蝴蝶兰组织培养研究进展_综述_
蝴蝶兰的组织培养技术研究
泡 ４、５、６、７、８ｍｉｎ，在 处理 过程 中要不 断摇 晃 ，使 消毒液和外植体能充分 、均匀 的接触 ，然后用无 菌水 淋 洗 ４ ５次 ，用 无 菌手 术 刀将 花梗 切 成 １．５— ２ｃｍ的小段 ，接种在诱导分化培养基上 ，每瓶接 ｉ－２段 。 ２．２ 各种培 养基 的选择
利用这种组合 的方式 ，筛选出最佳诱 导 、分 化 和生 根培养 基 。 ２．３ 培 养条件
无 菌苗 光照 时 间为 １２ｈ／ｄ，光 照强 度 为 １６００～ ２０００１ｘ，温度 为 ２５～２８℃。 ２．４ 调查 统计
数 据 统计 方 法 ：每 处 理 调 查 ２Ｏ～５０个 ，无 菌 苗以 １个月为 １个生长周期 ，统计增殖数量 ，计 算继 代系数 ；接种 后 ７ｄ统计 生根数量 ，计算 生 根 率 。 ３ 结果 与分 析 ３．１ 不 同消毒 时 间对花梗 段 的影 响
蝴蝶兰花梗为外植体 ，以 ＭＳ附加琼脂 ６ｇ／Ｌ， 蔗 糖 含 量 为 ２０ｇ／Ｌ，水 解 酪蛋 白 ０．１ｇ／Ｌ，柠檬 酸 ０．０３ｇ／Ｌ，椰 汁 ０．１ｇ／Ｌ为培 养 基 ，添 加 不 同浓 度 组 合的外源激素 ，ｐＨ值 ５．８～６．０。 ２ 方 法 ２．１ 消毒时间的选择
取 温 室 栽 培 的带 有 花 箭 的 蝴 蝶 兰 植 株 的 整 枝 花 梗 ，在 放有 洗 衣粉 的水 中浸泡 清 洗 １０ｍｉｎ，用 自来水流水冲洗干净 ，放在烧杯 中待用 。在超净 工作 台上将烧杯 内的花梗用 ７５％乙醇消毒 ４０ｓ， 然后用无菌水 冲洗 ３—５遍 ，再用 ０．１％升汞分别浸
第 ２期
河北 林业科技
２０１３年 ４月
蝴蝶 兰的组 织培 养技术研 究
金 独 英
蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展
蝴蝶兰组织培养及诱变育种的研究进展刘亮,易自力3,蒋建雄,彭筱娜,黄丽芳 (湖南农业大学细胞工程实验室,湖南长沙410128)摘要 从蝴蝶兰(phalaenopsis)的组织培养及诱变育种两个方面进行了探讨。
就当前蝴蝶兰外植体的选择、培养基的选择、原球茎增殖、生根壮苗、炼苗移栽化学诱变几个方面作了详细的讨论。
关键词 蝴蝶兰;组织培养;诱变育种中图分类号 Q943.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)27-08451-02R esearch P rogress in the Tissue Culture and Mutation B reeding of Phalaenopsis spp.LIU Liang et al (Cell Engineer Lab of Hunan Agriculture University,Changsha,Hunan410128)Abstract T he research progress in the tissue culture and mutation breeding of Phalaenopsis,including the effect of ex plants,m edium,multiplication of protocorm2like b ody,m eth od of rooting and seedling strengthening,transplantation and chem om orph osis and s o on,was discussed,in order to provide in for2 m ation for this field.K ey w ords Phalaenopsis spp.;T issue culture;Mutation breeding 蝴蝶兰(phalaenop sis)为兰科蝴蝶兰属兰花,原产于我国台湾、菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚等地[1]。
蝴蝶兰的组织培养研究
蝴蝶兰的组织培养研究本试验以蝴蝶兰原优良品种满天红花梗为外植体，对休眠芽萌发诱导、叶片原球茎诱导、原球茎增殖、根诱导和组培苗的移栽等方面进行初步研究，得出以下结果： 1、花梗休眠芽的诱导在夏季、秋季、春季三个季节选取含休眠芽的花梗节段进行培养，对污染率、休眠芽萌发诱导率和芽生长状况进行了比较。
试验表明秋季选取的花梗外植体灭菌效果最好，休眠芽萌发诱导率最高。
MS+BA 5.0培养基较适合休眠芽的诱导。
2、无菌苗叶片的原球茎诱导本试验以无菌苗叶片为外植体诱导原球茎产生，结果表明，BA浓度5.0mg·L<sup>-1</sup>最适合叶片原球茎诱导，添加15％（V／V）椰乳（CW）能提高原球茎的诱导率，并有利于原球茎的生长。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合诱导叶片产生原球茎，诱导率最高达到38％。
3、原球茎的增殖在MS培养基中添加一定浓度的BA和果汁能提高原球茎的增殖率。
另外，添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）100～200mg·L<sup>-1</sup>能有效控制培养基的酚污染、提高原球茎的增殖率。
MS+BA 5.0+CW 15％培养基较适合原球茎的增殖。
J‘西大学祝眨d卜学位论文4、根的诱导在1/2 Ms培养基中附加一定浓度NAA（0 .1一0.5mg’L一’）和多效哇MET（0 .1<sup>0</sup>.5mg’L一‘）与BA配合，能诱导小苗生根。
用多效哇诱导生根，幼苗矮壮，叶片较绿，有利提高幼苗的移栽成活率。
添加0.39一’活性炭（AC）能大大提高生根苗的平均根数和平均根长。
对根诱导较适合的培养基是:1/2 MS+B A 2.0+NAA 0.卜AC或1/ZMS+BA 2.0+MET 0.3。
5、组培苗移栽土上!苦篇乐左牙湘于丁石，卜Z戈寸汗吞目J 立伏禽己七心不破万县‘nl翻云六刁一谁才曰丢，卜Z人叹产1才曰日之习隆百冬观兀笠气1土刃尺水万万U圣a猫田联硒平葵啊权人。
蝴蝶兰组织培养研究
蝴蝶兰组织培养研究本文以蝴蝶兰满天红品种为研究材料,以花梗和叶片为外植体,通过对消毒方法、培养基种类、激素浓度、褐化现象等的研究,建立了一套通过蝴蝶兰组织培养快速繁殖的有效途径。
主要结论如下：(1)蝴蝶兰花梗灭菌的最佳处理方法为用0.1%升汞消毒13分钟或15分钟,成功率达到85%以上；叶片最佳消毒处理的方法为：预处理后0.1%升汞灭菌13分钟,灭菌成功率达97.7%。
(2)采用正交试验设计,结果表明最适宜蝴蝶兰花梗诱导的培养基配方为MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA(3.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+PH(5.6)；叶片诱导的最佳组合为：MS+琼脂(7.5g·L-1)以+蔗糖(30g·L-1)+6-BA (5.0mg·L-1)+NAA(2.5mg·L-1)+pH(5.0)。
(3)植物激素对蝴蝶兰类原球茎的实验研究表明,诱导蝴蝶兰原球茎的最佳激素组合为：6-BA(3.0mg·L-1)、NAA(0.5mg·L-1)和pH=5.4或6-BA(3.0mg·L-1)、 NAA(1.0mg·L-1)和pH=5.6.(4)植物激素组合对蝴蝶兰生根率的影响较小,差异性不显著(P>0.05)但不同激素组合对促进蝴蝶兰生根数及根长影响较大,更有利于生根,经方差分析,差异性均达到显著性水平(P<0.05)。
适宜蝴蝶兰根培养的培养基最佳配方为：1/2MS+6-BA3.0mg·L-1+NAA1.0-1.5 mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7.5g·L-1,pH=5.4-5.6。
(5)本实验采用的蝴蝶兰满天红品种,发现在蝴蝶兰花梗芽诱导的较优基本培养基为：MS基本培养基,诱导率为77.8%,高于1/2MS基本培养基(77.3%)；叶片诱导的培养基为MS和1/2MS,考虑到苗的后续生长状况以及MS培养基的褐化现象较严重,而且1/2MS培养基更能节约成本,故选择1/2MS培养基为叶片萌发的培养基。
蝴蝶兰组织培养研究进展
蝴蝶兰组织培养研究进展摘要通过不同培养基、不同激素及添加物对蝴蝶兰各培养再生途径的影响进行了概述,为蝴蝶兰的组培技术研究提供参考。
关键词蝴蝶兰;组织培养;研究进展蝴蝶兰(Phalaenopsis)属热带或亚热带的兰科植物,深受人们的喜爱,研究和开发蝴蝶兰的组织培养具有重要的意义[1]。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效方式,目前主要有3条途径:一是利用蝴蝶兰杂交种子在无菌条件下诱导发芽,获得再生植株[2];二是从离体器官诱导产生原球茎(Protocorm like-body,以下简称PLB),通过原球茎的增殖、分化获得再生植株,即原球茎再生途径[3,4];三是通过离体器官诱导产生丛生芽,通过培养丛生芽获得再生植株,即器官再生途径[4-7]。
1无菌播种再生途径蝴蝶兰经人工授粉可获得种子,但种子个体极其微小,结构简单,没有胚乳,只有1层极薄的种皮,通常在自然状态下很难萌发,需经组织培养无菌播种才能获得植株。
在蝴蝶兰开花时选择优良植株进行自交或杂交授粉,生长4～6个月后尚未开裂的蒴果可用于试管无菌播种。
由于蒴果内种子数量达几千万之多,1个蒴果便可繁殖出成千上万的植株[8]。
通过无菌播种人工培养,能够在短期内获得大量幼小植株,是现阶段经济有效的快速繁殖方法,也是工厂化育苗的重要途径。
种子无菌播种10d后胚明显膨大,呈鹅黄色,陆续变成绿色,约1个月的时间形成原球茎)。
随后,原球体拉长,同时原球体上伴随着长出白色根毛状物,接着在顶端生长点处长出芽鞘,芽鞘不断长大,形成第1片鞘叶。
至2个月时,于第1片鞘叶对面长出第2片鞘叶,随着鞘叶的生长,2～3个月的时间在2片鞘叶之间长出真叶。
最后,转移到新的培养基上形成再生植株[8-10]。
魏翠华等[9]研究发现,添加香蕉汁对蝴蝶兰种子发芽、原球体形成以及叶片的生长具有促进作用,水解乳蛋白对种子萌发有抑制作用,比较光照和黑暗2种培养条件,种子萌发无明显差异。
章玉平等[10]研究表明,外源植物生长调节剂对种子萌发有抑制作用,天然物质如苹果汁、香蕉汁、胰蛋白胨和活性炭对种子萌发具有促进作用。
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文
蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰组培的研究进展研究论文蝴蝶兰，兰科蝴蝶兰属植物，属热带、亚热带气生兰。
原产于菲律宾、印度尼西亚、泰国、马来西亚和我国台湾等地，其株型美观、花形奇特似蝶、枝叶繁茂，花朵硕大、花色鲜艳、花期持久，观赏价值极高，在热带兰中素有“兰花皇后”的美誉，有较高的观赏和经济价值，深受国内外花卉市场的欢迎。
但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖。
其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。
而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。
蝴蝶兰快速繁殖的途径主要是利用无菌播种和利用各种类型的外植体诱导类原球茎，进而诱导分生苗实现快繁，不用通过诱导愈伤组织而直接分化丛生芽。
蝴蝶兰组培快繁的影响因素1.无菌播种途径蝴蝶兰种子的胚发育不完全，不易发芽，用人工合成的培养基促使种子无菌萌发，可以得到较高发芽率。
种子培养过程中使用的培养基有KC、MS、花宝等，其中改良KC 培养基是蝴蝶兰种胚萌发的理想培养基。
对不同无菌播种方法包括撒播法、涂布法、稀释法进行了比较，结果表明稀释法较好，种子分布均匀，利用率高，明显减少转接次数，且原球茎发育健壮整齐【1】。
果龄采收期也影响着无菌播种效果。
也可采用无菌播种途径快繁蝴蝶兰，能够在短期内获得大量幼小植株，且技术简单、成本较低，是现阶段经济有效的快速繁殖方法，也是工厂化育苗的重要途径【2】。
但由于蝴蝶兰种子苗是一种杂交品系，因此后代变异率高，除了少数自花系列较稳定以外，难以形成品质均一的大规模栽培品种。
因此，在采用无菌播种进行蝴蝶兰种苗生产时，要对父母本进行严格的选择，以确保后代性状的尽可能一致。
2.类原球茎途径原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象，通过离体器官诱导原球茎快繁法获得试管苗基本一致，增殖系数较高，变异性较少，适合大规模繁殖，是兰花组培快繁的一个主要形式。
蝴蝶兰组织培养与快速繁殖技术研究进展
#" 原球茎增殖研究
原球茎繁殖 （ KLMNMOML? < )PQR SMTU ） 是兰花植物组 织培养的特有现象， 是其组培快繁的主要形式。通常 情况下从兰花成苗的叶片和根等成熟组织很难进行脱 分化形成原球茎， 而以兰花的茎尖分生组织为外植体 可以诱导原球茎。但因茎尖深埋于叶丛之中， 易被污 染， 成功率低， 而且会牺牲母株， 一般先取花梗侧芽， 经 常规消毒后接种于 /0 D 8 < => ( # 8?@ ; A 培养基上， 在较高温度 （ "7 # (’% ） 下待侧芽萌发成花梗苗， 再取 其组织诱导原球茎。这样既可以避免对母株造成损 失， 又可以免去消毒这一环节， 诱导分化的成功率高。 目前以蝴蝶兰的叶片、 根尖、 茎尖、 茎段等为外植体诱 导原球茎已获得成功， 但培养基及培养效果有差异。 # , !" 外植体的选择 #, !, !" 叶片诱导原球茎F " 早在 &V97 年日本的田中道
［ 9+ ］ 度 （ 大于 +8 7 /0 1 2） 会出现褐化死亡。袁全国等 在
, )’ 附加浓度为 - . * /0 1 2 时诱导的原球茎最多、 速 度最快， 而 &’’ 对叶片诱导原球茎无明显作用， 低浓度 3， 4 ,5 （ 6 78 * /0 1 2） 可促进愈伤组织形成、 但抑制原
［ 97］ 球茎分化。杨美纯等 研究认为 + , )’ 是决定叶片原
但因无菌播种方法为有性繁殖其获得的植株与母株基因型不同分离现象严重有可能出现大量劣质种苗而造成损失所以在选择母本进行杂交时应特别注意尽量了解亲本的遗传规律增加无菌播种后代性状的预见性减少市场风险
广东农业科学! *%%& 年第 , 期!
蝴蝶兰组织培养技术研究进展
蝴蝶兰组织培养技术研究进展摘要：蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，本文综述了蝴蝶兰的原球茎诱导增殖培养，并对我国未来蝴蝶兰研究发展进行了展望。
关键词：蝴蝶兰;原球茎;组织培养蝴蝶兰是兰科蝶属植物，花形奇特，色彩艳丽，花期持久，一般2～3个月，最长可达半年，适于家庭摆设或作切花用于花篮、花束等。
但蝴蝶兰很难用传统的方式进行无性繁殖。
蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧芽，且种子极难萌发，对其进行常规性的繁殖，增殖速度很慢，故多采用组织培养的方法对其进行快速繁殖。
原球茎是兰科植物组织培养产生的特有现象。
原球茎的发生途径可以由花梗节段、幼叶、根段、茎尖等部位直接产生，也可以通过诱导愈伤组织，再从愈伤组织诱导原球茎产生。
不同外植体原球茎的诱导，其特点及培养基的选择也不同。
本文就蝴蝶兰原球茎诱导增殖培养的研究现状进行综述。
1 外植体的选择外植体的来源是决定外植体能否培养成功的重要因素，不同品种、不同器官之间的分化程度和能力存在差别，因此，在进行组织培养时必须选择合适的外植体进行无菌操作才能保证蝴蝶兰组织培养的成功。
常用于蝴蝶兰组织培养的外植体有茎尖、根、叶片和花梗芽。
1.1 茎尖茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体，较容易诱导培养，是成功率较高的部位。
利用蝴蝶兰的茎尖诱导出类原球茎，再由类原球茎分化成苗。
这种培养的突出问题在于蝴蝶兰为单茎性植株，剥取茎尖就损坏了母株本身，而蝴蝶兰茎极短，操作困难，易污染。
但茎尖培养的优点是比较容易获取类原球茎或愈伤组织，因为茎尖分生组织细胞的生理年龄小，易于脱分化和分化，同时，操作细致还能达到脱毒效果，获得无病毒苗。
1.2 根尖蝴蝶兰根为外植体诱导原球茎的诱导率相对较低。
以蝴蝶兰新发生的根尖段切成0.5～0.8 cm接种到培养基上，遮光处理4～5 d，14d后可形成愈伤组织。
将蝴蝶兰根平放在培养基上经过约50 d的培养后，根尖顶端可长出原球茎，其诱导率在75％左右，而根尖分生区以外的根段上却诱导不出原球茎。
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2006,35(1):71-74.Subtropical Plant Science蝴蝶兰组织培养研究进展(综述)郑玉忠，张振霞，陈泽华(韩山师范学院生物系, 广东潮州 521041)摘要：本文从蝴蝶兰外植体的选择、不同基本培养基、激素及添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治以及生根壮苗方法等，概述蝴蝶兰组培快繁方面的研究进展，为其组培技术研究提供参考。
关键词：蝴蝶兰；组织培养；原球茎中图分类号：Q943.1；S682.31 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2006)01-0071-04Progress in Tissue Culture of Phalaenopsis spp.ZHENG Yu-zhong, ZHANG Zhen-xia, CHEN Ze-hua（Department of Biology, Hanshan Teachers College, Chaozhou 521041, Guangdong China）Abstract: The research progress of tissue culture of Phalaenopsis, including the effects of explants sources, culture mediums, hormones and nutrition compositions on multiplication and differentiation of protocorm-like body, the inhibition on browning of explants and methods of rooting and seedling strengthening before transplanting, are reviewed. Some reference materials are also provided for further study in tissue culture of phalaenopsis.Key words:Phalaenopsis spp.; tissue culture; protocorm-like body蝴蝶兰（Phalaenopsis spp.）属热带或亚热带的兰科植物，其花形奇特，姿态优雅，色彩鲜艳，花期长久，素有“兰花皇后”之美誉，观赏价值极高，深受人们的喜爱，国内外市场的需求量越来越大。
蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。
因此，研究和开发蝴蝶兰具有重要的意义。
组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，主要通过两条途径：一是利用种子无菌发芽，二是从离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎的增殖培养，得到大量幼苗[1]。
早在1949年，Potor[2]利用无菌培养技术成功地促使蝴蝶兰花梗上的休眠芽发育成完整植株，该方法经过其他研究人员改进后，曾一度成为蝴蝶兰的主要无性繁殖方式。
1974年，Intuwong等[3]利用蝴蝶兰茎尖诱导产生了原球茎状体，再由原球茎分化成植株，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础。
原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官，在兰科植物中多以这种器官发育、增殖和分化。
蝴蝶兰的组织培养中有几个关键的时期：原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育。
根据这几个重要的时期及其组织培养的外界条件，国内外研究人员对蝴蝶兰组织培养进行了广泛的研究，并取得了一定的成效。
本文就近年来蝴蝶兰组培快繁技术的研究现状进行综述，包括外植体的选择，不同基本培养基、激素、添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治，以及生根壮苗的方法等。
同时展望未来的发展趋势，为该研究领域今后的发展提供有益的信息。
1 外植体的选择诱导蝴蝶兰原球茎采用的外植体主要有根段[4]、花梗苗根尖[5]、花梗腋芽[6]、茎尖[7]、叶片[8-10]、胚收稿日期：2005-08-03基金项目：韩山师范学院青年基金项目（QN200503）资助作者简介：郑玉忠(1977-), 男, 广东潮阳人, 硕士, 从事植物生物技术研究。
注：张振霞为通讯作者。
第35卷 ﹒72﹒[11]、花葶节间[12]、花梗节或花梗节间切段[13]、种子[14-16]等。
顾伟民等[17]研究结果表明，蝴蝶兰不同外植体的成活率有差异，其中花梗侧芽的成活率最高，达75%，其次为花梗，成活率为62.5%，叶片和根尖最差，分别为12.5%和7.5%。
针对不同外植体，取材方法也不同，通常取花梗节之间1～2cm长的幼嫩部分，切取长2～3mm的切段作为外植体[13]。
如利用2～3cm长的根尖段，将其切成0.5～0.8cm，接种2周后根端切口处开始膨大，产生淡绿色瘤状愈伤组织[4]；采用无菌种子苗茎尖作为外植体时，培养30d后基部出现愈伤组织，出愈率达85%以上[16]；而利用正在培养的花梗苗生长旺盛的根尖进行培养，20d左右外植体膨大且表面颜色明显加深[5]；陈之材等则用花梗腋芽为起始材料诱导花葶，由花葶节间切片可以高频率诱导分化不定芽[12]。
2 基本培养基的选择蝴蝶兰组织培养所采用的基本培养基包括MS、1/2MS、VW、B5、KC、花宝及其改良型等，但对最适培养基的选择却不同，主要在于蝴蝶兰品种差异及外植体来源不同所致。
周俊辉等[18]以红花品种为试材，研究比较了MS、1/2MS和改良KC三种基本培养基，发现改良KC的效果最好，1/2MS次之，MS最差；张秀清等[9]、马子骏等[19]的研究结果也显示出蝴蝶兰的原球茎增殖培养以较低的无机盐浓度为好。
王静等[20]以红花系085#和白花系0217#的杂交品种作试验材料，研究了大量元素对蝴蝶兰原球茎增殖与分化的影响，研究结果表明了大量元素对原球茎增殖有很大影响，1/2MS对原球茎增殖最有利。
姚丽娟等[10]在MS、1/2MS、KC和VW的试验结果也表明，1/2MS对蝴蝶兰原球茎增殖效果最好。
鲁雪华等[13]在花梗节间切段诱导原球茎的实验过程中对培养基进行筛选，也发现1/2MS或改良MS较MS效果好，减少MS中大量元素和部分微量元素及有机成分，适当增加少量的叶酸和生物素有利于原球茎的增殖生长。
陈勇等[1]认为，1/2 MS培养基对原球茎的增殖和分化效果均好于MS培养基，MS培养基中较高浓度的无机盐不利于原球茎的增殖和分化。
杨美纯等[14]则认为，MS培养基最适合蝴蝶兰种子的萌发。
另外，也有报道B5培养基更有利于蝴蝶兰根段原球茎的诱导和增殖[4]。
3 植物生长调节剂对蝴蝶兰原球茎增殖与分化的影响目前，蝴蝶兰组织培养中常用的细胞分裂素为6-BA，较高浓度（1～8mg/L）的6-BA能促进蝴蝶兰原球茎增殖，较低浓度（0.1～0.5mg/L）的6-BA则能促进原球茎分化[21]。
也有研究认为，低浓度6-BA 更有利于原球茎的增殖，而高浓度（6mg/L）的6-BA刺激多酚氧化酶作用，使原球茎容易产生褐化[18]。
姚丽娟等[10]研究发现，附加6-BA后，原球茎增殖量明显高于附加Ad或KT的，增殖效果为6-BA＞KT＞Ad＞KT + Ad；当6-BA使用浓度在1.0～3.0mg/L时，增殖情况无明显差异；同时还发现NAA对原球茎增殖分化影响不明显。
周俊辉等[18]则认为，低浓度的NAA对原球茎增殖和出苗均有促进作用，高浓度的则不利。
王静等[20]研究结果也表明，适宜浓度的6-BA配合较低浓度的NAA，更有利于原球茎的增殖，2.0mg/L 6-BA 和0.3mg/L NAA配合使用是蝴蝶兰原球茎增殖的最佳组合。
叶晓青等[22]也发现，在添加BA和NAA的培养基中，原球茎的增殖系数比单独添加BA或NAA的高；单独使用2.0mg/L NAA的处理组，其繁殖系数也较高。
而陈勇等[1]认为，高浓度的NAA对蝴蝶兰原球茎增殖有一定的抑制作用，NAA浓度从1mg/L增加到3mg/L，增殖率相应从98.3%下降到38.3%；其实验结果同时还表明，单独添加3mg/L 6-BA，原球茎的增殖率与平均每块增殖数要高于其它各激素浓度的配比，且原球茎增殖迅速。
彭立新等[8]在蝴蝶兰组培快繁研究中，采用3.0mg/L 6-BA + 0.2mg/L NAA配方，能够有效的诱导原球茎，同时还发现提高激素配比（5.0mg/L 6-BA + 0.2mg/LNAA + 活性碳1.0g/L），则有利于原球茎的增殖，提高增殖系数，且不用转接就可直接生根成苗，避免转接过程带来的污染损失，简化了培养过程，因而是一种值得推广的方法。
此外，在培养基中加入1.0mg/L GA3对原球茎分化成芽有一定的抑制效果，为获得大量原球茎而避免分化成芽，适当添加GA3是有一定作用的[20]。
第1期郑玉忠,等：蝴蝶兰组织培养研究进展(综述) ﹒73﹒4 培养基添加物对蝴蝶兰原球茎增殖和分化的影响一些氨基酸类添加物，也可以作为培养基中的有机氮源，例如甘氨酸能促进离体根的生长，丝氨酸和谷氨酰胺有利于花药、胚状体或不定芽的分化。
水解酪蛋白和水解乳蛋白对胚状体或不定芽或多胚的分化有良好的促进作用。
而在培养基中加入一些天然有机物，如椰乳、香蕉泥、番茄汁等，也能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，如加入100～200mg/L香蕉泥，具有较大的pH缓冲作用，对幼苗发育有促进作用。
在不同添加物对蝴蝶兰原球茎增殖和分化影响的研究中发现，水解酪蛋白对蝴蝶兰原球茎增殖有明显促进作用，而水解酪蛋白和香蕉匀浆相结合却对原球茎增殖有抑制作用，有机添加物之间的相互作用或有机添加物与培养基之间的相互作用可能对原球茎增殖有影响[20]。
许多研究也表明，添加适量的香蕉泥、椰乳或含胶质的果菜汁等均对原球茎增殖有明显促进效果[15,17]。
培养基中添加活性炭，低浓度（0.5～1.0g/L）时对原球茎增殖影响不明显，高浓度（2.0～3.0g/L）时对原球茎增殖有促进作用，但原球茎有黄化现象[18]。
蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂，对原球茎的增殖生长影响较大。
有试验表明，2%的蔗糖浓度有利于原球茎生长，2%～3%蔗糖促进芽的形成，5%的蔗糖有利于根的分化和生长[23]。
陈勇等[1]也认为蔗糖浓度对原球茎分化有明显的影响，当分化培养基含1%或2%蔗糖时原球茎100%分化，尤其蔗糖为2%时，分化速度最快；蔗糖含量为3%～5%时，抑制原球茎的分化和生长，分化质量和分化速度都显著下降。
5 原球茎继代中褐化的防治蝴蝶兰和其它兰科植物一样，原球茎状体在继代培养过程中易褐变死亡，不易增殖。
在培养基中添加1～2g/L活性炭，适时切除培养物的褐化部分并及时更换新鲜培养基，能有效抑制外植体褐变死亡；培养基中加入10%椰子水，也能促进原球茎的生长，减少原球茎增殖过程中的褐变[24]。