵的进程。
实验五 酸奶发酵剂的制备及酸奶的酿制一、实验目的学习并掌握酸奶制作的基本原理和方法。
二、实验原理酸奶是以牛奶等为原料，经乳酸菌发酵而成的一种具有较高营养价值和特殊风味的发酵乳制品，是具有一定保健作用的食品。
其基本原理是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中酪蛋白(约占全乳的2．9％，占乳蛋白的85％)变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。
同时，通过发酵还可形成酸奶特有的香味和风味(与形成乙醛、丁二酮等有关)。
按凝固状态可将酸奶分为凝固型酸奶和搅拌型酸奶，二者基本工艺过程相似，本实验主要学习凝固型酸奶的制作方法。
三、实验器材1．菌种：一般选用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)。
也有使用嗜酸乳杆菌(L．acidophilus)和双歧乳杆菌如两歧双歧乳杆菌(Bifidobacterium bifidum)的，目前虽然有人认为它们保健作用更好，但由于不易培养和有特殊异味，尚未全面推广使用。
本实验使用前两种菌以 1：1比例混合接种。
2．培养基：菌种活化及扩大用培养基：10％脱脂乳液，pH自然。
发酵培养基：16％全脂乳液加适当比例(如8％)的白砂糖，pH自然。
3．器材：试管、烧杯、三角瓶、无菌吸管、酸奶瓶、温度计、玻璃棒、酒情灯、电炉。
四、实验方法1．工艺流程：全脂乳粉、砂糖、水 混合均匀 预热(60-70℃) 均质(15-18MPa)灭菌(85-90℃，5-8min) 冷却(43-45℃) 接种 分装封口 菌种 活化 母发酵剂 生产发酵剂保温发酵(42-43℃，2-3h)酸奶瓶 清洗 开水烫洗消毒冷藏(2～5℃)成 品2．菌种活化和培养：（1)将脱脂乳液(要求乳粉或生新鲜牛乳不含抗生素)分装试管和三角瓶．装量：18mm×180mm试管：10mL／管；250mL三角瓶：150mL／瓶。
置于高压灭菌锅内115℃，15min灭菌。
（2)将保藏菌种接入脱脂乳试管中活化2次，至凝固良好时，转接于三角瓶中(做成母发酵剂)，接种量2％左右。
大规模生产时还需进行下一级扩大培养(即做生产发酵剂)，接种量2％～3％。
（3)生产发酵剂培养需采用较大的容器，如不锈钢桶，灭菌则采用80℃、15min，连续两次。
灭菌后牛乳应立即冷却待用。
如1h内不使用，需储放在3～-5℃环境下。
（4)培养：保加利亚乳杆菌一般在42～45℃下培养12h，至牛乳凝固结实即可。
嗜热链球菌一般在37～42℃下培养12～14h，至牛乳凝固结实即可。
3．发酵培养基的消毒：将乳粉、砂糖和水按比例混合均匀(实验室小规模制作可用打浆机打浆，使充分混匀，代替均质)，在不锈钢容器(或烧杯)中加热至85～90℃保持5～8min即可杀死病原菌和其它微生物。
4．接种：将消毒后的牛乳迅速降温至45℃以下，接入发酵剂的量为原料乳量的10％。
采用混合菌株发酵时，总接种量不变，两菌株等量接种。
5．分装、封口、发酵：接种后，分装于消毒过的酸奶瓶或其它容器中，加盖或封口后送培养箱或发酵室保温发酵3～4h。
6．冷却后熟：经检查，酸奶已达到凝固状态(pH达4．2～4．3)时，取出置4℃条件下冷藏24h即得成品。
品尝自己制作的酸奶，判断其感官品质是否达到要求，若达不要求，分析其原因。
实验六 草莓果酒的酿造一、实验目的学习并掌握酸果酒的酿造的基本原理和方法。